Banca de DEFESA: SAMARA ALVES SANTOS

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : SAMARA ALVES SANTOS
DATA : 02/12/2021
HORA: 09:00
LOCAL: defesa virtual por web conferencia
TÍTULO:

Avaliação da Imunofluorescência Indireta e do Western blotting na detecção de anticorpos anti-Giardia duodenalis séricos

PALAVRAS-CHAVES:

Giardia duodenalis, Diagnóstico,Western blotting, Imunofluorescência.

PÁGINAS: 54
RESUMO:

Giardia duodenalis é considerado um dos parasitos humanos mais antigos com vasta distribuição mundial, infectando mais de 280 milhões de pessoas por ano.A giardíase é uma protozoose altamente prevalente em crianças brasileiras, cursando com quadros assintomáticos ou de diarreia aguda ou persistente, acompanhada por cólicas abdominais, flatulência, má absorção e perda de peso. O diagnóstico laboratorial dessa infecção é normalmente realizado através da identificação morfológica de cistos e/ou trofozoítos nas fezes através da microscopia. Além disso, ensaios sorológicos como a Imunofluorescência Indireta (IFI), ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) e Western Blotingt (WB)têm sido utilizados para detecção de anticorpos específicos para Giardia no soro. Entretanto, existe muita controvérsia quanto à utilização desses ensaios como ferramentas diagnósticas. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho dos ensaios de Imunofluorescencia Indireta (IFI) e Western blotting (WB) para a detecção de anticorpos IgG anti-Giardia duodenalis em indivíduos infectados. Foram selecionadas amostras de fezes e soros de crianças de creches e seus responsáveis, bem como de usuários do Laboratório de Análises Clínicas da Faculdade de Farmácia (LACTFAR-UFBA) infectados com Giardia duodenalis, infectados com outros parasitos, além de não-parasitados. Os soros foram analisados utilizando a técnica IFI e WB com o intuito de comparar a sensibilidade e especificidade dos métodos e identificar moléculas imunodominantes do parasito e possíveis reações cruzadas com outros parasitos. Foram testados 97 soros na IFI nas diluições 1:20 e 1:40 e destas, 40 amostras foram testadas no ensaio de WB. A sensibilidade da IFI foi de 97% na diluição dos soros a 1:20, caindo para 39,4% na diluição1:40. Para o WB a sensibilidade foi de 85,7%, considerando o total de 14 soros de pacientes eliminando cistos de Giardia testados. Entretanto, a especificidade para a IFI variou de 46,9% a 59,4%, conforme a diluição do soro, enquanto no WB foi de 75%. A maioria das amostras de soro dos pacientes com amebas positivaram na IFI na diluição 1:20, evidenciando uma possível reação cruzada, também observada no WB. As proteínas de 25, 27-31 e 45-55kDa foram consideradas imunodominantes por terem sido as mais reconhecidas por pessoas infectadas com G. duodenalis, apresentando uma sensibilidade diagnóstica exclusiva de cada proteína de 42,8%, 50% e 57,1% respectivamente. A concordância entre o WB e a detecção de G. duodenalis nas fezes por microscopia foi considerada substancial, Kappa = 0,61, enquanto que para a IFI nas diluições de soro 1:20 e 1:40 foram consideradas baixas, Kappa=0,27 e 0,31, respectivamente.A concordância entre os dois métodos sorológicos testados foi fraca com os soros diluídos 1:20 no IFI, Kappa = 0,150,ou nula, com a diluição 1:40 dos soros.A constante exposição à infecção por Giardia ao longo da vida pode manter altos níveis de anticorpos específicos no soro, mesmo sem infecção ativa, o que pode explicar a elevada sensibilidade e baixa especificidade de ensaios. A utilização de antígenos fracionados, como no WB, possibilita o reconhecimento de antígenos específicos imunodominantes e suas combinações ou critérios de exclusão, podendo ser utilizado como um teste alternativo no diagnóstico da giardíase.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 3187360 - MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
Interna - 2584365 - LUCIANA SANTOS CARDOSO
Externo ao Programa - 1673868 - THIAGO CAMPANHARO BAHIENSE