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Dissertações |
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LUANA ANDRADE MENDES SANTANA
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IDENTIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO DE RESISTÊNCIA E PATOGENICIDADE DE Enterococcus spp. EM AMOSTRAS DE DOADORAS DO BANCO DE LEITE HUMANO DO HOSPITAL ESAÚ MATOS EM VITÓRIA DA CONQUISTA (BA)
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Orientador : MARCIO VASCONCELOS OLIVEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCIO VASCONCELOS OLIVEIRA
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LUCAS MIRANDA MARQUES
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MILENA SOARES DOS SANTOS
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Data: 27/05/2019
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O leite humano (LH) é a fonte alimentar primordial para os recém-nascidos (RNs) e lactentes. Frequentemente, RNs internados necessitam de suporte nutricional de um Banco de Leite Humano (BLH). Considerando a rica composição de nutrientes do LH, o leite humano ordenhado (LHO) pode se tornar um excelente meio de cultura para o desenvolvimento de diversos microrganismos. No BLH, o LHO doado precisa passar por rigoroso controle de qualidade microbiológico para ser disponibilizado. As possíveis causas de elevação da quantidade de microrganismos no leite humano podem estar relacionadas com as técnicas inadequadas de coleta, com condições de higiene da doadora e dos utensílios utilizados e com a forma de conservação do alimento. Entre os microorganismos associados a importantes infecções de RNs, e que podem ser contaminantes de amostras de LHO, estão as espécies pertencentes ao gênero Enterococcus que podem advir da microbiota do trato gastrointestinal e pele de doadoras saudáveis. Essas espécies podem ser patogênicas para os recém-nascidos com vulnerabilidade imunológica e precisam, portanto, serem efetivamente inativadas pelo processo de pasteurização realizado no BLH. Diante da importância de Enterococcus spp. em patologias humanas, sobretudo em neonatos, o objetivo do estudo foi identificar e caracterizar resistência e patogenicidade destes microorganismos no leite materno do BLH do Hospital Municipal Esaú Matos de Vitória da Conquista, associando às condições higiênico-sanitárias das doadoras, a fim de traçar alternativas que impeçam a difusão em ambiente hospitalar. Foram coletadas amostras da região mamilo-areolar e mãos das doadoras, com a utilização de swab estéril único, e alíquotas e leite cru e leite pasteurizado. Os isolados de Enterococcus spp. foram identificados através de técnicas microbiológicas de cultivo e antibiograma (segundo recomendações preconizadas pelo CLSI 2017) de forma convencional, aliado ao uso do meio cromogênico Chromagar Orientation (BD™ CHROMagar™ Orientation). Posteriormente, foram realizados testes de biologia molecular para pesquisa de confirmação de resistência. Foram identificados espécimes de Enterococcus spp. em 30% das doadoras, obtendo um total de 11 isolados. Destes, 63,6% foram oriundos de amostras de swab e 36,4% de LHC. Nas amostras de leite humano pasteurizado não houve detecção de Enterococcus spp. Em relação ao teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, os isolados foram sensíveis a Ampicilina, Linezolida e Vancomicina. Observou-se perfil de resistência frente à Penicilina, Norfloxacino e Nitrofurantoína em 18 % dos isolados, separadamente, 9% de resistência a Ciprofloxacino e 63% para Tetraciclina. Os fatores de virulência foram identificados em 63% dos isolados para o gene efaA (Antígeno A) e 27% apresentaram genótipo para o gene ace (Adesina de Colágeno). O presente estudo apresentou a responsabilidade do controle microbiológico pelo Banco de Leite Humano e a necessidade de traçar alternativas para impedir a chegada de espécies de Enterococcus spp. em ambiente hospitalar (dispersão de patógenos comunitários em ambiente hospitalar, e vice-versa), possivelmente como causadores de infecções neonatais importantes que aumentam o tempo de internamento e, consequentemente, os custos do serviço de saúde.
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Human milk (LH) is the primary food source for newborns (RNs) and infants. Often RNs in the hospital need nutritional support from a Human Milk Bank (BLH). Considering the rich nutrient composition of LH, milked human milk (LHO) can become an excellent culture medium for the development of various microorganisms. At BLH, the donated LHO needs to undergo strict microbiological quality control to be made available. The possible causes of increase of the amount of microorganisms in the human milk can be related to the inadequate techniques of collection, with conditions of hygiene of the donor and the used utensils and with the form of conservation of the food.Among the microorganisms associated with important infections of RNs, which may be contaminants samples of LHO, are the species belonging to the genus Enterococcus that can come from the microbiota of the gastrointestinal tract and skin from healthy donors. These species may be pathogenic for newborns with immunological vulnerability and therefore need to be effectively inactivated by the pasteurization process performed at the BLH. Given the importance of Enterococcus spp. in human pathologies, especially in neonates, the study was identified and characterized the resistance and pathogenicity of these microorganisms in the breast milk of the Hospital of Esau Matos de Vitória da Conquista, associating hygienic-sanitary conditions of the donors with an aim to draw up alternatives that prevent diffusion in a hospital environment. Samples were collected from the nipple-areolar region and donor hands, using single sterile swab, and aliquots and raw milk and pasteurized milk. Isolates of Enterococcus spp. were identified through microbiological cultivation techniques and antibiogram (according to recommendations recommended by CLSI 2017) in a conventional way, together with the use of the chromogenic medium Chromagar Orientation (BD ™ CHROMagar ™ Orientation). Subsequently, molecular biology tests were performed to confirm resistance. Specimens of Enterococcus spp. were identified in 30% of the donors, obtaining a total of 11 isolates. Of these, 63.6% were from swab samples and 36.4% from LHC. Samples of pasteurized human milk did not detect Enterococcus spp. Regarding the antimicrobial susceptibility test, the isolates were sensitive to Ampicillin, Linezolid and Vancomycin. Resistance profile against Penicillin, Norfloxacin and Nitrofurantoin was observed in 18% of the isolates, separately, 9% resistance to Ciprofloxacin and 63% to Tetracycline. The virulence factors were identified in 63% of the isolates for the efaA gene (Antigen A) and 27% presented genotype for the ace gene (Collagen Adesin). The present study presented the responsibility of the microbiological control by the Human Milk Bank and the need to outline alternatives to prevent the arrival of species of Enterococcus spp. in the hospital environment (dispersion of community pathogens in the hospital environment, and the reverse), possibly as causes of important neonatal infections that increase hospitalization time and, consequently, health care costs.
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NIVEA NARA NOVAIS ANDRADE
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IDENTIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO DE RESISTÊNCIA E PATOGENICIDADE DE Escherichia coli e Klebsiella spp EM AMOSTRAS DE DOADORAS DO BANCO DE LEITE HUMANO DO HOSPITAL MUNICIPAL ESAÚ MATOS EM VITÓRIA DA CONQUISTA (BA).
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Orientador : MARCIO VASCONCELOS OLIVEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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CLAUDIO LIMA SOUZA
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JESSICA BOMFIM DE ALMEIDA
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LUCAS MIRANDA MARQUES
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MARCIO VASCONCELOS OLIVEIRA
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Data: 31/05/2019
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O leite humano (LH) é considerado o alimento ideal para recém-nascidos (RNs). Devido a sua composição nutricional, fatores imunobiológicos e protetores a Organização Mundial da Saúde (OMS) recomenda o aleitamento exclusivo até os seis meses. Em algumas situações, como permanência do RN no ambiente hospitalar ou doenças infecciosas maternas, não é possível que o RN obtenha o LH por amamentação e os Bancos de Leite Humano (BLHs) surgem como estratégia para garantir a nutrição desses RNs, através da distribuição de leite humano ordenhado (LHO) fornecido por doadoras cadastradas no serviço. A coleta do LHO pode ser realizada no domicílio das doadoras e as condições higiênico-sanitárias utilizadas desde a ordenha até o processamento devem seguir protocolos para evitar a contaminação microbiológica já que o LH possui características ideais para o crescimento de diversos micro-organismos que podem ser patogênicos aos receptores, em sua maioria prematuros. Dentre as bactérias que podem contaminar o LHO nas etapas de coleta, transporte e processamento destacam-se as Enterobactérias, que em sua maioria são comensais, mas possuem capacidade de adquirir genes de patogenicidade e resistência a antimicrobianos. Nessa família as espécies de Klebsiella spp e Escherichia coli são importantes causadores de infecções neonatais como meningite, pneumonia, infecções intestinais e sepse. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo identificar e caracterizar a patogenicidade e perfil de resistência à antibióticos de isolados de E. coli e Klebsiella spp. em amostras de doadoras provenientes do BLH do Hospital Esaú Matos e correlacionar a presença microbiana com as condições higiênico-sanitárias das participantes do estudo. Foram coletadas amostras das mãos e região mamilo-areolar e alíquotas de leite humano de 30 doadoras cadastradas no BLH durante o ano de 2018. As doadoras também foram submetidas a um questionário versando sobre condições socioeconômicas e higiênico-sanitárias da coleta. As amostras foram semeadas através de técnicas de microbiologia convencional. Foram identificadas cepas de Klebsiella em amostras de 11 doadoras (36,6%). Entre essas, em 36,4% (n=4) o micro-organismo foi isolado apenas nas amostras cutâneas, 36,4% (n=4) apenas no leite humano ordenhado cru (LHOC), 18,2% (n=2) com resultados positivos nas amostras cutâneas e de LHOC e 9,1% (n=1) com crescimento em amostras cutâneas, LHOC e no leite humano ordenhado pasteurizado (LHOP). Não foi isolada a E.coli nas amostras coletadas. Em todas as cepas de Klebsiella spp. isoladas foi realizado o antibiograma com recomendação do CLSI 2017, 42,8% (n=6) das cepas apresentaram resistência a Ampicilina e Sulbactam e 35,7% (n=5) resistentes a Amoxacilina e Ácido Clavulânico. Os isolados também foram submetidos ao teste de detecção fenotípica de ESBL por disco-aproximação, 23,1% (n=3) apresentaram resultados positivos para esse teste. Foi realizado o teste de Hodge modificado em todas as cepas para avaliar a presença da enzima carbapemenase e todas as cepas tiveram resultado negativo. Além dos testes fenotípicos os isolados foram submetidos a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase para detecção dos seguintes genes: gyrA, rpoB e pehX, para confirmação do gênero Klebsiella spp. e espécies de Klebsiella pneumoniae e Klebsiella oxytoca respectivamente; também foram pesquisados os genes associados a produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) SHV, TEM, CTXM-1, CTXM-2 e CTXM-3 e os genes de virulência rmpA e wcaG. Todas as cepas foram confirmadas como sendo do gênero Klebsiella spp., 53,8% (n=7) identificadas como Klebsiella pneumoniae, 7,7% (n=1) identificadas como Klebsiella oxytoca e 38,5% (n=5) não fazem parte das duas espécies pesquisadas. Não foram encontrados genes de ESBL e genes de virulência nas amostras isoladas.
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Mostrar Abstract
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Breast milk (BM) is considered the ideal food for newborns (NBs). Due to its nutritional composition and immunibiological and protective factors, the World Health Organization (WHO) recommends exclusive breastfeeding up to six months.In some situations, such as NB stay in the hospital setting or maternal infectious diseases, it is not possible for NB to obtain BM due to breastfeeding and Human Milk Banks (HMB) emerge as a strategy to guarantee the nutrition of these NBs through the distribuition of milked human milk (MHM) provided by donors registered in the service. The MHM collection can be carried out at the donors' home and the hygienic-sanitary conditions used from milking to processing must follow protocols to avoid microbiological contamination since BM possesses ideal characteristics for the growth of several microorganisms that can be pathogenic to predominantly premature receptors. Among the bacteria that can contaminate the MHM in the milking, transportation and processing stages are Enterobacteria, which are mostly commensal, but have the capacity to acquire pathogenicity and antimicrobial resistance genes. In this family the species of Klebsiella spp and Escherichia coli are important cause of neonatal infections such as meningitis, pneumonia, intestinal infections and sepsis. Therefore, the present study aimed to identify and characterize the pathogenicity and antibiotic resistance profile of E. coli and Klebsiella spp. in samples of donors from the HMB of the Esau Matos Hospital and to correlate the microbial presence with the hygienic-sanitary conditions of the study participants. Samples were collected from the hands and nipple-areolar region, raw human milk aliquot and human milk aliquot after the pasteurization of 30 donors registered at the HMB during the year 2018. The donors also filled out a questionnaire about their socioeconomic and hygienic-sanitary conditions of milking. Samples were seeded using a conventional microbiology technique and strains of Klebsiella were identified in samples from 11 donors (36.6%). Of these, in 36.6% (n = 4) the microorganism was isolated only in cutaneous samples, 36,6% (n = 4) only in raw milked human milk raw (MHMR), 18.2% (n = 2) with positive results in cutaneous and MHMR samples and 9.1% (n = 1) with growth in the three seed samples. E. coli was not isolated in the samples collected. In all strains of Klebsiella spp. the antibiogram with recommendation of the CLSI 2017 was performed. 42.8% (n = 6) of the strains showed resistance to Ampicillin and Sulbactam and 35.7% (n = 5) resistant to Amoxicillin and Clavulanic Acid. The isolates were also subjected to the phenotypic detection of ESBL by disk-approximation, 23.1% (n = 3) presented positive results for this test. The modified Hodge test was performed on all strains to evaluate the presence of the carbapemenase enzyme and all strains tested negative. In addition to the phenotypic tests, the isolates were submitted to the Polymerase Chain Reaction technique to detect the following genes: gyrA, rpoB and pehX, for confirmation of the genus Klebsiella spp. and species of Klebsiella pneumoniae and Klebsiella oxytoca respectively; the genes associated with the production of extended spectrum beta-lactamases (ESBL) SHV, TEM, CTXM-1, CTXM-2 and CTXM-3 and the virulence genes rmpA and wcaG were also investigated. All strains were confirmed as Klebsiella spp., 53.8% (n = 7) identified as Klebsiella pneumoniae, 7.7% (n = 1) identified as Klebsiella oxytoca and 38.5% (n = 5) are not part of the two species surveyed. No ESBL genes and virulence genes were found in the isolated samples.
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SUZETE CARVALHO LANDULFO LUZ
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TERAPIA FOTODINÂMICA: EFETIVIDADE E MECANISMOS MOLECULARES DA AÇÃO DA CURCUMINA COMO FOTOSSENSIBILIZADOR FRENTE A BIOFILME DE Pseudomonas aeruginosa
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Orientador : LUCIANO PEREIRA ROSA
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCIANO PEREIRA ROSA
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FRANCINE CRISTINA SILVA ROSA
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NATALIA MAYUMI INADA
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Data: 03/06/2019
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Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa com alta capacidade de formar biofilmes densos, uma estrutura complexa que predispõe o desenvolvimento de fenótipos resistentes a antibióticos, contribuindo para que as infecções relacionadas aos cuidados de saúde se tornem um grave problema de saúde pública mundial. Trata-se de uma pesquisa in vitro, do tipo experimental cujo objetivo foi avaliar a efetividade de distintos protocolos de Terapia Fotodinâmica (PDT) mediada por curcumina frente a biofilmes de Pseudomonas aeruginosa que foram submetidos a protocolos de PDT mediada por curcumina em três distintas concentações (5µg/ml, 20µg/ml e 40µg/ml), ativada por luz LED azul em três diferentes doses de energia (3,24J/cm², 5,4J/cm² e 10,8J/cm²) comparados a grupo controle negativo (sem tratamento) e grupos controle positivos (LED e curcumina, isoladamente, nas concentrações e doses de energia delineadas para o estudo), totalizando 16 grupos experimentais. Após checagem dos pressupostos de normalidade e homogeneidade, a análise estatística foi realizada por meio de Anova e Kruskal-Wallis, com pós-teste de Bonferroni e Dunn, respectivamente e a interpretação dos dados levou em conta os valores de redução de Log10 de unidades formadora de colônia por ml (UFC/ml) para avaliar o efeito antimicrobiano da terapia instituída. As análises da estrutura do biofilme foram realizadas a partir de imagens geradas por microscopia confocal de varredura a laser (CSLM) e a microespectroscopia Raman possibilitou avaliar os mecanismos moleculares da ação da curcumina através dos picos observados no espectro. Os resultados demonstraram uma ação centrada no efeito disruptivo do biofilme, além de um efeito antimicrobiano em todos os protocolos de PDT, com melhores resultados observados nos protocolos com maior concentração de fotossensibilizador e dose de energia mais alta. A PDT mediada por curcumina avaliada nesta pesquisa mostrou-se eficaz não só em reduzir a viabilidade de células bacterianas, mas principalmente pelo seu efeito antibiofilme, podendo ser utilizada como potencializador de antimicrobianos.
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Mostrar Abstract
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Pseudomonas aeruginosa is a gram-negative bacteria with a high capacity to form dense biofilms, a complex structure that predisposes the development of antibiotic-resistant phenotypes, contributing to health-care-related infections becoming a serious public health problem worldwide. It is an in vitro research of the experimental type whose objective was to evaluate the effectiveness of different protocols of Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin against Pseudomonas aeruginosa biofilms that were submitted to protocols of PDT mediated by curcumin in three different concentrations (5μg / ml, 20μg / ml and 40μg / ml), activated by blue LED light at three different energy doses (3.24J / cm², 5.4J / cm² and 10.8J / cm²) compared to a negative control group ( without treatment) and positive control groups (LED and curcumin, alone, in the concentrations and energy doses delineated for the study), totaling 16 experimental groups. After checking the assumptions of normality and homogeneity, the statistical analysis was performed by Anova and Kruskal-Wallis, with post-test of Bonferroni and Dunn, respectively and the interpretation of the data took into account the values of reduction of Log10 of formative units colony count per ml (CFU / ml) to evaluate the antimicrobial effect of the therapy instituted. The biofilm structure analyzes were performed using confocal laser scanning (CSLM) images and Raman microspectroscopy allowed to evaluate the molecular mechanisms of curcumin action through the observed peaks in the spectrum. The results demonstrated an action centered on the disruptive effect of the biofilm, besides an antimicrobial effect in all PDT protocols, with better results observed in the protocols with higher concentration of photosensitizer and higher energy dose. The curcumin-mediated PDT evaluated in this research proved to be effective not only in reducing the viability of bacterial cells, but mainly because of its antibiofilm effect, and could be used as an antimicrobial potentiator.
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MARISOL PORTO ROCHA
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DESENVOLVIMENTO E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE ENXAGUATÓRIO ORAL MICROEMULSIONADO CONTENDO CURCUMINA PARA TERAPIA FOTODINÂMICA INTRAORAL
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Orientador : FRANCINE CRISTINA SILVA ROSA
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MEMBROS DA BANCA :
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ANDRE LUIS MORAIS RUELA
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FRANCINE CRISTINA SILVA ROSA
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LUCIANO PEREIRA ROSA
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NATALIA MAYUMI INADA
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Data: 17/06/2019
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A PDT (do inglês, Photodynamic Therapy - PDT) utiliza uma fonte luminosa, um fotossensibilizador (FS) e oxigênio no meio reacional para produzir como resultado espécies altamente reativas capazes de provocar inviabilização de microrganismos, tais como: bactérias e fungos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma formulação de enxaguatório baseado em microemulsão para uso odontológico em PDT. O FScurcumina foi incorporado na formulação e seu potencial antimicrobiano foi avaliado usando PDT.Após construção de diagrama de fases pseudoternário, selecionou-se microemulsão óleo em água (O/A) composta de polissorbato 80, óleo de Linhaça, sobitol, Polietilenoglicol 400 e água como um veículo apropriado para incorporação da curcumina. Os sistemas selecionados foram caracterizados por medidas de condutividade, perfil reológico, tamanho de gotículas e potencial zeta. A estabilidade física da formulação também foi avaliada. A avaliação antimicrobiana do enxaguatório desenvolvido foi avaliada frente à PDT. Foram utilizados 360 corpos-de-prova de resina acrílica divididos em grupos (n=10) com concentrações de curcumina de 80 e 40 µg/mL e tempos de irradiação de 10 e 30 minutos. Os corpos-de-prova foram contaminados por cepas de Staphylococcus aureu meticilino resistente, Candida albicans e Escherichia coli em poços de placa de cultura de células contendo meio BHI ou Sabouraud e incubados a 35º ± 2º C por 24 horas para a formação dos biofilmes. Após a incubação, os grupos experimentais foram tratados com PDT, utilizando-se LED de 460 nm para ativação do FS presente no enxaguatório oral. Foram acrescentados outros três grupos: controle em que nenhum tratamento foi realizado, somente o enxaguatório com FS e somente as luzes. Os resultados mostraram efetividade acima de 5Log10 nos grupos tratados com PDT 40 e 80µg/mL no tempo de 30 minutos.
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PDT (Photodynamic Therapy - PDT) uses a light source, a photosensitizer (FS) and oxygen in the reaction medium to produce as a result highly reactive species capable of causing unfeasibility of microorganisms, such as: bacteria and fungi. The objective of this work was to develop a microemulsion based rinse formulation for dental use in PDT. FScurcumine was incorporated into the formulation and its antimicrobial potential was evaluated using PDT. After the construction of a pseudoternario phase diagram, oil-in-water (O / W) microemulsion composed of polysorbate 80, linseed oil, sobitol, polyethylene glycol 400 and water as an appropriate vehicle for curcumin incorporation. The selected systems were characterized by measurements of conductivity, rheological profile, droplet size and zeta potential. The physical stability of the formulation was also evaluated. The antimicrobial evaluation of the developed mouthwash was evaluated against PDT. A total of 360 acrylic resin specimens were divided into groups (n = 10) with curcumin concentrations of 80 and 40 μg / mL and irradiation times of 10 and 30 minutes. The specimens were contaminated with Staphylococcus aureus methicillin resistant strains, Candida albicans and Escherichia coli in wells of culture medium containing BHI or Sabouraud medium and incubated at 35 ± 2 ° C for 24 hours for the formation of biofilms. After incubation, the experimental groups were treated with PDT, using 460 nm LEDs for activation of FS present in the oral mouthwash. Three other groups were added: control in which no treatment was performed, only the FS and only the FS. The results showed effectiveness above 5Log10 in the groups treated with PDT 40 and 80μg / mL in the time of 30 minutes.
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DANIELBA ALMEIDA DA SILVA
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Efeitos in vitro e in vivo do nitróxido tempol sobre a inflamação e o estresse redox induzidos pela exposição aguda à fumaça de cigarro.
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Orientador : RAPHAEL FERREIRA QUEIROZ
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MEMBROS DA BANCA :
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AMELIA CRISTINA MENDES DE MAGALHAES GUSMAO
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FLÁVIA VIANA SANTA CECÍLIA
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RAPHAEL FERREIRA QUEIROZ
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Data: 05/07/2019
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A fumaça de cigarro é uma mistura complexa composta por mais de 6000 substâncias químicas diferentes. No pulmão, esses componentes podem direta ou indiretamente desencadear inflamação e estresse redox, característicos de algumas doenças pulmonares, incluindo a Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica. Tempol (4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxil) e outros nitróxidos cíclicos reduzem a injúria tecidual associada à inflamação por mecanismos ainda pouco compreendidos. Na literatura não há relato sobre os efeitos do tempol sobre a lesão pulmonar causada pela fumaça de cigarro bem como seu envolvimento na ativação da via do Nrf2. Nesse contexto, este estudo objetivou avaliar o efeito do tempol sobre a inflamação e estresse redox induzidos pela exposição aguda à fumaça de cigarro in vitro e in vivo. Camundongos C57BL/6 machos (n=32) foram divididos em 4 grupos (n=8, cada): 1) controle exposto ao ar ambiente (GC), 2) animais expostos à fumaça do cigarro por 5 dias (GFC), camundongos tratados 3) preventivamente ou 4) terapeuticamente com tempol (50 mg/kg/dia) e expostos à fumaça do cigarro por 5 dias (TP50+FC e TT50+FC, respectivamente). Os animais foram eutanaziados após 24 h da última exposição à fumaça de cigarro, e o lavado broncoalveolar e pulmões foram coletados para as análises posteriores. O número de leucócitos totais e neutrófilos bem como concentração e atividade da mieloperoxidase aumentaram no trato respiratório e no parênquima pulmonar dos camundongos expostos à fumaça de cigarro. Como consequência, houve aumento da peroxidação de lipídeos, e nitração e carbonilação de proteínas do pulmão. A administração de tempol antes ou durante à exposição à fumaça de cigarro inibiu entre 60-80% todos os parâmetros acima. Tempol também reduziu a expressão das citocinas inflamatórias IL-6, IL-1β e IL-17 para níveis basais e de TNF-α em aproximadamente 50%. Por outro lado, as transcrições de IL-10, TGF-β, e marcadores de ativação da via do Nrf2, hemeoxigenase 1 (HO-1) e GPx2, aumentaram significativamente nos camundongos tratados preventivamente e terapeuticamente com o nitróxido, o que refletiu diretamente na maior atividade da glutationa peroxidase no homogenato do pulmão. Em seguida, os efeitos do tempol foram avaliados sobre o estado redox intracelular, atividade da óxido nítrico sintase e expressão da HO-1 em macrófagos murinos RAW 264.7. Quando as células RAW 264.7 foram pré-incubadas com tempol (25, 50 e 100 µM) por 24 h e estimuladas com extrato da fumaça do cigarro, a oxidação intracelular da diclorofluoresceína foi reduzida de maneira concentração dependente, embora as concentrações de nitrito e nitrato, marcadores indiretos da atividade da óxido nítrico sintase, não se alteraram. Nas células tratadas com tempol (50 e 100 µM) por 24 h os níveis de HO-1 aumentaram de acordo com SDS-PAGE/Western Blotting. Coletivamente, esses dados indicam que tempol protege células e tecidos contra o dano oxidativo e inflamação na exposição à fumaça de cigarro provavelmente através da ativação da via do Nrf2.
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Mostrar Abstract
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Cigarette smoke is a complex mixture of more than 6000 different chemicals substances. In the lung, these components can directly or indirectly trigger inflammation and redox stress, characteristic of some pulmonary diseases, including Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Tempol (4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethyl piperidine-1-oxyl) and other cyclic nitroxides reduce tissue injury associated with inflammation by mechanisms that are not fully understood. In the literature there is no report on the effects of tempol on lung injury caused by cigarette smoke as well as its involvement in the activation of the Nrf2 pathway. In this context, this study aimed to evaluate the in vitro and in vivo effect of tempol on inflammation and redox stress induced by acute exposure to cigarette smoke. C57BL/6 (n=32) were assigned to four groups (n = 8 each): 1) control exposed to ambient air (CG), 2) mice exposed to cigarette smoke for 5 days (CSG), mice treated 3) preventively or 4) therapeutically with tempol (50 mg/kg/day) and exposed to cigarette smoke for 5 days (TP50+CS and TT50+CS, respectively). The animals were euthanized after 24 h of last exposure to cigarette smoke, and bronchoalveolar lavage and lungs were collected for further analysis. The number of total leukocytes and neutrophils as well as myeloperoxidase concentration and activity increased in the respiratory tract and lung parenchyma of mice exposed to cigarette smoke. As consequence, there was an increase in lipid peroxidation, and nitration and carbonylation of lung proteins. Administration of tempol before or during exposure to cigarette smoke inhibited 60-80% all of the above parameters. Tempol also reduced inflammatory cytokines expression IL-6, IL-1β and IL-17 for basal levels and TNF-α by approximately 50%. On the other hand, IL-10, TGF-β transcription, and activation Nrf2 pathway markers, heme oxygenase 1 (HO-1) and GPx2 increased significantly in the mice treated preventively and therapeutically with the nitroxide, which reflected a higher activity of glutathione peroxidase in the lung homogenate. Then, the effects of tempol were evaluated on intracellular redox state, nitric oxide synthase activity and HO-1 expression in RAW 264.7 murine macrophages. When RAW 264.7 cells were preincubated with tempol (25, 50 and 100 μM) for 24 h and stimulated with cigarette smoke extract, the intracellular oxidation of dichlorofluorescein was reduced in a concentration dependent manner, although nitrite and nitrate concentrations, indirect marker of nitric oxide synthase activity, did not change. In the cells treated with tempol (50 and 100 μM) for 24 h, HO-1 levels increased according to SDS-PAGE / Western Blotting. Collectively, these data indicate that tempol protects cells and tissues against oxidative damage and inflammation on exposure to cigarette smoke probably through the activation of the Nrf2 pathway.
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BRUNO PEREIRA DE ARAÚJO
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ESTUDO DA ATIVIDADE LARVICIDA DA TERAPIA FOTODINÂMICA MEDIADA POR CURCUMINA EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES E LED AZUL (460nm) SOBRE LARVAS DE MOSQUITOS SELVAGENS DO GÊNERO Aedes
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Orientador : FRANCINE CRISTINA SILVA ROSA
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MEMBROS DA BANCA :
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AGDA ALVES DA ROCHA
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FABRICIO FREIRE DE MELO
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FRANCINE CRISTINA SILVA ROSA
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LUCIANO PEREIRA ROSA
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Data: 26/11/2019
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Introdução: No primeiro trimestre de 2019 foram registrados 273.193 casos confirmados de dengue no país, o que representou um aumento de 74% em relação ao mesmo período do ano anterior. Ainda em 2019, no mesmo período, foram registrados 15.352 casos prováveis de chikungunya, sendo confirmados 2 óbitos (1 na Bahia e 1 no Rio de Janeiro) e 14 óbitos em investigação. Quanto a zika, nesse período, foram registrados 2.344 casos prováveis no país, sendo o Norte e Sudeste as regiões com maior número de casos prováveis. É notório que as políticas atuais para controle dos vetores dessas arboviroses não são eficazes. Estudos para utilização de fotossensibilizadores ativados pela luz como alternativa aos inseticidas convencionais para o controle sustentável dos mosquitos vetores como Aedes (dengue, febre amarela, chikungunya), Anopheles (malária), Culex (febre amarela) já podem ser encontrados, evidenciando vantagens sobre os inseticidas convencionais (eficácia, segurança, não-mutagenicidade e rápida degradação). Objetivo: Avaliar a efetividade da Terapia Fotodinâmica (PDT) mediada por curcumina e LED azul (460nm) na mortalidade de larvas selvagens de mosquitos do gênero Aedes aegypti. Materiais e métodos: Foram colocadas armadilhas ovitrampas em regiões estratégicas identificadas pelo LIRA emitido pela secretaria de Vigilância Epidemiológica da cidade de Vitória da Conquista-BA e as larvas coletadas nos estágios L2 e L3 foram alimentadas durante 24h com curcumina nas concentrações de 10, 20 e 50% misturada à ração de peixe e em seguida foram submetidas à irradiação com LED azul por 2h (22mW/cm2 e 158,4 J/cm2). As larvas foram colocadas em recipiente com água desclorada e a mortalidade foi acompanhada pelo período de 24 e 48h. Grupos controle em que foi realizada somente a exposição das larvas ao LED azul por 2h e em que larvas foram somente alimentadas com ração misturada à curcumina (10, 20 e 50%) foram incluídos no estudo, além do grupo sem tratamento. Todos experimentos foram repetidos após intervalo de 2 meses para confirmação dos resultados, totalizando 256 testes (testes 1 e 2, n=16) entre os grupos PDT 10%, PDT 20%, PDT 50%, curcumina 10%, curcumina 20%, curcumina 50%, LED azul e grupo sem tratamento. As larvas pertencentes ao grupo PDT 20% foram submetidas a confecção de lâminas histológicas, microsopia confocal e espectroscopia Raman. Resultados: Todos os grupos de PDT apresentaram atividade larvicida, evidenciada pelos testes complementares realizados no grupo PDT 20%. Conclusão: Concluiu-se que a PDT em todas as concentrações foi efetiva na mortalidade das larvas, sendo a concentração de 20% de curcumina a que apresentou melhor atividade com mortalidade de 100% em 24h.
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Introduction: In the first quarter of 2019, there were 273193 confirmed cases of dengue in the country, which represented an increase of 74% over the same period in last year. Also in 2019, in the same period, 15352 probable cases of chikungunya were register, with 2 deaths confirmed (1 in Bahia and 1 in Rio de Janeiro) and 14 deaths are under investigation. As for Zika, in this period, 2344 probable cases were register in the country, with the North and Southeast being the regions with the highest number of probable cases. It is notorious that current policies for vector control of these arboviruses are not effective. Studies of the use of light-activated photosensitizers as an alternative to conventional insecticides for sustainable control of vector mosquitoes such as Aedes (dengue, yellow fever, chikungunya), Anopheles (malaria), Culex (yellow fever) can already be found, showing advantages over conventional insecticides (efficacy, safety, non-mutagenicity and fast degradation). Objective: Evaluate the effectiveness of curcumin-mediated photodynamic therapy (PDT) and blue LED (460nm) on mortality of wild larvae of Aedes aegypti’s mosquitoes. Material and methods: Traps were place in strategic regions identified by the LIRA issued by the Secretariat of Epidemiological Surveillance of the city of Vitória da Conquista-BA. The larvae collected in stages L2 and L3 were feed for 24h with curcumin at concentrations of 10, 20 and 50% mixed with fish food and then underwent blue LED irradiation for 2h (22mW / cm2 and 158.4 J / cm2). The larvae were place in a container with chlorinated water and mortality was followed for 24 and 48h. Control groups in which only larvae were expose to blue LED for 2h and where larvae were only fed with curcumin mixed feed (10, 20 and 50%) were included in the study, in addition to the untreated group. All experiments were repeated after a 2-month interval for confirmation of the results, totaling 256 tests (tests 1 and 2, n = 16) between the PDT 10%, PDT 20%, PDT 50%, curcumin 10%, curcumin 20%, curcumin 50%, blue LED and untreated group. Larvae belonging to the 20% PDT group were submitted to histological slides, confocal microscopy and Raman spectroscopy. Results: All PDT groups showed larvicidal activity, evidenced by the complementary tests performed in the PDT 20% group. Conclusion: The PDT in all concentrations was effective in larval mortality, with the concentration of 20% curcumin showing the best activity with mortality of 100% in 24h.
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MAGDA SOUZA VIANA
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RECURSOS FOTÔNICOS APLICADOS AO PROCESSO FERMENTATIVO DA PRODUÇÃO DE VINHO TINTO: AVALIAÇÃO DO PROCESSO INICIAL
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Orientador : LUCIANO PEREIRA ROSA
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCIANO PEREIRA ROSA
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FRANCINE CRISTINA SILVA ROSA
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BRUNO LOPES BASTOS
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Data: 28/11/2019
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O vinho é considerado uma bebida alcoólica resultante da fermentação da uva. Para isso, durante o processo de sua produção, várias reações químicas são provocadas pelas leveduras, transformando os açúcares presentes na fruta em álcool e posteriormente dando origem a bebida. A obtenção de vinho de qualidade depende de uma série de pré-requisitos, dentre estes, fatores ambientais e intervenção humana que, quando otimizados, resultam em um aumento significativo da qualidade do processo inicial e consequentemente em melhoria do produto final. Neste cenário, a busca por melhorias no processo de produção do vinho vem sendo estudadas, uma delas, analisada por este trabalho é a aplicação da fotoestimulação, visto que a luz é capaz de acelerar o metabolismo da levedura levando a redução no tempo gasto na fermentação sem alterar a qualidade da bebida, como já comprovado em estudos com cerveja. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de Diodos Emissores de Luzes (LEDs) na seleção microbiana, no rendimento e produtividade da fermentação durante o processo inicial de produção de vinho tinto. Os reatores fotônicos utilizados no processo foram confeccionados com quatro fitas de LED RGB (Red – Green – Blue) (MSS LED Lightining Co., Ltda., Shenzhen, Guangdong, China) medindo 10 cm de comprimento, essas fitas foram fixadas nas paredes externas de um tubo de ensaio de vidro de 12 x 100 mm. Cada fita continha 6 LEDs RGB, perfazendo o conjunto um total de 24 LEDs RGB. Os reatores foram inseridos em elermayer contendo mosto de uva com leveduras do gênero Saccharomyces, isoladas das próprias uvas. Para grupos que foram avaliados a capacidade microbiológica, foi utilizada a luz LED azul e para os grupos que foram avaliados a produtividade e rendimento da fermentação, foi utilizada a luz vermelha. Para que não houvesse interferência da luz ambiente, em todos os grupos irradiados com luz o erlenmeyer contendo o mosto foi totalmente recoberto por papel filme. Ao realizar as análises intergrupos, pode-se observar que o LED foi eficiente na diminuição bacteriana principalmente nos tempos de 48 e 72 horas de aplicação, mostrando diferença estatística significante (p < 0,001) quando comparados a todos os tempos do grupo Puro (P24h, P48h e P72h) e aos tempos de 24 horas do grupo Metabissulfito (M24h). Outro ponto positivo foi o teor alcoólico obtido nas amostras que foram irradiadas com LED vermelho de 525nm, estas obtiveram resultados superiores quando comparados a todos os demais grupos (p < 0,001) no tempo final avaliado de 72 horas, mostrando que a luz estimula produção de etanol pelas leveduras. Assim percebe-se que a utilização das luzes azul (460 nm) e vermelha (630 nm) tem efeito positivo em mostos de uvas tanto na parte de descontaminação microbiológica quando na obtenção de etanol, podendo assim ser utilizada como uma técnica inovadora como forma de aprimorar e facilitar a produção de vinho tinto.
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Wine is considered an alcoholic beverage resulting from the fermentation of grapes. For this, during the process of its production, several chemical reactions are provoked by the yeast, transforming the sugars present in the fruit in alcohol and later giving rise to drink. Obtaining quality wine depends on a number of prerequisites, including environmental factors and human intervention, which, when optimized, result in a significant increase in the quality of the initial process and consequently in the improvement of the final product. In this scenario, the search for improvements in the wine production process has been studied, one of them, analyzed by this work is the application of photostimulation, since light is able to accelerate the yeast metabolism leading to a reduction in the time spent on fermentation. without altering the quality of the drink, as already proven in studies with beer number of prerequisites, including environmental factors and human intervention, which, when optimized, result in a significant increase in the quality of the initial process and consequently in the improvement of the final. product. In this scenario, the search for improvements in the wine production process has been studied, one of which, analyzed by this work is the application of photostimulation, since light is able to accelerate the yeast metabolism leading to a reduction in the time spent on fermentation . without changing the quality of the drink, as proven in studies with beer. Thus, the present work aimed to evaluate the effects of Light Emitting Diodes (LEDs) on microbial selection, fermentation yield and productivity during the initial process of red wine production. The photonic reactors used in the process were made with four RGB (Red - Green - Blue) LED strips (MSS LED Lightining Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong, China) measuring 10 cm in length, these strips were fixed to the outer walls. of a 12 x 100 mm glass test tube. Each ribbon contained 6 RGB LEDs, making up a total of 24 RGB LEDs. The reactors were inserted in elermayer containing grape must with yeast of the genus Saccharomyces, isolated from the grapes themselves. For groups that were evaluated for microbiological capacity, the blue LED light was used and for groups that were evaluated the productivity and yield of fermentation, the red light was used. In order to avoid interference from ambient light, in all groups irradiated with light the erlenmeyer containing the must was completely covered with film paper. When performing the intergroup analyzes, it can be observed that the LED was efficient in the bacterial decrease mainly at 48 and 72 hours of application, showing a statistically significant difference (p <0.001) when compared to all times of the Pure group (P24h, P48h and P72h) and at the 24 hour time of the Metabisulfite group (M24h). Another positive point was the alcohol content obtained in the samples that were irradiated with 525nm red LED, which obtained superior results when compared to all other groups (p <0.001) in the final time of 72 hours, showing that the light stimulates the production of ethanol by yeast. Thus, it can be seen that the use of blue (460 nm) and red (630 nm) lights has a positive effect on grape must both in the microbiological decontamination and ethanol production, and can thus be used as an innovative technique as a means of enhance and facilitate the production of red wine.
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ROBERTA DE SOUZA SANTOS
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DIVERSIDADE TAXÔNOMICA DE FUNGOS MICORRÍZICOS ARBUSCULARES EM CAFEEIRO COM DIFERENTES TIPOS DE MANEJO E EFICIÊNCIA NA PROMOÇÃO DO CRESCIMENTO DO FEIJÃO-CAUPI
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Orientador : PATRICIA LOPES LEAL
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MEMBROS DA BANCA :
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PATRICIA LOPES LEAL
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JOILSON SILVA FERREIRA
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RENATA CORREIA ASSUNÇÃO SPÓSITO
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Data: 03/12/2019
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Os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) são organismos mutualísticos e estabelecem simbiose com a maioria dos vegetais conhecidos, oferecendo diversos benefícios nutricionais. A diversidade desses fungos conhecida até o momento ainda é baixa, principalmente em sistemas agro florestais e culturas de café presentes no Nordeste brasileiro. Assim, objetivamos investigar (1) a ocorrência e diversidade de FMAs em solos cultivados com café sob diferentes manejos (arborizado com grevílea e a pleno sol com espaçamentos de 1,70 x 0,70 cm e 2,50 x 0,50 cm), e em solos de áreas de entorno sob pastagem e mata nativa (mata de cipó), localizadas no município de Barra do Choça, Bahia, Brasil e (2) determinar a eficiência destas comunidades fúngicas na cultura de feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp). Uma parte do solo coletado de cada área foi encaminhada para extração e identificação dos esporos de FMAs, e outra parte encaminhada para o experimento de cultura armadilha para determinação da eficiência em feijão caupi. O experimento de cultura armadilha foi conduzido em casa de vegetação, em vasos, com delineamento inteiramente casualisado (DIC), com três repetições onde foram analisadas duas espécies de FMAs em mistura (Claroideoglomus etunicatum e Rhizophagus clarus) como tratamento referência, um tratamento testemunha não inoculado e outros cinco tratamentos compostos por comunidades de FMAs provenientes das cinco áreas de coleta. Após 80 dias de crescimento das plantas o experimento foi desmontado e os dados tabulados estatisticamente. Esporos de 43 morfotipos de FMAs foram recuperados e identificados das amostras de campo referentes às áreas de coleta, distribuídos entre 14 gêneros pertencentes a seis famílias de Glomeromycota: Glomeraceae (35%), Acaulosporaceae (35%) ,Gigasporaceae (21%), Ambisporaceae (5%), Archaeosporaceae (2%) e Diversisporaceae (2%). De modo geral, foi observada a predominância de ocorrência de FMAs do gênero Acaulospora (34,8%) seguido de Glomus (16,27%). Segundo a frequência de ocorrência, Rhizophagus fasciculatus, Acaulospora mellea e Glomus sp.1foram as espécies dominantes em nosso estudo. Nas áreas de cultivo de café foram identificados 12 gêneros, sendo que dois desses (Dominikia e Fuscutata) nunca reportados na literatura quanto à associação com café cultivado no Brasil. Já os resultados referentes à cultura armadilha demonstraram que o tratamento referência, como esperado, apresentou os melhores resultados de massa seca da parte aérea e massa seca da raiz (MSPA+MSR) do feijão caupi, 7,55 g, e o tratamento com solo sob cultivo de café sombreado com grevílea foi o que mais se aproximou do tratamento referência com valores de (MSPA+MSR) igual a 4,31 g e teor de fósforo de 7,60 g kg-1. O tratamento com solo sob o cultivo de mata nativa apesar de não ter se destacado no tocante a massa seca do feijão caupi, apresentou a maior diversidade de FMAs, 23 morfotipos, indicando que maior diversidade de espécies não traduz, necessariamente, em maiores benefícios para a planta. Este estudo contribui significativamente para o nosso conhecimento sobre a composição da comunidade de FMAs em solos de locais de referência no cultivo de café no nordeste brasileiro, e mostrou que o feijão caupi foi responsivo a inoculação de muitas dessas comunidades.
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Arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) are considered mutualistic organisms that establish symbiotic relationships with most known plant species, offering plenty nutritional benefits. The knowledge regarding the diversity of these fungi is rather low, mainly in agroforestry systems and coffee plantations of Northeast Brazil. Thereby, our aim (1) was to examine the occurrence and diversity of AMF in growing coffee soils under different management (underneath grevília’s canopy and sun-grown with spacing of 1.7 x 0.7 cm and 2.5 x 0.5 cm), and in Soils of surrounding areas under pasture and native forest , located in the municipality of Barra do Choça, Bahia, Brazil and (2) to determine the efficiency of these fungal communities in cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp) culture. Part of soil samples of each area was sent to extraction and identification of AMF spores, whereasthe other was used in the trap culture experiment to determine the caupi-bean efficiency. The trap culture experiment was conductedin a greenhouse, in pots, by using a completely randomized design (CRD), with three repetitions, in which two AMF species in a mixture (Claroideoglomus etunicatum and Rhizophagus clarus) was used as reference treatment, one control treatment not inoculated and five treatments composed by AMF communities from the five areas sampled were analysed. After 80 days of plant growth the experiment was disassembled and the data was tabulated and statistically tested. Spores from 43 AMF morphotypes were recovered and identified from the field samples, distributed among 14 genera belonging to six Glomeromycota families: Glomeraceae (35%), Acaulosporaceae (35%), Gigasporaceae (21%), Ambisporaceae (5%), Archaeosporaceae (2%) e Diversisporaceae (2%). Overall, it was observed the predominance of occurrence of Acaulospora AMFs (34.8%) followed by Glomus (16.27%). According to the frequency of occurrence, Rhizophagus fasciculatus, Acaulospora mellea and Glomus sp.1 were the most dominant species in our study. In the coffee growing areas 12 generas were identified, two of these (Dominikia and Fuscutata) have never been reported in the literature associated to coffee growing in Brazil. Results from the trap culture experiment suggested that the reference treatment, as expected, showed significant results related to both shoot and root dry mass (SDM+RDM) of caupi-bean (7.55 g), and the soil from the shade-grown coffee treatment underneath grevílea was the closest to the reference treatment with values of (SDM+RDM) equal to (4.31 g) and phosphorus content equals to (7.60 g kg-1). Although the treatment of coffee growing underneath native forest did not show any change related to dry mass of caupi-bean, it showed the highest diversity of AMF, 23 morphotypes, suggesting that high diversity of AMF does not translate, necessarily, into benefits to plants. This study advances significantly our knowledge regarding the community composition of AMF in soils of an important coffee growing location in the Brazilian northeast, showing that caupi-bean was responsive to the inoculation of many of these communities.
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LORENA ALVES DE OLIVEIRA SILVA
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Desenvolvimento de sistemas nanodispersos contendo peróxido de Carbamida para clareamento dental
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Orientador : MATEUS FREIRE LEITE
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MEMBROS DA BANCA :
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ADRIANO MAIA DOS SANTOS
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ANGELICA FERRAZ GOMES
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MATEUS FREIRE LEITE
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Data: 05/12/2019
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O crescimento no ramo da odontologia estética tem aumentado, em consequência da exigência no padrão estético do sorriso. Um sorriso saudável e bonito melhora a autoimagem e confiança, e está diretamente associada a busca por dentes mais brancos, o que torna o clareamento dental um procedimento bastante requisitado na atualidade. O clareamento consiste no resultado de uma complexa interação física e química entre o dente e o agente causador do manchamento. Quando se pensa em desenvolvimento de novos produtos, a nanotecnologia tem sido apontada como a revolução tecnológica, que despertou um enorme interesse na comunidade científica ao longo das últimas décadas, sendo um dos principais focos das atividades de pesquisa, desenvolvimento e inovação em todos os países. As microemulsões (MEs) são sistemas nanotecnológicos, termodinamicamente estáveis, isotrópicos, dispersos que consistem em dois líquidos imiscíveis. A validação de método analítico, no controle de qualidade de produtos farmacêuticos, é demonstrar que o método é apropriado para determinada finalidade, ou seja, a determinação quantitativa de fármacos. Neste trabalho foi caracterizado e avaliado a estabilidade sistemas nanotecnológicos contendo peróxido de carbamida 16% para clareador dental, com potencial de permeação nos canalículos dentinários a fim de otimizar o processo de clareamento. A formulação selecionada, a partir do diagrama de fases, foi incorporada o peróxido de carbamida a 16% e em seguida caracterizada (microscopia óptica, pH, tamanho de partículas, índice de polidispersividade, potencial zeta, condutividade). A formulação também foi submetida ao estudo de estabilidade preliminar e acelerada. Validou o método para quantificação do peróxido de carbamida, conforme a RDC 166 - ANVISA. O produto contendo Peróxido de Carbamida 16% obteve valores de pH de 5,86 ± 0,05; potencial zeta de -6,38 ± 0,37 mV; tamanho de gotículas de 22,52 ± 0,37 nm; Índice de Polidispersividade de 0,164 ± 0,02 e Condutividade de 0,1063 ± 0,001 µs/cm. O perfil reológico das amostras analisadas apresentou-se com comportamento tixotrópico. O produto apresenta-se estável.
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Growth in the field of aesthetic dentistry has increased, as a result of the requirement in the aesthetic pattern of smile. A healthy and beautiful smile improves self-image and confidence, is directly associated with searching for whiter teeth, which makes dental whitening a requested procedure today. Whitening consists a result of a complex physical and chemical interaction between the tooth and the stain causative agent. When thinking about developing new products, nanotechnology has been pointed out as the technological revolution, which has aroused a huge interest in the scientific community over the past few decades, being one of the main focuses of development and innovation in all countries. Microemulsions (EMs) are nanotechnological, thermodynamically stable, isotropic, dispersed systems consisting of two imiscible liquids. The validation of an analytical method, in the quality control of pharmaceutical products, is to demonstrate that the method is appropriate for a given purpose, that is, the quantitative determination of drugs. In this work, the stability of nanotechnological systems containing carbamide peroxide 16% for tooth whitener was characterized and evaluated, with permeation potential in the dentin canaliles in order to optimize the bleaching process. The selected formulation, from the phase diagram, carbamide peroxide 16% was incorporated, and then characterized (optical microscopy, pH, particle size, polydispersivity index, zeta potential,conductivity). The formulation also submitted to the study of preliminary and accelerated stability. Validated the method for quantifying carbamide peroxide, according to RDC 166 – ANVISA. The product containing Carbamide Peroxide 16% obtained pH values of 5.86 ± 0.05; zeta potential -6.38 ± 0.37mV; droplet size 22.52 ± 0.37nm; Polydispersivity index 0.164±0.02 and Conductivity 0.1063±,001μs/cm. The rheological profile of the analyzed samples presented with thixotropic behavior. The product is stable.
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MAIARA PRATES DE ALMEIDA
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Obtenção de comprimidos contendo extrato hidroalcoólico spray dried padronizado de Lippia alba (Miller) N. E. Brown
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Orientador : MATEUS FREIRE LEITE
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MEMBROS DA BANCA :
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ANDRE LUIS MORAIS RUELA
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JULIANO GERALDO AMARAL
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MATEUS FREIRE LEITE
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Data: 06/12/2019
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A Lippia alba (Miller) N. E. Brown é uma das espécies promissoras ao desenolvimento de um novo medicamento. É popularmente conhecida como erva-cidreira e diversos estudos farmacológicos foram realizados avaliando tanto a atividade dos seus óleos essenciais, quanto dos extratos das folhas dos seus diferentes quimiotipos. Dentre as atividades farmacológicas da planta estão antiulcerogênica, antiespasmódica, anestésica e sedativa, além de antioxidantes e antibacteriana. A Lippia alba apresenta como constituintes fixos desde iridoídes, flavonoídes e também fenilpropanoídes. O acteosideo é um composto glicosilado, um fenilpropanoíde presente na Lippia alba, em quantidades superiores a outras substâncias, podendo ser um marcador analítico para a planta. Suas ações farmacológicas constam desde atividade antioxidante, ansiolíticas e até neuroprotetiva. O presente estudo objetiva o desenvolvimento e caracterização fisíco-química de comprimidos obtidos a partir do extrato hidroalcoólico de Lippia alba seco por spray dried. Análises de modelagem molecular das estruturas de 15 compostos identificados e quantificados para a planta foram submetidas à avaliação das atividades ansiolíticas e sedativas com o auxílio do programa PASS. Foi realizada a secagem por spray dried do extrato hidroalcoólico da planta (SDLA), o cálculo do índice de Carr (IC) e razão de Hausner (RH) do pó obtido. Como também, o desenvolvimento de formulações com os extratos padronizados e a análise do ângulo de repouso para a formulação escolhida. A compressão se deu por via direta e posteriormente analisaram-se os parâmetros de peso médio, friabilidade, dureza e desintegração dos comprimidos. Foi validado método analítico por CLAE, para quantificação do acteosideo. O teste de solubilidade do insumo farmacêutico ativo, o extrato, foi realizado a partir da quantificação do acteosideo exposto em meio aquoso com variação de pH de 1,0 a 6,8 após 24h. Realizou-se o doseamento do extrato e do comprimido, e também a dissolução do produto final. Sugere-se através das análises dos resultados obtidos com a predição do servidor PASS uma possível ação ansiolítica do acteosídeo devido à inibição da enzima GABA-transaminase. O extrato SDLA 7 apresentou excelentes resultados para o IC e RH, sendo o escolhido para o desenvolvimento. Os comprimidos obtidos foram aprovados quanto aos testes de peso médio, dureza, friabilidade e desintegração. O método validado utilizou metanol e ácido fórmico 0,9% (1:9), com faixa de trabalho variando de 2,10 a 18,90 µg/mL, analisados a 325 nm. A linearidade, precisão, seletividade, robustez, exatidão e limites de quantificação e detecção apresentaram-se de acordo as diretrizes vigentes. O teste de solubilidade apresentou melhores resultados no meio HCl 0,1M. O doseamento do extrato e comprimido foi aprovado, assim como a dissolução do produto desenvolvido.
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One of the promising native species to develop a new drug is Lippia alba (Miller) N. E. Brown. This plant is popularly known as “erva-cidreira” and several pharmacological studies were carried out evaluating the activity of both its essential oils and the leaf extracts of its different chemotypes. Among the pharmacological activities of the plant are antiulcerogenic, antispasmodic, anesthetic and sedative, as well as antioxidants and antibacterial. Lippia alba presents as fixed constituents from iridoids, flavonoids and also phenylpropanoids. Acteoside is a glycosylated compound, a phenylpropanoid present in Lippia alba in high quantities than other substances and maybe an analytical marker for the plant. Its pharmacological actions range from antioxidant, anxiolytic and even neuroprotective activity. The present study aims for the development and chemical-physical characterization of tablets obtained from spray-dried Lippia alba hydroalcoholic extract. Molecular modeling analyzes of the structures of 15 compounds identified and quantified for the plant were submitted to the evaluation of anxiolytic and sedative activities with de aid of the PASS program. It was performed spray drying of the hydroalcoholic extract (SDLA) of the plant, the calculation of the Carr index (IC) and Hausner ratio (RH) of the obtained powder. The developing formulations with standardized extracts and the angle of repose analyses for the chosen were investigated. Compression was performed directly and subsequently, the parameters of mean weight, friability, hardness and disintegration of the tablets were analyzed. An analytical method was validated by HPLC to quantify acteoside. The solubility test os the active pharmaceutical ingredient, the extract, was performed from the quantification of the exposed acteoside in aqueous médium with pH variation from 1.0 to 6.8 after 24h. The extract and tablets were dosed and the final product was dissolved. A possible anxiolytic action of acteoside due to inhibition of the enzyme GABA transaminase is suggested by analysis of the results obtained with the PASS server prediction. SDLA 7 extract showed excellent results for IC and RH, being chosen for development. The tablets were approved for the tests of average weight, hardness, friability, and disintegration. The validity method used methanol and formic acid 0,9% (1:9) with the working range from 2.10 to 18.90 µg/mL, analyzed at 325 nm. The linearity, precision, selectivity, robustness, accuracy, and limits of quantification and detection were following current guidelines. The solubility test showed better results in HCl 0.1M. The dosage of the extract and tablets was approved, as well as the dissolution of the developed product.
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