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Dissertações |
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BRUNA RAMOS TOSTA
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IMPACTO DE VARIANTES NO GENE MTOR NA GRAVIDADE DA COVID-19 EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA
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Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
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CINTHIA VILA NOVA SANTANA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 03/02/2023
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A pandemia de SARS-CoV-2 causou milhares de mortes em todo o mundo. A gravidade da doença está associada à idade, sexo, comorbidades, e uma resposta inflamatória sistêmica exacerbada e descontrolada resultante da tempestade de citocinas. As tempestades de citocinas são caracterizadas por uma grande liberação desregulada de citocinas que podem ser desencadeadas por infecções virais e moduladas por várias vias de sinalização. A proteína alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) é uma serina treonina quinase capaz de moldar a ativação celular e a resposta inflamatória inata das células, que é a primeira linha de defesa contra os vírus. A via mTORC1 mostrou ser afetada pelo SARS-CoV-2 e hiperativada em pacientes graves de COVID-19, o que sugere que a desregulação desta via pode desempenhar um papel importante no mau prognóstico da doença. Além disso, a genética dos pacientes poderia contribuir para esse desfecho. Objetivos: Investigar o envolvimento de variantes no gene MTOR com a gravidade da COVID-19 na população brasileira. Métodos: Indivíduos com COVID-19 grave e leve foram recrutados e amostras de sangue periférico e dados sociodemográficos foram coletados. Os SNPs rs1057079 e rs2536 do gene MTOR foram genotipados através de RT-qPCR. Realizamos análise de regressão logística e curvas de sobrevivência Kaplan-Meier. Aplicamos um escore de risco genético para estimar a contribuição cumulativa dos alelos de risco. Os níveis de plasma das citocinas TNF e IL-6 foram medidos através de ELISA e analisados. Resultados e Conclusões: O alelo T de rs1057079 foi associado ao risco de gravidade e a COVID-19 crítica, bem como ao aumento dos níveis plasmáticos de TNF. Enquanto isso, o alelo T de rs2536 foi associado com o óbito por COVID-19. Os alelos de risco das variantes mostraram um risco cumulativo quando herdadas juntas e podem ser úteis para prever um resultado mais grave da COVID-19.
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SARS-CoV-2’s pandemic has caused thousands of deaths worldwide. The disease’s severity is associated with age, sex, ongoing comorbidities along with exacerbated and uncontrolled systemic inflammatory response resulting from cytokine storm. Cytokine storms are characterized by a large dysregulated release of cytokines that can be triggered by viral infections and modulated by various signaling pathways. The target protein of rapamycin in mammals (mTOR) is a serine threonine kinase capable of shaping cellular activation and inflammatory innate response of cells, which is the first line of defense against viruses. The mTORC1 pathway has been shown to be affected by SARS-CoV-2 and hyperactivated in COVID-19’s severe patients which suggest that dysregulation of this pathway might play an important role in poor prognosis of disease. In addition, the genetic background of patients could possibly contribute to this outcome. Objectives: To investigate the involvement of variants in the MTOR gene with the severity of COVID-19 in the Brazilian population. Methods: Individuals with severe and mild COVID-19 were recruited and peripheral blood samples and sociodemographic data were collected. The SNPs rs1057079 and rs2536 of the MTOR gene were genotyped by RT-qPCR. We performed logistic regression analysis and Kaplan-Meier survival curves. We applied a genetic risk score to estimate the cumulative contribution of risk alleles. Plasma levels of the cytokines TNF and IL-6 were measured by ELISA and analyzed. Results and Conclusions: The T allele of rs1057079 was associated with risk of severity and critical COVID-19, as well as increased plasma levels of TNF. Meanwhile, the T allele of rs2536 was associated with death from COVID-19. The variant risk alleles showed a cumulative risk when inherited together and may be useful in predicting a more severe outcome of COVID-19.
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Thais Maia Miranda de Barreto
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CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS E GENÉTICAS DE PACIENTES PEDIÁTRICOS COM SÍNDROME INFLAMATÓRIA MULTISSITÊMICA ASSOCIADA À INFECÇÃO PELO SARS-COV-2.
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Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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SIMONE HASHIMOTO
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 09/02/2023
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Introdução: A Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) é uma complicação potencialmente fatal associada à infecção pelo SARS-CoV-2. Trata-se de uma condição pós infecciosa, cujos sintomas e achados laboratoriais demonstram hiperinflamação sistêmica. Ainda existem muitas incertezas sobre fatores de risco, manejo ideal e diferentes cursos clínicos, mas estudos vêm sendo desenvolvidos, numa tentiva de desvendar a genética da susceptibilidade à síndrome. Objetivo: Identificar variantes genéticas implicadas na SIM-P. Métodos: Trata-se de uma série de casos de pacientes previamente sadios e não vacinados para a COVID-19, diagnosticados com SIM-P no Brasil. Foram coletados dados clínicos e laboratoriais de prontuários médicos eletrônicos, bem como células dos pacientes para extração de DNA e realização do sequenciamento do exoma. A priorização de variantes foi realizada com foco em 126 genes humanos que codificam proteínas envolvidas em mecanismos pelos quais o SARS-CoV-2 modula a resposta imune, a partir de lista disponível na
base de dados Reactome. Para análise da ancestralidade, utilizamos como referência o Projeto 1000 Genomas e dados genéticos de BR-MIS-C, empregando variantes autossômicas com MAF > 0,1 comuns a ambos. Consideramos europeus, africanos e nativos americanos como grupos de formação da população brasileira. Para análise funcional, foram obtidas as sequências de aminoácidos, estrutura e os domínios funcionais de IL-17RC, IFNA10 e NLRP12 e avaliada a conservação evolutiva das posições dos aminoácidos. Resultados: 21 pacientes com SIM-P participaram do estudo; destes, 62% (n=13) eram do sexo masculino e 67% (n=14) foram declarados pardos. A mediana de idade foi de 8 anos (IQR, 5-12). Os sintomas mais prevalentes foram febre (100%) dor abdominal (74%), seguido por rash cutâneo (57%) e dispneia (57%). O principal desfecho observado foi choque (48%). Através da análise de priorização de variantes codificantes em genes implicados no processo de infecção pelo SARS-CoV-2, identificamos variantes raras e deletérias, potencialmente envolvidas no desenvolvimento da SIM-P, em 38% (n=8) dos indivíduos estudados. Cinco dos 21 (24%) pacientes apresentavam mutações funcionais no gene NLRP12, localizado no 19q13.42, que codifica uma proteína citoplasmática envolvida na supressão das respostas inflamatórias em monócitos ativados. Indentificou-se também 3 mutações no gene IL17RC, localizado no cromossomo 3p25.3, que codifica uma das cadeias do receptor da IL-17, e também uma variante sem sentido no gene IFNA10, localizado no agrupamento de genes no lócus 9p21.3, que codifica o fator IFN-α10 e tem grande potencial deletério. A análise de ancestralidade revelou um padrão miscigenado das crianças brasileiras com MIS-C, com uma variação de 0,77 ascendência europeia (P7) a 0,78 ascendência africana (P1). Variantes em IL17RC, IFNA10 e NLPR12 foram herdados com mais frequência de europeus. A avaliação da conservação evolutiva dos aminoácidos revelou grau de conservação intermediário a alto para posições de aminoácidos em IL-17RC, IFNA10 e NLRP12. Conclusão: Mutações raras e deletérias em regiões codificantes dos genes NLRP12, IL17RC e IFNA10, podem contribuir para a ocorrência da SIM-P.
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Introduction: Multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) is a potentially fatal complication of SARS-CoV-2 infection. It is a post-infectious condition, whose symptoms and laboratory findings demonstrate systemic hyperinflammation. There are still many doubts about risk factors, ideal management and different clinical courses, but studies have been developed to unravel the genetics of the syndrome's susceptibility. Ain: To identify genetic variants that are determinant for MIS-C. Methods: This is a case series study of patients with no prior health conditions, diagnosed with MIS-C in Brazil. Clinical and laboratory data were collected from medical records, as well as patient cells to perform exome sequencing. The prioritization of variants was carried out focusing on 126 human genes that encode proteins involved in the mechanisms by which SARS-CoV-2 modulates the immune response, from a list available in the Reactome database. For ancestry analysis, it was used the 1000 Genomes Project and genetic data from BR-MIS-C as a reference, using autosomal variants with MAF > 0.1 common to both. We have considered Europeans, Africans and Native Americans as forming groups of the Brazilian population. For functional analysis, the amino acid sequences, structure and functional domains of IL- 17RC, IFNA10 and NLRP12 were obtained and the evolutionary conservation of amino acid positions was evaluated. Results: A total of 21 patients with MIS-C was enrolled in this study; of these, 62% (n=13) were male and 67% (n=14) were declared as mixed race. The median age was 8 years (IQR, 5-12). In addition to fever, observed in 100% of patients, the most prevalent symptoms were abdominal pain (74%, n=15), followed by skin rash (57%, n=12) and dyspnea (57%, n=12). The main outcome observed was shock (48%). By analyzing the prioritization of coding variants in genes that participate of the SARS-CoV-2 infection process, we identified rare deleterious variants potentially involved in the development of MIS-C in 38% (n=8) of the individuals studied. Five out of twenty one (24%) patients had functional mutations in the NLRP12 gene, located at 19q13.42, which encodes a cytoplasmic protein involved in the suppression of inflammatory responses in activated monocytes. We also identified three mutations in the IL17RC gene, located on chromosome 3p25.3, which encodes one of the IL-17 receptor chains, and also a nonsense variant in the IFNA10 gene, located in the gene cluster at locus 9p21.3, which encodes the IFN-α10 factor and has great deleterious potential. Ancestry analysis revealed an admixed pattern of Brazilian children with MIS-C, ranging from 0.77 European ancestry (P7) to 0.78 African ancestry (P1). Variants in IL17RC, IFNA10 and NLPR12 were more frequently inherited from Europeans. Evaluation of evolutionary conservation of amino acids revealed intermediate to high degree of conservation for amino acid positions in IL-17RC, IFNA10 and NLRP12. Conclusion: Rare and deleterious mutations in coding regions of the NLRP12, IL17RC and IFNA10 genes may contribute to the occurrence of MIS-C.
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Rildo Batista Freire
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ASSOCIAÇÃO DE POLIMORFISMOS NOS GENES IL1B, IL6 E IL10 COM PERIODONTITE
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Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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MEMBROS DA BANCA :
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CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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DEISE SOUZA VILAS BOAS
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RAIMON RIOS DA SILVA
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Data: 13/02/2023
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A periodontite envolve a perda óssea do tecido de sustentação e consequente perda das unidades dentárias o que impacta significativamente na qualidade de vida de indivíduos de todas as camadas sociais. A presença de comunidades microbianas disbióticas e uma resposta imunológica exacerbada podem acarretar na destruição da microarquitetura do periodonto de sustentação. Fatores ambientais e genéticos estão associados ao desenvolvimento da doença, sendo necessário elucidar o papel da genética no seu desenvolvimento e progressão. Objetivo: Investigar a associação de polimorfismos dos genes IL1B, IL6 e IL10 com a periodontite; e determinar as frequências alélicas dos polimorfismos IL1B, IL,6 e IL10 nas populações africana, americana e europeia. Materiais e métodos: Estudo transversal,realizado com 506 indivíduos adultos, classificados com presença (n=117) ou ausência (n=389) de periodontite, participantes da coorte do Programa de Controle da Asma da Bahia (ProAR) em Salvador/Bahia – Brasil. O DNA genômico foi extraído e genotipado utilizando-se a plataforma Illumina Multi- Ethnic Global Array (MEGA, Illumina). As plataformas NCBI, RegulomeDB, ENCODE (Encyclopedia of DNA Elements), Haploview 4.2 e rSNPBase foram consultadas. A análise estatística foi realizada no software PLINK 1.9 e a regressão logística foi ajustada por idade, obesidade, hábito de respirar pela boca, uso de fio dental, asma e ancestralidade. Para controle de qualidade utilizou-se o equilíbrio de Hardy-Weinberg <0,05, taxa de genotipagem <0,98 e frequência do menor alelo (MAF) <1%. Resultados: Dois polimorfismos foram associados à periodontite no gene IL1B. O rs3136557 alelo A apresentou associação negativa com a periodontite tanto no modelo aditivo como no dominante, respectivamente (OR = 0,48; IC 95% = 0,24-0,94) e (OR = 0,48; IC 95 % = 0,24-0,97; p<=0,05). O rs1143630 alelo T apresentou associação positiva (OR = 1,49; IC 95% = 1,02-2,18) no modelo aditivo, enquanto no modelo dominante (OR = 1,61; IC 95% = 1,02-2,53, p<=0,05). No gene IL6 o polimorfismo rs2069841alelo A foi associado positivamente à periodontite no modelo aditivo (OR = 2,61; IC 95% = 1,05-6,50) e no modelo dominante (OR = 2,61; IC 95% = 1,05- 6,50). Na análise dos polimorfismos da IL10 não foram encontradas associações significativas com a periodontite na população estudada. A frequência do menor alelo A da variante rs3136557 é presente em 8% na população estudada de Salvador, semelhante a população americana que possui aproximadamente a mesma frequência, enquanto a população africana possui 5%. A variante rs1143630 (alelo T) possui frequência de 20% na população estudada, enquanto a população africana apresenta 28%, a população americana e europeia apresenta 6%. O MAF da variante rs2069841 (alelo A) foi de 2% no grupo estudado, semelhante a população africana que apresentou 3%. Conclusão: Polimorfismos nos genes das interleucinas IL-1B e IL-6 foram associados positivamente e negativamente à periodontite. Não foram encontradas associações de polimorfismos do gene IL10 com a periodontite, nesta população da cidade de Salvador. A frequência alélica dos polimorfismos mostra-se semelhante àquelas encontradas em outras populações, como a africana e europeia.
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Introduction: Periodontitis involves bone loss of support tissue and consequent loss of dental units, which significantly impacts the quality of life of individuals from all social strata. The presence of dysbiotic microbial communities and an exacerbated immune response may result in the destruction of the microarchitecture of the supporting periodontium. Environmental and genetic factors are associated with the development of the disease, and it is necessary to elucidate the role of genetics in its development and progression. Objective:To investigate the association of polymorphisms of the IL1 B, IL6 and IL10 genes with periodontitis; and to determine the allelic frequencies of IL1 B, IL,6 and IL10 polymorphisms in African, American and European populations. Materials and methods: Cross-sectional study, conducted with 506 adult individuals, classified with presence (n=117) or absence (n=389) of periodontitis, participants in the cohort of the Bahia Asthma Control Program (ProAR) in Salvador/Bahia – Brazil. Genomic DNA was extracted and genotyped using the Illumina Multi-Ethnic Global Array (MEGA, Illumina) platform. The platforms NCBI, RegulomeDB, ENCODE (Encyclopedia of DNA Elements), Haploview 4.2 and rSNPBase were consulted. Statistical analysis was performed using the PLINK 1.9 software and logistic regression was adjusted for age, obesity, mouth breathing habit, flossing, asthma and ancestry. For quality control, Hardy-Weinberg equilibrium <0.05, genotyping rate <0.98 and frequency of the lowest allele (MAF) <1% were used. Results: Two polymorphisms were associated with periodontitis in the IL1 B gene. The rs3136557 A allele showed a negative association with periodontitis in both the additive and dominant models , respectively (OR = 0.48; CI 95% = 0.24-0.94) and (OR = 0.48; CI 95 % = 0.24-0.97; p<=0.05). The rs1143630 T allele showed a positive association (OR = 1.49; CI 95% = 1.02-2.18) in the additive model, while in the dominant model (OR = 1.61; CI 95% = 1.02-2.53, p<=0.05). In the IL6 gene, the rs2069841allele A polymorphism was positively associated with periodontitis in the additive model (OR = 2.61; CI 95% = 1.05-6.50) and in the dominant model (OR = 2.61; CI 95% = 1.05- 6.50). In the analysis of IL10 polymorphisms, no significant associations with periodontitis were found in the population studied. The frequency of the lowest A allele of the rs3136557 variant is present in 8% of the studied population of Salvador, similar to the American population that has approximately the same frequency, while the African population has 5%. The rs1143630 variant (T allele) has a frequency of 20% in the population studied, while the African population presents 28%, the American and European population presents 6%. The MAF of the rs2069841 variant (A allele) was 2% in the studied group, similar to the African population that presented 3%. Conclusion: Polymorphisms in the genes of interleukins IL- 1B and IL-6 were positively and negatively associated with periodontitis. No associations of IL10 gene polymorphisms with periodontitis were found in this population of the city of Salvador. The allelic frequency of polymorphisms is similar to those found in other populations, such as African and European.
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LUANA ARAUJO DAS MERCÊS
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EFEITOS DA IMUNOESTIMULAÇÃO PELA Echinacea purpurea (L.) MOENCH SOBRE A HISTOARQUITETURA DA PAREDE DO CÓLON DE RATOS INFECTADOS POR Toxoplasma gondii.
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Orientador : MARCELO BIONDARO GOIS
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
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MARCELO BIONDARO GOIS
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WENDELL MARCELO DE SOUZA PERINOTTO
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Data: 15/02/2023
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O objetivo do presente estudo é avaliar as alterações em células e tecidos que compõem a parede do cólon de ratos inoculados com oocistos de T. gondii (cepa RH, genótipo I) e imunoestimulados com 100 mg/kg de E. purpurea (L.) Moench. Vinte e quatro Rattus norvegicus machos foram separados aleatoriamente em quatro grupos (n=6), a saber: grupo controle (GC); grupo infectado com 500 oocistos de T. gondii e não imunoestimulados (GI); grupo controle imunoestimulado com 100 mg/kg de E. purpurea (GC+EP); e grupo infectado e imunoestimulado com 100 mg/kg de E. purpurea (GI+EP). O protocolo experimental (nº 7633021018) foi aprovado pelo comitê de Ética para a utilização de animais em experimentação. Vinte e oito dias após a inoculação, com 93 dias de idade, os ratos foram submetidos à eutanásia. O cólon de cada foi coletado, fixados e analisado por meio de técnicas histoquímica e imuno- histoquímica. A infecção toxoplásmica, bem como a imunoestimulação com 100 mg/kg de E. purpurea causaram alterações histomorfométricas, aumento na distribuição de mastócitos totais e mastócitos e células enterocromafins que expressam 5-HT e na proporção de linfócitos intraepiteliais no cólon de ratos. Demonstramos que houve aumento em todos os fenótipos de células caliciformes avaliados no epitélio da mucosa do cólon. Em adição, demonstramos que a infecção causou alterações histopatológicas à parede do cólon as quais foram atenuadas pela imunoestimulação com 100 mg/kg de E. purpurea. Em conjunto, nossos resultados sugerem que parte das alterações em células e tecidos que compõem a parede do cólon foram atenuadas pela imunoestimulação com 100 mg/kg de E. purpurea (L.) Moench sugerindo que pode ser utilizado futuramente como coadjuvante ao tratamento convencional; porém, para tanto, novos estudos são necessários.
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The objective of the present study is to evaluate changes in cells and tissues that make up the colonic wall of rats inoculated with oocysts of T. gondii (strain RH, genotype I) and immunostimulated with 100 mg/kg of E. purpurea (L.) Moench. Twenty-four male Rattus norvegicus were randomly divided into four groups (n=6), namely: control group (CG); group infected with 500 T. gondii oocysts and not immunostimulated (GI); control group immunostimulated with 100 mg/kg of E. purpurea (GC+EP); and group infected and immunostimulated with 100 mg/kg of E. purpurea (GI+EP). The experimental protocol (nº 7633021018) was approved by the Ethics Committee for the use of experimental animals. Twenty-eight days after inoculation, at 93 days of age, the rats were euthanized. The colon of each was collected, fixed and analyzed using histochemical and immunohistochemical techniques. Toxoplasmic infection, as well as immunostimulation with 100 mg/kg of E. purpurea, caused histomorphometric alterations, increase in the distribution of total mast cells and mast cells and enterochromaffin cells that express 5-HT and in theproportion of intraepithelial lymphocytes in the colon of rats. We demonstrated that there was an increase in all goblet cell phenotypes evaluated in the colonic mucosal epithelium. In addition, we demonstrated that the infection caused histopathological hanges to the colon wall which were attenuated by immunostimulation with 100 mg/kg of E. purpurea. Taken together, our results suggest that part of the changes in cells and tissues that make up the colonic wall were attenuated by immunostimulation with 100 mg/kg of E. purpurea (L.) Moench, suggesting that it can be used in the future as an adjunct to conventional treatment; however, for that, new studies are necessary.
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CÍNTIA SENA CARVALHO
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DESENVOLVIMENTO DE UMA PROTEÍNA MULTI-EPÍTOPO COM POTENCIAL IMUNOGÊNICO E PROSPECÇÃO DE NOVOS FÁRMACOS CONTRA INFECÇÕES CAUSADAS POR Corynebacterium pseudotuberculosis.
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Orientador : THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
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MEMBROS DA BANCA :
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RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
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SANDEEP TIWARI
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THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
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Data: 28/02/2023
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Corynebacterium pseudotuberculosis é um patógeno Gram-positivo e intracelular facultativo conhecido por causar doenças de importância veterinária. Dentre estas doenças está a Linfadenite Caseosa (LC), uma enfermidade que acomete caprinos e ovinos gerando abscessos nos linfonodos e órgãos internos, ocasionando perdas econômicas para os criadores desses animais. A profilaxia é a alternativa de melhor custo-benefício para o controle de doenças infecciosas, no entanto ainda não há uma vacina efetiva contra a LC. Diversas metodologias in silico têm contribuído para a seleção de alvos moleculares que podem ser explorados no desenvolvimento de estratégias terapêuticas, métodos diagnósticos e imunógenos recombinantes. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo a seleção de alvos vacinais e terapêuticos, bem como a construção de uma proteína quimérica potencialmente imunogênica e o screening de compostos que possam ser utilizados no tratamento da LC. A partir de dados da literatura, as proteínas reativas RpfB, SlpA, Nlpc/P60 e os fatores de virulência CP40 e PLD foram selecionadas e avaliadas quanto a sua conservação intraespecífica e homologia com proteínas dos hospedeiros caprino e ovino. Posteriormente, foram preditos e avaliados epítopos de MHC-I, MHC-II e células B presentes nestas proteínas. Além disso, proteínas compartilhadas por todas as linhagens de C. pseudotuberculosis, citoplasmáticas e essenciais foram selecionadas para análise de ancoragem molecular com compostos naturais. Uma proteína quimérica foi construída a partir dos epítopos das proteínas RpfB, SlpA, Nlpc/P60, CP40 e PLD. Esse potencial imunogêno se mostrou estável, solúvel, antigênico e não alergênico nas análises in silico. Já na abordagem terapêutica, as proteínas WP_013241317.1, WP_013241598.1, WP_014522829.1, WP_013242887.1, WP_013241937.1 e WP_013241997.1 foram selecionadas e os compostos naturais ZINC04258889, ZINC04235924, ZINC04236001, ZINC04235972, ZINC08300419 e ZINC67902338 foram os melhores ligantes para elas, respectivamente. Esses resultados irão contribuir para a profilaxia e tratamento da LC bem como de outras doenças causadas por C. pseudotuberculosis.
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Corynebacterium pseudotuberculosis is a Gram-positive and intracellular facultative pathogen known to cause diseases of veterinary importance. Among these diseases is Caseous Lymphadenitis (CLA), a disease that affects goats and sheep, generating abscesses in the lymph nodes and internal organs, causing economic losses for the breeders of these animals. Prophylaxis is the most cost-effective alternative for controlling infectious diseases, however there is still no effective vaccine against CLA. Several in silico methodologies have contributed to the selection of molecular targets that can be explored in the development of therapeutic strategies, diagnostic methods and recombinant immunogens. Therefore, the present work aimed to select vaccine and therapeutic targets, as well as to construct a potentially immunogenic chimeric protein and to screen out compounds that could be used in the treatment of CLA. Based on data from the literature, the reactive proteins RpfB, SlpA, Nlpc/P60 and the virulence factors CP40 and PLD were selected and evaluated for their intraspecific conservation and homology with proteins from goat and sheep hosts. Subsequently, epitopes of MHC-I, MHC-II and B cells present in these proteins were predicted and evaluated. In addition, proteins shared by all C. pseudotuberculosis strains, both cytoplasmic and essential, were selected for virtual screening and molecular docking analysis with natural compounds. A chimeric protein was constructed from the epitopes of RpfB, SlpA, Nlpc/P60, CP40 and PLD proteins. This immunogenic potential proved to be stable, soluble, antigenic and non-allergenic in in silico analyses. In the therapeutic approach, The proteins WP_013241317.1, WP_013241598.1, WP_014522829.1, WP_013242887.1, WP_013241937.1 and WP_013241997.1 were selected and natural compounds ZINC04258889, ZINC04235924, ZINC04236001, ZINC04235972, ZINC08300419 and ZINC67902338 were the best binders for them, respectively. These results will contribute to the prophylaxis and treatment of CLA as well as other diseases caused by C. pseudotuberculosis.
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Gabriel Barroso de Almeida
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MARCADORES INFORMATIVOS DE ANCESTRALIDADE E RESPOSTA IMUNOLÓGICA EM INDIVÍDUOS COM COVID-19
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Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
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MEMBROS DA BANCA :
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POLYANNA CAROZO DE OLIVEIRA
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SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
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THAIS FERREIRA BOMFIM PALMA
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Data: 09/03/2023
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A COVID-19 é caracterizada por um amplo espectro de manifestações clínicas e as respostas imunológicas podem determinar desfechos desfavoráveis durante o curso da infecção pelo SARS-CoV-2. Alguns grupos étnicos minoritários parecem ser mais vulneráveis à infecção ou apresentar quadros clínicos severos, seja por fatores biológicos ou sociodemográficos. Existem poucos dados relacionados à ancestralidade genômica e desfechos clínicos da doença, por esta razão, este estudo teve como objetivo estimar o perfil ancestral por meios de Marcadores Informativos de Ancestralidade (AIMs) e avaliar o perfil hematológico e linfocitário de indivíduos com COVID-19 oriundos das cidades de Salvador-Ba e Feira de Santana-Ba. Foram analisados 58 indivíduos com COVID-19 classificados em quadros clínicos leves e graves. A genotipagem ocorreu por meio da PCR e a identificação do perfil linfocitário por meio de imunofenotipagem. Em relação ao perfil ancestral, o grupo grave apresentou 40,2%, 30,4% e 29,4% de perfil ancestral europeu, africano e ameríndio, respectivamente. Enquanto o grupo leve apresentou 44,8%, 30,9% e 24,3% de perfil europeu, ameríndio e africano, respectivamente. O grupo grave apresentou: aumento de leucócitos totais e neutrófilos; redução nos parâmetros de hemácia, hemoglobina, hematócrio e linfócitos na comparação com grupo leve, bem como diminuição dos perfis celulares de TCD4+, TCD8+ e linfócitos B. Não foi possível associar ancestralidade à severidade da doença, porém no quesito perfil celular, nossos achados corroboram com dados que descrevem que a resposta imunológica do indivíduo pode ter papel crucial na patogênese da doença.
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COVID-19 is characterized by a wide spectrum of clinical manifestations and immune responses can determine unfavorable outcomes during the course of SARS-CoV-2 infection. Some minority ethnic groups seem to be more vulnerable to infection or to present severe clinical conditions, whether due to biological or sociodemographic factors. There are few data related to genomic ancestry and clinical outcomes of the disease, for this reason, this study aimed to estimate the ancestral profile by means of Ancestry Informative Markers (AIMs) and to evaluate the hematological and lymphocyte profile of individuals with COVID-19 from from the cities of Salvador-Ba and Feira de Santana-Ba. 58 individuals with COVID-19 classified into mild and severe clinical conditions were analyzed. Genotyping was performed using PCR and the lymphocyte profile was identified using immunophenotyping. Regarding the ancestral profile, the severe group presented 40.2%, 30.4% and 29.4% of European, African and Amerindian ancestry profiles, respectively. While the light group had 44.8%, 30.9% and 24.3% of European, Amerindian and African profile, respectively. The severe group presented: increase in total leukocytes and neutrophils; reduction in the parameters of erythrocytes, hemoglobin, hematocrit and lymphocytes in comparison with the mild group, as well as a decrease in the cell profiles of TCD4+, TCD8+ and B lymphocytes. with data describing that the individual's immune response may play a crucial role in the pathogenesis of the disease.
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Vitor Cordeiro Pereira
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COMPARAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE HUMORAL E CELULAR DE OVINOS IMUNIZADOS COM UMA VACINA RECOMBINANTE E UMA VACINA MÚLTIPLA INATIVADA DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS.
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Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
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MEMBROS DA BANCA :
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SIBELE BORUSK
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MARCOS BORGES RIBEIRO
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SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
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Data: 13/03/2023
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Corynebacteriumpseudotuberculosis(C. pseudotuberculosis)éumabactériagram-positiva,anaeróbiafacultativa e intracelular facultativa. Esse agente etiológico causa a linfadenite caseosa, doençainfecciosadecarátercrônicoqueafeta principalmente pequenosruminantes.Osanimaisinfectadosapresentam como sinal clínico, lesões granulomatosas em linfonodos superficiais, internos, alem de poderacometer órgãos vitais.Perdaseconômicasprovocadaspelainfecção por C. pseudotuberculosis associado ao diagnóstico tardio e a falta de um protocolo de imunização eficiente, servem como incentivo para o desenvolvimento de estudos relacionados a linfadenite caseosa. Assim, o objetivo destetrabalhoé avaliar a imunomodulação humoral e celular de ovinos imunizados com uma vacina de subunidaderecombinante constituídapelosantígenosrNanh, rSodC e rPknG de C. pseudotuberculosis, comparando-a com uma vacina comercial múltipla inativada disponível no mercado brasileiro.Comometodologia utilizou-se sistema heterólogo para e expressão das proteínas rNanH, rPknG e rSodCde C. pseudotuberculosis. Doze ovinos foram separados randomicamente em três grupos, sendo G1 grupo controle que recebeu solução salina 0,9%, G2 grupo que foi imunizado com uma vacina múltipla inativada e G3 grupo que foi imunizado com vacina composta pelas proteínas rNanH, rSodC e rPknG. Todos os animais foram desafiados com a cepa CAPJ4 de C. pseudotuberculosis. Ensaio imunoensimático (ELISA) foi utilizado para verificar a indução da respostaimunehumoral. A verificação da resposta imune celular foi realizada a partir da quantificação, por qPCR, das citocinas IFN-y, IL10 e IL12. Além da quantificação de interferon-gama (IFN-y) por ELISA. Ao utilizar os antígenos de C. pseudotuberculosis secretados em meio BHI foi possível verificar que os animais que receberam a vacina múltipla inativada (G2) tiveram um aumento dos níveis de anticorpos específicos IgG quando comparado com os animais que receberam a vacina recombinante (G3). Quando as proteínas recombinantes foram utilizadas como antígeno no ELISA, foi possível observar que o G3 apresentou aumento nos níveis de anticorpos após aplicação das duas doses da vacina quando comparado com G2, grupo esse que não foi possível observar o aumento dos níveis de anticorpos. Na indução da resposta imune celular, não foi possível verificar diferença significativa nos animais do G3 quando comparado com o G2. Portanto, foi possível inferir que a utilização das proteinas rNanH, rPknG e rSodCde C. pseudotuberculosis em uma formulação vacinal foi capaz de induzir a resposta imune humoral em ovinos, fornecendo anticorposespecíficos contraesses antígenos vacinais.
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Corynebacteriumpseudotuberculosis (C.pseudotuberculosis) is a gram-positive,facultativeanaerobic,facultativeintracelularbacterium.Thisetiologicalagentcausescaseouslymphadenitis,a chronicinfectiousdiseasethatmainlyeffectssmallruminants. Infectedanimals presente as aclinicalsign,granulomainsuperficialandinternallymphnodes,whichcanaffectvitalorgans. Economic lossses causes byC. pseudotuberculosisinfectionassociatedwith late diagnosisandthelackofanefficientimmunizationprotocol serve as an incentive for thedevelopmentofstudiesrelatedtocaseouslymphadenitis. Thus, theobjectiveofthisworkistoevaluatethe humoral andcellularimmunomodulationofsheepimmunizedwith a recombinantsubunitvaccineconstitutedbytherNanh, rSodCandrPknGantigensofC. pseudotuberculosis, comparing it with a commercialmultipleinactivatedvaccineavailable in theBrazilianmarket. As a methodology, a heterologussytem for expressionofrNanH, rPknGandrSodCproteinsfromC.pseudotuberculosis. Twelvesheepswererandomlydivididintothreegroups : G1, a controlgroupthatreceived 0,9% saline solution, G2 a groupwasimmunizedwiththeinactivadedmultiplevaccineand G3 a groupthatwasimmunizedwith a vaccinecomposedofrNanh, rSodCandrPknGproteins. Allanimalswerechallengedwiththe CAP 76 strainofC.pseudotuberculosis.Immunoenzymaticassay (ELISA) wasusedtoverifytheinductionofthe humoral imune response. The verificationofcellularimmune response wasperformedfromthequantification, byqPCR, ofthecytokinesIFN-y, IL-10 and IL-12. In additiontothequantificationof interferon-gammaby ELISA. The C.pseudotuberculosisantigenssecreted in the BHI mediumshowedthatreceivedtheinactivatedmultiplevaccine (G2) had a increase in specific IgG levelswhencomparedtoyheanimalsthatreceivedtherecombinantvaccine (G3). When therecombinantproteinswereused as antigen in the ELISA, it waspossibleto observe thatthe G3 presentedanincrease in antibodylevelsaftertheapplicationoftwo doses ofthevaccinewhencomparedwithto G2, a group in which it wasnotpossibleto observe anincrease in antibodylevels. In theinductionofcerllularimmune response, it wasnotpossibletoverfythesignificantdifferencein animalsfrom G3 whencomparedto G2.Therefore,itwaspossibletoinferthatthe use ofrNanh, rSodCandrPknGproteinsfromC. pseudotuberculosisin a vaccineformulationwasabbletoinduce a humoral immune response in sheep, providingespecificantibodyagainstvaccineantigens
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Fabiane da Silva Reis Góes
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AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DOS GENES SELPLG, ITGA4, ARG1, NOS2 EM LEUCÓCITOS TOTAIS E NÍVEIS PLASMÁTICOS DAS PROTEÍNAS P-SELECTINA E PSGL-1 EM PACIENTES COM COVID-19 E SUA CORRELAÇÃO COM GRAVIDADE.
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Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
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MEMBROS DA BANCA :
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CYNARA GOMES BARBOSA
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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VITOR ANTONIO FORTUNA
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Data: 19/05/2023
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INTRODUÇÃO: A COVID-19, doença causada pelo vírus SARS-COV-2 pode progredir para
casos graves e promover a Síndrome do Desconforto Respiratório Agudo (SDRA). A fisiopalotogia da COVID grave não está bem esclarecida, mas parece estar relacionada à disfunção endotelial combinada a uma resposta imune desregulada e tempestade de citocinas. A COVID-19 evolui rapidamente para casos graves, portanto é de grande importância avaliar exames laboratoriais e biomarcadores indicadores da resposta imune do hospedeiro que sejam eficazes para predizer a evolução de casos graves, com objetivo de otimizar o manejo clínico e a terapêutica para evitar desfecho desfavorável, como óbito. OBJETIVO: Avaliar a expressão dos genes ARG1, NOS2, ITGA4 e SELPLG em leucócitos totais e mensurar os níveis das proteínas P-selectina e PSGL-1 no plasma de pacientes com COVID-19 associando com a gravidade do quadro clínico e ao prognóstico da doença. METODOLOGIA: No presente estudo observacional submetido e aprovado pelo CONEP (Nº Parecer: 4.014.165) Recrutamos 117 pacientes com diagnóstico confirmado da doença COVID-19 (grave = 58 e leve = 59). Parâmetros demográficos, clínicos e laboratoriais foram coletados na admissão ao estudo. Usamos o ensaio de RT-qPCR para mensurar a expressão relativa dos genes. Avaliamos níveis plasmáticos da P-selectina e PSGL-1 com ensaio de ELISA. RESULTADOS: Encontramos que homens, idosos com presença de comorbidades pré-existentes (p<0,0001) tiveram maiores chances para desfecho grave. A razão neutrofilo-linfócito (RNL) e razão plaquetas-linfócitos (RPL) (p<0,0001), estavam alteradas no grupo grave. Os pacientes com sintomas grave exibiram expressão aumentada dos genes ARG1 (p=0,032) e SELPLG (p<0,0001), assim como maiores concentrações plasmáticas das protéinas P-selectina (p=0,031) e PSGL-1 (p<0,002). CONCLUSÃO: Nossos dados sugerem que exames laboratoriais como RNL, RPL, expressão elevada dos genes SELPLG / ARG1 em leucócitos e níveis aumentados de P-selectina e PSGL-1 no plasma, podem ser potenciais biomarcadores de diagnóstico e prognóstico úteis para a doença grave, orientando tratamento estratégico para o COVID-19.
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INTRODUCTION: COVID-19, a disease caused by the SARS-COV-2 virus, can progress to
severe cases and promote Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). The pathophysiology of severe COVID is not well understood, but it appears to be related to endothelial dysfunction combined with a dysregulated immune response and cytokine storm. COVID-19 evolves quickly into severe cases, so it is of great importance to evaluate laboratory tests and biomarkers that are indicators of the host's immune response that are effective in predicting the evolution of severe cases, with the aim of optimizing clinical and therapeutic management to avoid adverse outcomes. unfavorable events, such as death. OBJECTIVE: To evaluate the expression of the ARG1, NOS2, ITGA4 and SELPLG genes in total leukocytes and to measure the levels of P-selectin and PSGL-1 proteins in the plasma of patients with COVID-19, associating it with the severity of the clinical picture and the prognosis of the disease . METHODOLOGY: In the present controlled observational study approved by CONEP (Opinion No.: 4,014,165) we recruited 117 patients with a confirmed diagnosis of COVID-19 (severe = 58 and mild = 59). Demographic, clinical, and laboratory parameters were collected at study admission. We used the RT-qPCR assay to measure the relative expression of genes. We evaluated plasmatic levels of P-selectin and PSGL-1 with ELISA assay. RESULTS: we found that men, elderly people with pre-existing comorbidities (p<0.0001) were more likely to have a severe outcome. The neutrophil-lymphocyte ratio (NLR) and platelet-lymphocyte ratio (PLR) (p<0.0001) were altered in the severe group. Patients with severe symptoms exhibit increased expression of the ARG1 (p=0.032) and SELPLG (p<0.0001) genes, as well as higher plasma concentrations of P-selectin (p=0.031) and PSGL-1 (p<0.002) proteins. CONCLUSION: Our data suggest that laboratory tests such as RNL, RPL, elevated expression of SELPLG / ARG1 genes in leukocytes and increased levels of P-selectin and PSGL-1 in plasma, may be potential useful diagnostic and prognostic biomarkers for severe disease, guiding strategic treatment for COVID-19.
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CATARINA DE JESUS NUNES
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Investigação do potencial neuroprotetor e anti-inflamatório de extratos de espécies de esponjas marinhas
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Orientador : SILVIA LIMA COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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SILVIA LIMA COSTA
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Data: 13/06/2023
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INTRODUÇÃO: As doenças neurodegenerativas são caracterizadas pela perda progressiva de neurônios, resultando em incapacidade e morte. A busca por novas terapias a partir de compostos naturais visa investigar substâncias com potencial anti-inflamatório no SNC. As esponjas estão entre os organismos marinhos mais prolíficos para novas substâncias, e estudos in vitro mostraram atividade anticancerígena e anti-inflamatória de extratos ou compostos purificados de algumas espécies. OBJETIVOS: Avaliar in vitro a toxicidade de extratos de espécies de esponjas marinhas; o potencial neuroprotetor contra danos inflamatórios em neurônios e a associação à modulação da resposta de microglias. MÉTODOS: Culturas de células neuronais PC12 foram tratadas com 20 diferentes extratos (0,1 a 200 µg/mL) obtidos com solventes diclorometano (DCM), acetato de etila (AcOEt) e metanol (MeOH) de espécies de esponjas marinhas dos gêneros Aplysina, Cladocroce, Chondrilla, Callyspongia e Haliclona. A viabilidade celular foi determinada após 72 h do tratamento pelo teste MTT. Células PC12 foram submetidas ao dano inflamatório com LPS a 5 µg/mL por 12 h e após tratadas por 24 h com o extrato de A. fulva (0,1 e 1 µg/mL), ou com o seu composto purificado AF-H1 (1 e 10 µM) e viabilidade celular avaliadas pela exclusão de Azul de Tripan e Iodeto de Propídeo. Microglias, obtidas do córtex cerebral de ratos Wistar neonatos, foram tratadas por 24 h com meio condicionado derivado de células PC12 nessas condições e o fenótipo destas e de células PC12 nas diferentes condições foi avaliado por microscopia de contraste de fase e coloração pancrômica de Rosenfeld. RESULTADOS: A maioria dos extratos apresentaram toxicidade nas concentrações de 100 e 200 µg/mL, exceto os extratos Ac-OEt que foram a partir de 10 μg/mL. O extrato MeOH de A. fulva (AF-MeOH) e seu composto AF-H1 não foram tóxicos em nenhuma das concentrações testadas. Células PC12 submetidas a dano com LPS apresentaram corpos celulares contraídos, efeito que não foi observado em culturas tratadas com extrato AF-MeOH e AF-H1 nas concentrações adotadas. Microglias tratadas com meio condicionado de culturas de PC12 submetidas ao LPS mostraram forma semelhante à ameboide; em contraste, microglias submetidas ao meio condicionado de células PC12 tratadas com LPS e AF-MeOH ou LPS e AF-H1 apresentaram fenótipo mais ramificado, similar ao de microglias em condições controle. CONCLUSÕES: O extrato MeOhH de A. fulva (AF-MeOH) e seu componente AF-H1 são capazes de proteger estas células frente ao dano inflamatório com LPS e modular a resposta inflamatória de microgliais para um fenótipo neuroprotetor.
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INTRODUCTION: Neurodegenerative diseases are characterized by progressive loss of neurons, resulting in disability and death. The search for new therapies from natural compounds aims to investigate substances with anti-inflammatory potential in the CNS. Sponges are among the most prolific marine organisms for new substances, and in vitro studies have shown anti- cancer and anti-inflammatory activity of extracts or purified compounds from some species. OBJECTIVES: To evaluate in vitro the toxicity of extracts from marine sponge species; the neuroprotective potential against inflammatory damage in neurons and the association with the modulation of the microglial response. METHODS: Cultures of PC12 neuronal cells were treated with 20 different extracts (0.1 to 200 µg/mL) obtained with dichloromethane (DCM), ethyl acetate (EtOAc) and methanol (MeOH) solvents from marine sponge species of the genus Aplysina , Cladocroce, Chondrilla, Callyspongia and Haliclona. Cell viability was determined after 72 h of treatment by the MTT test. PC12 cells were subjected to inflammatory damage with LPS at 5 µg/mL for 12 h and then treated for 24 h with A. fulva extract (0.1 and 1 µg/mL), or with its purified compound AF-H1 (1 and 10 µM) and cell viability evaluated by exclusion of Trypan Blue and Propidium Iodide. Microglia, obtained from the cerebral cortex of newborn Wistar rats, were treated for 24 h with conditioned medium derived from PC12 cells under these conditions and the phenotype of these and PC12 cells under different conditions was evaluated by phase contrast microscopy and Rosenfeld panchromic staining. RESULTS: Most extracts showed toxicity at concentrations of 100 and 200 µg/mL, except for Ac- EtO extracts which were from 10 µg/mL. The MeOH extract of A. fulva (AF-MeOH) and its compound AF-H1 were not toxic in any of the tested concentrations. PC12 cells subjected to damage with LPS showed contracted cell bodies, an effect that was not observed in cultures treated with AF-MeOH and AF-H1 extracts at the adopted concentrations. Conditioned medium-treated microglia from PC12 cultures subjected to LPS showed amoeboid-like shape; in contrast, microglia subjected to conditioned medium from PC12 cells treated with LPS and AF-MeOH or LPS and AF-H1 showed a more branched phenotype, similar to that of microglia under control conditions. CONCLUSIONS: A. fulva MeOhH extract (AF-MeOH) and its AF-H1 component are able to protect these cells against inflammatory damage with LPS and modulate the inflammatory response of microglials towards a neuroprotective phenotype.
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MONICA DE SOUSA PITA
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Influência Da Coinfecção Por Trypanossoma Cruzi Na Resposta Imune E No Desfecho Clínico De Pacientes Com Leishmaniose Cutânea Da Área Endêmica De Corte De Pedra
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Orientador : LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
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LUCIANA SANTOS CARDOSO
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AUGUSTO MARCELINO PEDREIRA DE CARVALHO
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Data: 14/06/2023
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Em diversas áreas da América Latina, a distribuição geográfica da leishmaniose cutânea (LC) se sobrepõe a áreas de transmissão da doença de Chagas, sendo a infecção por Trypanosoma cruzi documentada em 12 a 70% dos pacientes com sintomas clínicos de leishmaniose. Estudos mostram diferença na frequência de células T em pacientes com LC coinfectados com T.ruzi em relação a pacientes com leishmaniose isolada. O objetivo deste estudo é investigar se a resposta imune de pacientes com LC causada por Leishmania braziliensis e coinfectados com T. cruzi está associada à evolução clínica da leishmaniose. Foi realizado um inquérito sorológico com cento e oitenta soros de pacientes com LC causada por L. braziliensis, onde foram utilizadas proteínas quiméricas específicas do T. cruzi para detectar a coinfecção nesses pacientes. Foram identificados 20 pacientes com LC coinfectados com T.cruzi, todos com títulos de anticorpos anti-Leishmania superiores aos pacientes infectados apenas pela Leishmania. Quanto a produção de citocinas, IL-6 foi a que apresentou maiores níveis no grupo de pacientes coinfectados comparado com o grupo somente com leishmaniose. Não houve diferença estatística na produção de IFN-γ, TNF, IL-1β entre pacientes coinfectados com Leishmania braziliensis e T.cruzi. Em relação ao desfecho clínico, quatorze (70%) dos coinfectados falharam a terapia com antimônio, e dos pacientes com apenas infecção por Leishmania, um total de sessenta e dois (42%) falharam. Esses resultados indicam que a coinfecção pode interferir na resposta imune, e influencia na resposta ao tratamento de pacientes com LC causada por L. braziliensis.
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In several areas of Latin America, the geographic distribution of cutaneous leishmaniasis (CL) overlaps with areas of Chagas disease transmission ranging from 12 to 70% of patients with clinical symptoms of leishmaniasis. Studies show a difference in the expression of T cells in CL and in patients coinfected with Trypanosoma cruzi in relation to patients with isolated Leishmania. The aim of this study is to investigate whether the immune response of patients with CL caused by L. braziliensis and coinfected with T. cruzi is associated with the clinical course of leishmaniasis. A case-control study was carried out with one hundred and eighty sera from patients with CL caused by L. braziliensis, where chimeric proteins specific to Trypanosoma cruzi were used to detect coinfection with Chagas disease. We identified 20 patients with CL who were coinfected with T.cruzi, all of whom had higher anti-Leishmania antibody titers than patients infected with Leishmania alone. As for the production of cytokines, IL-6 was the one with the highest levels in the group of co-infected patients compared to the group with leishmaniasis alone. There was no statistical difference in the production of IFN-γ, TNF, IL-1β between patients coinfected with Leishmania braziliensis and T.cruzi. With regard to clinical outcome, fourteen (70%) of the co-infected patients failed antimonial therapy, and of patients with Leishmania infection alone, a total of sixty-two (42%) failed. These results indicate that co-infection can interfere with the immune response and influence the response to treatment of patients with CL caused by L. braziliensis.
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Nívia Nonato Silva
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"Avaliação da Expressão do Interferon Tipo 1 e Receptores (IFNAR1 e IFNAR2), Interleucina 17A, Retrovírus Endógenos Humanos (HERVK-10 e HERVW-1) no sangue periférico e associação com a gravidade nos pacientes com COVID-19."
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Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
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MEMBROS DA BANCA :
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ELISANGELA VITORIA ADORNO
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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VITOR ANTONIO FORTUNA
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Data: 28/06/2023
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Introdução: A COVID-19 caracteriza-se pela hiperativação do sistema imunológico e liberação descontrolada de citocinas. Recentes estudos apontam que a sinalização prejudicada dos IFNA1 e seus receptores, IL17A, HERVs e IFNG pode estar associada à gravidade da COVID-19. Objetivo: Analisar a expressão dos genes IFNA1 e receptores IFNAR1/IFNAR2, IL17A e HERVs (HERVK-10 e HERVW-1) em leucócitos totais e níveis basais de IFNG no plasma de pacientes com COVID-19. Métodos: Estudo prospectivo, observacional e transversal com 117 pacientes recrutados (grave=58 e leve=59). Dados demográficos e clínicos foram coletados. Os leucócitos do sangue periférico foram isolados e o ensaio RT-qPCR foi realizado para análise da expressão gênica. Os níveis plasmáticos de IFNG foram mensurados pelo método ELISA. Resultados: Na amostra avaliada, observou-se prevalência do sexo masculino (p<0,05), idosos (p<0,0001), negros (p<0,0001) e comorbidades pré-existentes (p<0,0001). Os pacientes com COVID-19 grave apresentaram leucocitose, neutrofilia, contagem elevada de plaquetas e linfócitos reduzidos em comparação com os pacientes leves (p<0,0001). Os índices SII, AISI e SII/Hb foram significativamente maiores em pacientes graves (p<0,0001). Os níveis de expressão gênica de IFNA1, HERVW-1 e IL17A foram significativamente maiores em pacientes graves (p<0,05, p<0,05, p<0,001, respectivamente). Entretanto, os níveis plasmáticos de IFNG não foram significativos. A análise ROC apontou que os índices SII e SII/Hb são bons marcadores prognósticos de gravidade da COVID-19, com AUC (0,98 e 0,99, p<0,0001, respectivamente). Conclusão: Nossos resultados apontam que o segmento mais afetado pela COVID-19 compreende homens, idosos, negros e portadores de comorbidades, com maior expressão gênica de IFNA1, HERVW-1 e IL17A. Índices como SII e SII/Hb podem ser prognósticos promissores de gravidade para a COVID-19.
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Mostrar Abstract
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COVID-19 is characterized by hyperactivation of the immune system and uncontrolled release of cytokines. Recent studies indicate that impaired signaling of IFNA1 and its receptors, IL17A, HERVs and IFNG may be associated with the severity of COVID-19. Objective: To analyze the expression of IFNA1 genes and IFNAR1/IFNAR2 receptors, IL17A and HERVs (HERVK-10 and HERVW-1) in total leukocytes and baseline levels of IFNG in the plasma of patients with COVID-19. Methods: Prospective, observational and croos-sectional study with 117 recruited patients (severe=58 and mild=59). Demographic and clinical data were collected. Peripheral blood leukocytes were isolated and RT-qPCR assay was performed for gene expression analysis. Plasma levels of IFNG were measured by the ELISA method. Results: Among the evaluated sample, there was a prevalence of males (p<0.05), elderly (p<0.0001), blacks (p<0.0001) and pre-existing comorbidities (p<0.0001). Patients with severe COVID-19 had leukocytosis, neutrophilia, and elevated platelet counts with reduced lymphocytes compared with mild patients (p<0.0001). The SII, AISI and SII/Hb indexes were significantly higher in critically ill patients (p<0.0001). IFNA1, HERVW-1 and IL17A gene expression levels were significantly higher in critically ill patients (p<0.05, p<0.05, p<0.001, respectively). However, plasma levels of IFNG were not significant. ROC analysis showed that SII and SII/Hb indexes are good prognostic markers for the outcome of COVID-19, with AUC (0.98, 0.99, p<0.0001, respectively). Conclusion: Our results indicate that the segment most affected by COVID-19 comprises men, the elderly, black people and those with comorbidities, with higher gene expression of IFNA1, HERVW-1 and IL17A. Indices such as SII and SII/Hb can be promising predictors of severity for COVID-19.
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Leticia Reis de Oliveira
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IDENTIFICAÇÃO DE microRNA DIFERENCIALMENTE EXPRESSOS EM PACIENTES COM DISFUNÇÃO CARDÍACA DECORRENTE DE SEPSE E A CORRELAÇÃO COM AS VIAS INTRACELULARES DE SINALIZAÇÃO: ANÁLISE IN SILICO DE POTENCIAIS BIOMARCADORES DE PROGNÓSTICO
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Orientador : SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
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NATALIA MACHADO TAVARES
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SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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Data: 13/07/2023
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Introdução: A sepse é uma condição clínica com elevado risco de morte, definida como uma disfunção orgânica decorrente de uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, sendo a disfunção cardíaca uma das principais complicações dos pacientes com sepse e está intimamente associada à elevada mortalidade induzida por esta condição clínica. Atualmente, a incidência e a mortalidade da sepse ainda são elevadas, apontando a importância do uso de biomarcadores no diagnóstico precoce e no seu prognóstico. Nesse cenário, os microRNA surgem como candidatos potenciais com alta especificidade e sensibilidade para a sepse. Diante desse contexto, o presente estudo visou investigar o perfil de expressão dos miRNA e sua correlação com as vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio decorrente da sepse. Métodos & Resultados : O levantamento dos transcriptomas publicamente disponíveis em NCBI, GEO e ENA, resultou na obtenção do conjunto de dados GSE171546. Este conjunto dispõe de 20 amostras : 5 compondo o grupo controle e 15 amostras constituindo o grupo com cardiomiopatia séptica, separadas nos intervalos de tempo: 24h, 48h e 72h. A importação e análise desse conjunto de dados foram feitas a partir da plataforma online do Galaxy. Foi então avaliado o valor de p <0,05 e Fold change para encontrar os Genes Diferencialmente Expressos (GDE) e microRNA Diferencialmente Expressos (MDE). A partir desta análise, 768 GDE foram encontrados no período de 24h, 312 no grupo 48h e 255 GDE no intervalo de 72h, além de dois MDE (miR-8110 e miR-574-5p). As análises de enriquecimento de vias e de ontologia genética foram feitas pelo Webgestalt. A verificação dos mRNA alvos dos MDE foi realizado através do Mirwalk e posterior construção de rede de interação entre GDE e MDE, no Cytoscape. Conclusão : Os dois miRNA identificados estão relacionados a diversas vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio associado à disfunção cardíaca decorrente da sepse e estão diferencialmente modulados no transcriptoma analisado neste estudo, sugerindo um papel relevante como potenciais biomarcadores de prognóstico da cardiomiopatia decorrente da sepse.
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Mostrar Abstract
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Introdução: A sepse é uma condição clínica com elevado risco de morte, definida como uma disfunção orgânica decorrente de uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, sendo a disfunção cardíaca uma das principais complicações dos pacientes com sepse e está intimamente associada à elevada mortalidade induzida por esta condição clínica. Atualmente, a incidência e a mortalidade da sepse ainda são elevadas, apontando a importância do uso de biomarcadores no diagnóstico precoce e no seu prognóstico. Nesse cenário, os microRNA surgem como candidatos potenciais com alta especificidade e sensibilidade para a sepse. Diante desse contexto, o presente estudo visou investigar o perfil de expressão dos miRNA e sua correlação com as vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio decorrente da sepse. Métodos & Resultados : O levantamento dos transcriptomas publicamente disponíveis em NCBI, GEO e ENA, resultou na obtenção do conjunto de dados GSE171546. Este conjunto dispõe de 20 amostras : 5 compondo o grupo controle e 15 amostras constituindo o grupo com cardiomiopatia séptica, separadas nos intervalos de tempo: 24h, 48h e 72h. A importação e análise desse conjunto de dados foram feitas a partir da plataforma online do Galaxy. Foi então avaliado o valor de p <0,05 e Fold change para encontrar os Genes Diferencialmente Expressos (GDE) e microRNA Diferencialmente Expressos (MDE). A partir desta análise, 768 GDE foram encontrados no período de 24h, 312 no grupo 48h e 255 GDE no intervalo de 72h, além de dois MDE (miR-8110 e miR-574-5p). As análises de enriquecimento de vias e de ontologia genética foram feitas pelo Webgestalt. A verificação dos mRNA alvos dos MDE foi realizado através do Mirwalk e posterior construção de rede de interação entre GDE e MDE, no Cytoscape. Conclusão : Os dois miRNA identificados estão relacionados a diversas vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio associado à disfunção cardíaca decorrente da sepse e estão diferencialmente modulados no transcriptoma analisado neste estudo, sugerindo um papel relevante como potenciais biomarcadores de prognóstico da cardiomiopatia decorrente da sepse.
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LARA SOUSA CRUZ OLIVEIRA PORTELA RODRIGUES
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Identificação De Genes Diferencialmente Expressos Em Pacientes Com Sepse e a Correlação com o perfil inflamatório: Análise In Silico De Potenciais Biomarcadores.
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Orientador : SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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ALINE CRISTINA ANDRADE MOTA MIRANDA MASCARENHAS
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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Data: 13/07/2023
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A sepse é um problema de saúde pública mundial e representa a principal causa de morbidade e mortalidade no mundo em unidades de terapia intensiva não destinadas a pacientes cardiopatas. Apesar de toda a dedicação para uma investigação mais minuciosa a fim de um diagnóstico e prognóstico precoce e preciso nas últimas décadas, esta abordagem continua sendo um desafio considerável e crescente aos cuidados de saúde. Neste contexto de desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico rápidas, acessíveis e adequadas para melhorar a identificação, prevenção e tratamento da sepse, destaca-se o uso dos genes diferencialmente expressos (GDE) como potenciais biomarcadores no diagnóstico e prognóstico da sepse. Portanto, o objeti vo dessa pesquisa foi estudar o perfil de expressão dos genes e sua correlação com as vias intracelulares moduladas por citocinas e fatores decrescimento associadas à progressão e severidade da sepse. Para isso, foi feita uma pesquisa nos bancos de dados do NCBI e GEO e, posteriormente, selecionados três conjuntos de dados de sequenciamento, o GSE12624, GSE131761 e GSE69063. Foram escolhidos os GDE que possuíam um p-valor <0,05 e cuja expressão apresentava FC menor que -1,1 ou maior que +1,1. Os genes foram analisados segundo o programa de enriquecimento de vias Enrichr para verificar se a expressão gênica dos indivíduos é consistente com a doença estudada. Foi construída uma rede de interações entre os genes através do programa String. A análise de ontologia dos genes das principais vias intracelulares apresentou expressão significativamente aumentada.Através do diagrama de Venn identificou-se cinco genes presentes nos três estudos, esses cinco genes foram analisados no String. Foi construída uma rede de interações entre os genes através do programa. Foram feitas as análises dos genes avaliados quanto à sensibilidade e especificidade com base na intensidade de sinal de cada amostra através da ferramenta estatística SPSS 20.0 e os genes ARG1, HPGD, DAAM2 e PCOLCE2 apresentaram boa especificidade e sensibilidade para identificar a sepse. Estes resultados colaboram para o entendimento do papel dos 4 genes na sepse e irá ajudar na construção de um perfil de assinatura para o diagnóstico precoce da doença.
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Sepsis is a global public health problem and represents the leading cause of morbidity and mortality worldwide in non-cardiac intensive care units. Despite all the dedication to a more thorough investigation for early and accurate diagnosis and prognosis in the last decades, this approach remains a considerable and growing challenge to healthcare. In this context of developing rapid, accessible, and appropriate diagnostic tools to improve sepsis identification, prevention, andtreatment, the use of differentially expressed genes (DEGs) as potential biomarkers in sepsis diagnosis and prognosis stands out. Therefore, the objective of this research was to study the gene expression profile and its correlation with intracelular pathways modulated by cytokines and growth factors associated with sepsis progression and severity. For this purpose, a search was conducted in the NCBI and GEO databases, and subsequently, three sequencing datasets, namely GSE12624, GSE131761, and GSE69063, were selected. DEGs with a p-value <0.05 and expression fold change (FC) less than -1.1 or greater than +1.1 were chosen. The genes were analyzed using the Enrichr pathway enrichment program to verify if the gene expression of individuals is consistent with the studied disease. An interaction network between the genes was constructed using the String program. Based on this, we obtained preliminary results, and the ontology analysis of genes in the main intracellular pathways showed significantly increased expression. Through the Venn diagram, five genes present in all three studies were identified, and these five genes were further analyzed using the String program to construct an interaction network. The genes evaluated for sensitivity and specificity were analyzed based on the signal intensity of each sample through the statistical tool SPSS 20.0 and the genes ARG1, HPGD, DAAM2 and PCOLCE2 showed good specificity and sensitivity to identify sepsis. These results contribute to the understanding of the role of the 4 genes in sepsis and will help in the construction of a signature profile for the early diagnosis of the disease.
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Taiane de Macêdo Gondim
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EXPRESSÃO DE IFN, IL-17, IL-2, CCL2, CCL3 E HERVs ASSOCIADA À GRAVIDADE DA COVID-19
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Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCOS DA COSTA SILVA
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SORAYA CASTRO TRINDADE
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VERA LUCIA COSTA VALE
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Data: 25/07/2023
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A COVID-19 é uma doença respiratória aguda causada pelo novo coronavírus (SARS-CoV-2). Embora a maioria dos casos sejam assintomáticos ou cursem comsintomas leves, cerca de 20% dos acometidos pela doença desenvolvem sua forma grave. A progressão da COVID-19 tem sido associada a hipóxia, inflamação sistêmica desregulada e coagulopatias, porém os fatores de risco para sua evolução para a forma grave ainda não são totalmente compreendidos. O mau prognóstico da doença parece estar associado a fatores envolvidos na interação vírus-hospedeiro, como a sinalização prejudicada do IFN tipo I –principal linha de defesa inata para montagem de uma resposta imune antiviral efetiva –associada a uma expressão desregulada da citocina pró-inflamatórias. Além disso, os retrovírus endógenos humanos (HERVs), remanescentes de inserções genômicas virais ancestrais, parecem ser reativados em resposta a agentes infecciosos como o SARS-CoV-2, modulando a resposta imune inata e levando a vários efeitos deletérios sistêmicos, porém com papel no agravamento da COVID-19 ainda são incipientes. O presente estudo analisou a expressão gênica e níveis plasmáticos de algumas moléculas apontadas como marcadores de gravidade da COVID-19, comparando os quadros leve e grave da doença. Foram avaliados 71 indivíduos (46 casos leves e 25 graves) para análise da expressão gênica, e 139 para dosagem plasmáticas de citocinas (58 casos leves e 81 graves). As expressões dos genes de IFN e seus receptores (INFAR1 e INFAR2), IL-17 e HERVs foram analisadas em ambos os grupos, bem como as citocinas IL-2, CCL2 e CCL3. O gene INFAR2 e a citocina IL-2 foi mais elevada no grupo leve, enquanto os níveis da quimiocina CCL3 foram mais significativos no grupo grave. Esses achados potencializam as evidências de como a dinâmica da resposta imunológica do hospedeiro pode impactar o desfecho clínico da infecção pelo SARS-CoV-2.
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COVID-19 is an acute respiratory illness caused by the new coronavirus (SARS-CoV-2). Although most cases are asymptomatic or have mild symptoms, about 20% of those affected by the disease develop its severe form. The progression of COVID-19 has been associated with hypoxia, systemic physiological dysregulation and coagulopathies, but the risk factors for its evolution to the severe form are not yet fully understood. The poor prognosis of the disease seems to be associated with factors involved in the virus-host interaction, such as impaired IFN type I signaling –the main innate line of defense for mounting an effective antiviral immune response –associated with dysregulated expression of the pro-inflammation cytokine. Furthermore, human endogenous retroviruses (HERVs), remnants of ancestral viral genomic insertions, appear to be reactivated in response to infectious agents such as SARS-CoV-2, modulating the innate immune response and leading to various deleterious systemic effects, but with a role the worsening of COVID-19 are still incipient.This study analyzed gene expression and plasma levels of some molecules identified as markers of COVID-19 severity, comparing mild and severe disease. We evaluated 71 individuals (46 mild and 25 severe cases) for gene expression analysis, and 139 for plasma cytokine dosage (58 mild and 81 severe cases). Expressions of IFN genes and their receptors (INFAR1 and INFAR2), IL-17 and HERVs were analyzed in both groups, as well as IL-2, CCL2 and CCL3 cytokines. The INFAR2 gene and the IL-2 cytokine were higher in the mild group, while CCL3 chemokine levels were more significant inthe severe group. These findings add to the evidence of how the dynamics of the host's immune response can impact the clinical outcome of SARS-CoV-2 infection.
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EDSON HENRIQUE BISPO AMARAL
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Identificação de mecanismos genéticos e imunológicos associados ao uso nocivo de álcool em uma população latino-americana miscigenada
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Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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CAROLINE ALVES FEITOSA
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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THIAGO MAGALHÃES DA SILVA
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Data: 03/08/2023
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Introdução: O uso nocivo do álcool (UNA) é um problema de saúde pública que impõe custos consideráveis aos sistemas de saúde em todo o mundo. O consumo de etanol afeta a qualidade de vida dos usuários, levando a uma série de problemas de saúde mental e física. Os transtornos associados ao uso de álcool são condições complexas influenciadas por diversos fatores, como: alterações nos sistemas de neurotransmissão, mediadores imunes/inflamatórios e variantes genéticas. Tais distúrbios apresentam herdabilidade estimada entre 50% e 60%. Estudos de associação genômica ampla revelaram diversas variantes genéticas associadas aos fenótipos relacionados ao uso álcool, em particular em genes envolvidos no metabolismo da droga. No entanto, a maioria desses estudos se concentrou em populações de ascendência europeia ou asiática, limitando possíveis extrapolações para outros grupos étnicos. Objetivo: Investigar mecanismos genéticos/imunogenéticos associados ao UNA em indivíduos latino-americanos miscigenados. Metodologia: O Teste de Identificação de Transtorno por Uso de Álcool (AUDIT) foi usado para avaliar o risco de UNA em 2.840 indivíduos da cidade de Pelotas (Brasil). Os indivíduos foram genotipados para 2,3 milhões de Variantes de Nucleotídeo Único (SNVs) utilizando a plataforma Illumina HumanOmni 2.5-8v1 BeadChip, seguido por processo de imputação de genótipos. Os padrões de ancestralidade dos participantes foram investigados através de análise de Componentes Principais e pelo método ADMIXTURE. Análises de associação genética foram realizadas através de regressão logística multivariada. Os potenciais funcionais das variantes associadas ao UNA foram avaliados através de análises in silico. Além disso, foram realizadas análises de enriquecimento e interação de vias para identificar mecanismos potencialmente envolvidos no desenvolvimento de UNA. Resultados: As análises de ancestralidade evidenciaram o padrão miscigenado da população de Pelotas. Os indivíduos com alto risco de UNA apresentaram mediana de ancestralidade europeia significativamente maior do que os participantes com risco baixo/moderado [0.84 e 0.82, respectivamente; p = 2.13x10-2). Notavelmente, foi identificada associação significativa do fenótipo de UNA com uma variante intrônica no gene Citocromo P450 Família 4 Subfamília B Membro 1 (CYP4B1) (rs1097611; [p = 4.88x10-8, odds ratio (OR) = 1.8, intervalo de confiança (IC) = 1.46-2.23]. Diversas variantes em desequilíbrio de ligação com rs1097611 podem ter implicações funcionais no locus e são associadas à expressão diferencial do gene CYPB1 em múltiplos tecidos em humanos. Também foi observada associação sugestiva (5x10-8 < p < 10-5) com SNV situada no gene Fator de Troca de Nucleotídeo Guanina Vav 1 (VAV1) (p = 6.33x10-6, OR = 3.16, IC = 1.92-5.20), que codifica produto com função imune. Por fim, foi possível evidenciar diversas vias relacionadas aos sistemas nervoso e imunológico potencialmente implicadas no UNA. Conclusão: Em conjunto, esses dados suportam a natureza multifatorial do UNA, apoiando a hipótese da participação do sistema imune e de vias de neurotransmissão nos comportamentos de consumo da droga. Estudos como este, com indivíduos de grupos étnicos subrepresentados, são fundamentais para identificar novas variantes associadas ao UNA.
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Introduction: Harmful use of alcohol (HUA) is a public health problem that imposes considerable costs on healthcare systems worldwide. Ethanol consumption affects the quality of life of users, leading to a range of mental and physical health issues. Alcohol-related disorders are complex conditions influenced by various factors, such as alterations in neurotransmission systems, immune/inflammatory mediators, and genetic variants. These disorders have an estimated heritability of 50% to 60%. Genome-wide association studies have revealed numerous genetic variants associated with alcohol-related phenotypes, particularly in drug metabolism-related genes. However, most of these studies have focused on populations of European or Asian ancestries, limiting potential extrapolations to other ethnic groups. Objective: To investigate genetic/immunogenetic mechanisms associated with HUA in admixed Latin American individuals. Methods: The Alcohol Use Disorder Identification Test (AUDIT) was used to assess the risk of HUA in 2,840 individuals from the city of Pelotas (Brazil). The participants were genotyped for 2.3 million Single Nucleotide Variants (SNVs) using the Illumina HumanOmni 2.5-8v1 BeadChip platform, followed by genotype imputation. Ancestry patterns were investigated through Principal Component Analysis and ADMIXTURE method. Genetic association analyses were conducted using multivariate logistic regression. The potential functional implications of variants associated with HUA were evaluated through in silico analyses. Additionally, pathway enrichment and interaction analyses were performed to identify mechanisms potentially involved in HUA. Results: Ancestry analyses revealed the admixed pattern of the Pelotas population. Individuals with high risk of HUA exhibited significantly higher median European ancestry compared to low/moderate-risk participants (0.84 and 0.82, respectively; p = 2.13x10-2). Notably, a significant association of the HUA phenotype was identified with an intronic variant in the Cytochrome P450 Family 4 Subfamily B Member 1 (CYP4B1) gene (rs1097611; [p = 4.88x10-8, odds ratio (OR) = 1.8, confidence interval (CI) = 1.46-2.23]. Several variants in linkage disequilibrium with rs1097611 may have functional implications at the locus and are associated with differential CYPB1 gene expression in multiple human tissues. A suggestive association (5x10-8 < p < 10-5) was also observed with an SNV located in the Vav Guanine Nucleotide Exchange Factor 1 (VAV1) gene (p = 6.33x10-6, OR = 3.16, CI = 1.92-5.20), which encodes a product with immune function. Finally, multiple pathways related to nervous and immune systems are involved in HUA. Conclusion: Taken together, these findings support the multifactorial nature of HUA, suggesting the involvement of the immune system and neurotransmission pathways on drug consumption behaviors. Studies like this, with individuals from underrepresented ethnic groups, are essential to identify new variants associated with HUA.
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Itamara Raquel dos Anjos
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A INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA SOBRE A REATIVIDADE ASTROCITÁRIA EM CULTURAS PRIMÁRIAS DE RATOS NEONATOS
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Orientador : CLARISSA DE SAMPAIO SCHITINE
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MEMBROS DA BANCA :
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CLARISSA DE SAMPAIO SCHITINE
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QUIARA LOVATTI ALVES
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REJANE CONCEICAO SANTANA
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Data: 10/08/2023
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Os astrócitos são células gliais heterogênea, essenciais para o funcionamento do SNC. Eles fornecem nutrientes, recaptam neurotransmissores em excesso, contribuem com a plasticidade neuronal, remover espécies reativas de oxigênio, contribuem para a integridade e permeabilidade da BHE, possuem funções neurogênicas, sinaptogênicas, além de crescimento axonal e sobrevivência neuronal . Os astrócitos também estão envolvidos na modulação das respostas inflamatórias liberando citocinas pró-inflamatórias, regulatórias e antiinflamatórias. Dentro deste contexto, os astrócitos respondem a lesões teciduais ou estímulos danosos através de alterações morfológicas como a hipertrofia, proliferação exacerbada, alterações nos prolongamentos, e aumento da expressão de marcadores como o GFAP, em um processo conhecido como astrogliose reativa. Essa resposta astrocitária está presente em vários cenários patológicos incluindo doeças neurodegenerativas e infecções. Uma característica muito comum em muitas infecções é a alteração da temperatura. Além disso, o choque térmico pode estar associado com a indução ou severidade de doenças neurodegenerativas. Portanto, o objetivo principal do trabalho é avaliar a influência da temperatura na reatividade astroglial, analisando os efeitos do estresse térmico na expressão do principal marcador astrocitário, a proteína GFAP, a viabilidade e o impacto desse insulto térmico na modulação da resposta astrocitária. Para investigar um possível efeito da temperatura, culturas primárias de astrócitos foram preparadas de ratos pós-natais de dois dias e submetidas a uma temperatura de 42 graus Celsius por 30 min. Após esse período, as culturas foram recuperadas a 37°C em C02 por mais 24 horas. A fim de verificar a viabilidade celular nas culuras enriquecidas de astrócitos submetidas ao choque térmico, realizamos o ensaio de de MTT e não observamos diferença significativa no numero de células viaveis nas culturas submetidas ao choque termico em relação as culuras controle. Em seguida, analisamos a morfologia das culturas enriquecidas de astrócitos através da coloração de Rosenfeld, ensaio de ICQ, onde obtivemos uma resposta associada a astrogliose com a presença de prolongamentos extensos, formação de aglomerados celulares, células com ramificações expandidas e a presença de células binucleadas. Além disso, os ensaio de ICQ mostraram aumento na quantidade de células positivas para GFAP, dado que contrastou com os resultados obtidos com a técnica de Western blot, que evidenciou que a expressão de GFAP em culturas expostas a alta temperatura não difere significantemente da cultura controle. Para avaliar a modulação inflamatória induzida pela alta temperatura, dosamos concentração de NO e não houve alteração nos seus níves entre os grupos experimentais. Em adição, analisamos o perfil inflamatório da culturas enriquecidas de astrocitos dosando as citocinas IL-10, IL-1B e a proteína GFAP através da expressão gênica por qRT-PCR. Os resultados indicam que a alta temperatura, de 42 graus Celsius, por 30 minutos, induz a uma remodelação da expressão de GFAP em astrócitos em aproximadamente 40%, sem haver aumento da quantidade da proteina expressa ou da transcrição do gene conforme os dados obtidos. Também não houve mudança do perfil de citocinas expressas nas culturas expostas ao choque térmico, sugerindo a presença de uma reatividade astroglial inicial induzida pelo choque térmico. Dessa forma, novos experimentos devem ser realizados para complementar e aprofundar a dinâmica assim como a progressão da reatividade astrocitária em modelos de choque térmico.
INGLÊS
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Astrocytes are heterogeneous glial cells, essential for the functioning of the CNS. They provide nutrients, reuptake excess neurotransmitters, contribute to neuronal plasticity, remove reactive oxygen species, contribute to the integrity and permeability of the BBB, have neurogenic and synaptogenic functions, and axonal growth and neuronal survival. Astrocytes are also involved in modulating inflammatory responses by releasing pro-inflammatory, regulatory, and anti-inflammatory cytokines. Within this context, astrocytes respond to tissue injury or harmful stimuli through morphological changes such as hypertrophy, exacerbated proliferation, changes in processes, and increased expression of markers such as GFAP, in a process known as astrogliosis reactive. This astrocytic response is present in several pathological scenarios including neurodegenerative diseases and infections. A prevalent feature in many infections is the change in temperature. Furthermore, heat shock may be associated with the induction or severity of neurodegenerative diseases. Therefore, the main objective of this work is to evaluate the influence of temperature on astroglial reactivity, analyzing the effects of thermal stress on the expression of the main astrocytic marker, the GFAP protein, the viability and the impact of this thermal insult on the modulation of the astrocytic response. To investigate a possible effect of temperature, primary cultures of astrocytes were prepared from two-day postnatal mice and subjected to a temperature of 42 degrees Celsius for 30 minutes. After this period, the cultures were recovered at 37°C in C02 for another 24 hours. In order to verify cell viability in enriched cultures of astrocytes subjected to heat shock, we performed the MTT test. We did not observe a significant difference in the number of viable cells in cultures subjected to heat shock compared to control cultures. Then, we analyzed the morphology of enriched astrocyte cultures through Rosenfeld staining, and ICQ assay, where we obtained a response associated with astrogliosis with the presence of extensive extensions, formation of cell clusters, cells with expanded ramifications, and the presence of binucleated cells. In addition, the ICQ assays showed an increase in the number of GFAP-positive cells, which contrasted with the results obtained with the Western blot technique, which showed that GFAP expression in cultures exposed to high temperature does not differ significantly from the culture control. To evaluate the inflammatory modulation induced by high temperature, we measured the concentration of NO and there was no change in NO levels between the experimental groups. In addition, we analyzed the inflammatory profile of enriched cultures of astrocytes measuring IL-10, IL-1B, and GFAP protein through gene expression by qRT-PCR. The results indicate that the high temperature, 42 degrees Celsius, for 30 minutes, induces remodeling of GFAP expression in astrocytes by approximately 40%, without increasing the amount of expressed protein or gene transcription according to the data obtained. There was also no change in the profile of cytokines expressed in cultures exposed to heat shock, suggesting the presence of an initial astroglial reactivity induced by heat shock. Thus, new experiments must be carried out to complement and deepen the dynamics and progression of astrocytic reactivity in thermal shock models.
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Natália da Rocha Lopes
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AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE FATOR PROMOTOR DE RESSUSCITAÇÃO DE Corynebacterium pseudotuberculosis
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Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCOS BORGES RIBEIRO
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NUBIA SEYFFERT
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SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
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Data: 10/08/2023
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A caprino-ovinocultura são atividades prevalentes no Nordeste brasileiro. No entanto, esses animais sofrem com doenças infectocontagiosas como a linfadenite caseosa (LC), causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, que apresenta dificuldade no tratamento. Compreender o comportamento de fatores promotores de ressuscitação (Rpf) pode auxiliar nessa problemática, sendo também indicada relação entre a capacidade de produzir biofilme e a expressão de rpf. Para observar a expressão de rpfB nessa bactéria, como um possível alvo terapêutico, buscou-se avaliar a expressão desse gene nas cepas CAP3W e CAPJ4 de C. pseudotuberculosis, não produtora e produtora de biofilme, respectivamente. Para as análises foram realizados cultivos dessas cepas em caldo BHI nutritivo e em estresses oxidativo e ácido. Os estresses foram aplicados no início e meio da fase exponencial, assim como foram coletadas alíquotas em tempos pré-determinados. As alíquotas foram armazenadas a -70 ºC em TRI Reagente®, realizou-se extração de RNA que foi convertido a cDNA, sendo utilizado para avaliar a expressão de rpfB por RT-qPCR. Houve expressão de rpfB em ambas as cepas e em todas as condições analisadas. No cultivo nutritivo, observou-se expressão significativa de rpfB nas primeiras horas na cepa CAPJ4. Os estresses ácido e oxidativo induziram expressão significante do gene na cepa CAPJ4 na ressuscitação, exceto o oxidativo no início da fase exponencial. Com isso, podemos afirmar que as cepas de C. pseudotuberculosis estudadas apresentaram expressão de rpfB nas condições avaliadas. A cepa CAPJ4, conhecida por sua capacidade na formação de biofilme, se destacou na produção de rpfB.
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Goat and sheep breeding are prevalent activities in the Brazilian Northeast. However, these animals suffer from infectious and contagious diseases such as caseous lymphadenitis (CL) caused by Corynebacterium pseudotuberculosis bacteria, which presents challenges in treatment. Understanding the behavior of resuscitation-promoting factors (Rpf) may aid to solve this issue, as there is an indication of a correlation between the ability to produce biofilm and the expression of rpf. To observe the expression of rpfB in the bacteria as a potential therapeutic target, we aimed to evaluate the expression of this gene in the CAP3W and CAPJ4 strains of C. pseudotuberculosis, non-biofilm producer and biofilm producer strains, respectively. To analyze, these strains were cultured in nutritive BHI broth and subjected to oxidative and acid stresses. The stresses were applied at the early and middle of exponential phases, and aliquots were collected at predetermined times. The aliquots were stored at -70°C in TRI Reagent®, and RNA extraction was performed, followed by conversion to cDNA and used this to evaluate rpfB expression by RT-qPCR. There was expression of rpfB in both strains under all conditions analyzed. In the nutritive culture, significant expression of rpfB was observed in the early hours in CAPJ4 strain. Acid and oxidative stresses induced significant gene expression in CAPJ4 strain during resuscitation, except for oxidative stress at early exponential phase. Therefore, we can conclude that the studied strains of C. pseudotuberculosis presented rpfB expression under all evaluated conditions. The CAPJ4 strain, known for its biofilm-forming capacity, showed higher rpfB production.
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Ingrid Marins de Almeida
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ESTUDO DE VARIANTES NO GENE AKT1 E O SEU PAPEL NA GRAVIDADE DA COVID-19
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Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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ALEX JOSE LEITE TORRES
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CINTHIA VILA NOVA SANTANA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 10/08/2023
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A pandemia de COVID-19, causada pelo vírus SARS-CoV-2, é uma crise global. O Brasil é o segundo país com maior número de mortes ocorridas devido à COVID-19 no mundo, 701.494 mortes. Muitos fatores podem determinar a gravidade da COVID-19, incluindo carga viral, fatores genéticos, presença de comorbidades, idade, sexo e inflamação descontrolada. Estima-se que aproximadamente 5% dos casos desenvolvem síndrome do desconforto respiratório agudo grave devido à tempestade de citocinas. Uma via de sinalização celular que pode estar envolvida nesse processo é a PI3K/AKT/MTOR. Estudos demonstram que a inibição de AKT pode potencialmente suprimir a inflamação patológica, tempestade de citocinas, fibroproliferação e ativação plaquetária associada a COVID-19. Objetivos: Investigar a associação entre variantes do gene AKT1 com a gravidade da COVID-19. Métodos: Amostras de sangue periférico e dados sociodemográficos foram coletados de 508 indivíduos com COVID-19, 216 casos leves e 292 casos graves, de abril de 2020 a abril de 2021. As concentrações plasmáticas de citocinas foram medidas por ELISA. A genotipagem dos SNPs, rs1130214 e rs2494746, e a expressão do gene AKT1 foram realizadas usando kits da Thermo Fisher e analisadas por qRT-PCR no QuantStudio 12K (Applied Biosystems). Resultados e Conclusões: O alelo rs2494746-C foi associado à gravidade, internação na UTI e morte por COVID-19. Enquanto isso, o alelo C de rs1130214 foi associado a níveis elevados de TNF-α e D-dímero. Além disso, as variantes demonstraram um risco cumulativo associado à gravidade, criticidade e morte por COVID-19. Na análise preditiva, o rs2494746 obteve acurácia de 71%, sugerindo alta probabilidade do teste determinar a gravidade da doença. Portanto, o presente estudo contribui para entender a influência do gene AKT1 e suas variantes no dano imunológico em indivíduos infectados com SARS-CoV-2, o que pode ser útil no futuro para auxiliar na previsão de um pior resultado do COVID- 19.
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The COVID-19 pandemic, caused by the SARS-CoV-2 virus, is a global crisis. Brazil is the second country with the highest number of deaths due to COVID-19 in the world, 701,494 deaths. Many factors can determine the severity of COVID-19, including viral load, genetic factors, presence of comorbidities, age, gender, and uncontrolled inflammation. It is estimated that approximately 5% of cases develop severe acute respiratory distress syndrome due to cytokine storm. A cell signaling pathway that may be involved in this process is PI3K/AKT/MTOR. Studies demonstrate that AKT inhibition can potentially suppress pathologic inflammation, cytokine storm, fibroproliferation, and platelet activation associated with COVID-19. Objectives: To investigate the association between AKT1 gene variants and the severity of COVID-19. Methods: Peripheral blood samples and sociodemographic data were collected from 508 individuals with COVID-19, 216 mild cases and 292 severe cases, from April 2020 to April 2021. Plasma cytokine concentrations were measured by ELISA. Genotyping of the SNPs, rs1130214 and rs2494746, and AKT1 gene expression were performed using Thermo Fisher kits and analyzed by qRT-PCR in the QuantStudio 12K (Applied Biosystems). Results and Conclusions: The rs2494746-C allele was associated with severity, ICU admission, and death from COVID-19. Meanwhile, the C allele of rs1130214 was associated with elevated TNF-α and D-dimer levels. In addition, variants demonstrated a cumulative risk associated with severity, criticality, and death from COVID-19. In the predictive analysis, the rs2494746 obtained an accuracy of 71%, suggesting a high probability of the test determining the severity of the disease. Therefore, the present study contributes to understanding the influence of the AKT1 gene and its variants on immune damage in individuals infected with SARS-CoV-2, which may be useful in the future to help predict a worse outcome of COVID-19.
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Irlã Santos Lima
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Caracterização de mecanismos antitumorais e imunomodulatórios do flavonoide rutina em células de glioma em interação com microglia e relação com expressão de miRNAs.
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Orientador : SILVIA LIMA COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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FABIOLA CARDILLO
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GISELLE PINTO DE FARIA LOPES
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SILVIA LIMA COSTA
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Data: 24/08/2023
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O glioblastoma (GBM) é o tumor cerebral mais agressivo e resistente ao tratamento. No microambiente GBM, a interação com a microglia está associada à desregulação de citocinas, quimiocinas e miRNAs, que contribuem para angiogênese, proliferação, anti-apoptose e quimiorresistência. O flavonoide rutina tem demonstrado ser capaz de induzir a inibição do crescimento de células de glioma de rato associado à ativação microglial e produção de mediadores pró-inflamatórios por mecanismos ainda pouco esclarecidos. Caracterizar os mecanismos antitumorais e imunomodulatórios do flavonoide rutina em células de glioma em interação indireta com microglias e a relação com expressão de miRNAs. Para tanto foram utilizadas células de GBM humanas GL15 e microglias humanas da linhagem C20. A viabilidade celular foi analisada pelo teste de MTT em ambos os tipos celulares tratadas ou não com rutina (1-50 μM) por 24 h. A capacidade de migração de células GL-15 após tratamento com rutina (30 µM) foi analisada por microscopia de interferência em ensaio de lesão em monocamada. A expressão do miR-125b em células GL15 tratadas ou não com rutina (30 µM) e no secretoma foi avaliada 24 h após o tratamento por RT-qPCR. A expressão de mRNA para citocinas IL-1β, IL-6, IL-10, TNF e para a proteína sinalizadora STAT3 em microglia C20 controles, tratadas com meio condicionado de GL-15 em condições controle (MCGC) ou tratadas com meio condicionado de GL-15 tratadas com rutina (MCGR) foi avaliada 24 h após o tratamento por RT-qPCR. Adicionalmente, a expressão de proteína STAT3 nas células GL15 e C20, nas diferentes condições, foi avaliada por western blot, e a morfologia das células foi analisada por microscopia de interferência. Foi observado que rutina (30-50 μM) reduziu significativamente a viabilidade das células GL15 (50%) após 24 h, e aboliu a migração após 48 h, no entanto, não afetou a viabilidade de microglias. Somado a estes, o tratamento de células GL15 com rutina reduziu significativamente a expressão de miR-125b e da proteína STAT3. Por outro lado, microglias submetidas ao MCGR apresentaram alterações morfológicas sugestivas de reatividade e apresentaram redução na expressão de mRNA para IL-6, TNF e STAT3 e da proteína STAT3. Os resultados deste estudo reiteram o potencial antiglioma do flavonoide rutina e revelam a sua propriedade em modular a expressão de onco miRNA-125b que, pelos estudos de interação indireta com microglias, deve implicar na modulação do perfil inflamatório destas células para um fenótipo mais responsivo antitumoral.
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Glioblastoma (GBM) is the most aggressive and treatment-resistant brain tumor. In the GBM microenvironment, interaction with microglia is associated with dysregulation of cytokines, chemokines, and miRNAs, which contribute to angiogenesis, proliferation, anti-apoptosis, and chemoresistance. The flavonoid rutin has been shown to induce inhibition of rat glioma cell growth associated with microglial activation and production of pro-inflammatory mediators by mechanisms that are still poorly understood. The present study aimed to characterize the antitumor and immunomodulatory mechanisms of the flavonoid rutin in human glioma cells in indirect interaction with microglia and the relationship with miRNA expression. For this, human GL15 GBM cells and human C20 microglia were used. Cell viability was analyzed by MTT test in both cell types treated or not with rutin (1-50 μM) for 24 h. The migration capacity of GL-15 cells after treatment with rutin (30 μM) was analyzed by interference microscopy in a monolayer lesion assay. The expression of miR-125b in GL15 cells treated or not with rutin (30 μM) and in their secretome was evaluated 24 h after treatment by RT-qPCR. The expression of mRNA for cytokines IL-1β, IL-6, IL-10, TNF and for the signaling protein STAT3 in C20 microglia controls, treated with conditioned medium of GL-15 under control conditions (GCCM) or treated with conditioned medium of GL-15 treated with rutin (MCGR) was evaluated 24 h after treatment by RT-qPCR. Additionally, the expression of STAT3 protein in GL15 and C20 cell in the different conditions was evaluated by Western blot, and the morphology of the cells was analyzed by interference microscopy. It was observed that rutin (30-50 μM) significantly reduced the viability of GL15 cells (about 50%) after 24 h, and abolished migration after 48 h, however, it did not affect the viability of microglia. In addition, the treatment of GL15 cells with rutin significantly reduced the expression of miR-125b and the STAT3 protein. On the other hand, microglia submitted to MCGR showed morphological changes suggestive of reactivity and showed a reduction in the expression of mRNA for IL-6, TNF and STAT3 and in STAT3 protein. The results of this study reiterate the antiglioma potential of the flavonoid rutin and reveal its property in modulating the expression of onco miRNA-125b which, by studies of indirect interaction with microglia, should be implyed in the modulation of the inflammatory profile of these cells for a more responsive antitumor phenotype.
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CLARA MACÊDO MIMOSO
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LESÃO TECIDUAL E REPARO INDUZIDOS PELO VENENO DE Bothrops leucurus NO MÚSCULO ESQUELÉTICO E POTENCIAL TERAPÊUTICO DA ADMINISTRAÇÃO DE G-CSF
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Orientador : LUCIANA LYRA CASAIS E SILVA
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCIANA LYRA CASAIS E SILVA
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MARCIO CAJAZEIRA AGUIAR
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VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
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Data: 29/09/2023
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Os acidentes ofídicos são um importante problema de saúde pública em regiões tropicais do mundo, devido ao grande número de pessoas afetadas e ao risco de morbimortalidade após o envenenamento. Na Bahia aproximadamente 70% dos acidentes são causados pela espécie Bothrops leucurus. Os venenos são uma mistura complexa de substâncias orgânicas e inorgânicas que se diversificam entre espécies e de acordo com fatores como desenvolvimento evolutivo, variações geográficas, alimentares e biológicas, o que reforça a necessidade de investigar os mecanismos envolvidos na ação de cada veneno. As manifestações locais desencadeadas pelo envenenamento, como inflamação persistente, dano tecidual e mionecrose, são neutralizadas de forma ineficiente, podendo haver dano tecidual irreversível. Terapias coadjuvantes são propostas para reduzir os danos locais do envenenamento botrópico, entretanto ainda não existe uma terapia alternativa aplicada na clínica. Tratamentos com G-CSF tem sido utilizado nas recuperações funcionais e estruturais de músculos lesionados. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil temporal da lesão e reparo induzidos pelo envenenamento pelo veneno de B. leucurus, assim como o grau de comprometimento estrutural do músculo esquelético, o perfil de células inflamatórias e de citocinas liberadas após a inoculação do veneno, e avaliar o efeito do tratamento com G-CSF sobre o músculo esquelético envenenado em modelo experimental. Para isso, camundongos Swiss foram inoculados com 50 μg/mL do veneno total de B. leucurus e eutanasiados nos períodos experimentais de 3 h, 6 h e 24 h, 7 d, 14 d e 28 d. Animais inoculados com veneno B. leucurus foram tratados com G-CSF por dois dias consecutivos após completarem 7 d e 28 d do envenenamento. Amostras de soro e músculo foram coletadas, processadas e utilizadas para a avaliação da atividade miotóxica do veneno, através da dosagem de CK plasmática, da análise histopatológica das lesões musculares e quantificação de células inflamatórias, e da e expressão gênica de citocinas, por RT-qPCR. Os resultados de CK demonstraram pico de liberação após 6 h. Os cortes histológicos corados com HE evidenciaram infiltrado inflamatório em todos os períodos analisados, com predominância da concentração em 7 d e 14 d; presença de ‘lesão delta’, edema, hemorragia, mionecrose e hipercontração miofibrilar. A avaliação da expressão gênica de citocinas demostrou o aumento de TNF-α, IL-1β, INF-y, IL-6, IL-10, ARG e VEGF, nos diferentes tempos analisados. De forma geral o tratamento com G-CSF teve ação imunomoduladora do processo inflamatório, alterando a expressão das citocinas, mas não na avaliação histológica, indicando a possibilidade de desdobramento positivo no tratamento com G-CSF para lesões do músculo esquelético ocasionadas pelo envenenamento por B. leucurus, utilizando protocolo de tratamento diferente.
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Ophidian accidents are a major public health problem in tropical regions of the world, due to the large number of people affected and the risk of morbidity and mortality after envenoming. In Bahia approximately 70% of the accidents are caused by the species Bothrops leucurus. Snake venoms are a complex mixture of organic and inorganic substances that change between species and according to factors such as evolutionary development, geographical, dietary and biological variations, which reinforces the need to investigate the mechanisms involved in the actions of each venom. Local manifestations triggered by envenoming, such as persistent inflammation, tissue damage and myonecrosis, are inefficiently neutralized and irreversible tissue damage may result. Coadjuvant therapies are proposed to reduce the local damage of bothropic envenoming, however there is still no alternative therapy applied in the clinic. G-CSF treatments have been used in the functional and structural recovery of injured muscles. The aim of this study was to characterize the temporal profile of injury and repair induced by B. leucurus venom envenomation, as well as the degree of structural impairment of skeletal muscle, the profile of inflammatory cells and cytokines released after venom inoculation, and to evaluate the effect of treatment with G-CSF on envenoming skeletal muscle in an experimental model. For this, Swiss mice were inoculated with 50 μg/mL of B. leucurus venom and euthanized in the experimental periods of 3 h, 6h and 24 h, 7 d, 14 d and 28 d. Animals inoculated with B. leucurus venom were treated with G-CSF for two consecutive days after completing 7 d and 28 d of envenomation. Serum and muscle samples were collected, processed and used to assess the myotoxic activity of the venom, through plasma CK dosage, histopathological analysis of muscle lesions and quantification of inflammatory cells and cytokine gene expression by RT-qPCR. CK results demonstrated peak release after 6 h. Histological sections stained with HE showed inflammatory infiltrate in all analyzed periods, with predominance of the concentration in 7 d and 14 d; presence of ‘delta lesion’, oedema, hemorrhage, myonecrosis and myofibrillar hypercontraction. The evaluation of cytokine gene expression showed an increase in TNF-α, IL-1β, INFy, IL-6, IL-10, ARG and VEGF at the different times analyzed. In general, the treatment with G-CSF had an immunomodulatory action on the inflammatory process, altering the expression of cytokines, but not in the histological evaluation, indicating the possibility of a positive development in the treatment with G-CSF for skeletal muscle injuries caused by envenoming by B. leucurus, using a different treatment protocol.
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Allan Souza dos Santos
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CARACTERIZAÇÃO DE SUBPOPULAÇÕES LINFOCITÁRIAS E MARCADORES PROGNÓSTICOS EM PACIENTES RECÉM DIAGNOSTICADOS COM MIELOMA MÚLTIPLO SUBMETIDOS À TERAPIA DE PRIMEIRA LINHA COM CICLOFOSFAMIDA, TALIDOMIDA, DEXAMETASONA E DARATUMUMABE.
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Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
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MEMBROS DA BANCA :
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ALEX JOSE LEITE TORRES
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SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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MARINHO MARQUES DA SILVA NETO
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Data: 27/10/2023
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O mieloma múltiplo (MM) é a segunda neoplasia hematológica mais frequente, decorrente da proliferação de plasmócitos produtores de proteína monoclonal, afetando majoritariamente a população idosa. Na última década, os avanços terapêuticos têm possibilitado aumento da sobrevida global dos pacientes, contudo a doença permanece incurável. Protocolos terapêuticos combinando agentes alquilantes, imunomoduladores, imunossupressores e imunoterapia induzem a uma alteração imunológica ainda pouco compreendida. O objetivo deste estudo foi caracterizar subpopulações linfocitárias em pacientes com Mieloma Múltiplo elegíveis ao Transplante Autólogo de Células-Tronco Hematopoiéticas (TACTH), utilizando a terapia de primeira linha com ciclofosfamida, talidomida, dexametasona associado ao daratumumabe (CTd-Dara), anticorpo monoclonal anti-CD38. Entre 2018 e 2022, 23 pacientes com MM recém-diagnosticados tiveram seus perfis linfocitários analisados em cinco momentos distintos e a resposta terapêutica monitorada por Next-Generation Flow (NGF), através da pesquisa de doença residual mensurável (DRM). Observou-se que o tratamento induziu mudanças significativas no perfil linfocitário, com destaque para a diminuição de linfócitos B e células NK. A composição das subpopulações de linfócitos B alterou significativamente ao longo do tratamento. Na avaliação de variáveis prognósticas, a expressão da molécula CD38 na superfície dos plasmócitos, revelou-se um marcador promissor, correlacionando-se a menores níveis de DRM para esta terapia e ao sistema R-ISS. Embora as subpopulações linfocitárias e as Células Tumorais Circulantes (CTCs) não tenham alcançado significância estatística em termos prognósticos, elas indicam um padrão que merece uma investigação mais aprofundada. Estes resultados enriquecem nossa compreensão sobre os efeitos imunomoduladores de terapias no MM e sinalizam caminhos para otimizar tratamentos e monitoramento de pacientes.
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Multiple Myeloma (MM) is the second most common hematological malignancy, resulting from the proliferation of monoclonal protein-producing plasma cells, predominantly affecting the elderly population. In the last decade, therapeutic advances have led to an increase in the overall survival of patients, however the disease remains incurable. Therapeutic protocols combining alkylating agents, immunomodulators, immunosuppressants, and immunotherapy induce an immunological shift that is still not fully understood. The aim of this study was to characterize lymphocyte subsets in patients with Multiple Myeloma eligible for Autologous Stem Cell Transplant (ASCT) using first-line therapy with cyclophosphamide, thalidomide, dexamethasone combined with daratumumab (CTd-Dara), an anti-CD38 monoclonal antibody. Between 2018 and 2022, 23 newly-diagnosed MM patients had their lymphocyte profiles analyzed at five distinct time points, and the therapeutic response was monitored by Next Generation Flow (NGF), through the detection of measurable residual disease (MRD). It was observed that the treatment induced significant changes in the lymphocyte profile, with emphasis on the decrease in B cells and NK cells. The composition of the B cell subsets changed significantly throughout the treatment. When evaluating prognostic variables, the expression of the CD38 molecule on the surface of plasma cells emerged as a promising marker, correlating with lower MRD levels for this therapy and the R-ISS system. Although the lymphocyte subpopulations and Circulating Tumor Cells (CTCs) did not achieve statistical significance in prognostic terms, they indicate a pattern warranting further investigation. These findings enhance our understanding of the immunomodulatory effects of therapies in MM and signal ways to optimize treatments and patient monitoring.
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UENDERSON CONCEIÇÃO ROCHA
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SOROPREVALÊNCIA DA INFECÇÃO PELO VÍRUS SARS-COV-2 EM DOADORES DE SANGUE NO INTERIOR DA BAHIA
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Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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RODRIGO FELICIANO DO CARMO
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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SARA NUNES DE OLIVEIRA ARAUJO
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Data: 22/11/2023
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Introdução: A COVID-19 trouxe complicações para diversos países. No Brasil, a distribuição da infecção ocorreu, de modo geral, das capitais dos estados para as cidades do interior. Esse fluxo foi identificado também na Bahia, sendo importante traçar o nível de circulação viral e o impacto da infecção nas regiões do estado. Objetivo: Investigar a relação entre a soroprevalência para a infecção pelo SARS-CoV-2 em amostras de doadores de sangue e a notificação de casos de infecção pelo vírus no Interior da Bahia, em 2020. Material e Métodos: A amostra populacional constitui-se originalmente de 6.877 pessoas doadoras de sangue em 13 cidades, situadas em quatro regiões do estado da Bahia (norte, sul, leste e oeste). Posteriormente, as amostras de soro foram submetidas a teste para a detecção de anticorpos anti-SARS-CoV-2, utilizando o Kit TR COVID-19 IGM/IGG – Bio-Manguinhos. Foram realizadas análises estatísticas para estimar a soroprevalência bruta da infecção e utilizado o método de correção bayesiano para determinar a soroprevalência ajustada por região do estado. Os dados referentes a notificação/incidência têm como fonte a base de dados pública da Secretária de Saúde do Estado da Bahia (SESAB) e o DATASUS. Foram preservados apenas os registros cujo teste para COVID-19 tenha sido marcado como “POSITIVO” e “SRAG por COVID-19” no ano de 2020, entre os meses de abril e novembro. Resultados: Os doadores de sangue apresentaram idade mediana de 34 anos (IQR: 25-42). A maioria dos doadores testados era da região oeste da Bahia. A soroprevalência entre doadores de sangue e a incidência cumulativa de infecção/hospitalização entre abril e novembro de 2020 foram de 12,2% e 5,0%, respectivamente. Foi possível identificar diferenças entre a soroprevalência de doadores de sangue e a incidência acumulada de casos, principalmente nas regiões oeste e leste da Bahia, em novembro de 2020. Conclusão: Este estudo revela uma discrepância entre a soroprevalência de SARS-CoV-2 em doadores de sangue e os casos notificados de infecção na Bahia em 2020, particularmente nas regiões oeste e leste do estado. A prevalência de 12,2% entre os doadores de sangue, em comparação com a incidência cumulativa de 5,0% de infecções/hospitalizações, sugere uma subnotificação substancial dos casos de COVID-19. A pesquisa contribui para um maior entendimento da dinâmica da infecção do SARS-Cov-2 no interior da Bahia, fornecendo dados valiosos para o planejamento de estratégias de saúde pública mais direcionadas e eficientes na contenção da disseminação do vírus, especialmente em áreas menos acessíveis e em populações vulneráveis.
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Introduction: COVID-19 has brought complications to various countries. In Brazil, the spread of the infection generally moved from state capitals to interior cities. This pattern was also identified in Bahia, making it important to trace the level of viral circulation and the impact of the infection in the regions of the state. Objective: To investigate the relationship between the seroprevalence of SARS-CoV-2 infection in blood donor samples and the notification of virus infection cases in the Interior of Bahia in 2020. Materials and Methods: The population sample originally consisted of 6,877 blood donors in 13 cities, located in four regions of the state of Bahia (north, south, east, and west). Subsequently, serum samples were tested for the detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies using the TR COVID-19 IGM/IGG Kit – Bio-Manguinhos. Statistical analyses were conducted to estimate the crude seroprevalence of the infection and a Bayesian correction method was used to determine the seroprevalence adjusted by region of the state. The data on notification/incidence are sourced from the public database of the Secretary of Health of the State of Bahia (SESAB) and DATASUS. Only records marked as "POSITIVE" and "SRAG for COVID-19" in the year 2020, between April and November, were preserved. Results: The blood donors had a median age of 34 years (IQR: 25-42). Most of the tested donors were from the western region of Bahia. The seroprevalence among blood donors and the cumulative incidence of infection/hospitalization between April and November 2020 were 12.2% and 5.0%, respectively. Differences were identified between the seroprevalence of blood donors and the accumulated incidence of cases, mainly in the west and east regions of Bahia, in November 2020. Conclusion: This study reveals a discrepancy between the seroprevalence of SARS-CoV-2 in blood donors and the reported cases of infection in Bahia in 2020, particularly in the western and eastern regions of the state. The prevalence of 12.2% among blood donors, compared to the cumulative incidence of 5.0% of infections/hospitalizations, suggests substantial underreporting of COVID-19 cases. The research contributes to a better understanding of the dynamics of SARS-CoV-2 infection in the interior of Bahia, providing valuable data for planning more targeted and efficient public health strategies to contain the virus's spread, especially in less accessible areas and among vulnerable populations.
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Raquel Bispo de São Pedro
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Avaliação de genes auto inflamatórios em crianças com Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) associada à infecção pelo SARS-CoV-2.
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Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
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VIVIAN BOTELHO LORENZO
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Data: 13/12/2023
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Introdução: A Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) é uma condição inflamatória associada à infecção pelo SARS-CoV-2. É caracterizada por febre, sintomas gastrointestinais proeminentes, manifestações mucocutâneas, sintomas respiratórios e choque. A ocorrência de SIM-P pode estar associada a erros inatos da imunidade, que afetam seletivamente a resposta imune do hospedeiro contra o SARS-CoV-2. Objetivo: Identificar variantes em genes envolvidos em condições autoinflamatórias primárias que podem ser determinantes para a SIM-P. Métodos: Foram coletadas células e informações clínicas e laboratoriais de 21 pacientes pediátricos com SIM-P, recrutados em três hospitais públicos da região Nordeste do Brasil. Os casos de SIM-P foram classificados como graves ou moderados, considerando-se a necessidade ou não, respectivamente, de Ventilação por Pressão Positiva (PPV) e/ou medicação vasopressora. Em seguida, foi realizado sequenciamento total do exoma (WES) dos indivíduos e aplicada estratégia de priorização de Variantes de Nucleotídeo Único (SNVs) com potencial deletério, com foco em 56 genes previamente implicados em doenças autoinflamatórias (de acordo com o Comitê de Imunidade da União Internacional das Sociedades de Imunologia, 2022). Resultados: Nove indivíduos apresentaram a forma moderada da SIM-P, enquanto os outros 12 foram incluídos no grupo de SIM-P grave. Na abordagem de priorização de variantes, foram identificadas 6 SNVs em 5 genes diferentes (ADAM17, CARD14, IKBKG, PSTPIP1 e SH3BP12). Todas essas variantes foram encontradas em crianças/adolescentes com a forma grave da SIM-P. Notavelmente, foram selecionadas duas variantes (rs1200631089 e rs144458353) no gene ADAM17. Tal gene codifica uma protease implicada no processamento do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e desempenha papel fundamental na infecção pelo SARS-CoV-2, clivando a Enzima Conversora de Angiotensina 2 (ECA-2), o principal receptor humano para o SARS-CoV-2. Conclusão: Nossos dados sugerem que variantes deletérias raras em genes previamente implicados em condições autoinflamatórias, incluindo ADAM17, IKBKG, PSTPIP1, SH3BP2 e CARD14, podem explicar a ocorrência de SIM-P em crianças e adolescentes brasileiros previamente sadios.
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Introduction: Multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) is an inflammatory condition associated with SARS-CoV-2 infection. It is characterized by fever, prominent gastrointestinal symptoms, mucocutaneous manifestations, respiratory symptoms, and shock. The occurrence of P-MIS may be linked to innate immunological errors that selectively affect the host's immune response against SARS-CoV-2. Ain: Identify variants in genes involved in primary autoinflammatory conditions that may be implicated in MIS-C. Methods: Cells and clinical/laboratory information were collected from 21 pediatric patients with MIS-C recruited from three public hospitals in the Northeast region of Brazil. The MIS-C cases were categorized as severe or moderate based on the need for Positive Pressure Ventilation (PPV) and/or vasopressor medication, respectively. Subsequently, whole exome sequencing (WES) was performed on the individuals, and a strategy for prioritizing Single Nucleotide Variants (SNVs) with potential deleterious effects was applied. The focus was on 56 genes previously implicated in autoinflammatory diseases (according to the International Union of Immunological Societies Immunodeficiency Committee, 2022). Results: Nine individuals presented with the moderate form of MIS-C, while the remaining 12 were included in the severe MIS-C group. In the variant prioritization approach, six Single Nucleotide Variants (SNVs) were identified in five different genes (ADAM17, CARD14, IKBKG, PSTPIP1, and SH3BP12). All these variants were found in children/adolescents with the severe form of MIS-C. Notably, two variants (rs1200631089 and rs144458353) in the ADAM17 gene were selected. This gene encodes a protease implicated in the processing of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and plays a crucial role in SARS-CoV-2 infection by cleaving Angiotensin-Converting Enzyme 2 (ACE2), the primary human receptor for SARS-CoV-2. Conclusion: Our data suggest that rare deleterious variants in genes previously implicated in autoinflammatory conditions, including ADAM17, IKBKG, PSTPIP1, SH3BP2, and CARD14, may account for the occurrence of P-MIS in previously healthy Brazilian children and adolescents.
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Verônica Moreira de Sousa
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“CARACTERIZAÇÃO DA MODULAÇÃO DA RESPOSTA GLIAL PELO FLAVONOIDE AGATISFLAVONA EM MODELO IN VITRO DE TRAUMA CRÂNIO ENCEFÁLICO”
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Orientador : SILVIA LIMA COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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ANIBAL DE FREITAS SANTOS JUNIOR
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DENIS DE MELO SOARES
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SILVIA LIMA COSTA
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Data: 14/12/2023
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A lesão cerebral traumática (LCT) é uma patologia complexa e multifatorial, sendo uma das principais causas de morte e incapacidade em humanos.Imediatamente após a LCT, astrócitos e microglias reagem com alterações morfológicas e funcionais complexas conhecidas como gliose reativa e formam, na área imediatamente adjacente à lesão, a cicatriz glial, é a principal barreira para a regeneração neuronal no sistema nervoso central. O flavonoide agatisflavona (bis-apigenina), presente nas folhas de Poincianella pyramidalis, tem demonstrado efeitos neurogênicos, neuroprotetores e anti-inflamatórios, conforme demonstrado em modelos in vitro de toxicidade induzida por glutamato, neuroinflamação e desmielinização. O presente estudo investigou o efeito da agatisflavona na integridade neuronal e na modulação da gliose em modelos ex vivo de LCT. Metodologia: Microdissecações do encéfalo de ratos Wistar (P6-8) foram preparadas e submetidas a lesão mecânica (LM), sendo tratadas ou não diariamente com agatisflavona (5 μM) por 3 dias. A reatividade dos astrócitos foi investigada pela mensuração de mRNA e expressão da proteína GFAP na área lesionada por imunofluorescência e western blot; a proporção de microglias foi determinada por imunofluorescência para Iba-1; a expressão de mRNA para o inflamassoma NRPL3 e interleucina-1 beta (IL-1β) foi determinada por RT-qPCR. Resultados: Observou-se que a lesão no tecido cortical induziu astrócitos a super expressar GFAP na típica cicatriz glial, e a agatisflavona modulou a expressão desta proteína nos níveis transcricional e pós-transcricional associados à redução da cicatriz. A LM induziu um aumento na proporção de microglias (Iba-1+) que não foi observado em culturas tratadas com agatisflavona. Além disso, o flavonoide modulou negativamente a expressão de mRNA tanto de NRLP3 quanto de IL-1β, que estavam aumentados na área lesionada do tecido. Conclusão: Todas essas descobertas reiteram a propriedade regulatória da resposta inflamatória das células gliais pela agathisflavona, que pode impactar na neuroproteção e deve ser considerada para futuros estudos pré-clínicos e clínicos em patologias do sistema nervoso central, incluindo a LCT.
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Introduction: Traumatic Brain Injury (TBI) is a complex and multifactorial pathology, being a major cause of death and disability for humans. Immediately after TBI, astrocytes and microglia react with complex morphological and functional changes known as reactive gliosis and forms, in the area immediately adjacent to the lesion, the glial scar, the major barrier to neuronal regeneration in the central nervous system. The flavonoid agathisflavone (bis-apigenin), present in Poincianella pyramidalis leaves, has been shown to have neurogenic, neuroprotective, and anti-inflammatory effects, demonstrated in in vitro models of glutamate-induced toxicity, neuroinflammation, and demyelination. The present study investigated, the effect of agathisflavone in neuronal integrity and in the modulation of gliosis in ex vivo models of TBI. Methodology: Microdissections from the encephalon of Wistar rats (P6-8), were prepared and subjected to mechanical injury (MI) and treated or not daily with agathisflavone (5 μM) for 3 days. Astrocyte reactivity was investigated by measuring mRNA and expression of GFAP protein in the lesioned area by immunofluorecence and westernblot; proportion of microglia was determined by immunofluorescence for Iba-1; mRNA expression for inflammasome NRPL3 and interleukin -1 beta (IL-1β) was determined by RT-qPCR. Results: It was observed that lesion of the cortical tissue induced astrocytes over expressing GFAP in the typical glial scar formed, and agathisflavone modulated GFAP expression at transcriptional and pos-transcriptional level associated with reduction of glial scar. MI induced increase in the proportion of microglia (Iba-1+) that was not observed in agathisflavone treated cultures. Moreover, the flavonoid modulated negatively both NRLP3 and IL-1β mRNA expression that was increases in the lesioned area of the tissue. Conclusion: All of these findings reiterate the regulatory property of the inflammatory response of glial cells by the flavonoid agathisflavone, which can impact in neuroprotection and should be considered for future pre-clinical and clinical studies for CNS pathologies, including TBI.
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ADLAS MICHEL DE JESUS RIBEIRO
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AVALIAÇÃO DO PERFIL CLÍNICO-DEMOGRÁFICO DE PACIENTES INFANTO-JUVENIS COM COVID-19 ATENDIDOS EM UM HOSPITAL EM SALVADOR/BA
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Orientador : LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
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LUCIANE AMORIM SANTOS
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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Data: 19/12/2023
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Introdução: A pandemia global de COVID-19 resultou em milhares de casos e óbitos em todo o mundo. A disseminação ampla e contínua do vírus SARS-CoV-2 em todo o mundo, propiciou condições para o surgimento de novas variantes. Crianças e adolescentes desempenham um papel importante na propagação do vírus. No Brasil, as variantes Gama, Delta e Ômicron estavam amplamente presentes, porém, há escassez de dados sobre o impacto dessas variantes nesse grupo demográfico. Assim, compreender as implicações dessas variantes na evolução da COVID-19 em crianças e adolescentes se torna crucial. Objetivo: Descrever as características clínicas e epidemiológicas dos pacientes menores de 18 anos com COVID-19 atendidos em um hospital privado, no município de Salvador, durante o período de maior prevalência das variantes Gama, Delta e Ômicron. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo que incluiu 619 participantes com 0 a 17 anos atendidos na emergência pediátrica do hospital. Foram coletados dados clínicos, laboratoriais e informações sobre internamento e óbito através de consulta aos prontuários eletrônicos. Resultados: Foi observado uma distribuição de casos confirmados para COVID-19 semelhante entre os períodos de prevalência da variante Gama e Ômicron, porém uma redução de casos durante o período de prevalência da variante Delta. Isso foi observado para as hospitalizações em UTI. A mediana do tempo de início dos sintomas variou entre 3 e 4 dias. Os principais sintomas relatados foram febre, tosse, coriza e Cefaléia. Tosse foi mais prevalente durante o período das variantes Delta e Ômicron. Foram observadas poucas comorbidades, ausência de mortalidade e apenas um caso de síndrome inflamatória multissistêmica (SIM-P) no período do estudo. Em relação aos marcadores inflamatórios, um aumento significativo da proteína C reativa associado à variante Ômicron, indicando um maior processo inflamatório ou infeccioso. Na avaliação do hemograma, os níveis de monócitos mostraram diferença entre os períodos, sugerindo que no período de Prevalência da variante Ômicron ocorreu uma resposta imune mais ativa. Conclusão: Este estudo oferece uma compreensão detalhada das características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais das variantes do SARS-CoV-2 em pacientes pediátricos, enfatizando a necessidade contínua de vilância e pesquisa para enfrentar as evoluções da COVID-19.
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Introduction: The global COVID-19 pandemic has resulted in thousands of cases and deaths worldwide. The widespread and continuous spread of the SARS-CoV-2 virus has created conditions for the emergence of new variants. Children and adolescents play a significant role in the transmission of the virus. In Brazil, the Gamma, Delta, and Omicron variants were widely present; however, there is a scarcity of data on the impact of these variants in this demographic group. Therefore, understanding the implications of these variants in the evolution of COVID-19 in children and adolescents becomes crucial. Objective: The objective of this retrospective study is to describe the clinical and epidemiological characteristics of patients under 18 years old with COVID-19 treated at a private hospital in the city of Salvador during the period of highest prevalence of the Gamma, Delta, and Omicron variants. Methods: This is a retrospective study that included 619 participants aged 0 to 17 years treated in the pediatric emergency department of the hospital. Clinical and laboratory data, as well as information on hospitalization and death, were collected through electronic medical record reviews. Results: A similar distribution of confirmed COVID-19 cases was observed during the prevalence periods of the Gamma and Omicron variants, with a reduction in cases during the Delta variant prevalence period. The same pattern was observed for ICU hospitalizations. The median time of symptom onset varied between 3 to 4 days. The main reported symptoms were fever, cough, runny nose, and headache, with cough being more prevalent during the Delta and Omicron variant periods. Few comorbidities were observed, no mortality was recorded, and only one case of multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) was identified during the study period. Regarding inflammatory markers, a significant increase in C-reactive protein associated with the Omicron variant was observed, indicating a higher inflammatory or infectious process. In the hematological assessment, monocyte levels showed differences between the periods, suggesting a more active immune response during the Omicron variant prevalence period. Conclusion: This study provides a detailed understanding of the clinical, epidemiological, and laboratory characteristics of SARS-CoV-2 variants in pediatric patients. It underscores the ongoing need for surveillance and research to address the evolutions of COVID-19, particularly in contexts where new variants are in circulation. The data analysis contributes to a deeper understanding of the impact of these variants on children and adolescents, providing valuable insights for prevention and control strategies in this demographic group.
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ALINE CLARA DA SILVA
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DESENVOLVIMENTO DE UM TESTE PARA DETECÇÃO QUANTITATIVA DE CÉLULAS INFECTADAS POR HTLV POR IMUNOFENOTIPAGEM
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Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
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MEMBROS DA BANCA :
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EVERTON DA SILVA BATISTA
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ALEX JOSE LEITE TORRES
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MARCOS BORGES RIBEIRO
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MARCOS DA COSTA SILVA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 10/02/2023
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A infecção por HTLV estabelece baixa carga proviral uma vez que a disseminação do vírus ocorre por sinapse virológica e por multiplicação mitótica das células infectadas. A expansão clonal das células infectadas, além de ser importante para latência da infecção, parece levar a disfunções no sistema imune do hospedeiro gerando autoimunidade (HAM/TSP, uveíte e doenças cardiovasculares) e malignidade (ATL). O comprometimento do sistema imune causado pela infecção por HTLV-1/2 torna o indivíduo infectado suscetível a outras doenças infecciosas como tuberculose e Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). HIV e HTLV apresentam organização genômica similar e tropismo por células do sistema imune (células T CD4+). No entanto, a influência do HTLV-1/2 na progressão da patologia desenvolvida pelo HIV vem sendo bastante discutida. Este trabalho pretende, através de citometria de fluxo, identificar a infecção intracitoplasmática de células infectadas por HTLV e em pacientes coinfectados, demonstrando a participação do sistema imune em ambos os pacientes. Participaram da pesquisa 14 indivíduos monoinfectados por HTLV-1 e 15 indivíduos coinfectados por HTLV-1/HIV-1. A detecção da infecção intracelular por HTLV-1 foi realizada através da marcação de anticorpos monoclonais anti-CD4 e um mix de sondas complementares a um domínio LTR do HTLV-1 às proteínas alvos nas células. As células infectadas forma identificadas por citometria de fluxo e analisadas estatisticamente. Ao fim do estudo constatou-se que o mix de sonda anti-HTLV foi capaz de identificar células infectadas em diferentes tipos celulares, em mono ou coinfecção. Percebeu-se um menor número de monócitos CD4+ em indivíduos coinfectados, bem como em pacientes em uso de TARV. Ao se avaliar o perfil fenotípico de ativação celular, observou-se uma tendência a diminuição na expressão de HLA-DR e aumento na expressão de CTLA-4 em indivíduos monoinfectados com manifestações clínicas associadas ao HTLV-1.
Sugere-se que a metodologia apresentada seja utilizada como ferramenta na definição das populações celulares infectadas em pacientes com HTLV-1 o que abriria novas possibilidades para acompanhamento e definição terapêutica nesses indivíduos.
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HTLV infection establishes a low proviral load since the spread of the virus occurs by virological synapse and by mitotic multiplication of infected cells. The clonal expansion of infected cells, in addition to being important for latency of infection, seems to lead to dysfunctions in the host's immune system, generating autoimmunity (HAM/TSP, uveitis and cardiovascular diseases) and malignancy (ATL). The impairment of the immune system caused by HTLV-1/2 infection makes the infected individual susceptible to other infectious diseases such as tuberculosis and Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). HIV and HTLV have similar genomic organization and tropism for cells of the immune system (CD4+ T cells). However, the influence of HTLV-1/2 on the progression of the pathology developed by HIV has been widely discussed. This work intends, through flow cytometry, to identify the intracytoplasmic infection of cells infected by HTLV and in coinfected patients, demonstrating the participation of the immune system in both patients. 14 individuals monoinfected by HTLV-1 and 15 individuals coinfected by HTLV-1/HIV-1 participated in the research. Detection of intracellular HTLV-1 infection was performed by labeling anti-CD4 monoclonal antibodies and a mix of probes complementary to an HTLV-1 LTR domain to target proteins in cells. Infected cells were identified by flow cytometry and statistically analyzed. At the end of the study, it was found that the anti-HTLV probe mix was able to identify infected cells in different cell types, in mono or co-infection. A smaller number of CD4+ monocytes was observed in co-infected individuals, as well as in patients using ART. When evaluating the phenotypic profile of cellular activation, a trend towards a decrease in the expression of HLA-DR and an increase in the expression of CTLA-4 was observed in monoinfected individuals with clinical manifestations associated with HTLV-1. It is suggested that the presented methodology be used as a tool in the definition of infected cell populations in patients with HTLV-1, which would open new possibilities for monitoring and therapeutic definition in these individuals.
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TALITA DOS SANTOS DE JESUS
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AVALIAÇÃO DOS FATORES IMUNOGENÉTICOS ASSOCIADOS ÀS EXACERBAÇÕES GRAVES DE ASMA E SEUS FENÓTIPOS
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Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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MEMBROS DA BANCA :
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CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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GUSTAVO NUNES DE OLIVEIRA COSTA
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JAMILLE SOUZA FERNANDES
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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VALDIRENE LEAO CARNEIRO
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Data: 24/02/2023
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Exacerbações graves da asma levam a perda na qualidade de vida e altos custos para o SUS. Existem pacientes que mesmo sob tratamento apropriado não alcançam o controle da asma, o que pode ser ocasionado por variações genéticas. Estudos farmacogenéticos buscam identificar variantes interferindo na resposta ao tratamento. Neste âmbito, estudos visando identificar marcadores genéticos associados ao tratamento da asma são frequentes, especialmente em genes que são alvo terapêuticos, como os glicocorticoides e broncodilatadores β2-adrenérgicos. Objetivo: Avaliar o impacto de variantes em genes candidatos associadas à exacerbações graves de asma e fenótipos clínicos e funcionais da doença. Métodos: A princípio foi realizado uma revisão sistemática e metanálise em genes candidatos para exacerbações e resposta ao tratamento (ADRB2, GLCCI1, CRHR1, NR3C1). Foram pesquisados artigos até fevereiro de 2022 no PUBMED e Cochrane Library com os fenótipos e variantes de interesse. A metanálise foi realizada para a variante rs1042713 do ADRB2 utilizando o software RStudio 4.1.2. Foi realizado também um estudo de genes candidatos em 172 adultos participantes de uma coorte de exacerbação grave de asma, onde foram realizadas avaliações clínicas, coleta de material biológico, avaliação da função pulmonar e acompanhamento com equipe especializada no ProAR por um ano. Foi realizada a genotipagem de variantes no ADRB2 (rs1042713, rs1042714), ADCY9 (rs2601814,rs2601796) e NR3C1 (rs41423247,rs10052957). Foram realizadas regressões logísticas multivariadas para avaliar as associações entre as variantes estudadas com exacerbações e outros fenótipos funcionais. As análises estatísticas foram realizadas no PLINK V.1.9, RStudio, SPSS V.20, Graphpad Prism 20, além de outras plataformas online. Resultados: Os dados da metanálise demonstraram que o gene mais replicado para exacerbações é o ADRB2 (rs1042713) e que essa variante, alelo A (Arg) está associada posit ivamente com exacerbação em crianças quando estratificada por tratamento. Essa mesma variante foi também associada positivamente com exacerbação grave de asma na nossa coorte de exacerbação (OR 4.10 IC: 1.47-11.4, 7.19 IC:2.05-25.1, modelo aditivo e dominante, respectivamente), rs1042714 foi também associado com exacerbação, mas antes do acompanhamento no estudo (OR 1.79, IC 1.07-3.01), o rs2601814 (ADCY9) foi negativamente associado com o uso de corticosteroide oral e com asma não controlada, além do genótipo GG ter sido associado com um menor nível de neutrófilos no sangue. O rs10052957 (NR3C1) foi negativamente associado com uso de corticosteroide oral e com exacerbações graves antes do acompanhamento. Duas outras variantes não foram associadas significantemente com nenhum dos fenótipos analisados (rs41423247 e rs2601796). Conclusão: A variante rs1042713 vem se estabelecendo cada vez mais como um fator de risco para exacerbações graves de asma, devendo ser melhor estudada a fim de elucidar melhor os mecanismos pelo qual atua e começar a ser usada como uma variante preditiva.
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Severe asthma exacerbations lead to loss in quality of life and high costs for the National Brazilian health system, SUS. There are patients who even under appropriate treatment do not reach asthma control, which can be caused by genetic variations. Pharmacogenetic studies seek to identify variants interfering in treatment response. In this context, studies aimed at identifying genetic markers associated with asthma treatment in literature are frequent, especially, involving genes that are therapeutic target, such as bronchodilators β2-adrenergic and glucocorticoids. Objective: To evaluate the impact of variants on candidate genes associated with severe exacerbations of asthma and clinical and functional phenotypes of the disease. Methods: At first, a systematic review and meta-analysis in candidates genes (ADRB2, GLCCI1, CRHR1, NR3C1) for exacerbations and treatment response was done. Papers published until February 2022 in Pubmed and Cochrane Library with phenotypes and variants of interest were included. Meta-analysis was performed for the ADRB2 (rs1042713) variant using RStudio 4.1.2 software. A study to evaluate candidate genes was also conducted in 172 adults participating in a severe asthma exacerbation cohort where clinical evaluations, biological material collection and evaluation of pulmonary function were performed. The participants were followed-up with a specialized team in ProAr for one year. The genotyping of variants in ADRB2 (rs1042713, rs1042714), ADCY9 (rs2601814, rs2601796) and NR3C1 (rs41423247, rs10052957) was conducted and logistic regressions for exacerbations and other functional phenotypes were done. Statistical analyzes were performed on PLINK v.1.9, RStudio, SPSS v.20, GraphPa D Prism 20, in addition to other online platforms. Results: In the metanalysis results we observed that the most replicated gene is ADRB2 (rs1042713) and that the A allele (Arg) of this variation is positively associated with exacerbation in children when stratified by treatment. This same variant was also positively associated to asthma exacerbation in our exacerbation cohort (OR 4.10 IC: 1.47-11.4, 7.19 IC: 2.05-25.1, additive and dominant model, respectively), rs1042714 was also positively associated with severe exacerbation, but before from follow-up in the study (OR 1.79, IC 1.07-3.01), the rs2601814 (ADCY9) was negatively associated with the use of oral corticosteroids and non-controlled asthma, and GG genotype was associated with a lower neutrophils level in the blood. The rs10052957 (NR3C1) was negatively associated with the use of oral corticosteroids and with severe exacerbations before follow-up. Two other variants were not significantly associated with any of the phenotypes analyzed (rs41423247 and rs2601796). CONCLUSION: The rs1042713 variant has been increasingly established a risk factor for severe asthma exacerbation, and should be better studied in order to elucidate the mechanisms by which it operates and start to be used as a predictive variant.
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Geraldo Pedral Sampaio
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ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE CD105 (ENDOGLINA) EM PRECURSORES LINFOIDES NORMAIS E EM BLASTOS NEOPLÁSICOS DE PACIENTES PEDIÁTRICOS COM LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA DE CÉLULAS PRECURSORAS B NO ESTADO DA BAHIA
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Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
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MEMBROS DA BANCA :
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BRUNO DIAZ PAREDES
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EUGÊNIA TERRA GRANADO PINA
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LUCIANA SANTOS CARDOSO
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LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
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MARCO AURELIO SALVINO DE ARAUJO
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ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
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Data: 06/03/2023
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A leucemia linfoide aguda (LLA), possui uma incidência bimodal, caracterizada pela perda de habilidade normal de diferenciação e proliferação, havendo um acúmulo de células progenitoras linfoides e expansão clonal em medula óssea, sangue periférico e outros tecidos. É a mais comum na infância e adolescência, tendo diversos fatores associados à sua etiologia. O uso da citometria de fluxo, em conjunto com a análise morfológica, é fundamental para o diagnóstico e acompanhamento de tais enfermidades. Nesse contexto, a análise da expressão de moléculas na curva maturativa de precursores linfoides normais e neoplásicos é uma ferramenta que contribui para elucidar o comportamento do ambiente medular na análise de Doença Residual Mensurável (DRM). A molécula endoglina (ENG, CD105) é um co-receptor da família do TGF-β que desempenha um papel crucial na regulação da angiogênese. Apesar de ser mais conhecida por sua expressão em células endoteliais, a endoglina também é expressa nas células-tronco hematopoiéticas (CTH) e recentemente tem sido sugerida como marcador de mau prognóstico para pacientes pediátricos com LLA de células precursoras B (LLA-cpB). Neste contexto, o presente trabalho avaliou a expressão do CD105 em precursores normais de células B, também denominados de hematogônias, e em blastos leucêmicos de pacientes pediátricos com LLA-cpB. O estudo foi realizado em amostras de pacientes onco-pediátricos do Hospital Aristides Maltez, Martagão Gesteira e Santa Casa de Itabuna, utilizando painéis pré-definidos para a análise da expressão do CD105. A aquisição dos eventos foi realizada no citômetro de fluxo BD FACSCalibur e as análises realizadas no software Infinicyt™ 9 1.8. As amostras dos pacientes, avaliados ao diagnóstico ou durante DRM, foram analisadas individualmente quanto à presença ou ausência da expressão antigênica de cada marcador utilizado na citometria de fluxo. O CD105, ao diagnóstico, foi expresso em 73,33% dos pacientes com LLA-cpB, tendo a maior expressão nos blastos leucêmicos. Já quando comparado com DRM, a maior expressão foi nas hematogônias em DRM negativa (67,28%), com média de intensidade de fluorescência (MIF) de 87,26. Quando analisado individualmente (paciente 1), os blastos tiveram uma maior expressão e MIF, 21,56% e 26,14, respectivamente. CD105 pode ser considerado um potencial marcador VII prognóstico para detecção de resposta à terapia de indução na infância LLA-B, e pode servir para otimizar as decisões para tratamento.
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Acute lymphocytic leukemia (ALL) has a bimodal incidence, characterized by loss of normal ability to differentiate and proliferate, with an accumulation of lymphoid progenitor cells and clonal expansion in bone marrow, peripheral blood, and other tissues. It is the most common in childhood and adolescence, with several factors associated with its etiology. The use of flow cytometry, in conjunction with morphological analysis, is essential for the diagnosis and followup of such diseases. In this context, the analysis of the expression of molecules in the maturation curve of normal and neoplastic lymphoid precursors is a tool that contributes to elucidating the behavior of the medullary environment in the analysis of Measurable Residual Disease (MRD). The endoglin molecule (ENG, CD105) is a co-receptor of the TGF-β family that plays a crucial role in the regulation of angiogenesis. Although best known for its expression in endothelial cells, endoglin is also expressed in hematopoietic stem cells (HSC) and has recently been suggested as a marker of poor prognosis for pediatric patients with B Cell Precursor ALL (BCP-ALL). In this context, the present work evaluated the expression of CD105 in normal precursors of B cells, also called hematogonia, and in leukemic blasts from pediatric patients with BCP-ALL. The study was carried out on onco-pediatric patients samples from Hospital Aristides Maltez, Martagão Gesteira, and Santa Casa de Itabuna, using pre-defined panels for the analysis of CD105 expression. Events were acquired using a BD FACSCalibur flow cytometer and analyzes were performed using the Infinicyt™ 9 1.8 software. Patient samples, evaluated at diagnosis or during MRD, were individually analyzed for the presence or absence of antigenic expression of each marker used in flow cytometry. CD105, at diagnosis, was expressed in 73.33% of VIII patients with BCP-ALL, with the highest expression in leukemic blasts. When compared with MRD, the highest expression was in hematogonia in negative MRD (67.28%), with a mean MFI of 87.26. When analyzed individually (patient 1), the blasts had a higher expression and MFI, 21.56 and 26.14, respectively. CD105 can be considered a potential prognostic marker for the detection of response to induction therapy in childhood BCP-ALL, and may serve to optimize treatment decisions.
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Maria Borges Rabêlo de Santana
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Desenvolvimento de painel genético para predição de exacerbação grave da asma através de estudo amplo do genoma e de algoritmos de Machine Learning
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Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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ALEX JOSE LEITE TORRES
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LAURA MARIA DE LIMA BELIZARIO FACURY LASMAR
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LEA CRISTINA DE CARVALHO CASTELLUCCI
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PABLO DE MOURA SANTOS
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 31/03/2023
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As exacerbações graves da asma são definidas como a piora dos sintomas respiratórios e podem causar morte. No entanto, ainda faltam biomarcadores preditivos para esse desfecho. Nosso objetivo foi realizar estudos de associação genômica ampla (GWAS) para exacerbações graves de asma, e avaliar seu papel funcional. Adicionalmente, integrar dez algoritmos de Machine Learning usando uma lista dos principais Single Nucleotides Variants (SNVs) do GWAS anterior em indivíduos com asma ou asma grave com o objetivo de criar painéis genéticos preditivos de exacerbações graves. O GWAS para exacerbações graves de asma foi realizado em 727 brasileiros com asma, incluindo 12 milhões de variantes genéticas. A exacerbação foi definida como uso de corticoide sistêmico ≥ 3 dias e/ou consulta de emergência e/ou internação hospitalar no último ano. A replicação do GWAS para exacerbações graves foi avaliada no U-BIOPRED, GALA II e SAGE. Os efeitos epigenéticos das variantes foram avaliados in silico. As variantes com valor de p <0,05 no GWAS foram filtradas e modelos de predição integrativa foram construídos usando dez algoritmos de Machine Learning. Também foi feito um GWAS para falha terapêutica em 364 brasileiros com asma grave, seguido pela predição integrativa. As variantes intergênicas G-rs55670125, G-rs10854420, C-rs68160941, A-rs11910414 e A-rs35834033 estavam em completo desequilíbrio de ligação e estão associadas com exacerbações graves de asma (Odds ratio (OR): 2,5; valor de P: 3,47 e-8). Essas variantes estão localizadas próximas ao gene CXADR (receptor de coxsackievirus e adenovírus) no cromossomo 21. Nossos achados não foram validados na população U-BIOPRED, GALA II e SAGE. Quatro dos SNVs identificados foram associados à modificação de histonas de H3K4me1, que foi previamente associada à patogênese da asma. O melhor algoritmo preditivo foi o XGBoost, neste 68 variantes genéticas foram consideradas mais importantes para predizer efetivamente exacerbações graves de asma em indivíduos com asma, apresentando 80% de acurácia. Para indivíduos regularmente tratados com corticosteróide inalatório e Beta-agonistas de longa ação, o melhor algoritmo preditivo foi o C5.0, que considerou 14 variantes preditivas com acurácia de 81%. Esses painéis podem auxiliar na prática clínica na população brasileira. É necessário validar este método em outras populações.
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Severe asthma exacerbations are determined to worsen respiratory symptoms and can cause death. However, predictive biomarkers for this outcome are still lacking. Our aim was to perform genome-wide association studies (GWAS) for severe asthma exacerbations in patients with mild, moderate, and severe asthma, and to evaluate its functional role. Additionally, integrate ten Machine Learning algorithms using a list of top Single Nucleotide Variants (SNVs) from previous GWAS in subjects with asthma or severe asthma with the aim of creating predictive genetic panels of severe exacerbations. The GWAS for severe asthma exacerbations was performed in 727 Brazilians with asthma, including 12 million genetic variants. Exacerbation was defined as systemic corticosteroid use ≥ 3 days and/or emergency room visit and/or hospitalization in the last year. GWAS replication for severe exacerbations was evaluated in U-BIOPRED, GALA II and SAGE. The epigenetic effects of the variants were evaluated in silico. Variants with p-value <0.05 in the GWAS were filtered out and integrative prediction models were built using ten Machine Learning algorithms. A GWAS was also performed for treatment failure in 364 Brazilians with severe asthma, followed by integrative prediction. The intergenic variants G-rs55670125, G-rs10854420, C-rs68160941, A-rs11910414 and A-rs35834033 were in complete linkage and are related to severe asthma exacerbations (Odds ratio (OR): 2.5; P value: 3.47e-8). These variants are located close to the CXADR gene (coxsackievirus and adenovirus receptor) on chromosome 21. Our findings have not been validated in the U-BIOPRED, GALA II and SAGE populations. Four of the SNVs were identified associated with histone modification of H3K4me1, which was previously associated with the pathogenesis of asthma. The best predictive algorithm was XGBoost, in which 68 genetic variants were considered more important to effectively predict severe asthma exacerbations in individuals with asthma, with 80% accuracy. For individuals regularly treated with inhaled corticosteroids and long-acting beta-agonists, the best predictive algorithm was C5.0, which considered 14 predictive variants with an accuracy of 81%. These panels can help in clinical practice in the Brazilian population. It is necessary to validate this method in other tolerated ones.
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Maiara Nelma Bonfim Costa
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O USO DE TERAPIAS ADJUVANTES E SEUS EFEITOS ANTITUMORAIS NO MELANOMA EXPERIMENTAL EM CAMUNDONGOS C57BL/6
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Orientador : FABIOLA CARDILLO
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MEMBROS DA BANCA :
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DANIEL PEREIRA BEZERRA
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FABIOLA CARDILLO
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KARINE ARAUJO DAMASCENO
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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SILVIA LIMA COSTA
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Data: 16/06/2023
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Imiquimode (IMIQ), é um agonista de TLR7 que potencializa a resposta antitumoral de forma rápida e persistente e o bacilo Calmette-Guérin (BCG) é uma vacina (cepa) atenuada do Mycobacterium bovis, que induz uma robusta ativação do sistema imune, o que pode ser uma importante ajuda na resposta antitumoral.
Este estudo teve como objetivo testar os efeitos do IMIQ no melanoma experimental para determinar se ele é essencial para restringir o crescimento do tumor e para prolongar a sobrevida animal após o tratamento em camundongos C57Bl/6 selvagem (WT) e C57Bl/6 que não possuem a molécula de CD1 (CD1-/-). Tencionou-se ainda testar a vacina BCG como uma terapia adjuvante anti-melanoma em animais C57Bl/6 selvagens. Os camundongos foram tratados com IMIQ ou BCG depois da injeção de células tumorais por via subcutânea (s.c.) no pavilhão auricular.
Foram avaliados parâmetros para ambos os tratamentos como: tamanho do tumor, sobrevivência e fenótipos de células esplênicas. Além disso, as citocinas intracelulares foram avaliadas após estimulação com anti-CD3. O tratamento com IMIQ restringiu, efetivamente, o crescimento inicial do tumor e aumentou a sobrevida apenas nos animais WT. As frequências de células apresentadoras de antígeno (APC) foram maiores em animais WT do que nos animais CD1-/-, independentemente do tratamento com IMIQ. Houve um aumento no número de células NK+ perforina+ esplênicas em camundongos WT, e aumento de células T CD4+ esplênicas produtoras de IFN-g estimuladas com anti-CD3 quando comparados camundongos WT com CD1-/- tratados com IMIQ. Além disso existiu, também, o aumento de células T CD8+ esplênicas produtoras de TNF+ em células esplênicas não estimuladas dos animais WT em comparação com animais CD1-/-. Nos animais tratados com a injeção de BCG in situ, houve redução no crescimento tumoral maior sobrevida quando comparados aos animais que só receberam tumor. A nível esplênico houve aumento de células dendríticas e diminuição de células Tregs esplênicas. A produção de citocinas revelou diminuição de IL-10, aumento de INF-γ, por células T CD4+ e T CD8+ esplênicas, aumento de INF-γ e dos fatores perforina e granzima B por células NK e aumento de INF-γ por células NKT. Também a nível de tumor por análises histopatológica foi avaliado que os animais tratados com BCG possuíam maior infiltrado celular e menor porcentagem de necrose e invasão tumoral muscular. Em conclusão, animais tratados com IMIQ: os camundongos WT foram protegidos da mortalidade precoce, com uma diminuição no desenvolvimento do melanoma. Já os animais tratados com BCG houve uma limitação do desenvolvimento do tumor e aumentou significativo da sobrevida dos camundongos C57Bl/6, além do aumento do número de células infiltrando o tumor e uma menor área de necrose e invasão tumoral muscular, o que forneceu evidências de uma forte ativação do sistema imune, caracterizada pelas respostas inata e adquirida.
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Imiquimod (IMIQ) is a TLR7 agonist that potentiates the antitumor response quickly and persistently, and BCG is an attenuated vaccine (strain) of Mycobacterium bovis, which induces a increase in the activation of the immune system, which can be an essential aid in the antitumor response.
This research aimed to test the effects of IMIQ on experimental melanoma to determine if it is essential to restrict tumor growth and to prolong animal survival after treatment in C57Bl/6 wild-type (WT) and C57Bl/6 CD1-knockout mice (CD1-/-). This study also aimed to test the BCG vaccine as an adjuvant anti- melanoma therapy in wild C57Bl/6 animals. Mice were treated with IMIQ or BCG after injection of tumor cells subcutaneously (s.c) into the pinna of the ear. Parameters for both treatments were evaluated, such as tumor size, survival, and splenic cell phenotypes were analyzed. Furthermore, intracellular cytokines were evaluated after stimulation with anti-CD3. Treatment with IMIQ effectively restricted initial tumor growth and increased survival only in WT animals. Antigen-presenting cell (APC) frequencies were higher in WT animals than in CD1-/- animals, regardless of IMIQ treatment. There was an increase in the number of splenic perforin+ NK+ cells in WT mice and an increase in splenic IFN-γ-producing CD4+ T cells stimulated with anti-CD3 when compared to WT mice with CD1-/- treated with IMIQ. In addition, there was also an increase in splenic CD8+ T cells producing TNF+ in unstimulated splenic cells from WT animals compared to CD1-/- animals. In animals treated with BCG injection in situ, there was reduced tumor growth and increased survival compared to animals that only received tumor cells. There was an increase in dendritic cells and a decrease in splenic Treg cells at the splenic level. Cytokine production revealed a decrease in IL-10, an increase in INF-γ by splenic CD4+ and CD8+ T cells, an increase in INF-γ and perforin and granzyme B factors by NK cells, and an increase in INF-γ by NKT cells. Also, at the tumor level, the histopathological analysis indicated that the animals treated with BCG had a greater cellular infiltrate and a lower percentage of necrosis and muscle tumor invasion. In conclusion, animals treated with IMIQ: WT mice were protected by IMIQ from early mortality, with a decrease in melanoma development. Besides, BCG treatment limited tumor development and significantly increased survival in C57Bl/6 mice, which parallels with strong activation of the immune system, characterized by innate and adaptative responses, and had a more significant infiltration of inflammatory cells and less necrosis, and muscular tumor infiltration.
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Jordana Batista Santana
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LINFÓCITOS T REGULATÓRIOS NA INFECÇÃO PELO SCHISTOSOMA MANSONI
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Orientador : LUCIANA SANTOS CARDOSO
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCIANA SANTOS CARDOSO
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LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
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BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
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THIAGO MARCONI DE SOUZA CARDOSO
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SILVANE MARIA BRAGA SANTOS
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Data: 03/07/2023
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Introdução: A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada com grande impacto na saúde pública; A infecção crônica pelo Schistosoma mansoni está associada a polarização da resposta imunológica do tipo 2, no entanto este helminto explora vias imunoregulatórias como mecanismos de sobrevivência. O objetivo deste estudo foi analisar a assinatura regulatória mediada pelos linfócitos T regulatórios (Treg) de indivíduos infectados por S. mansoni. Materias e Métodos: Os indivíduos recrutados, são residentes em uma área endêmica em esquistossomose na Bahia, município do Conde, a aproximadamente 150 Km da Capital, Salvador. Após avaliação parasitológica, observou-se uma prevalência de 24,21% de infecção pelo S. mansoni. Para avaliação imunológica, foram recrutados 19 indivíduos, sendo 12 (63,1%) infectados pelo S. mansoni e 7 (36,8%) não infectados, no momento do recrutamento. Os linfócitos regulatórios foram obtidos a partir de PBMC e estimulados com o antígeno solúvel do ovo do S. mansoni (SEA), para avaliação fenotípica e das citocinas intracelulares por citometria de fluxo. Em seguida, as células Treg depletadas utilizando-se beads magnéticas por seleção positiva, para utilização em culturas depletadas de linfócitos Treg. Nestas culturas, os níveis de IL-10, IL-13 IL-17 e IFN- foram avaliados por ELISA. Resultados: Observamos maiores frequências dos linfócitos Treg (TCD4+ CD25+ FoxP3+), bem como maior expressão de IL-10 e TGF-β por estas células, no grupo de indivíduos infectados. Neste mesmo grupo, houve maiores frequências dos linfócitos TCD4+CD25+FoxP3+PD-1 +, ao tempo em que não houve diferença na expressão de CTLA-4 por estas células. Aumento na expressão do PD-1 e TGF-β também foram observados nas populações dos linfócitos T não regulatórios (CD4+CD25LowFOXP3neg) sugerindo que, algumas vias de regulação pode não ser exclusivas das populações Treg. Indivíduos infectados pelo S. mansoni tem maiores níveis no sobrenadante de PBMC de IL-10 e IL-13 e menores níveis de IFN-, comparados aos indivíduos não infectados. A depleção de células Treg reduziu os níveis de IL-10 e IL-13, ao passo em que não alterou os níveis de IFN- no grupo de indivíduos infectados. Conclusão: A regulação mediada pelo S. mansoni parece envolver as vias da IL-10, TGF-β, PD-1, e as células Treg parecem ter um papel fundamental no controle da produção de IL-10 e IL-13. Estes resultados ampliam nossos conhecimentos sobre as vias exploradas por esses parasitos para sobreviverem no hospedeiro.
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Introduction: Schistosomiasis is a neglected tropical disease with a great impact on public health; Chronic infection by Schistosoma mansoni is associated with polarization of the type 2 immune response, however this helminth explores immunoregulatory pathways as a survival mechanism. The aim of this study was to analyze the regulatory signature mediated by regulatory T lymphocytes (Treg) of individuals infected with S. mansoni. Materials and Methods: The individuals recruited live in an endemic area for schistosomiasis in Bahia, unicipality of Conde, approximately 150 km from the capital, Salvador. After parasitological evaluation, a prevalence of 24.21% of S. mansoni infection was observed. For immunological evaluation, 19 individuals were recruited, 12 (63.1%) infected by S. mansoni and 7 (36.8%) not infected at the time of recruitment. Regulatory lymphocytes were obtained from PBMC and stimulated with soluble S. mansoni egg antigen (SEA) for phenotypic and intracellular cytokine evaluation by flow cytometry. Then, the depleted Treg cells using magnetic beads by positive selection, for use in depleted cultures of Treg lymphocytes. In these cultures, the levels of IL-10, IL-13 IL-17 and IFN- were valuated by ELISA. Results: We observed higher frequencies of Treg lymphocytes (TCD4 + CD25 + FoxP3 + ), as well as higher expression of IL-10 and TGF-β by these cells, in the group of infected individuals. In this same group, there were higher frequencies of TCD4 + CD25 + FoxP3 + PD-1 + lymphocytes, while there was no difference in CTLA-4 expression by these cells. Increased expression of PD-1 and TGF-β were also observed in populations of non-regulatory T lymphocytes (CD4 + CD25 Low FOXP3 neg ) suggesting that some regulatory pathways may not be exclusive to Treg populations. Individuals infected with S. mansoni have higher PBMC supernatant levels of IL-10 and IL- 13 and lower levels of IFN- compared to non-infected individuals. Treg cell depletion reduced IL-10 and IL-13 levels, while it did not alter IFN-γ levels in the group of infected individuals. Conclusion: Regulation mediated by S. mansoni seems to involve IL-10, TGF-β, PD-1 pathways, and Treg cells seem to play a key role in controlling IL-10 and IL-13 production. These results expand our knowledge about the pathways explored by these parasites to survive in the host.
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Fabíola Ramos Jesus
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ESTUDO DO ENVELHECIMENTO NA DOENÇA PULMONAR OBSTRUTIVA CRÔNICA: ASPECTOS IMUNE E ENDÓCRINO
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Orientador : GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
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MEMBROS DA BANCA :
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CAROLINA ARRUDA DE FARIA
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ERCY MARA CIPULO RAMOS
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AQUILES ASSUNCAO CAMELIER
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GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 13/07/2023
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Considerada uma doença associada ao envelhecimento, a Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) apresenta limitação do fluxo aéreo associada à inflamação pulmonar crônica com envolvimento de alterações do sistema respiratório e sistêmico. Fatores de risco como tabagismo, inalação de gases nocivos e mutações genética podem influenciar no desenvolvimento da doença. A DPOC é resultado da interação complexa entre fatores genéticos e ambientais ao longo do tempo. O teste de função pulmonar é uma ferramenta útil na identificação de populações com risco de desenvolver DPOC. Um subtipo específico dessa doença é conhecido como espirometria com comprometimento da relação preservada (PRISm). Tanto a DPOC quanto o processo de envelhecimento compartilham mecanismos semelhantes da imunossenescência. Acredita-se que essas mudanças resultem em um processo de "envelhecimento acelerado" em pacientes com DPOC. A imunossenescência encontrada na DPOC possui relação com a clínica da doença e está associada com piora nas trocas gasosas, hiperinflação pulmonar e maior risco de mortalidade. A aceleração do envelhecimento endócrino foi identifica em indivíduos com DPOC por meio da análise dos níveis dos hormônios DHEA-S (deidroepiandrosterona-sulfato) e GH (hormônio do crescimento). O envelhecimento acelerado pulmonar, do sistema imune e endócrino na doença são discutidos muitas vezes isoladamente na literatura. Estudos que avaliem as interações desses sistemas requerem atenção renovada, visto que a DPOC não se limita a repercussões apenas a nível pulmonar. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil clínico, endócrino e imunológico em indivíduos diagnosticados com DPOC, bem como em indivíduos PRISm, além de revisar aspectos da imunossenescência na DPOC. Nesta tese, apresentamos uma revisão sistemática que aborda as alterações da imunossenescência na DPOC e discutimos as suas repercussões clínicas. Além disso, um artigo original apresenta o perfil imunoendócrino de indivíduos com DPOC e PRISm, bem como discute as implicações da influência desses hormônios na função pulmonar e nos marcadores imunológicos.
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Considered a disease associated with aging, Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) presents airflow limitation associated with chronic lung inflammation involving changes in the respiratory and systemic systems. Risk factors such as smoking, inhalation of harmful gases, and genetic mutations can influence the development of the disease. COPD results from the complex interaction between genetic and environmental factors over time. Both COPD and the aging process share similar mechanisms of immunosenescence. These changes are thought to result in an "accelerated aging" process in COPD patients. The immunosenescence found in COPD is related to the clinical course of the disease, associated with worsening gas exchange, pulmonary hyperinflation, and increased risk of mortality. Pulmonary function testing is a valuable tool in identifying patients at risk of developing COPD. A specific subtype of this disease is known as spirometry with impaired preserved relationship (PRISm). The interference of endocrine aging was identified in individuals with COPD by analyzing DHEA-S (dehydroepiandrosterone sulfate) levels and GH (growth hormone). Accelerated lung, immune, and endocrine aging in the disease are often discussed individually in the literature. Studies that assess how relaxing these systems are require renewed attention, given that COPD is not limited to repercussions only at the local level. The objective of this study was to evaluate the clinical, endocrine, and immunological profile in individuals diagnosed with COPD, as well as in individuals with risk factors for the development of the disease, in addition to reviewing the aspect of immunosenescence in COPD. This study presents a systematic review addressing immunosenescence changes in COPD and discussing their clinical repercussions. In addition, an original article presents the immunoendocrine profile of individuals with COPD and PRISm, as well as the influence of these hormones on lung function and immunological markers.
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Balbino Lino dos Santos
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"EFEITO DO FLAVONÓIDE AGATHISFLAVONA NA MODULAÇÃO DO NRLP3-INFLAMOSSOMA, MICRO-RNAs E CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS ASSOCIADOS A RESPOSTA MICROGLIAL A ESTIMULOS INFLAMATORIOS E PEPTÍDEOS Aβ-AMILOIDE"
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Orientador : SILVIA LIMA COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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EDUARDO RIGON ZIMMER
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GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
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JOSÉ CLÁUDIO FONSECA MOREIRA
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SILVIA LIMA COSTA
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SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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Data: 28/07/2023
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A ativação microglial desempenha papel crucial na patogenia de doenças neurodegenerativas (NDD), e o controle desta ativação têm sido alvo de investigações como estratégia ao desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para NDD. A agatisflavona, purificada de Cenostigma pyramidale (Tul.), demonstrou ser neuroprotetora em modelos in vitro de excitotoxicidade induzida por glutamato e danos inflamatórios. No entanto, o papel potencial da regulação microglial por agathisflavone nesses efeitos neuroprotetores ainda não está claro. Neste trabalho, nós investigamos em células microgliais do córtex de ratos e em células microgliais de linhagem humana induzidas ao dano inflamatório, os efeitos da agatisflavona em modular a resposta inflamatória com vistas a elucidar mecanismos de neuroproteção. Para isto, culturas de microglias humanas da linhagem C20 e microglias isoladas do córtex de ratos Wistar recém-nascidos foram expostas a oligômeros do peptídeo β-amilóide (500nM) por 4h ou a lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS, 1µg/mL) por 24h e então tratadas ou não com agatisflavona (1µM) por 24h. Culturas de células neuronais PC12 foram expostas ao meio condicionado da microglia de rato (MCM) tratado ou não com agatisflavona. Em um primeiro trabalho, observamos que o LPS induziu a microglia a assumir um estado inflamatório ativado (CD68 aumentado, com fenótipo mais arredondado/amoebóide). No entanto, a maioria das microglias expostas ao LPS e agatisflavona apresentaram um perfil anti-inflamatório (CD206 aumentado e fenótipo ramificado), associado à redução da expressão de NO, GSH, inflamassoma NRLP3, IL1-β, IL-6, IL-18, TNF, CCL5 e CCL2. O docking molecular também mostrou que a agatisflavona se ligou ao domínio inibitório NLRP3 NACTH. Além disso, nas culturas de células PC12 expostas ao MCM previamente tratado com o flavonoide, a maioria das células preservaram os seus neuritos e aumentaram a expressão de β-tubulina III. No segundo trabalho, observamos que o β-amilóide e o LPS induziram as culturas de microglia a assumir um estado inflamatório ativado, com aumento na expressão de miR-146a e miR-155 e dos mediadores inflamatórios IL1-β, IL-6 e NOS2. No entanto, nas células expostas ao dano inflamatório e tratadas com agatisflavona, observamos redução significativa na concentração de miR146a e miR-155, bem como das citocinas inflamatórias avaliadas. Observamos também nas células estimuladas apenas com β-amilóide, um aumento na relação das proteínas sinalizadoras p-STAT3/STAT3, e nas células estimuladas com β-amilóide e tratadas com flavonoide, redução nesta relação. Assim, estes dados reforçam a atividade anti-inflamatória e o efeito neuroprotetor da agatisflavona, associados ao controle do inflamassoma NLRP3 e de mediadores inflamatórios, com destaque também ao seu potencial na regulação de miRNAs associados a neuroinflamação. Estes resultados fortalecem o potencial deste flavonoide como uma molécula promissora ao tratamento ou a prevenção de doenças neurodegenerativas.
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Microglial activation plays a crucial role in the pathogenesis of neurodegenerative diseases (NDD), and the control of this activation has been the subject of investigations as a strategy for the development of new therapeutic approaches for NDD. Agatisflavone, purified from Cenostigma pyramidale (Tul.), has been shown to be neuroprotective in in vitro models of glutamate-induced excitotoxicity and inflammatory damage. However, the potential role of microglial regulation by agathisflavone in these neuroprotective effects remains unclear. In this work, we investigated in microglial cells from the cortex of rats and in microglial cells of human lineage induced to inflammatory damage, the effects of agatisflavone in modulating the inflammatory response in order to elucidate mechanisms of neuroprotection. For this purpose, cultures of human microglia of the C20 lineage and microglia isolated from the cortex of newborn Wistar rats were exposed to β-amyloid peptide oligomers (500nM) for 4h or Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS, 1µg/mL) for 24h and then treated or not with agathisflavone (1µM) for 24h. Cultures of PC12 neuronal cells were exposed to rat microglia conditioned medium (MCM) treated or not with agathisflavone. In a first study, we observed that LPS induced microglia to assume an activated inflammatory state (increased CD68, with a more rounded/amoeboid phenotype). However, most microglia exposed to LPS and agathisflavone showed an anti-inflammatory profile (increased CD206 and branched phenotype), associated with reduced expression of NO, GSH, NRLP3 inflammasome, IL1-β, IL-6, IL-18, TNF, CCL5 and CCL2. Molecular docking also showed that agathisflavone bound to the NLRP3 NACTH inhibitory domain. Furthermore, in cultures of PC12 cells exposed to MCM previously treated with the flavonoid, most cells preserved their neurites and increased expression of β-tubulin III. In the second study, we observed that β-amyloid and LPS induced microglia cultures to assume an activated inflammatory state, with increased expression of miR-146a and miR-155 and inflammatory mediators IL1-β, IL-6 and NOS2. However, in cells exposed to inflammatory damage and treated with agathisflavone, we observed a significant reduction in the concentration of miR146a and miR-155, as well as the inflammatory cytokines evaluated. We also observed in cells stimulated only with β-amyloid, an increase in the ratio of p-STAT3/STAT3 signaling proteins, and in cells stimulated with β-amyloid and treated with flavonoid, a reduction in this ratio. Thus, these data reinforce the anti-inflammatory activity and the neuroprotective effect of agathisflavone, associated with the control of the NLRP3 inflammasome and inflammatory mediators, also highlighting its potential in the regulation of miRNAs associated with neuroinflammation. These results strengthen the potential of this flavonoid as a promising molecule for the treatment or prevention of neurodegenerative diseases.
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JESSICA VIEIRA CERQUEIRA
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ESTUDO DE ASSOCIAÇÃO DE VARIANTES DO GENE BDNF COM FENÓTIPOS DE ASMA EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA
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Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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MEMBROS DA BANCA :
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CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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CINTIA RODRIGUES MARQUES
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LAURA MARIA DE LIMA BELIZARIO FACURY LASMAR
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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RAFAEL VALENTE VEIGA
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Data: 07/08/2023
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"A asma é uma das doenças não transmissíveis mais comuns no mundo, afetando de 1 a 29% da população em diferentes países. O processo inflamatório da asma está associado com a ativação do sistema imunológico, hiperresponsividade das vias aéreas, ativação de células epiteliais, superprodução de muco e remodelamento das vias aéreas. É bem reconhecido que as células Th2 são as principais condutoras da inflamação alérgica eosinofílica das vias aéreas, gerando quantidades abundantes de IL-4, IL-5, IL-9 e IL-13. No entanto a asma em adultos é mais frequentemente não alérgica do que alérgica. Apesar da inflamação ser apresentada como característica-chave da resposta exacerbada na asma, a terapia com anti-inflamatórios apenas reduz essa resposta exagerada, mas não é capaz de suprimi-la, levando a hipótese de que outros fatores além do processo inflamatório, contribuem para os sintomas observados na asma. Os tecidos de barreira como os pulmões são inervados pelo sistema nervoso periférico, que detecta estímulos, incluindo os nocivos, e responde a eles regulando reações autonômicas. O sistema nervoso no trato respiratório desempenha um papel importante na regulação da secreção de muco, permeabilidade vascular, tônus da musculatura lisa das vias aéreas e fluxo sanguíneo. O BDNF é uma neurotrofina presente nas vias aéreas inferiores e pode contribuir para alterações da estrutura e função das vias aéreas. Neste contexto, esta pesquisa teve como objetivo avaliar o impacto de variantes no gene do BDNF nos fenótipos de asma. O estudo de associação das variantes foi desenvolvido com a população de adultos asmáticos do ProAR. Os resultados mostraram que o alelo G de rs962369 foi negativamente associado à asma leve (OR 0,74, IC 95% 0,564-0,985, p= 0,038). Os alelos A, G, G, G, T e A de rs6265, rs11030104, rs7103411, rs988748, rs10767664, rs2030323, respectivamente, foram positivamente associados à falta de reversibilidade. O alelo G de SNVs rs7124442 foi significativamente associado a menores chances de atopia (OR 0,75, IC 95% 0,575-0,989, p= 0,041). Enquanto os alelos G e A dos SNVs rs2030324 e rs7934165, respectivamente, foram associados a uma maior chance de atopia (OR 1,26, 95% CI 1,048-1,516, p= 0,014) e (OR 1,25, 95% CI 1,041-1,506, p= 0,016). O alelo G do rs7124442 e o alelo A do rs11030119 foram associados a uma maior chance de exacerbação (OR = 1,575, Pperm = 0,037 e OR = 1,823, Pperm = 0,029). Além disso, o alelo G dos SNVs rs7124442 reduziu os níveis de IL-5 e IgE e aumentou a contagem de neutrófilos no sangue. Estes dados mostram que variantes do gene BDNF possuem impacto na asma em nossa população."
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"Asthma is one of the most common noncommunicable diseases in the world, affecting from 1 to 29% of the population in different countries. The inflammatory process of asthma is associated with immune system activation, airway hyperresponsiveness, epithelial cell activation, mucus overproduction, and airway remodeling. It is well recognized that Th2 cells are the main drivers of eosinophilic allergic airway inflammation, generating abundant amounts of IL-4, IL-5, IL-9 and IL-13. However, asthma in adults is more often non-allergic than allergic. Although inflammation appears as a key feature of the exacerbated response in asthma, anti-inflammatory therapy only reduces this exaggerated response but is not able to suppress it, leading to the hypothesis that other factors besides the inflammatory process contribute to the symptoms. observed in asthma. Barrier tissues, such as the lungs, are innervated by the peripheral nervous system, which detects stimuli, including harmful ones, and responds to them by regulating autonomic reactions. The nervous system in the tract plays an important role in regulating mucus intensity, vascular permeability, airway smooth muscle tone, and blood flow. BDNF is an NT present in the lower airways and may contribute to changes in airway structure and function. In this context, this research aimed to evaluate the impact of variants in the BDNF gene on asthma phenotypes. The association study of the variants was carried out with the population of asthmatic adults from the ProAR. The results showed that the G allele of rs962369 was negatively associated with mild asthma (OR 0.74, 95% CI 0.564-0.985, p= 0.038). The A, G, G, G, T and A alleles of rs6265, rs11030104, rs7103411, rs988748, rs10767664, rs2030323, respectively, were positively associated with a lack of reversibility. The G allele of SNVs rs7124442 was significantly associated with lower chances for atopy (OR 0.75, 95% CI 0.575-0.989, p= 0.041). While the G and A alleles of the SNVs rs2030324 and rs7934165, respectively, were associated with a higher chance of atopy (OR 1.26, 95% CI 1.048-1.516, p= 0.014) and (OR 1.25, 95% CI 1.041-1.506, p= 0.016). G allele of the rs7124442 and A allele of the rs11030119, were associated with an increased chance of exacerbation (OR = 1.575, Pperm =0.037 and OR = 1.823, Pperm = 0.029). Furthermore, the G allele of the SNVs rs7124442 reduced IL-5 and IgE levels and increased blood neutrophil counts. These data show that BDNF gene variants have an impact on asthma in our population.
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Brysa Mariana Dias Silveira
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ASPECTOS REGENERATIVOS E IMUNOMODULATÓRIOS DAS CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS DO TECIDO ADIPOSO EM MODELO FALCIFORME
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Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
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MEMBROS DA BANCA :
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VITOR ANTONIO FORTUNA
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NATALIA MACHADO TAVARES
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ELISANGELA VITORIA ADORNO
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BRUNO SOLANO DE FREITAS SOUZA
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JAIME RIBEIRO FILHO
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Data: 08/08/2023
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Úlceras crônicas de perna (CLU) são complicações microvasculares comuns em pacientes com anemia falciforme. CLUs são recalcitrantes e na ausência de tratamento podem levar à amputação dos membros inferiores. As células estromais do tecido adiposo (ASC) representam uma alternativa para o tratamento de CLUs, devido a sua capacidade de secretar mediadores solúveis envolvidos no reparo tecidual. Desta forma, avaliamos os efeitos do secretoma de ASC em modelo in vitro de células endoteliais do cordão umbilical (HUVECs) e em modelo in vivo com camundongos C57BL/6 transgênicos e camundongos Towness falciformes. Nosso trabalho observou que o secretoma de ASC pré-condicionado em normóxia (condição com 20% de oxigênio) e hipóxia (condição com 5% de oxigênio) apresentou em sua composição marcadores de regeneração tecidual (ex: VEGF, MCP1, IL-8 e Angiogenina). A análise in vitro demonstrou que ambos os meios condicionados (MCs) exerceram ação anti-apoptótica e angiogênica em HUVECs, com melhor desempenho das células tratadas com MC em normóxia. Nosso modelo in vivo utilizando camundongos C57BL/6 transgênicos revelou aceleração do processo cicatricial de feridas tratadas com os MCs. Considerando que o nosso produto terapêutico apresentou melhor desempenho em condições de normóxia, analisamos o potencial terapêutico do MC normóxia em modelo de cicatrização com camundongos falciformes. Neste trabalho, buscamos avaliar o efeito pró- angiogênico e imunomodulatório em peles tratadas com o MC através das técnicas de imunohistoquímica, imunofluorescência e RT-PCR. Nossos resultados revelaram que a administração do MC foi capaz de estimular o processo de cicatrização através da redução da inflamação local, aumento do número de fibroblastos e maior produção de colágeno, bem como através da redução de transcritos inflamatórios, evidenciando o efeito terapêutico do MC sobre a imunomodulação.
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Chronic leg ulcers (CLU) are common microvascular complications in patients with sickle cell anemia. CLUs are recalcitrant and the absence of treatment can lead to lower limb amputation. Adipose tissue stromal cells (ASC) represent an alternative for the treatment of CLUs, due to their ability to secrete soluble mediators involved in tissue repair. Thus, we evaluated the effects of the ASC secretome in vitro model of umbilical cord endothelial cells (HUVECs) and in vivo model with transgenic C57BL/6 mice and sickle Towness mice. Our work found that the secret of ASC preconditioned in normoxia (condition with 20% oxygen) and hypoxia (condition with 5% oxygen) presented in its composition markers of tissue regeneration (eg: VEGF, MCP1, IL-8 and angiogenin). In vitro analysis demonstrated that both conditioned media (CMs) exerted anti- apoptotic and angiogenic action on HUVECs, with better performance of cells treated with CM in normoxia. Our in vivo model using C57BL/6 transgenic mice revealed radiation from the healing process of wounds treated with MCs. Considering that our therapeutic product performed better under conditions of normoxia, we analyzed the therapeutic potential of MC normoxia in wound healing model with sickle cell mice. In this work, we sought to evaluate the pro- angiogenic and immunomodulatory effect in skins treated with CM using immunohistochemistry, immunofluorescence and RT-PCR techniques. Our results revealed that CM administration was able to stimulate the healing process by reducing local inflammation, increasing the number of fibroblasts and increasing collagen production. Just as we identified reduced expression of inflammatory transcripts, evidencing the therapeutic effect of MC on immunomodulation.
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Regina Santos Nascimento
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Avaliação funcional de polimorfismos nos genes EBI3 e IL12A associados ao desenvolvimento de asma em uma coorte de crianças do município de Salvador-BA.
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Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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MEMBROS DA BANCA :
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ALEX JOSE LEITE TORRES
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CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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JAILTON DE AZEVEDO SILVA JUNIOR
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JAMILLE SOUZA FERNANDES
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TAMIRES CANA BRASIL CARNEIRO
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Data: 09/08/2023
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A asma é doença inflamatória crônica das vias áreas, de caráter não transmissível, influenciada por fatores ambientais e genéticos. A asma alérgica é o fenótipo mais comum da doença e está associada com a exacerbação da resposta imune Th2. Vários tipos celulares estão envolvidos na regulação do sistema imunológico no pulmão, com destaque para as células regulatórias (Treg e Breg). Diversos mecanismos inibitórios desenvolvidos por estas células já foram descritos, dentre os quais estão a liberação de citocinas supressoras como IL-10, TGF-β e IL-35. A IL-35 é uma citocina heterodimérica, composta pelas subunidades EBI3 e IL12p35, que são codificadas respectivamente pelos genes EBI3 e IL12A. Alterações nos níveis dessa citocina têm sido associadas a asma e atopia. A relevância do componente genético no desenvolvimento da asma é amplamente discutida na literatura. Nesse contexto, dada a importância das células Treg e da susceptibilidade genética, este estudo se propôs a investigar o impacto funcional de polimorfismos nos genes regulatórios EBI3 e IL12A em uma população de crianças brasileiras. O DNA de 1.218 crianças foi genotipado usando o Illumina 2.5 Human Chip Omni Bead. Análises de regressão logística foram realizadas usando o software PLINK 1.9 para verificar a associação entre os polimorfismos em EBI3 e IL12A, asma e marcadores atópicos, ajustados para sexo, idade, infecções por helmintos e marcadores de ancestralidade. A expressão do mRNA foi realizada usando qPCR em tempo real. Um total de 4 marcadores para IL12A e 5 para EBI3 foram encontrados. Os resultados mostraram que o alelo C de rs2243131 em IL12A foi positivamente associado à asma (OR 1.35, CI 1.06–1.71), gravidade de asma (OR 1.36, CI 1.02–1.81), teste cutâneo positivo para Blatella germanica (OR 1.59, CI 1.09–2.22), e também positivamente associado para a produção espontânea da produção de IL-5 (OR: 1.71; CI: 1.11–2.62). O alelo A de rs568408 em IL12A também foi positivamente associado ao teste cutâneo positivo para B. germanica (OR 1.65, CI 1.10-2, 37). Já o rs582537 em IL12A foi negativamente associado ao teste cutâneo positivo para B. germanica (OR 0.64, CI 0.42-0.98) e Dermatophaoides pteronyssinus (OR 0.77, CI 0.60-0.98), além de negativamente associado com a produção espontânea de INF-y (OR: 0.52; CI: 0.52–0.99). Com relação a EBI3, todas as variantes encontradas foram negativamente associadas a marcadores de atopia: o alelo C de rs78749916 (OR 0.61, CI 0.40-0.93), o alelo G de rs77145509 (OR 0.66, CI 0.46-0.94), e o alelo A de rs76353132 (OR 0.68, CI 0.43-0.96), foram negativamente associados ao teste cutâneo positive para Periplaneta americana. A variante rs76353132 também foi negativamente associada a produção espontânea de INF-y (OR: 0.72; CI: 0.52-0.99). O alelo C de rs428253 foi negativamente associado com teste cutâneo positivo para pelo menos um alérgeno (OR: 0.64; CI: 0.44–0.92), e o alelo G de rs4905 foi negativamente associado com IgE positivo para pelo menos um alérgeno (OR 0.62, CI 0.40-0.95). Os níveis de expressão do mRNA de IL12A foram reduzidos em indivíduos asmáticos atópicos quando comparados aos controles. Os níveis de expressão de EBI3 foram diminuídos em indivíduos asmáticos atópicos em comparação com indivíduos não asmáticos e atópicos, e quando comparados aos controles. Neste estudo pudemos, pela primeira vez, descrever novas variantes na via regulatória da IL-35 ligada à asma e atopia, destacando a importância da regulação imune na patogênese da asma.
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Asthma is a chronic inflammatory disease of the airways, non-transmissible, influenced by environmental and genetic factors. Allergic asthma is the most common phenotype of the disease and is associated with an exacerbation of the Th2 immune response. Several cell types are involved in the regulation of the immune system in the lung, with emphasis on regulatory cells (Treg and Breg). Several inhibitory controls included by these cells have already been admitted, among which are the release of suppressive cytokines such as IL-10, TGF-β and IL-35. IL-35 is a heterodimeric cytokine, composed of the EBI3 and IL12p35 subunits, which are encoded by the EBI3 and IL12A genes, respectively. Changes in the levels of this cytokine have been associated with asthma and atopy. The consternation of the genetic component in the development of asthma is widely reported in the literature. In this context, given the importance of Treg cells and genetic susceptibility, this study set out to investigate the functional impact of polymorphisms in the regulatory genes EBI3 and IL12A in a population of Brazilian children. DNA from 1.218 children was genotyped using the Illumina 2.5 Human Chip Omni Bead. Logistic regression analyzes were performed using PLINK 1.9 software to verify the association between polymorphisms in EBI3 and IL12A, asthma and atopic markers, adjusted for sex, age, helminth survivors and ancestry markers. mRNA expression was performed using real-time qPCR. A total of 4 markers for IL12A and 5 for EBI3 were found. The surprising results that the C allele of rs2243131 in IL12A was positively associated with asthma (OR 1.35, CI 1.06–1.71), asthma severity (OR 1.36, CI 1.02–1.81), positive skin test for Blatella germanica (OR 1.59, CI 1.09–2.22), and also positively associated with the spontaneous production of IL-5 (OR: 1.71; CI: 1.11–2.62). The A allele of rs568408 in IL12A was also positively associated with a positive skin test for B. germanica (OR 1.65, CI 1.10-2, 37). rs582537 in IL12A was associated with a positive skin test for B. germanica (OR 0.64, CI 0.42-0.98) and Dermatophaoides pteronyssinus (OR 0.77, CI 0.60-0.98), in addition to being associated with the natural production of INF-y (OR : 0.52; CI: 0.52–0.99). With regard to EBI3, all the variants found were incorporated into atopy markers: the C allele of rs78749916 (OR 0.61, CI 0.40-0.93), the G allele of rs77145509 (OR 0.66, CI 0.46-0.94), and the A allele of rs76353132 (OR 0.68, CI 0.43-0.96), were associated with a positive skin test for Periplaneta americana. The rs76353132 variant was also associated with spontaneous INF-y production (OR: 0.72; CI: 0.52-0.99). The rs428253 C allele was associated with a positive skin test for at least one allergen (OR: 0.64; CI: 0.44–0.92), and the rs4905 G allele was associated with a positive IgE for at least one allergen (OR 0.62, CI 0 .40-0.95). IL12A mRNA expression levels were reduced in atopic asthmatic subjects when compared to controls. EBI3 expression levels were decreased in atopic asthmatic subjects compared to non-asthmatic and atopic subjects, and when compared to controls. In this study, we were able, for the first time, to describe new variants in the IL-35 regulatory pathway linked to asthma and atopy, highlighting the importance of immune regulation in the pathogenesis of asthma.
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LUCIANO GAMA DA SILVA GOMES
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Análise de painel genético preditivo para o diagnóstico de asma e de fenótipos através de machine learning
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Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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MÔNICA VERSIANI NUNES PINHEIRO DE QUEIROZ
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PAULO AUGUSTO MOREIRA CAMARGOS
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RAFAEL VALENTE VEIGA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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SORAYA CASTRO TRINDADE
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Data: 14/08/2023
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A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas multifatorial. Sua heterogeneidade e a variabilidade da resposta ao tratamento são as principais barreiras para o sucesso do manejo adequado de determinados tipos de pacientes asmáticos. O objetivo principal do estudo foi realizar a modelagem computacional predição de painéis genéticos no desenvolvimento de asma e de seus endofenótipos, utilizando técnicas de machine learning. A coorte do ProAR incluiu indivíduos adultos com diagnóstico de asma. A análise de classe latente foi usada para agrupar indivíduos em diferentes fenótipos de asma com base em variáveis. O estudo se concentrou em 1.009.762 SNVs usando o algoritmo Boruta para seleção de variáveis. Dez algoritmos diferentes foram empregados para desenvolver modelos preditivos (KNN, NB, ANN, SVM, CART, C5.0, Bagging, AdaBoost, RF e XGBoost) para identificar com precisão os pacientes com asma e seus subtipos. O painel genético preditivo da asma em geral foi concluído com 155 variantes de nucleotídeo único, com 91,18% de precisão, 92,75% de sensibilidade e 89,55% de especificidade usando o algoritmo support vector machine. Além do mais, nosso estudo diferenciou subtipos distintos de asma e a partir desses definimos painéis genéticos com alta performance. Dessa forma, o aprendizado de máquina pode ser uma ferramenta útil na pesquisa de resultados complexos, capaz de auxiliar na predição da asma e contribuir para a personalização do manejo clínico.
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Asthma is a multifactorial chronic inflammatory disease of the airways. Its heterogeneity and the variability of the response to treatment are the main barriers to the success of adequately managing certain types of asthmatic patients. The main objective of the study was to carry out computational modeling and prediction of genetic panels in the development of asthma and its endophenotypes, using machine learning techniques. The ProAR cohort included adults diagnosed with asthma. Latent class analysis was used to group individuals into different asthma endotypes based on variables. The study focused on 1,009,762 SNVs using the Boruta algorithm for variable selection. Ten different algorithms were employed to develop predictive models (KNN, NB, ANN, SVM, CART, C5.0, Bagging, AdaBoost, RF, and XGBoost) to accurately identify patients with asthma and their subtypes. The predictive genetic panel of overall asthma was completed with 155 single nucleotide variants with 91.18% accuracy, 92.75% sensitivity, and 89.55% specificity using the support vector machine algorithm. Furthermore, our study differentiated distinct subtypes of asthma, and from these, we defined genetic panels with high performance. In this way, machine learning can be a useful tool in researching complex outcomes, capable of helping to predict asthma and contributing to the personalization of clinical management.
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Anaque de Oliveira Pires
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ASSOCIAÇÃO DE VARIANTES GENÉTICAS NOS GENES DAD1 E OXA1L COM ASMA E ATOPIA EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA
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Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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MEMBROS DA BANCA :
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CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
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CARINA DA SILVA PINHEIRO
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CINTHIA VILA NOVA SANTANA
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TATIANE DE OLIVEIRA TEIXEIRA MUNIZ CARLETTO
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VALDIRENE LEAO CARNEIRO
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Data: 31/08/2023
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A asma é uma doença imunomediada altamente complexa, caracterizada por uma obstrução reversível e intermitente das vias aéreas que apesar de ter uma prevalência maior na infância, tem apresentado uma alta incidência e mortalidade em adultos. Nos últimos anos, diversos estudos de associação genômica ampla (GWAS) identificaram um número expressivo de variantes genéticas responsáveis pela suscetibilidade à asma. Essas variantes têm demonstrado desempenhar um papel importante na regulação da expressão gênica e na hereditariedade da asma, dentre as quais se destacam variantes nos genes DAD1 e OXA1L. O gene DAD1 é conhecido pelo seu papel na regulação da morte celular programada, e OXA1L é descrito pelo envolvimento na biogênese e fosforilação oxidativa mitocondrial. O presente estudo objetivou a identificação de novas variantes nos genes DAD1 e OXA1L e a avaliação da associação com asma e marcadores de atopia em indivíduos adultos. O estudo contou com a participação de 1.084 indivíduos adultos divididos em asma leve a moderada, asma grave e controles saudáveis pertencentes a uma coorte de estudo caso-controle do Programa para Controle da Asma na Bahia-ProAR. Análises de associações entre variantes nos genes estudados e variáveis de asma ou atopia foram realizadas usando um modelo de regressão logística multivariada ajustado para sexo, idade, índice de massa corporal (IMC), tabagismo, volume expiratório forçado em 1 segundo (VEF1) e componente principal de ancestralidade (PC1) usando o software PLINK 1.9. Modelos genéticos aditivos, dominantes e recessivos foram utilizados para todas as variáveis analisadas. Neste estudo, foram identificadas novas variantes nos genes DAD1 e OXA1L nunca antes descritas. Variantes nestes genes foram associadas com asma e marcadores de atopia tais como, teste cutâneo (SPT), IgE específica para aeroalérgenos, eosinófilos e produção de citocinas do tipo Th2. Análises de expressão gênica in silico, demonstraram que alguns dos polimorfismos em ambos os genes são capazes de afetar seus respectivos níveis de expressão gênica. Desta forma, nossos achados demonstram que variantes nos genes DAD1 e OXA1L podem ter influência na asma e atopia em indivíduos adultos brasileiros.
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Asthma is a highly complex immune-mediated disease, characterized by a reversible and intermittent obstruction of the airways that, despite having a higher prevalence in childhood, has shown a high incidence and mortality in adults. In recent years, several genomic wide association studies (GWAS) have identified a significant number of genetic variants responsible for asthma susceptibility. These variants have been shown to play an important role in the regulation of gene expression and in the heritability of asthma, including variants in DAD1 e OXA1L genes. The DAD1 gene is known for its role in the regulation of programmed cell death, and OXA1L is described for its involvement in mitochondrial biogenesis and oxidative phosphorylation. The present study aimed to identify new variants in the DAD1 and OXA1L genes and to evaluate the association with asthma and atopy markers in adults. The study involved the participation of 1,084 adult individuals divided into mild to moderate asthma, severe asthma and healthy controls belonging to a case-control study cohort of the Programa para Controle da Asma na Bahia-ProAR. Analyzes of associations between variants in the studied genes and asthma or atopy were performed using a multivariate logistic regression model adjusted for sex, age, body mass index (BMI), smoking, forced expiratory volume in 1 second (FEV1) and ancestry (PC1) using PLINK 1.9 software. Additive, dominant and recessive genetic models were used for all analyzed variables. In this study, new variants in the DAD1 and OXA1L genes that had never been described before were identified. These genes have been associated with asthma and atopy markers such as skin prick test (SPT), specific IgE for aeroallergens, eosinophils and Th2-type cytokine production. In silico gene expression analyzes demonstrated that some of the polymorphisms in both genes are able to affect their respective levels of gene expression. Thus, our findings demonstrate that variants in the DAD1 and OXA1L genes may influence asthma and atopy in Brazilian adults.
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Flávia Martins da Silva
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AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE HSPs EM Corynebacterium pseudotuberculosis
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Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
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MEMBROS DA BANCA :
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BRUNO DE ALMEIDA LOPES
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LILIA FERREIRA DE MOURA COSTA
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MARCOS DA COSTA SILVA
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ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
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SUZANA TELLES DA CUNHA LIMA
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THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
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Data: 15/09/2023
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A Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria intracelular responsável pela doença Linfadenite caseosa em ovino e caprinos que trazem grandes prejuízos econômicos a agropecuária. A resistência de C. pseudotuberculosis dentro de macrófagos, durante a infecção, aponta para a ativação de mecanismos moleculares envolvidos na adaptação aos estresses gerados pelo hospedeiro. Proteínas de choque térmico (HSPs) tem demonstrado importante papel dessas moléculas no aumento da resistência microbiana sob condições de estresse durante a infecção, além de serem imunologicamente importantes por serem reconhecidas pelo hospedeiro, são, portanto, capazes de induzir resposta da imunidade celular e humoral em mamíferos. Esta pesquisa tem por objetivo identificar e avaliar a expressão de possíveis genes de HSPs em C. pseudotuberculosis como resposta ao estresse que possam contribuir para o entendimento dos mecanismos resistência, virulência e patogenicidade utilizado por esse patógeno, e compará-los à condição fisiológica. O estudo simulou in vitro cinco condições de estresse (ácido, térmico, óxido nítrico, osmótico e oxidativo) com duas concentrações em três tempos de exposição (15min, 30min, 45 min) para avaliar a resistência de C. pseudotuberculosis. Três diferentes linhagens foram utilizadas: T1(atenuada), ER1409 (virulenta) e CapJ4 (76) (forte produtor de biofilme). As linhagens foram cultivadas em BHI monitorado o crescimento e isoladas alíquotas na fase exponencial inicial (DO600nm= 0,2) as quais foram submetidas aos estresses em seguida extraídos o RNA total. Os cDNAs gerados por transcrição reversa foram submetidos a ensaios de RT-qPCR (quantitative PCR) para quantificação dos 5 genes HSPs (ClpB, DnaJ, Hspr, Hsp10, Hsp65). Os resultados alcançados sugerem que as cepas ER1409 e CapJ4 (76) teve maior adaptabilidade apesar de apresentarem uma discreta perda de potencial replicativo que foi observado através da taxa de sobrevivência. Estas tiveram maior número de transcritos (Hsp65, Hsp10, HspR. Cpl -B, DnaJ) durante diferentes estresses. Essas HSPs estão envolvidos na resposta adaptativa, no crescimento bacteriano, e na virulência exercendo papel promissor na ativação do sistema imunológico. A descoberta da participação destes genes na resposta as condições celulares estressante s do hospedeiro podem auxiliar na busca de novos tratamentos para a linfadenite caseosa, através da possível redução na expressão destes genes de resistência, assim como novos mecanismos de combate a doença.
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Corynebacterium pseudotuberculosis is an intracellular bacterium responsible for caseous lymphadenitis in sheep and goats, which brings great economic losses to agriculture. The resistance of C. pseudotuberculosis within macrophages, during infection, points to the activation of molecular mechanisms involved in adaptation to stress generated by the host. Heat shock proteins (HSPs) have demonstrated an important role for these molecules in increasing microbial resistance under stress conditions during infection, in addition to being immunologically important for being recognized by the host, they are therefore capable of inducing cellular and humoral immunity responses in mammals. This research aims to identify and evaluate the expression of possible HSP genes in C. pseudotuberculosis as a response to stress that may contribute to the understanding of resistance, virulence and pathogenicity mechanisms used by this pathogen, and compare them to the physiological condition. The study simulated in vitro five stress conditions (acid, thermal, nitric oxide, osmotic and oxidative) with two concentrations and three exposure times (15min, 30min, 45 min) to evaluate the resistance of C. pseudotuberculosis. Three different strains were used: T1(attenuated), ER1409 (virulent) and CapJ4 (76) (strong biofilm producer). The strains were cultivated in BHI with growth monitored and aliquots isolated in the initial exponential phase (OD600nm= 0.2) which were subjected to stress and then total RNA was extracted. The cDNAs generated by reverse transcription were submitted to RT- qPCR (quantitative PCR) assays to quantify the 5 HSPs genes (ClpB, DnaJ, Hspr, Hsp10, Hsp65). The results achieved suggest that the ER1409 and CapJ4 strains (76) had greater adaptability despite showing a slight loss of replicative potential that was observed through the survival rate. These had a higher number of transcripts (Hsp65, Hsp10, HspR. Cpl -B, DnaJ) during different stresses. These HSPs are involved in adaptive response, bacterial growth, and virulence, playing a promising role in activating the immune system. The discovery of the participation of these genes in the response to the host's stressful cellular conditions may help in the search for new treatments for caseous lymphadenitis, through the possible reduction in the expression of these resistance genes, as well as new mechanisms to combat the disease.
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Pedro Augusto Silva dos Santos Rodrigues
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"VARIANTES EM GENES NA VIA DO TNF CONTRIBUEM PARA PIOR RESPOSTA AO TRATAMENTO ANTI-TNF EM PACIENTES COM ARTRITE REUMATOIDE"
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Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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ALEX JOSE LEITE TORRES
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CHARLESTON RIBEIRO PINTO
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GENARIO OLIVEIRA SANTOS JUNIOR
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RAFAEL VALENTE VEIGA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 28/11/2023
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Nas últimas décadas, o uso de medicamentos biológicos (imunobiológicos) como os agentes anti-TNF vem ganhando destaque para o tratamento de doenças autoimunes, especialmente as reumatológicas, como a Artrite Reumatoide (AR). A presença do fator de necrose tumoral (TNF) como molécula de defesa imunológica crucial na patogênese de doenças autoimunes tornou a terapia anti-TNF um grande progresso no tratamento de desordens inflamatórias crônicas, porém parcela importante dos pacientes não respondem ou perdem sua resposta a esses medicamentos, necessitando de doses maiores ou substituição da terapia, o que, por vezes, têm sido associado a variações em fatores genéticos. Ainda não existem estudos que avaliem a resposta a esses medicamentos correlacionando-os com polimorfismos genéticos em população brasileira, desse modo, este estudo objetivou avaliar a associação de variantes genéticas na via do TNF com o diagnóstico de AR e o perfil de resposta aos imunobiológicos anti-TNF em pacientes acompanhados em centros de infusão públicos no estado da Bahia, Brasil. Neste estudo de coorte ambispectivo utilizamos de dados clínicos, sociodemográficos e genéticos para avaliar as associações de variantes nos genes TNF, TNFRSF1A e TNFRSF1B com o diagnóstico de AR, escores padronizados, exames laboratoriais e resposta ao tratamento com TNFi. Foram incluídos 360 controles saudáveis e 294 pacientes diagnosticados com AR. Em uma subamostra, foram realizadas medições dos níveis séricos de citocinas TNF e IL-6. Nossos principais resultados sugerem que o rs767455-C pode desempenhar um papel na resposta ao tratamento com anti-TNF, estando relacionado a uma melhor resposta terapêutica. Adicionalmente, outros SNPs como o rs1061622-G e o rs1800629-A parecem também interferir no perfil de resposta aos anti-TNF. Nossos modelos logísticos binários conseguiram predizer de forma significativa e a partir de poucas variáveis a resposta a anti-TNFs. O alelo rs1800629-A e elevado escore da Escala Visual Analógica demonstraram estar associados a uma pior resposta. Fenótipos como sexo masculino, uso de medicamentos sintéticos e uma AR soropositiva parecem contribuir para uma melhor resposta ao tratamento com TNFi. Nossos resultados destacam a importância de avaliar o efeito desses polimorfismos dentro do contexto clínico e sociodemográfico do indivíduo com o objetivo de desenvolver um painel útil na definição de condutas clínicas no manejo terapêutico da AR.
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In recent decades, the use of biological medications (immunobiologicals) such as anti-TNF agents has gained prominence for the treatment of autoimmune diseases, especially rheumatological ones, such as Rheumatoid Arthritis (RA). The presence of tumor necrosis factor (TNF) as a crucial immune defense molecule in the pathogenesis of autoimmune diseases has made anti-TNF therapy a major step forward in the treatment of chronic inflammatory disorders, but a significant portion of patients do not respond or lose their response to these medications, requiring higher doses or therapy replacement, which have sometimes been associated with variations in genetic factors. There are still no studies that evaluate the response to these medications by correlating them with genetic polymorphisms in the Brazilian population. Therefore, this study aimed to evaluate the association of genetic variants in the TNF pathway with the diagnosis of RA and the response profile to anti-TNF immunobiologics in patients followed in public infusion centers in the state of Bahia, Brazil. In this ambispective cohort study, we used clinical, sociodemographic and genetic data to evaluate the associations of variants in the TNF, TNFRSF1A and TNFRSF1B genes with the diagnosis of RA, standardized scores, laboratory tests and response to treatment with TNFi. 360 healthy controls and 294 patients diagnosed with RA were included. In a subsample, measurements of serum levels of cytokines TNF and IL-6 were performed. Our main results suggest that rs767455-C may play a role in the response to anti-TNF treatment, being related to a better therapeutic response. Additionally, other SNPs such as rs1061622-G and rs1800629-A also seem to interfere with the anti-TNF response profile. Our binary logistic models were able to significantly predict the response to anti-TNFs from a few variables. The rs1800629-A allele and high Visual Analogue Scale scores were shown to be associated with a worse response. Phenotypes such as male sex, use of synthetic medications and seropositive RA seem to contribute to a better response to TNFi treatment. Our results highlight the importance of evaluating the effect of these polymorphisms within the individual's clinical and sociodemographic context with the aim of developing a useful panel in defining clinical approaches in the therapeutic management of RA.
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PATRÍCIA MARES DE MIRANDA
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ASSOCIAÇÃO ENTRE VARIANTES NOS GENES DAS METALOPROTEINASES E PERIODONTITE
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Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
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MEMBROS DA BANCA :
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ERICA DEL PELOSO RIBEIRO
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PAULO JOSE LIMA JUIZ
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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SORAYA CASTRO TRINDADE
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VIVIANE ALMEIDA SARMENTO
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Data: 05/12/2023
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A periodontite é uma doença inflamatória crônica caracterizada pela destruição dos tecidos de sustentação dos dentes e desencadeada pela resposta imune do hospedeiro à presença de um biofilme subgengival disbiótico. Dentre as diversas moléculas produzidas no processo patogênico da periodontite, enzimas proteolíticas, como as metaloproteinases (MMP) têm um papel de destaque na destruição tecidual. Este estudo transversal buscou avaliar a associação de SNV de genes das MMP 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14 e 16 com a periodontite em indivíduos maiores de 18 anos. A genotipagem SNV foi realizada através do Multi Ethnic Global Array. A associação das frequências genotípicas dos SNP de MMP com a periodontite foi investigada por meio de análise bivariada e múltipla, nos modelos aditivo, dominante e recessivo, considerando-se as SNV como exposição e a periodontite como desfecho. Covariáveis relacionadas a características socioeconômico-demográficas, de comportamento de estilo de vida e condições de saúde geral e bucal foram obtidas por meio de um questionário. Além disso, foram analisadas a expressão de locus de traço quantitativo (eQTL) e o desequilíbrio de ligação (LD). Não houve associação de genes das MMP 2, 3, 7, 8, 12,13 e 14 com a periodontite nos modelos testados. Houve associação positiva entre o SNV rs2071230 (G) da MMP-1 e a periodontite no modelo aditivo (OR=1,42 e IC [95% 1,002-2,03]). Houve associação negativa entre a periodontite e o SNV da MMP-9 rs13925 (alelo A) no modelo dominante (OR=0,56 e IC 95% [0,33-0,95]), e os SNV da MMP-16 rs10097366 (alelo G) no modelo recessivo (OR=0.01; IC 95%=0.01-0.98) e rs6994019 (alelo A) nos modelos aditivo (OR=0.71; IC 95%=0.52-0.97) e recessivo (OR=0.53; IC 95%=0.29-0.95). Foi observada associação positiva com as variantes da MMP-16: rs13261974 (alelo G) nos modelos aditivo (OR=1.42; IC 95%= 1.03-2.00) e dominante (OR=1.67; IC 95%= 1.04-2.70), rs28986473 (alelo G) nos modelos aditivo (OR=2.472; IC 95%= 1.05-5.79) e dominante (OR=2.472; IC 95%= 1.05-5.79) e rs9771895 (alelo A) no modelo recessivo (OR= 1.75; IC 95%= 1.04-2.96). Na comparação in silico da expressão quantitativa em sangue total, o alelo G mostrou uma maior expressão em homozigose do que em heterozigose (p<0,01) para rs13925 da MMP-9. Tanto no gene da MMP-9 quanto no da MMP-16, muitos SNV estavam em alto desequilíbrio de ligação. Variantes em genes da MMP-9 e da MMP-16 aumentam a chance de ocorrência de periodontite.
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Periodontitis is a chronic inflammatory disease characterized by the destruction of tooth-supporting tissues and triggered by the host's immune response to the presence of a dysbiotic subgingival biofilm. Among the various molecules produced in the pathogenic process of periodontitis, proteolytic enzymes, such as metalloproteinases (MMP) play a prominent role in tissue destruction. This cross-sectional study sought to evaluate the association of SNV of MMP 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14 and 16 genes with periodontitis in individuals over 18 years of age. SNV genotyping was performed using the Multi Ethnic Global Array. The association of genotypic frequencies of MMP SNPs with periodontitis was investigated using bivariate and multiple analysis, in additive, dominant and recessive models, considering SNV as exposure and periodontitis as outcome. Covariates related to socioeconomic-demographic characteristics, lifestyle behavior and general and oral health conditions were obtained through a questionnaire. Furthermore, quantitative trait locus (eQTL) expression and linkage disequilibrium (LD) were analyzed. There was no association of MMP 2, 3, 7, 8, 12,13 and 14 genes with periodontitis in the models tested. There was a positive association between MMP-1 SNV rs2071230 (G) and periodontitis in the additive model (OR=1.42 and CI [95% 1.002-2.03]). There was a negative association between periodontitis and the MMP-9 SNV rs13925 (A allele) in the dominant model (OR=0.56 and 95% CI [0.33-0.95]), and the MMP-16 SNV rs10097366 (G allele) in the recessive model (OR=0.01; 95% CI=0.01-0.98) and rs6994019 (A allele) in the additive (OR=0.71; 95% CI=0.52-0.97) and recessive (OR=0.53; CI) models 95%=0.29-0.95). A positive association was observed with the MMP-16 variants: rs13261974 (G allele) in the additive (OR=1.42; 95% CI= 1.03-2.00) and dominant (OR=1.67; 95% CI= 1.04-2.70) models, rs28986473 (G allele) in the additive (OR=2.472; 95% CI= 1.05-5.79) and dominant (OR=2.472; 95% CI= 1.05-5.79) models and rs9771895 (A allele) in the recessive model (OR= 1.75; CI 95%= 1.04-2.96). In the in silico comparison of quantitative expression in whole blood, the G allele showed greater expression in homozygosity than in heterozygosity (p<0.01) for rs13925 of MMP-9. In both the MMP-9 and MMP-16 genes, many SNV were in high linkage disequilibrium. Variants in MMP-9 and MMP-16 genes increase the chance of periodontitis occurring.
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REJANE RODRIGUES SOUZA DOS SANTOS
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“ASPECTOS DO PAPEL DA PILINA SpaC EM CORYNEBACTERIUM E AVALIAÇÕES IN SILICO EM CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS.”
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Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
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MEMBROS DA BANCA :
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RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
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ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
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SANDEEP TIWARI
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SORAYA CASTRO TRINDADE
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VASCO ARISTON DE CARVALHO AZEVEDO
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Data: 11/12/2023
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A linfadenite Caseosa doença de ocorrência mundial que acomete principalmente caprinos e ovinos no Brasil, tem como agente etiológico a Corynebacterium pseudotuberculosis, bactéria gram-positiva que apresenta parede celular com estrutura denominada pili responsável pela adesão e constituída por proteínas pilina, sendo a subunidade SpaC de grande importância na adesão celular, mantendo contato inicial com hospedeiro, além de agrupar epítopos capazes de estimular uma resposta imune contra C. pseudotuberculosis dados confirmados na literatura através de análises in silico, destacando a importância de utilização deste método. Ferramentas da bioinformática que caracterizam a análise in silico foram utilizadas nesse estudo com intuito de identificar epítopos da proteína SpaC referente as cepas PA01, NCTC 4681 e NCTC 4656 de C. pseudotuberculosis associados ao MHCI, MHCII e células B, para construção de uma proteína quimérica que proporcione efetiva resposta imunológica. Características como baixo número de domínios transmembrana, presença de domínios citoplasmáticos denominados peptídeos sinais, a identificação de proteínas como transmembranar, extracitoplasmática, análise dos parâmetros físico-químicos e a identificação de aminoácidos em regiões específicas dessas proteínas contribuíram para a seleção dos melhores epítopos na construção de uma proteína quimérica a base de peptídeos que possa ser utilizada no desenvolvimento de uma vacina sintética. A seleção final resultou em 12 epítopos associados ao MHC I e MHCII utilizados para construção da proteína quimérica. De acordo com as análises a proteína se apresentou não-alergênica, com grande potencial antigênico, exibindo parâmetros físico-químicos que garantem a estabilidade do modelo e interação com receptores Toll-like 2 confirmando seu potencial imuno protetor.
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Caseous lymphadenitis, a worldwide disease that mainly affects goats and sheep in Brazil, has as its etiological agent Corynebacterium pseudotuberculosis, a gram-positive bacterium that has a cell wall with a structure called pili responsible for adhesion and made up of pilin proteins, with the SpaC subunit being great importance in cell adhesion, maintaining initial contact with the host, in addition to grouping epitopes capable of stimulating an immune response against C. pseudotuberculosis, data confirmed in the literature through in silico analyses, highlighting the importance of using this method. Bioinformatics tools that characterize in silico analysis were used in this study with the aim of identifying epitopes of the SpaC protein referring to strains PA01, NCTC 4681 and NCTC 4656 of C. pseudotuberculosis associated with MHCII, MHCII and B cells, for construction of a chimeric protein that provides an effective immunological response. Characteristics such as a low number of transmembrane helices, the presence of cytoplasmic domains called signal peptides, the identification of proteins such as transmembrane, extracytoplasmic, analysis of physicochemical parameters and the identification of amino acids in specific regions of these proteins contributed to the selection of the best epitopes in the construction of a chimeric peptide-based protein that can be used in the development of a synthetic vaccine. The final selection resulted in 12 epitopes associated with MHC I and MHCII used to construct the chimeric protein. According to the analyses, the protein was non-allergenic, with great antigenic potential, exhibiting physicochemical parameters that guarantee the stability of the model and interaction with Toll-like 2 receptors, confirming its immunoprotective potential.
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Raísa Santos Coêlho
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VARIANTES GENÉTICAS ESTÃO ASSOCIADAS COM OBESIDADE EM UMA POPULAÇÃO DE SALVADOR / GENETIC VARIANTS ARE ASSOCIATED WITH OBESITY IN A POPULATION IN SALVADOR
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Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
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MEMBROS DA BANCA :
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CINTIA RODRIGUES MARQUES
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GISELLE CALASANS DE SOUZA COSTA
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LEA CRISTINA DE CARVALHO CASTELLUCCI
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PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 14/12/2023
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A obesidade é considerada uma doença crônica, de etiologia multifatorial, caracterizada por inflamação sistêmica de baixo grau, decorrente de alterações na secreção de citocinas/adipocinas, pelo tecido adiposo, e comumente associada à resistência à insulina. A obesidade poligênica, investigada em estudos de GWAS e gene candidato, resulta de efeitos cumulativos em grande número de variantes com consequências individuais modestas. Objetivos: Investigar a contribuição de variantes genéticas para a suscetibilidade de obesidade em uma população miscigenada, através de um estudo de ampla associação genômica (GWAS) e um estudo de gene candidato (genes LEP, LEPR, INS e INSR). Métodos: Os estudos foram realizados com 1036 indivíduos (333 eutróficos e 703 com excesso de peso), provenientes do ProAR (Programa para o Controle da Asma na Bahia), para identificar variantes associadas à obesidade. O chip MEGA (Illumina) foi utilizado para a genotipagem. Posteriormente, no GWAS, realizamos imputação com o painel de referência do CAAPA (Consórcio sobre Asma entre Populações com Ancestralidade Africana). As análises foram realizadas no software Plink. Realizamos análises in silico no GTex, RegulomeDB, Ensembl, Haploreg e Var Elect Phenotyper. Além disso, 11 citocinas (Eotaxina, IFNγ, IL-10, IL-6, IL-12, IL-13, IL-17A, IL-1β, IL-5, IL-8 e TNFα) foram quantificadas no sangue periférico, em uma subamostra (n=657), e relacionadas com os genótipos das variantes associadas ao estudo GWAS. Resultados: No GWAS, trinta e cinco variantes foram sugestivamente associadas (5 x 10-8 < valor de p < 1 x 10-5) ao excesso de peso. O cromossomo 4 reuniu os principais genes associados ao desfecho (SPON2, RNF212, COL4A3, TMED11P e PCSK2), expressos no tecido adiposo. Além destes, uma variante no gene ZZEF1, no cromossomo 17. As variantes rs10014526-T (OR 0.44 ; IC95%: 0.32 - 0.60) e rs77703123-T (OR 0.44 ; IC 95% : 0.32 - 0.60), no TMED11P apresentam elevado desequilíbrio de ligação (LD) com variantes no SPON2, rs75448245-G (OR 0.43 ; IC 95% : 0.31 - 0.60), rs11538062-T (OR 0,44 ; IC 95% : 0.32 - 0.61) e rs75654334-T (OR 0.44 ; IC 95% 0.32 – 0.60) e no COL4A3, rs13419630-A (OR 0.42 ; IC 95% 0.30 – 0.59). A variante rs781851-G, no gene ZZEF1, ao contrário das anteriores, associou-se positivamente com o desfecho (OR 1.70; IC95% 1.38 – 2.10). Os alelos polimórficos foram associados às citocinas IL-6, IL-10 e IL-12. No estudo de gene candidato, a associação foi investigada entre variantes nos genes LEP, LEPR, INS e INSR. A variante rs10954174-A, no gene LEP, foi positivamente associada ao excesso de peso (OR 1.74; IC 95% 1.06 – 2.87), assim como 10 das 11 variantes observadas no gene do receptor da leptina (LEPR), com exceção do rs113424381-T (OR 0.53; IC 95% 0.30 – 0.93), negativamente associado ao desfecho. No gene da insulina (INS), apenas uma variante passou pelo controle de qualidade adotado e não se associou ao desfecho. Enquanto no gene do receptor (INSR), seis variantes foram associadas ao excesso de peso, apenas duas ao risco: rs148418658-G (OR 3.33; IC 95% 1.12 – 9.87) e rs10427021-C (OR 1.32; IC 95% 1.02 – 1.70). Conclusões: Nossa pesquisa sugere que genes associados ao excesso de peso, especialmente o SPON2, no GWAS, e os receptores para leptina (LEPR) e insulina (INSR), no estudo de gene candidato, apresentaram associação com o desfecho de obesidade, o que indica possível relação com disfunções metabólicas que caracterizam a mesma, a serem investigadas. Nosso estudo apresenta algumas associações inéditas e pode contribuir para a medicina de precisão no tratamento da obesidade.
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Obesity is considered a chronic disease, with multifactorial etiology, characterized by low-grade systemic inflammation, resulting from changes in the secretion of cytokines/adipokines, by adipose tissue, and commonly associated with insulin resistance. Polygenic obesity, investigated in GWAS and candidate gene studies, results from cumulative effects on large numbers of variants with modest individual consequences. Objectives: To investigate the contribution of genetic variants to obesity susceptibility in an admixed population, through a genome-wide association study (GWAS) and a candidate gene study (genes LEP, LEPR, INS and INSR genes). Methods: The studies were carried out with 1036 individuals (333 eutrophic and 703 overweight), from ProAR (Program for Asthma Control in Bahia), to identify variants associated with obesity. The MEGA chip (Illumina) was used for genotyping. Subsequently, in GWAS, we performed imputation with the CAAPA (Consortium on Asthma among Populations with African Ancestry) reference panel. Analyzes were performed using Plink software. We performed in silico analyzes in GTex, RegulomeDB, Ensembl, Haploreg and Var Elect Phenotyper. Furthermore, 11 cytokines (Eotaxin, IFNγ, IL-10, IL-6, IL-12, IL-13, IL-17A, IL-1β, IL-5, IL-8 and TNFα) were quantified in peripheral blood, in a subsample (n=657), and related to the genotypes of the variants associated with the GWAS study. Results: In GWAS, thirty-five variants were suggestively associated (5 x 10-8 < p-value < 1 x 10-5) with excess weight. Chromosome 4 brought together the main genes associated with the outcome (SPON2, RNF212, COL4A3, TMED11P and PCSK2), expressed in adipose tissue. In addition to these, a variant in the ZZEF1 gene, on chromosome 17. The variants rs10014526-T (OR 0.44; 95% CI: 0.32 - 0.60) and rs77703123-T (OR 0.44; 95% CI: 0.32 - 0.60), in TMED11P present elevated linkage disequilibrium (LD) with variants in SPON2, rs75448245-G (OR 0.43; 95% CI: 0.31 - 0.60), rs11538062-T (OR 0.44; 95% CI: 0.32 - 0.61) and rs75654334-T (OR 0.44; 95% CI 0.32 – 0.60) and in COL4A3, rs13419630-A (OR 0.42; 95% CI 0.30 – 0.59). The rs781851-G variant, in the ZZEF1 gene, unlike the previous ones, was positively associated with the outcome (OR 1.70; 95% CI 1.38 – 2.10). The polymorphic alleles were associated with the cytokines IL-6, IL-10 and IL-12. In the candidate gene study, the association was investigated between variants in the LEP, LEPR, INS and INSR genes. The rs10954174-A variant, in the LEP gene, was positively associated with excess weight (OR 1.74; 95% CI 1.06 – 2.87), as were 10 of the 11 variants observed in the leptin receptor (LEPR) gene, with the exception of rs113424381 -T (OR 0.53; 95% CI 0.30 – 0.93), negatively associated with the outcome. In the insulin gene (INS), only one variant passed the adopted quality control and was not associated with the outcome. While in the receptor gene (INSR), six variants were associated with excess weight, only two with risk: rs148418658-G (OR 3.33; 95% CI 1.12 – 9.87) and rs10427021-C (OR 1.32; 95% CI 1.02 – 1.70). Conclusions: Our research suggests that genes associated with excess weight, especially SPON2, in the GWAS, and the leptin (LEPR) and insulin (INSR) receptors, in the candidate gene study, were associated with the outcome of obesity, which indicates a possible relationship with metabolic dysfunctions that characterize it, to be investigated. Our study presents some novel associations and may contribute to precision medicine in the treatment of obesity.
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Rebeca Pereira Bulhosa Santos
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AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA DE OSTEOBLASTOS PRODUZIDOS EM BIOMATERIAIS (ABS M30i, PC-ISO, PLA)
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Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
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MEMBROS DA BANCA :
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LUCAS NOVAES TEIXEIRA
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Antonio Pedro Fróes de Farias
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SORAYA CASTRO TRINDADE
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VALDIRENE LEAO CARNEIRO
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VIVIANE ALMEIDA SARMENTO
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Data: 15/12/2023
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Algumas lesões orofaciais estão relacionadas à perda da continuidade óssea e, consequentemente, a danos estruturais e funcionais que prejudicam a qualidade de vida. A produção de tecidos biológicos a partir de culturas celulares é sugerida como estratégia auxiliar para cirurgias reconstrutivas orofaciais, porém, a eficácia da técnica depende de uma estrutura de suporte que oriente a formação de tecidos funcionais de acordo com o leito receptor. Nesse contexto, foi investigada a assinatura de expressão gênica de células osteoblásticas (SAOS-2) cultivadas em matrizes rígidas produzidas com impressora tridimensional. Para isso, os osteoblastos cultivados em scaffolds de policarbonato de ácido polilático (PLA), acrilonitrila-butadieno-estireno (ABS M30i) e Policarbonato-ISO (PC-ISO) foram avaliados pelo sistema Array Real Time PCR para determinar a expressão de genes relacionados à diferenciação osteoblástica, mineralização óssea, ossificação, fatores de crescimento e fatores de transcrição envolvidos na inflamação e cicatrização. Os resultados obtidos revelaram que os arcabouços de ABS-M30i, com destaque nos genes bmp5, bmp6, col9A2, col11A1, spp1, Ibsp, fgf2, vegfA, smad4, smad9, runx2 / bmpr1A, fgfr1 e Igfr1, de PCISO com destaque nos genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, Ibsp, fgf2, vegfa, smad1, runx2, bmPr1a e Fgfr e do PLA destacando-se os genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, spp1, minpp1, ibsp, fgf2, tgfb2, smad1, smad5, smad4, bmpr1 e fgr1, permitem a expressão de grande parte de genes responsáveis pela formação óssea in vitro, no entanto o PLA parece ter permitido a expressão de forma mais exuberante nos genes que foram destacados, e o PC-ISO permitiu uma resposta global mais uniforme. Assim, a utilização dos três biomateriais na engenharia tecidual torna-se promissora.
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Some orofacial injuries are related to the loss of bone continuity and, consequently, to structural and functional damage that impair quality of life. The production of biological tissues from cell cultures is suggested as an auxiliary strategy for orofacial reconstructive surgeries, but the effectiveness of the technique depends on a support structure that guides the formation of functional tissues according to the receptor bed. In this context, the gene expression signature of osteoblastic cells (SAOS-2) cultured on rigid matrices produced with a three-dimensional printer was investigated. To this end, osteoblasts cultured on polylactic acid polycarbonate (PLA), acrylonitrilebutadiene-styrene (ABS M30i) and Polycarbonate-ISO (PC-ISO) scaffolds were evaluated by Array Real time PCR system to determine the expression of genes related to osteoblastic differentiation, bone mineralization, ossification, growth factors, and transcription factors involved in inflammation and healing. The results obtained showed that the ABS-M30i scaffolds, with emphasis on the genes bmp5, bmp6, col9A2, col11A1, spp1, Ibsp, fgf2, vegfA, smad4, smad9, runx2 / bmpr1A, fgfr1 and Igfr1, the PC-ISO with emphasis on in the genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, Ibsp, fgf2, vegfa, smad1, runx2, bmPr1a and Fgfr and the PLA, highlighting the genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, spp1, minpp1, ibsp, fgf2 , tgfb2, smad1, smad5, smad4, bmpr1 and fgr1, allow the expression of a large number of genes responsible for bone formation in vitro, however, PLA seems to have allowed more exuberant expression in the genes that were highlighted, and PC-ISO allowed a more uniform overall response. Thus, the use of the three biomaterials in tissue engineering becomes promising.
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CAIO LOPES BORGES ANDRADE
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Uso de Aprendizado de Máquina na identificação de plasmócitos em lâminas de aspirado de medula óssea de casos de Mieloma Múltiplo
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Orientador : SONGELI MENEZES FREIRE
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MEMBROS DA BANCA :
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EDVAN DE QUEIROZ CRUSOE
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JOÃO PAULO PEREIRA DE SÁ CANÁRIO
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MARINHO MARQUES DA SILVA NETO
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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SONGELI MENEZES FREIRE
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Data: 20/12/2023
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O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica ocasionada por uma proliferação desregulada dos plasmócitos na medula óssea, que atinge geralmente pacientes com idades superiores aos 50 anos. Atualmente é a 2o oncohematologia mais frequente e responsável por 1% dos tipos de câncer no mundo. Para o estadiamento do mieloma os médicos responsáveis devem seguir os critérios do Sistema de Estadiamento Internacional (ISS), sendo o mielograma apresentando a infiltração de plasmócitos (>10%) um método observador dependente e que consome tempo considerável do profissional médico hematologista. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e treinar uma Inteligência Artificial para identificação de Plasmócitos e células nucleadas Não Plasmocitárias em lâmina de Medula Óssea de pacientes com diagnóstico de Mieloma Múltiplo. O setor de Imunofenotipagem do Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular (LABIMUNO-UFBA) disponibilizou lâminas de medula óssea codificadas de portadores de MM. A partir destas, foi realizada a aquisição das imagens por meio de aparelho celular acoplado ao microscópio para produção de banco digital de imagens. As imagens foram rotuladas com marcação de plasmócitos e outros grupos de células. As rotulações foram validadas por médicos e especialistas em hematologia. As imagens do banco passaram por processo de normalização para obter um padrão que facilitasse a visão computacional. Por fim, as imagens alimentaram o aprendizado profundo de máquina para desenvolvimento de IA. Com isso, foi possível obter um banco de imagens digital de lâminas de medula óssea de indivíduos com diagnóstico de MM, contendo imagens de plasmócitos e outros grupos celulares nucleados devidamente rotulados, que permitiu o avanço do projeto que inclui o desenvolvimento de uma IA com capacidade de identificação de plasmócitos e outros grupos celulares nucleados em imagens de lâmina de medula óssea. Uma IA com esta proposta poderá auxiliar a equipe médica na avaliação morfológica e quantitativa de células para o diagnóstico microscópico mais efetivo.
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Multiple myeloma (MM) is a hematological neoplasm caused by dysregulated regulation of plasma cells in the bone marrow, which generally affects patients over 50 years of age. It is currently the 2nd most common oncohematology and responsible for 1% of cancer types in the world. To stage myeloma, responsible physicians must follow the criteria of the International Staging System (ISS), with the myelogram showing plasma cell infiltration (>10%) being an observer-dependent method that takes specific time for the hematologist. The present study aims to develop and train Artificial Intelligence to identify Plasmocytes and Non-Plasmocyte nucleated cells in Bone Marrow slides from patients diagnosed with Multiple Myeloma. The Immunophenotyping sector of the Laboratory of Immunology and Molecular Biology (LABIMUNO-UFBA) made available coded bone marrow slides from MM carriers. As of today, images were acquired using a cell phone adapted specifically for the production of digital image banks. The images were labeled with plasma cells and other cell groups. The labels were validated by doctors and hematology experts. The stock images went through a normalization process to obtain a standard that facilitated computer vision. Ultimately, the images fed deep machine learning for AI development. With this, it was possible to obtain a bank of digital images of bone marrow slides from individuals diagnosed with MM, containing images of plasma cells and other properly labeled nucleated cell groups, which allowed the advancement of the project, which includes the development of an AI with capacity identification of plasma cells and other nucleated cell groups in bone marrow slide images. An AI with this proposal could assist the medical team in the morphological and quantitative evaluation of cells for a more effective microscopic diagnosis.
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