Introdução: A mucosite é uma reação inflamatória complexa que ocorre no trato gastrointestinal de pacientes submetidos a quimioterapia ou radioterapia. Atualmente, não existe um tratamento totalmente eficaz para essa condição. Estudos recentes têm explorado os flavonoides como uma alternativa para esse problema. Objetivo: Investigar os efeitos da administração oral de 30 mg/kg de luteolina sobre as células e tecidos que compõem a parede do duodeno e cólon de camundongos com mucosite intestinal induzida por irinotecano. Métodos: Dezoito camundongos foram distribuídos em grupo Controle, Veículo e Luteolina. O grupo controle não foi tratado. O grupo veículo recebeu água por 14 dias. O grupo Luteolina recebeu diariamente 30 mg/kg de luteolina por 14 dias. Dos dias 7 a 10, os grupos Veículo e Luteolina receberam irinotecano (75 mg/kg) para induzir a mucosite intestinal. Os camundongos foram sacrificados 72 horas após a última dose de irinotecano. Duodeno e cólon foram coletados e fixados. Análises histoquímicas e imuno-histoquímicas foram realizadas. Resultados: Demonstramos que o tratamento com luteolina apresentou efeitos benéficos na mucosite intestinal induzida pelo irinotecano. Esses benefícios incluíram a melhoria das alterações histopatológicas, aumento na produção de muco e expressão de MUC-2, aumento do número de células de Paneth, redução do número de mastócitos, preservação da morfologia neuronal e aumentou a deposição de fibras de colágeno tipo III. Conclusão: A luteolina reduz os danos da mucosite intestinal induzida por irinotecano, indicando seu potencial terapêutico promissor.

A pandemia de SARS-CoV-2 causou milhares de mortes em todo o mundo. A
gravidade da doença está associada à idade, sexo, comorbidades, e uma resposta inflamatória
sistêmica exacerbada e descontrolada resultante da tempestade de citocinas. As tempestades
de citocinas são caracterizadas por uma grande liberação desregulada de citocinas que podem
ser desencadeadas por infecções virais e moduladas por várias vias de sinalização. A proteína
alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) é uma serina treonina quinase capaz de moldar a
ativação celular e a resposta inflamatória inata das células, que é a primeira linha de defesa
contra os vírus. A via mTORC1 mostrou ser afetada pelo SARS-CoV-2 e hiperativada em
pacientes graves de COVID-19, o que sugere que a desregulação desta via pode desempenhar
um papel importante no mau prognóstico da doença. Além disso, a genética dos pacientes
poderia contribuir para esse desfecho. Objetivos: Investigar o envolvimento de variantes no
gene MTOR com a gravidade da COVID-19 na população brasileira. Métodos: Indivíduos
com COVID-19 grave e leve foram recrutados e amostras de sangue periférico e dados
sociodemográficos foram coletados. Os SNPs rs1057079 e rs2536 do gene MTOR foram
genotipados através de RT-qPCR. Realizamos análise de regressão logística e curvas de
sobrevivência Kaplan-Meier. Aplicamos um escore de risco genético para estimar a
contribuição cumulativa dos alelos de risco. Os níveis de plasma das citocinas TNF e IL-6
foram medidos através de ELISA e analisados. Resultados e Conclusões: O alelo T de
rs1057079 foi associado ao risco de gravidade e a COVID-19 crítica, bem como ao aumento
dos níveis plasmáticos de TNF. Enquanto isso, o alelo T de rs2536 foi associado com o óbito
por COVID-19. Os alelos de risco das variantes mostraram um risco cumulativo quando
herdadas juntas e podem ser úteis para prever um resultado mais grave da COVID-19.

A periodontite envolve a perda óssea do tecido de sustentação e consequente perda das unidades dentárias o que impacta significativamente na qualidade de vida de indivíduos de todas as camadas sociais. A presença de comunidades microbianas disbióticas e uma resposta imunológica exacerbada podem acarretar na destruição da microarquitetura do periodonto de sustentação. Fatores ambientais e genéticos estão associados ao desenvolvimento da doença, sendo necessário elucidar o papel da genética no seu desenvolvimento e progressão. Objetivo: Investigar a associação de polimorfismos dos genes IL1B, IL6 e IL10 com a periodontite; e determinar as frequências alélicas dos polimorfismos IL1B, IL,6 e IL10 nas populações africana, americana e europeia. Materiais e métodos: Estudo transversal,realizado com 506 indivíduos adultos, classificados com presença (n=117) ou ausência (n=389) de periodontite, participantes da coorte do Programa de Controle da Asma da Bahia (ProAR) em Salvador/Bahia – Brasil. O DNA genômico foi extraído e genotipado utilizando-se a plataforma Illumina Multi- Ethnic Global Array (MEGA, Illumina). As plataformas NCBI, RegulomeDB, ENCODE (Encyclopedia of DNA Elements), Haploview 4.2 e rSNPBase foram consultadas. A análise estatística foi realizada no software PLINK 1.9 e a regressão logística foi ajustada por idade, obesidade, hábito de respirar pela boca, uso de fio dental, asma e ancestralidade. Para controle de qualidade utilizou-se o equilíbrio de Hardy-Weinberg <0,05, taxa de genotipagem <0,98 e frequência do menor alelo (MAF) <1%. Resultados: Dois polimorfismos foram associados à periodontite no gene IL1B. O rs3136557 alelo A apresentou associação negativa com a periodontite tanto no modelo aditivo como no dominante, respectivamente (OR = 0,48; IC 95% = 0,24-0,94) e (OR = 0,48; IC 95 % = 0,24-0,97; p<=0,05). O rs1143630 alelo T apresentou associação positiva (OR = 1,49; IC 95% = 1,02-2,18) no modelo aditivo, enquanto no modelo dominante (OR = 1,61; IC 95% = 1,02-2,53, p<=0,05). No gene IL6 o polimorfismo rs2069841alelo A foi associado positivamente à periodontite no modelo aditivo (OR = 2,61; IC 95% = 1,05-6,50) e no modelo dominante (OR = 2,61; IC 95% = 1,05- 6,50). Na análise dos polimorfismos da IL10 não foram encontradas associações significativas com a periodontite na população estudada. A frequência do menor alelo A da variante rs3136557 é presente em 8% na população estudada de Salvador, semelhante a população americana que possui aproximadamente a mesma frequência, enquanto a população africana possui 5%. A variante rs1143630 (alelo T) possui frequência de 20% na população estudada, enquanto a população africana apresenta 28%, a população americana e europeia apresenta 6%. O MAF da variante rs2069841 (alelo A) foi de 2% no grupo estudado, semelhante a população africana que apresentou 3%. Conclusão: Polimorfismos nos genes das interleucinas IL-1B e IL-6 foram associados positivamente e negativamente à periodontite. Não foram encontradas associações de polimorfismos do gene IL10 com a periodontite, nesta população da cidade de Salvador. A frequência alélica dos polimorfismos mostra-se semelhante àquelas encontradas em outras populações, como a africana e europeia. 

Corynebacterium pseudotuberculosis é um patógeno Gram-positivo e intracelular facultativo conhecido por causar doenças de importância veterinária. Dentre estas doenças está a Linfadenite Caseosa (LC), uma enfermidade que acomete caprinos e ovinos gerando abscessos nos linfonodos e órgãos internos, ocasionando perdas econômicas para os criadores desses animais. A profilaxia é a alternativa de melhor custo-benefício para o controle de doenças infecciosas, no entanto ainda não há uma vacina efetiva contra a LC. Diversas metodologias in silico têm contribuído para a seleção de alvos moleculares que podem ser explorados no desenvolvimento de estratégias terapêuticas, métodos diagnósticos e imunógenos recombinantes. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo a seleção de alvos vacinais e terapêuticos, bem como a construção de uma proteína quimérica potencialmente imunogênica e o screening de compostos que possam ser utilizados no tratamento da LC. A partir de dados da literatura, as proteínas reativas RpfB, SlpA, Nlpc/P60 e os fatores de virulência CP40 e PLD foram selecionadas e avaliadas quanto a sua conservação intraespecífica e homologia com proteínas dos hospedeiros caprino e ovino. Posteriormente, foram preditos e avaliados epítopos de MHC-I, MHC-II e células B presentes nestas proteínas. Além disso, proteínas compartilhadas por todas as linhagens de C. pseudotuberculosis, citoplasmáticas e essenciais foram selecionadas para análise de ancoragem molecular com compostos naturais. Uma proteína quimérica foi construída a partir dos epítopos das proteínas RpfB, SlpA, Nlpc/P60, CP40 e PLD. Esse potencial imunogêno se mostrou estável, solúvel, antigênico e não alergênico nas análises in silico. Já na abordagem terapêutica, as proteínas WP_013241317.1, WP_013241598.1, WP_014522829.1, WP_013242887.1, WP_013241937.1 e WP_013241997.1 foram selecionadas e os compostos naturais ZINC04258889, ZINC04235924, ZINC04236001, ZINC04235972, ZINC08300419 e ZINC67902338 foram os melhores ligantes para elas, respectivamente. Esses resultados irão contribuir para a profilaxia e tratamento da LC bem como de outras doenças causadas por C. pseudotuberculosis.  

Corynebacteriumpseudotuberculosis(C. pseudotuberculosis)éumabactériagram-positiva,anaeróbiafacultativa e intracelular facultativa. Esse agente etiológico causa a linfadenite caseosa, doençainfecciosadecarátercrônicoqueafeta principalmente pequenosruminantes.Osanimaisinfectadosapresentam como sinal clínico, lesões granulomatosas em linfonodos superficiais, internos, alem de poderacometer órgãos vitais.Perdaseconômicasprovocadaspelainfecção por C. pseudotuberculosis associado ao diagnóstico tardio e a falta de um protocolo de imunização eficiente, servem como incentivo para o desenvolvimento de estudos relacionados a linfadenite caseosa. Assim, o objetivo destetrabalhoé avaliar a imunomodulação humoral e celular de ovinos imunizados com uma vacina de subunidaderecombinante constituídapelosantígenosrNanh, rSodC e rPknG de C. pseudotuberculosis, comparando-a com uma vacina comercial múltipla inativada disponível no mercado brasileiro.Comometodologia utilizou-se sistema heterólogo para e expressão das proteínas rNanH, rPknG e rSodCde C. pseudotuberculosis. Doze ovinos foram separados randomicamente em três grupos, sendo G1 grupo controle que recebeu solução salina 0,9%, G2 grupo que foi imunizado com uma vacina múltipla inativada e G3 grupo que foi imunizado com vacina composta pelas proteínas rNanH, rSodC e rPknG. Todos os animais foram desafiados com a cepa CAPJ4 de C. pseudotuberculosis. Ensaio imunoensimático (ELISA) foi utilizado para verificar a indução da respostaimunehumoral. A verificação da resposta imune celular foi realizada a partir da quantificação, por qPCR, das citocinas IFN-y, IL10 e IL12. Além da quantificação de interferon-gama (IFN-y) por ELISA. Ao utilizar os antígenos de C. pseudotuberculosis secretados em meio BHI foi possível verificar que os animais que receberam a vacina múltipla inativada (G2) tiveram um aumento dos níveis de anticorpos específicos IgG quando comparado com os animais que receberam a vacina recombinante (G3). Quando as proteínas recombinantes foram utilizadas como antígeno no ELISA, foi possível observar que o G3 apresentou aumento nos níveis de anticorpos após aplicação das duas doses da vacina quando comparado com G2, grupo esse que não foi possível observar o aumento dos níveis de anticorpos. Na indução da resposta imune celular, não foi possível verificar diferença significativa nos animais do G3 quando comparado com o G2. Portanto, foi possível inferir que a utilização das proteinas rNanH, rPknG e rSodCde C. pseudotuberculosis em uma formulação vacinal foi capaz de induzir a resposta imune humoral em ovinos, fornecendo anticorposespecíficos contraesses antígenos vacinais.

INTRODUÇÃO: As doenças neurodegenerativas são caracterizadas pela perda progressiva de neurônios, resultando em incapacidade e morte. A busca por novas terapias a partir de compostos naturais visa investigar substâncias com potencial anti-inflamatório no SNC. As esponjas estão entre os organismos marinhos mais prolíficos para novas substâncias, e estudos in vitro mostraram atividade anticancerígena e anti-inflamatória de extratos ou compostos purificados de algumas espécies. OBJETIVOS: Avaliar in vitro a toxicidade de
extratos de espécies de esponjas marinhas; o potencial neuroprotetor contra danos inflamatórios em neurônios e a associação à modulação da resposta de microglias. MÉTODOS: Culturas de células neuronais PC12 foram tratadas com 20 diferentes extratos (0,1 a 200 µg/mL) obtidos com solventes diclorometano (DCM), acetato de etila (AcOEt) e metanol (MeOH) de espécies de esponjas marinhas dos gêneros Aplysina, Cladocroce, Chondrilla,
Callyspongia e Haliclona. A viabilidade celular foi determinada após 72 h do tratamento pelo teste MTT. Células PC12 foram submetidas ao dano inflamatório com LPS a 5 µg/mL por 12 h e após tratadas por 24 h com o extrato de A. fulva (0,1 e 1 µg/mL), ou com o seu composto purificado AF-H1 (1 e 10 µM) e viabilidade celular avaliadas pela exclusão de Azul de Tripan e Iodeto de Propídeo. Microglias, obtidas do córtex cerebral de ratos Wistar neonatos, foram tratadas por 24 h com meio condicionado derivado de células PC12 nessas condições e o fenótipo destas e de células PC12 nas diferentes condições foi avaliado por microscopia de contraste de fase e coloração pancrômica de Rosenfeld. RESULTADOS: A maioria dos extratos apresentaram toxicidade nas concentrações de 100 e 200 µg/mL, exceto os extratos Ac-OEt que foram a partir de 10 μg/mL. O extrato MeOH de A. fulva (AF-MeOH) e seu composto AF-H1 não foram tóxicos em nenhuma das concentrações testadas. Células PC12 submetidas a dano com LPS apresentaram corpos celulares contraídos, efeito que não foi observado em culturas tratadas com extrato AF-MeOH e AF-H1 nas concentrações adotadas. Microglias tratadas com meio condicionado de culturas de PC12 submetidas ao LPS mostraram forma semelhante à ameboide; em contraste, microglias submetidas ao meio condicionado de células PC12 tratadas com LPS e AF-MeOH ou LPS e AF-H1 apresentaram fenótipo mais ramificado, similar ao de microglias em condições controle. CONCLUSÕES: O extrato MeOhH de A. fulva (AF-MeOH) e seu componente AF-H1 são capazes de proteger estas células frente ao dano inflamatório com LPS e modular a resposta inflamatória de microgliais para um fenótipo neuroprotetor.

Introdução: A COVID-19 caracteriza-se pela hiperativação do sistema imunológico e liberação descontrolada de citocinas. Recentes estudos apontam que a sinalização prejudicada dos IFNA1 e seus receptores, IL17A, HERVs e IFNG pode estar associada à gravidade da COVID-19. Objetivo: Analisar a expressão dos genes IFNA1 e receptores IFNAR1/IFNAR2, IL17A e HERVs (HERVK-10 e HERVW-1) em leucócitos totais e níveis basais de IFNG no plasma de pacientes com COVID-19. Métodos: Estudo prospectivo, observacional e transversal com 117 pacientes recrutados (grave=58 e leve=59). Dados demográficos e clínicos foram coletados. Os leucócitos do sangue periférico foram isolados e o ensaio RT-qPCR foi realizado para análise da expressão gênica. Os níveis plasmáticos de IFNG foram mensurados pelo método ELISA. Resultados: Na amostra avaliada, observou-se prevalência do sexo masculino (p<0,05), idosos (p<0,0001), negros (p<0,0001) e comorbidades pré-existentes (p<0,0001). Os pacientes com COVID-19 grave apresentaram leucocitose, neutrofilia, contagem elevada de plaquetas e linfócitos reduzidos em comparação com os pacientes leves (p<0,0001). Os índices SII, AISI e SII/Hb foram significativamente maiores em pacientes graves (p<0,0001). Os níveis de expressão gênica de IFNA1, HERVW-1 e IL17A foram significativamente maiores em pacientes graves (p<0,05, p<0,05, p<0,001, respectivamente). Entretanto, os níveis plasmáticos de IFNG não foram significativos. A análise ROC apontou que os índices SII e SII/Hb são bons marcadores prognósticos de gravidade da COVID-19, com AUC (0,98 e 0,99, p<0,0001, respectivamente). Conclusão: Nossos resultados apontam que o segmento mais afetado pela COVID-19 compreende homens, idosos, negros e portadores de comorbidades, com maior expressão gênica de IFNA1, HERVW-1 e IL17A. Índices como SII e SII/Hb podem ser prognósticos promissores de gravidade para a COVID-19.

A sepse é um problema de saúde pública mundial e representa a principal causa de morbidade e mortalidade no mundo em unidades de terapia intensiva não destinadas a pacientes cardiopatas. Apesar de toda a dedicação para uma investigação mais minuciosa a fim de um diagnóstico e prognóstico precoce e preciso nas últimas décadas, esta abordagem continua sendo um desafio considerável e crescente aos cuidados de saúde. Neste contexto de desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico rápidas, acessíveis e adequadas para melhorar a identificação, prevenção e tratamento da sepse, destaca-se o uso dos genes diferencialmente expressos (GDE) como potenciais biomarcadores no diagnóstico e prognóstico da sepse. Portanto, o objeti vo dessa pesquisa foi estudar o perfil de expressão dos genes e sua correlação com as vias intracelulares moduladas por citocinas e fatores decrescimento associadas à progressão e severidade da sepse. Para isso, foi feita uma pesquisa nos bancos de dados do NCBI e GEO e, posteriormente,  selecionados três conjuntos de dados de sequenciamento, o GSE12624, GSE131761 e GSE69063. Foram escolhidos os GDE que possuíam um p-valor &lt;0,05 e cuja expressão apresentava FC menor que -1,1 ou maior que +1,1. Os genes foram analisados segundo o programa de enriquecimento de vias Enrichr para verificar se a expressão gênica dos indivíduos é consistente com a doença estudada. Foi construída uma rede de interações entre os genes através do programa String. A análise de ontologia dos genes das principais vias intracelulares apresentou expressão significativamente aumentada.Através do diagrama de Venn identificou-se cinco genes presentes nos três estudos, esses cinco genes foram analisados no String. Foi construída uma rede de interações entre os genes através do programa. Foram feitas as análises dos genes avaliados quanto à sensibilidade e especificidade com base na intensidade de sinal de cada amostra através da ferramenta estatística SPSS 20.0 e os genes ARG1, HPGD, DAAM2 e PCOLCE2 apresentaram boa especificidade e sensibilidade para identificar a sepse. Estes resultados colaboram para o entendimento do papel dos 4 genes na sepse e irá ajudar na construção de um perfil de assinatura para o diagnóstico precoce da doença. 

Introdução: O uso nocivo do álcool (UNA) é um problema de saúde pública que impõe custos consideráveis aos sistemas de saúde em todo o mundo. O consumo de etanol afeta a qualidade de vida dos usuários, levando a uma série de problemas de saúde mental e física. Os transtornos associados ao uso de álcool são condições complexas influenciadas por diversos fatores, como: alterações nos sistemas de neurotransmissão, mediadores imunes/inflamatórios e variantes genéticas. Tais distúrbios apresentam herdabilidade estimada entre 50% e 60%. Estudos de associação genômica ampla revelaram diversas variantes genéticas associadas aos fenótipos relacionados ao uso álcool, em particular em genes envolvidos no metabolismo da droga. No entanto, a maioria desses estudos se concentrou em populações de ascendência europeia ou asiática, limitando possíveis extrapolações para outros grupos étnicos. Objetivo: Investigar mecanismos genéticos/imunogenéticos associados ao UNA em indivíduos latino-americanos miscigenados. Metodologia: O Teste de Identificação de Transtorno por Uso de Álcool (AUDIT) foi usado para avaliar o risco de UNA em 2.840 indivíduos da cidade de Pelotas (Brasil). Os indivíduos foram genotipados para 2,3 milhões de Variantes de Nucleotídeo Único (SNVs) utilizando a plataforma Illumina HumanOmni 2.5-8v1 BeadChip, seguido por processo de imputação de genótipos. Os padrões de ancestralidade dos participantes foram investigados através de análise de Componentes Principais e pelo método ADMIXTURE. Análises de associação genética foram realizadas através de regressão logística multivariada. Os potenciais funcionais das variantes associadas ao UNA foram avaliados através de análises in silico. Além disso, foram realizadas análises de enriquecimento e interação de vias para identificar mecanismos potencialmente envolvidos no desenvolvimento de UNA. Resultados: As análises de ancestralidade evidenciaram o padrão miscigenado da população de Pelotas. Os indivíduos com alto risco de UNA apresentaram mediana de ancestralidade europeia significativamente maior do que os participantes com risco baixo/moderado [0.84 e 0.82, respectivamente; p = 2.13x10^-2). Notavelmente, foi identificada associação significativa do fenótipo de UNA com uma variante intrônica no gene Citocromo P450 Família 4 Subfamília B Membro 1 (CYP4B1) (rs1097611; [p = 4.88x10^-8, odds ratio (OR) = 1.8, intervalo de confiança (IC) = 1.46-2.23]. Diversas variantes em desequilíbrio de ligação com rs1097611 podem ter implicações funcionais no locus e são associadas à expressão diferencial do gene CYPB1 em múltiplos tecidos em humanos. Também foi observada associação sugestiva (5x10^-8 < p < 10^-5) com SNV situada no gene Fator de Troca de Nucleotídeo Guanina Vav 1 (VAV1) (p = 6.33x10^-6, OR = 3.16, IC = 1.92-5.20), que codifica produto com função imune. Por fim, foi possível evidenciar diversas vias relacionadas aos sistemas nervoso e imunológico potencialmente implicadas no UNA. Conclusão: Em conjunto, esses dados suportam a natureza multifatorial do UNA, apoiando a hipótese da participação do sistema imune e de vias de neurotransmissão nos comportamentos de consumo da droga. Estudos como este, com indivíduos de grupos étnicos subrepresentados, são fundamentais para identificar novas variantes associadas ao UNA.

A caprino-ovinocultura são atividades prevalentes no Nordeste brasileiro. No entanto, esses animais sofrem com doenças infectocontagiosas como a linfadenite caseosa (LC), causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, que apresenta dificuldade no tratamento. Compreender o comportamento de fatores promotores de ressuscitação (Rpf) pode auxiliar nessa problemática, sendo também indicada relação entre a capacidade de produzir biofilme e a expressão de rpf. Para observar a expressão de rpfB nessa bactéria, como um possível alvo terapêutico, buscou-se avaliar a expressão desse gene nas cepas CAP3W e CAPJ4 de C. pseudotuberculosis, não produtora e produtora de biofilme, respectivamente. Para as análises foram realizados cultivos dessas cepas em caldo BHI nutritivo e em estresses oxidativo e ácido. Os estresses foram aplicados no início e meio da fase exponencial, assim como foram coletadas alíquotas em tempos pré-determinados. As alíquotas foram armazenadas a -70 ºC em TRI Reagente®, realizou-se extração de RNA que foi convertido a cDNA, sendo utilizado para avaliar a expressão de rpfB por RT-qPCR. Houve expressão de rpfB em ambas as cepas e em todas as condições analisadas. No cultivo nutritivo, observou-se expressão significativa de rpfB nas primeiras horas na cepa CAPJ4. Os estresses ácido e oxidativo induziram expressão significante do gene na cepa CAPJ4 na ressuscitação, exceto o oxidativo no início da fase exponencial. Com isso, podemos afirmar que as cepas de C. pseudotuberculosis estudadas apresentaram expressão de rpfB nas condições avaliadas. A cepa CAPJ4, conhecida por sua capacidade na formação de biofilme, se destacou na produção de rpfB.

O glioblastoma (GBM) é o tumor cerebral mais agressivo e resistente ao tratamento. No microambiente GBM, a interação com a microglia está associada à desregulação de citocinas, quimiocinas e miRNAs, que contribuem para angiogênese, proliferação, anti-apoptose e quimiorresistência. O flavonoide rutina tem demonstrado ser capaz de induzir a inibição do crescimento de células de glioma de rato associado à ativação microglial e produção de mediadores pró-inflamatórios por mecanismos ainda pouco esclarecidos. Caracterizar os mecanismos antitumorais e imunomodulatórios do flavonoide rutina em células de glioma em interação indireta com microglias e a relação com expressão de miRNAs. Para tanto foram utilizadas células de GBM humanas GL15 e microglias humanas da linhagem C20. A viabilidade celular foi analisada pelo teste de MTT em ambos os tipos celulares tratadas ou não com rutina (1-50 μM) por 24 h. A capacidade de migração de células GL-15 após tratamento com rutina (30 µM) foi analisada por microscopia de interferência em ensaio de lesão em monocamada. A expressão do miR-125b em células GL15 tratadas ou não com rutina (30 µM) e no secretoma foi avaliada 24 h após o tratamento por RT-qPCR. A expressão de mRNA para citocinas IL-1β, IL-6, IL-10, TNF e para a proteína sinalizadora STAT3 em microglia C20 controles, tratadas com meio condicionado de GL-15 em condições controle (MCGC) ou tratadas com meio condicionado de GL-15 tratadas com rutina (MCGR) foi avaliada 24 h após o tratamento por RT-qPCR. Adicionalmente, a expressão de proteína STAT3 nas células GL15 e C20, nas diferentes condições, foi avaliada por western blot, e a morfologia das células foi analisada por microscopia de interferência. Foi observado que rutina (30-50 μM) reduziu significativamente a viabilidade das células GL15 (50%) após 24 h, e aboliu a migração após 48 h, no entanto, não afetou a viabilidade de microglias. Somado a estes, o tratamento de células GL15 com rutina reduziu significativamente a expressão de miR-125b e da proteína STAT3. Por outro lado, microglias submetidas ao MCGR apresentaram alterações morfológicas sugestivas de reatividade e apresentaram redução na expressão de mRNA para IL-6, TNF e STAT3 e da proteína STAT3. Os resultados deste estudo reiteram o potencial antiglioma do flavonoide rutina e revelam a sua propriedade em modular a expressão de onco miRNA-125b que, pelos estudos de interação indireta com microglias, deve implicar na modulação do perfil inflamatório destas células para um fenótipo mais responsivo antitumoral. 

O mieloma múltiplo (MM) é a segunda neoplasia hematológica mais frequente, decorrente da proliferação de plasmócitos produtores de proteína monoclonal, afetando majoritariamente a população idosa. Na última década, os avanços terapêuticos têm possibilitado aumento da sobrevida global dos pacientes, contudo a doença permanece incurável. Protocolos terapêuticos combinando agentes alquilantes, imunomoduladores, imunossupressores e imunoterapia induzem a uma alteração imunológica ainda pouco compreendida. O objetivo deste estudo foi caracterizar subpopulações linfocitárias em pacientes com Mieloma Múltiplo elegíveis ao Transplante Autólogo de Células-Tronco Hematopoiéticas (TACTH), utilizando a terapia de primeira linha com ciclofosfamida, talidomida, dexametasona associado ao daratumumabe (CTd-Dara), anticorpo monoclonal anti-CD38. Entre 2018 e 2022, 23 pacientes com MM recém-diagnosticados tiveram seus perfis linfocitários analisados em cinco momentos distintos e a resposta terapêutica monitorada por Next-Generation Flow (NGF), através da pesquisa de doença residual mensurável (DRM). Observou-se que o tratamento induziu mudanças significativas no perfil linfocitário, com destaque para a diminuição de linfócitos B e células NK. A composição das subpopulações de linfócitos B alterou significativamente ao longo do tratamento. Na avaliação de variáveis prognósticas, a expressão da molécula CD38 na superfície dos plasmócitos, revelou-se um marcador promissor, correlacionando-se a menores níveis de DRM para esta terapia e ao sistema R-ISS. Embora as subpopulações linfocitárias e as Células Tumorais Circulantes (CTCs) não tenham alcançado significância estatística em termos prognósticos, elas indicam um padrão que merece uma investigação mais aprofundada. Estes resultados enriquecem nossa compreensão sobre os efeitos imunomoduladores de terapias no MM e sinalizam caminhos para otimizar tratamentos e monitoramento de pacientes.

Introdução: A Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) é uma condição inflamatória associada à infecção pelo SARS-CoV-2. É caracterizada por febre, sintomas gastrointestinais proeminentes, manifestações mucocutâneas, sintomas respiratórios e choque. A ocorrência de SIM-P pode estar associada a erros inatos da imunidade, que afetam seletivamente a resposta imune do hospedeiro contra o SARS-CoV-2. Objetivo: Identificar variantes em genes envolvidos em condições autoinflamatórias primárias que podem ser determinantes para a SIM-P. Métodos: Foram coletadas células e informações clínicas e laboratoriais de 21 pacientes pediátricos com SIM-P, recrutados em três hospitais públicos da região Nordeste do Brasil. Os casos de SIM-P foram classificados como graves ou moderados, considerando-se a necessidade ou não, respectivamente, de Ventilação por Pressão Positiva (PPV) e/ou medicação vasopressora. Em seguida, foi realizado sequenciamento total do exoma (WES) dos indivíduos e aplicada estratégia de priorização de Variantes de Nucleotídeo Único (SNVs) com potencial deletério, com foco em 56 genes previamente implicados em doenças autoinflamatórias (de acordo com o Comitê de Imunidade da União Internacional das Sociedades de Imunologia, 2022). Resultados: Nove indivíduos apresentaram a forma moderada da SIM-P, enquanto os outros 12 foram incluídos no grupo de SIM-P grave. Na abordagem de priorização de variantes, foram identificadas 6 SNVs em 5 genes diferentes (ADAM17, CARD14, IKBKG, PSTPIP1 e SH3BP12). Todas essas variantes foram encontradas em crianças/adolescentes com a forma grave da SIM-P. Notavelmente, foram selecionadas duas variantes (rs1200631089 e rs144458353) no gene ADAM17. Tal gene codifica uma protease implicada no processamento do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e desempenha papel fundamental na infecção pelo SARS-CoV-2, clivando a Enzima Conversora de Angiotensina 2 (ECA-2), o principal receptor humano para o SARS-CoV-2. Conclusão: Nossos dados sugerem que variantes deletérias raras em genes previamente implicados em condições autoinflamatórias, incluindo ADAM17, IKBKG, PSTPIP1, SH3BP2 e CARD14, podem explicar a ocorrência de SIM-P em crianças e adolescentes brasileiros previamente sadios.

Introdução: A pandemia global de COVID-19 resultou em milhares de casos e óbitos em todo o mundo. A disseminação ampla e contínua do vírus SARS-CoV-2 em todo o mundo, propiciou condições para o surgimento de novas variantes. Crianças e adolescentes desempenham um papel importante na propagação do vírus. No Brasil, as variantes Gama, Delta e Ômicron estavam amplamente presentes, porém, há escassez de dados sobre o impacto dessas variantes nesse grupo demográfico. Assim, compreender as implicações dessas variantes na evolução da COVID-19 em crianças e adolescentes se torna crucial. Objetivo: Descrever as características clínicas e epidemiológicas dos pacientes menores de 18 anos com COVID-19 atendidos em um hospital privado, no município de Salvador, durante o período de maior prevalência das variantes Gama, Delta e Ômicron. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo que incluiu 619 participantes com 0 a 17 anos atendidos na emergência pediátrica do hospital. Foram coletados dados clínicos, laboratoriais e informações sobre internamento e óbito através de consulta aos prontuários eletrônicos. Resultados: Foi observado uma distribuição de casos confirmados para COVID-19 semelhante entre os períodos de prevalência da variante Gama e Ômicron, porém uma redução de casos durante o período de prevalência da variante Delta. Isso foi observado para as hospitalizações em UTI. A mediana do tempo de início dos sintomas variou entre 3 e 4 dias. Os principais sintomas relatados foram febre, tosse, coriza e Cefaléia. Tosse foi mais prevalente durante o período das variantes Delta e Ômicron. Foram observadas poucas comorbidades, ausência de mortalidade e apenas um caso de síndrome inflamatória multissistêmica (SIM-P) no período do estudo. Em relação aos marcadores inflamatórios, um aumento significativo da proteína C reativa associado à variante Ômicron, indicando um maior processo inflamatório ou infeccioso. Na avaliação do hemograma, os níveis de monócitos mostraram diferença entre os períodos, sugerindo que no período de Prevalência da variante Ômicron ocorreu uma resposta imune mais ativa. Conclusão: Este estudo oferece uma compreensão detalhada das características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais das variantes do SARS-CoV-2 em pacientes pediátricos, enfatizando a
necessidade contínua de vilância e pesquisa para enfrentar as evoluções da COVID-19. 

Exacerbações graves da asma levam a perda na qualidade de vida e altos custos para o SUS. Existem pacientes que mesmo sob tratamento apropriado não alcançam o controle da asma, o que pode ser ocasionado por variações genéticas. Estudos farmacogenéticos buscam identificar variantes interferindo na resposta ao tratamento. Neste âmbito, estudos visando identificar marcadores genéticos associados ao tratamento da asma são frequentes, especialmente em genes que são alvo terapêuticos, como os glicocorticoides e broncodilatadores β2-adrenérgicos. Objetivo: Avaliar o impacto de variantes em genes candidatos associadas à exacerbações graves de asma e fenótipos clínicos e funcionais da doença. Métodos: A princípio foi realizado uma revisão sistemática e metanálise em genes candidatos para exacerbações e resposta ao tratamento (ADRB2, GLCCI1, CRHR1, NR3C1). Foram pesquisados artigos até fevereiro de 2022 no PUBMED e Cochrane Library com os fenótipos e variantes de interesse. A metanálise foi realizada para a variante rs1042713 do ADRB2 utilizando o software RStudio 4.1.2. Foi realizado também um estudo de genes candidatos em 172 adultos participantes de uma coorte de exacerbação grave de asma, onde foram realizadas avaliações clínicas, coleta de material biológico, avaliação da função pulmonar e acompanhamento com equipe especializada no ProAR por um ano. Foi realizada a genotipagem de variantes no ADRB2 (rs1042713, rs1042714), ADCY9 (rs2601814,rs2601796) e NR3C1 (rs41423247,rs10052957). Foram realizadas regressões logísticas multivariadas para avaliar as associações entre as variantes estudadas com exacerbações e outros fenótipos funcionais. As análises estatísticas foram realizadas no PLINK V.1.9, RStudio, SPSS V.20, Graphpad Prism 20, além de outras plataformas online. Resultados: Os dados da metanálise demonstraram que o gene mais replicado para exacerbações é o ADRB2 (rs1042713) e que essa variante, alelo A (Arg) está associada posit ivamente com exacerbação em crianças quando estratificada por tratamento. Essa mesma variante foi também associada positivamente com exacerbação grave de asma na nossa coorte de exacerbação (OR 4.10 IC: 1.47-11.4, 7.19 IC:2.05-25.1, modelo aditivo e dominante, respectivamente), rs1042714 foi também associado com exacerbação, mas antes do acompanhamento no estudo (OR 1.79, IC 1.07-3.01), o rs2601814 (ADCY9) foi negativamente associado com o uso de corticosteroide oral e com asma não controlada, além do genótipo GG ter sido associado com um menor nível de neutrófilos no sangue. O rs10052957 (NR3C1) foi negativamente associado com uso de corticosteroide oral e com exacerbações graves antes do acompanhamento. Duas outras variantes não foram associadas significantemente com nenhum dos fenótipos analisados (rs41423247 e rs2601796). Conclusão: A variante rs1042713 vem se estabelecendo cada vez mais como um fator de risco para exacerbações graves de asma, devendo ser melhor estudada a fim de elucidar melhor os mecanismos pelo qual atua e começar a ser usada como uma variante preditiva. 

As exacerbações graves da asma são definidas como a piora dos sintomas respiratórios e podem causar morte. No entanto, ainda faltam biomarcadores preditivos para esse desfecho. Nosso objetivo foi realizar estudos de associação genômica ampla (GWAS) para exacerbações graves de asma, e avaliar seu papel funcional. Adicionalmente, integrar dez algoritmos de Machine Learning usando uma lista dos principais Single Nucleotides Variants (SNVs) do GWAS anterior em indivíduos com asma ou asma grave com o objetivo de criar painéis genéticos preditivos de exacerbações graves. O GWAS para exacerbações graves de asma foi realizado em 727 brasileiros com asma, incluindo 12 milhões de variantes genéticas. A exacerbação foi definida como uso de corticoide sistêmico ≥ 3 dias e/ou consulta de emergência e/ou internação hospitalar no último ano. A replicação do GWAS para exacerbações graves foi avaliada no U-BIOPRED, GALA II e SAGE. Os efeitos epigenéticos das variantes foram avaliados in silico. As variantes com valor de p <0,05 no GWAS foram filtradas e modelos de predição integrativa foram construídos usando dez algoritmos de Machine Learning. Também foi feito um GWAS para falha terapêutica em 364 brasileiros com asma grave, seguido pela predição integrativa. As variantes intergênicas G-rs55670125, G-rs10854420, C-rs68160941, A-rs11910414 e A-rs35834033 estavam em completo desequilíbrio de ligação e estão associadas com exacerbações graves de asma (Odds ratio (OR): 2,5; valor de P: 3,47 e-8). Essas variantes estão localizadas próximas ao gene CXADR (receptor de coxsackievirus e adenovírus) no cromossomo 21. Nossos achados não foram validados na população U-BIOPRED, GALA II e SAGE. Quatro dos SNVs identificados foram associados à modificação de histonas de H3K4me1, que foi previamente associada à patogênese da asma. O melhor algoritmo preditivo foi o XGBoost, neste 68 variantes genéticas foram consideradas mais importantes para predizer efetivamente exacerbações graves de asma em indivíduos com asma, apresentando 80% de acurácia. Para indivíduos regularmente tratados com corticosteróide inalatório e Beta-agonistas de longa ação, o melhor algoritmo preditivo foi o C5.0, que considerou 14 variantes preditivas com acurácia de 81%. Esses painéis podem auxiliar na prática clínica na população brasileira. É necessário validar este método em outras populações.

Introdução: A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada com grande impacto na saúde pública; A infecção crônica pelo Schistosoma mansoni está associada a polarização da resposta imunológica do tipo 2, no entanto este helminto explora vias imunoregulatórias como mecanismos de sobrevivência. O objetivo deste estudo foi analisar a assinatura regulatória mediada pelos linfócitos T regulatórios (Treg) de indivíduos infectados por S. mansoni. Materias e Métodos: Os indivíduos recrutados, são residentes em uma área endêmica
em esquistossomose na Bahia, município do Conde, a aproximadamente 150 Km da Capital, Salvador. Após avaliação parasitológica, observou-se uma prevalência de 24,21% de infecção pelo S. mansoni. Para avaliação imunológica, foram recrutados 19 indivíduos, sendo 12 (63,1%) infectados pelo S. mansoni e 7 (36,8%) não infectados, no momento do recrutamento. Os linfócitos regulatórios foram obtidos a partir de PBMC e estimulados com o antígeno solúvel do ovo do S. mansoni (SEA), para avaliação fenotípica e das citocinas intracelulares por citometria de fluxo. Em seguida, as células Treg depletadas utilizando-se beads magnéticas por seleção positiva, para utilização em culturas  depletadas de linfócitos Treg. Nestas culturas, os níveis de IL-10, IL-13 IL-17 e IFN- foram avaliados por ELISA. Resultados: Observamos maiores frequências dos linfócitos Treg (TCD4+ CD25+ FoxP3+), bem como maior expressão de IL-10 e TGF-β por estas células, no grupo de indivíduos infectados. Neste mesmo grupo, houve maiores frequências dos linfócitos TCD4+CD25+FoxP3+PD-1 +, ao tempo em que não houve diferença na expressão de CTLA-4 por estas células. Aumento na expressão do PD-1 e TGF-β também foram observados nas populações dos linfócitos T não regulatórios (CD4+CD25LowFOXP3neg) sugerindo que, algumas vias de regulação pode não ser exclusivas das populações Treg. Indivíduos infectados pelo S. mansoni tem maiores níveis no sobrenadante de PBMC de IL-10 e IL-13 e menores níveis de IFN-, comparados aos indivíduos não infectados. A depleção de células Treg reduziu os níveis de IL-10 e IL-13, ao passo em que não alterou os níveis de IFN-  no grupo de indivíduos infectados. Conclusão: A regulação mediada pelo S. mansoni parece envolver as vias da IL-10, TGF-β, PD-1, e as células Treg parecem ter um papel fundamental no controle da produção de IL-10 e IL-13. Estes resultados ampliam nossos conhecimentos sobre as vias exploradas por esses parasitos para sobreviverem no hospedeiro. 

A ativação microglial desempenha papel crucial na patogenia de doenças neurodegenerativas (NDD), e o controle desta ativação têm sido alvo de investigações como estratégia ao desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para NDD. A agatisflavona, purificada de Cenostigma pyramidale (Tul.), demonstrou ser neuroprotetora em modelos in vitro de excitotoxicidade induzida por glutamato e danos inflamatórios. No entanto, o papel potencial da regulação microglial por agathisflavone nesses efeitos neuroprotetores ainda não está claro. Neste trabalho, nós investigamos em células microgliais do córtex de ratos e em células microgliais de linhagem humana induzidas ao dano inflamatório, os efeitos da agatisflavona em modular a resposta inflamatória com vistas a elucidar mecanismos de neuroproteção. Para isto, culturas de microglias humanas da linhagem C20 e microglias isoladas do córtex de ratos Wistar recém-nascidos foram expostas a oligômeros do peptídeo β-amilóide (500nM) por 4h ou a lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS, 1µg/mL) por 24h e então tratadas ou não com agatisflavona (1µM) por 24h. Culturas de células neuronais PC12 foram expostas ao meio condicionado da microglia de rato (MCM) tratado ou não com agatisflavona. Em um primeiro trabalho, observamos que o LPS induziu a microglia a assumir um estado inflamatório ativado (CD68 aumentado, com fenótipo mais arredondado/amoebóide). No entanto, a maioria das microglias expostas ao LPS e agatisflavona apresentaram um perfil anti-inflamatório (CD206 aumentado e fenótipo ramificado), associado à redução da expressão de NO, GSH, inflamassoma NRLP3, IL1-β, IL-6, IL-18, TNF, CCL5 e CCL2. O docking molecular também mostrou que a agatisflavona se ligou ao domínio inibitório NLRP3 NACTH. Além disso, nas culturas de células PC12 expostas ao MCM previamente tratado com o flavonoide, a maioria das células preservaram os seus neuritos e aumentaram a expressão de β-tubulina III. No segundo trabalho, observamos que o β-amilóide e o LPS induziram as culturas de microglia a assumir um estado inflamatório ativado, com aumento na expressão de miR-146a e miR-155 e dos mediadores inflamatórios IL1-β, IL-6 e NOS2. No entanto, nas células expostas ao dano inflamatório e tratadas com agatisflavona, observamos redução significativa na concentração de miR146a e miR-155, bem como das citocinas inflamatórias avaliadas. Observamos também nas células estimuladas apenas com β-amilóide, um aumento na relação das proteínas sinalizadoras p-STAT3/STAT3, e nas células estimuladas com β-amilóide e tratadas com flavonoide, redução nesta relação. Assim, estes dados reforçam a atividade anti-inflamatória e o efeito neuroprotetor da agatisflavona, associados ao controle do inflamassoma NLRP3 e de mediadores inflamatórios, com destaque também ao seu potencial na regulação de miRNAs associados a neuroinflamação. Estes resultados fortalecem o potencial deste flavonoide como uma molécula promissora ao tratamento ou a prevenção de doenças neurodegenerativas.

Úlceras crônicas de perna (CLU) são complicações microvasculares comuns em pacientes com anemia falciforme. CLUs são recalcitrantes e na ausência de tratamento podem levar à amputação dos membros inferiores. As células estromais do tecido adiposo (ASC) representam uma alternativa para o tratamento de CLUs, devido a sua capacidade de secretar mediadores solúveis envolvidos no reparo tecidual. Desta forma, avaliamos os efeitos do secretoma de ASC em modelo in vitro de células endoteliais do cordão umbilical (HUVECs) e em modelo in vivo com camundongos C57BL/6 transgênicos e camundongos Towness falciformes. Nosso trabalho observou que o secretoma de ASC pré-condicionado em normóxia (condição com 20% de oxigênio) e hipóxia (condição com 5% de oxigênio) apresentou em sua composição marcadores de regeneração tecidual (ex: VEGF, MCP1, IL-8 e Angiogenina). A análise in vitro demonstrou que ambos os meios condicionados (MCs) exerceram ação anti-apoptótica e angiogênica em HUVECs, com melhor desempenho das células tratadas com MC em normóxia. Nosso modelo in vivo utilizando camundongos C57BL/6 transgênicos revelou aceleração do processo cicatricial de feridas tratadas com os MCs. Considerando que o nosso produto terapêutico apresentou melhor desempenho em condições de normóxia, analisamos o potencial terapêutico do MC normóxia em modelo de cicatrização com camundongos falciformes. Neste trabalho, buscamos avaliar o efeito pró- angiogênico e imunomodulatório em peles tratadas com o MC através das técnicas de imunohistoquímica, imunofluorescência e RT-PCR. Nossos resultados revelaram que a administração do MC foi capaz de estimular o processo de cicatrização através da redução da inflamação local, aumento do número de fibroblastos e maior produção de colágeno, bem como através da redução de transcritos inflamatórios, evidenciando o efeito terapêutico do MC
sobre a imunomodulação. 

A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas multifatorial. Sua heterogeneidade e a variabilidade da resposta ao tratamento são as principais barreiras para o sucesso do manejo adequado de determinados tipos de pacientes asmáticos. O objetivo principal do estudo foi realizar a modelagem computacional predição de painéis genéticos no desenvolvimento de asma e de seus endofenótipos, utilizando técnicas de machine learning. A coorte do ProAR incluiu indivíduos adultos com diagnóstico de asma. A análise de classe latente foi usada para agrupar indivíduos em diferentes fenótipos de asma com base em variáveis. O estudo se concentrou em 1.009.762 SNVs usando o algoritmo Boruta para seleção de variáveis. Dez algoritmos diferentes foram empregados para desenvolver modelos preditivos (KNN, NB, ANN, SVM, CART, C5.0, Bagging, AdaBoost, RF e XGBoost) para identificar com precisão os pacientes com asma e seus subtipos. O painel genético preditivo da asma em geral foi concluído com 155 variantes de nucleotídeo único, com 91,18% de precisão, 92,75% de sensibilidade e 89,55% de especificidade usando o algoritmo support vector machine. Além do mais, nosso estudo diferenciou subtipos distintos de asma e a partir desses definimos painéis genéticos com alta performance. Dessa forma, o aprendizado de máquina pode ser uma ferramenta útil na pesquisa de resultados complexos, capaz de auxiliar na predição da asma e contribuir para a personalização do manejo clínico.

A Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria intracelular responsável pela doença Linfadenite caseosa em ovino e caprinos que trazem grandes prejuízos econômicos a agropecuária. A resistência de C. pseudotuberculosis dentro de macrófagos, durante a infecção, aponta para a ativação de mecanismos moleculares envolvidos na adaptação aos estresses gerados pelo hospedeiro. Proteínas de choque térmico (HSPs) tem demonstrado importante papel dessas moléculas no aumento da resistência microbiana sob condições de estresse durante a infecção, além de serem imunologicamente importantes por serem reconhecidas pelo hospedeiro, são, portanto, capazes de induzir resposta da imunidade celular e humoral em mamíferos. Esta pesquisa tem por objetivo identificar e avaliar a expressão de possíveis genes de HSPs em C. pseudotuberculosis como resposta ao estresse que possam contribuir para o entendimento dos mecanismos resistência, virulência e patogenicidade utilizado por esse patógeno, e compará-los à condição fisiológica. O estudo simulou in vitro cinco condições de estresse (ácido, térmico, óxido nítrico, osmótico e oxidativo) com duas concentrações em três tempos de exposição (15min, 30min, 45 min) para avaliar a resistência de C. pseudotuberculosis. Três diferentes linhagens foram utilizadas: T1(atenuada), ER1409 (virulenta) e CapJ4 (76) (forte produtor de biofilme). As linhagens foram cultivadas em BHI monitorado o crescimento e isoladas alíquotas na fase exponencial inicial (DO600nm= 0,2) as quais foram submetidas aos estresses em seguida extraídos o RNA total. Os cDNAs gerados por transcrição reversa foram submetidos a ensaios de RT-qPCR (quantitative PCR) para quantificação dos 5 genes HSPs (ClpB, DnaJ, Hspr, Hsp10, Hsp65). Os resultados alcançados sugerem que as cepas ER1409 e CapJ4 (76) teve maior adaptabilidade apesar de apresentarem uma discreta perda de potencial replicativo que foi observado através da taxa de sobrevivência. Estas tiveram maior
número de transcritos (Hsp65, Hsp10, HspR. Cpl -B, DnaJ) durante diferentes estresses. Essas HSPs estão envolvidos na resposta adaptativa, no crescimento bacteriano, e na virulência exercendo papel promissor na ativação do sistema imunológico. A descoberta da participação destes genes na resposta as condições
celulares estressante s do hospedeiro podem auxiliar na busca de novos tratamentos para a linfadenite caseosa, através da possível redução na expressão destes genes de resistência, assim como novos mecanismos de combate a doença. 

A periodontite é uma doença inflamatória crônica caracterizada pela destruição dos tecidos de sustentação dos dentes e desencadeada pela resposta imune do hospedeiro à presença de um biofilme subgengival disbiótico. Dentre as diversas moléculas produzidas no processo patogênico da periodontite, enzimas proteolíticas, como as metaloproteinases (MMP) têm um papel de destaque na destruição tecidual. Este estudo transversal buscou avaliar a associação de SNV de genes das MMP 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14 e 16 com a periodontite em indivíduos maiores de 18 anos. A genotipagem SNV foi realizada através do Multi Ethnic Global Array. A associação das frequências genotípicas dos SNP de MMP com a periodontite foi investigada por meio de análise bivariada e múltipla, nos modelos aditivo, dominante e recessivo, considerando-se as SNV como exposição e a periodontite como desfecho. Covariáveis relacionadas a características socioeconômico-demográficas, de comportamento de estilo de vida e condições de saúde geral e bucal foram obtidas por meio de um questionário. Além disso, foram analisadas a expressão de locus de traço quantitativo (eQTL) e o desequilíbrio de ligação (LD). Não houve associação de genes das MMP 2, 3, 7, 8, 12,13 e 14 com a periodontite nos modelos testados. Houve associação positiva entre o SNV rs2071230 (G) da MMP-1 e a periodontite no  modelo aditivo (OR=1,42 e IC [95% 1,002-2,03]). Houve associação negativa entre a periodontite e o SNV da MMP-9 rs13925 (alelo A) no modelo dominante (OR=0,56 e IC 95% [0,33-0,95]), e os SNV da MMP-16 rs10097366 (alelo G) no modelo recessivo (OR=0.01; IC 95%=0.01-0.98) e rs6994019 (alelo A) nos modelos aditivo (OR=0.71; IC 95%=0.52-0.97) e recessivo (OR=0.53; IC 95%=0.29-0.95). Foi observada associação positiva com as variantes da MMP-16: rs13261974 (alelo G) nos modelos aditivo (OR=1.42; IC 95%= 1.03-2.00) e dominante (OR=1.67; IC 95%= 1.04-2.70), rs28986473 (alelo G) nos modelos aditivo (OR=2.472; IC 95%= 1.05-5.79) e dominante (OR=2.472; IC 95%= 1.05-5.79) e rs9771895 (alelo A) no modelo recessivo (OR= 1.75; IC 95%= 1.04-2.96). Na comparação in silico da expressão quantitativa em sangue total, o alelo G mostrou uma maior expressão em homozigose do que em heterozigose (p<0,01) para rs13925 da MMP-9. Tanto no gene da MMP-9 quanto no da MMP-16, muitos SNV estavam em alto desequilíbrio de ligação. Variantes em genes da MMP-9 e da MMP-16 aumentam a chance de ocorrência de periodontite. 

O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica ocasionada por uma proliferação desregulada dos plasmócitos na medula óssea, que atinge geralmente pacientes com idades superiores aos 50 anos. Atualmente é a 2o oncohematologia mais frequente e responsável por 1% dos tipos de câncer no mundo. Para o estadiamento do mieloma os médicos responsáveis devem seguir os critérios do Sistema de Estadiamento Internacional (ISS), sendo o mielograma apresentando a infiltração de plasmócitos (>10%) um método observador dependente e que consome tempo considerável do profissional médico hematologista. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e treinar uma Inteligência Artificial para identificação de Plasmócitos e células nucleadas Não Plasmocitárias em lâmina de Medula Óssea de pacientes com diagnóstico de Mieloma Múltiplo. O setor de Imunofenotipagem do Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular (LABIMUNO-UFBA) disponibilizou lâminas de medula óssea codificadas de portadores de MM. A partir destas, foi realizada a aquisição das imagens por meio de aparelho celular acoplado ao microscópio para produção de banco digital de imagens. As imagens foram rotuladas com marcação de plasmócitos e outros grupos de células. As rotulações foram validadas por médicos e especialistas em hematologia. As imagens do banco passaram por processo de normalização para obter um padrão que facilitasse a visão computacional. Por fim, as imagens alimentaram o aprendizado profundo de máquina para desenvolvimento de IA. Com isso, foi possível obter um banco de imagens digital de lâminas de medula óssea de indivíduos com diagnóstico de MM, contendo imagens de plasmócitos e outros grupos celulares nucleados devidamente rotulados, que permitiu o avanço do projeto que inclui o desenvolvimento de uma IA com capacidade de identificação de plasmócitos e outros grupos celulares nucleados em imagens de lâmina de medula óssea. Uma IA com esta proposta poderá auxiliar a equipe médica na avaliação morfológica e quantitativa de células para o diagnóstico microscópico mais efetivo.

A leishmaniose é uma doença endêmica na América do Sul e Central, África e Ásia, causada por uma variedade de espécies de parasitos do gênero Leishmania. Atualmente, 88 países de clima tropical e sub-tropical são afetados pela leishmaniose, sendo somente em 32 desses países a doença considerada de notificação compulsória, tendo assim um número substancial de casos não reportados. A resposta imune para este parasito é do tipo Th1, que é importante para ativação dos macrófagos e eliminação da Leishmania, mas também é a principal responsável pela patogênese da doença tegumentar, principalmente no que se refere à lesão tecidual. Por outro lado, antígenos derivados de parasitos com potencial modulatório da resposta imune, a exemplo do antígeno Sm29 do Schistosoma mansoni, vêm sendo avaliados quanto ao potencial em regular a exacerbação da resposta imune em doenças imuno-mediadas.  O objetivo deste estudo é avaliar o efeito do antígeno do S. mansoni Sm29 na infectividade de macrófagos derivados de monócitos in vitro infectados com L. braziliensis e analisar a secreção de citocinas e quimiocinas. Como resultado, foi observado que a adição do antígeno Sm29 só alterou a infectividade dos macrófagos pela L. Braziliensis quando adicionado antes da infecção. Foi visto também que no sobrenadante a produção das citocinas TNF e IL-10 e das quimiocinas CXCL9 e CXCL10 não tiveram alteração nas culturas infectadas e estimuladas com Sm29. Os resultados sugerem que o efeito regulatório já conhecido induzido pela proteína Sm29 em induzir a produção IL-10, não ocorreu nas fases iniciais da infecção dos macrófagos por L. Braziliensis, possivelmente precisando do envolvimento de outras células do sistema imune ou uma ativação prévia à infecção. 

A neuroinflamação é característica de doenças neurodegenerativas, resultante da liberação de moléculas pró-inflamatórias por células gliais. Receptores nucleares, como o receptor de glicocorticoide (GR), são fatores de transcrição com ampla variedade de efeitos, incluindo efeito regulatório na neuroinflamação. GR é um dos principais fatores de transcrição regulatórios e seu maior nível de expressão é no sistema nervoso central. O biflavonoide agathisflavona é um dímero de apigenina, ambos com ação neurogênica, neuroprotetora e anti-inflamatória demonstradas em modelos in vitro de toxicidade induzida por glutamato e isquemia cerebral. Entretanto, seus mecanismos de ação ainda são pouco elucidados. O objetivo deste estudo foi investigar se a ação anti-inflamatória de agathisflavona é mediada por GR. Foi utilizado modelo in vitro de neuroinflamação induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em cultura primária de astrócitos e microglia corticais de ratos neonatos. As células foram tratadas com LPS (1 μg/mL), associado ou não a agathisflavona (1 μM), e na presença ou não de mifepristona (RU486; 1 μM), antagonista de GR. O perfil inflamatório microglial, foi avaliado por imunofluorescencia para molécula adaptadora ionizada de ligação ao cálcio (Iba-1), marcador microglial no sistema nervoso e para CD68, marcador de perfil pró-inflamatório microglial. O perfil inflamatório astrocitário foi avaliado por imunofluorescência e Western Blot para a proteína ácida fibrilar glial (GFAP). A ramificação microglial foi aumentada em resposta ao tratamento com agathisflavona, efeito inibido na presença de mifepristona. A expressão de CD68 foi reduzida em resposta ao mesmo tratamento, efeito inibido na presença de mifepristona. A expressão relativa de GFAP foi reduzida em resposta ao tratamento com agathiflavona, efeito inibido na presença de mifepristona. Estes resultados sugerem que agathisflavona modula a o perfil inflamatório microglial e astrocitário de forma dependente da atividade de GR após estímulo inflamatório, contribuindo para elucidação de seu mecanismo de ação molecular.

Os astrócitos participam ativamente da regulação redox no cérebro. O desequilíbrio entre a superprodução de espécies reativas e mecanismos antioxidantes, pode resultar na astrogliose reativa. A astrogliose associada ao estresse oxidativo, pode promover mudanças na morfologia e na função celular, redução da atividade enzimática e aumento de citocinas e mediadores inflamatórios. Nesse contexto, os flavonoides, que possuem propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, são candidatos promissores para o estudo de terapias adjuvantes em doenças que tem como fisiopatologia o estresse oxidativo. Este trabalho avaliou, in vitro, a citotoxicidade e atividade antioxidante de flavonoides e derivados de síntese (naringenina, (S) – naringenina, 7,4’-O-diprenilnaringenina, (S)-7,4’-O-diprenilnaringenina, 7-O-prenilnaringenina, naringina, hesperidina, crisina, apigenina e rhoifolina), associados ao controle da resposta inflamatória glial. A atividade antioxidante celular dos flavonoides e derivados de síntese (1, 10 e 50μM por 15min) foi determinada pela reação de eliminação do radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH). Hesperidina e o derivado diprenilado (S)-7,4’-O-diprenilnaringenina apresentaram maiores potenciais antioxidantes e naringenina e seus demais derivados prenilados apresentaram atividade antioxidante moderada após este teste livre de células em reação de 15min. Foram utilizadas culturas primárias de glia enriquecidas de astrócitos derivadas de ratos Wistar neonatos (P0-P2) expostas ao lipopolissacarídeo (LPS, 1 µg/mL por 24 h) e tratadas com as moléculas (5 ou 10 µM por 24 h). Observou-se efeito antioxidante através do aumento dos níveis de GSH, promovidos pela naringenina e seus derivados, através do teste de depleção da glutationa com o monoclorobimano após tratamentos (5 µM por 24 h). Nos níveis enzimáticos de SOD, LPS e crisina aumentaram SOD e demais moléculas não interferiram nos níveis enzimáticos. Através do teste de citotoxicidade (MTT) foi demonstrado que o derivado prenilado 7-O-prenilnaringenina (1, 10 e 50 e 100μM por 24 h) foi o mais citotóxico para as células proliferativas de GL15 (humana) e C6 (murino), no entanto sem apresentar toxicidade e mudanças morfológicas para as células da cultura primária de glia enriquecida de astrócitos. Na coloração de Rosenfeld apigenina e crisina (10 µM por 24 h), induziram mudanças morfológicas como retração do citoplasma e núcleo das células da cultura primária de glia enriquecida de astrócitos e demais moléculas atenuaram mudanças morfológicas promovidas pelo LPS (1 µg/mL) quando em tratamento concomitante. Além disso, os flavonoides e derivados de síntese (10 µM, 24 h) promoveram redução dos níveis de óxido nítrico (NO) e não induziram produção de NO em tratamento isolado. Juntos, esses achados indicam que flavonoides e derivados de síntese têm capacidade antioxidante e antineuroinflamatória significativas, in vitro, podendo ser aliados como candidatos a tratamentos adjuvantes em doenças neurodegenerativas

A hepatite C crônica (HCC) é uma das principais causas de doença hepática em todo o mundo e a persistência do vírus da hepatite C, pode causar cirrose, insuficiência hepática e carcinoma hepatocelular, além de manifestações extra-hepáticas. Há poucos trabalhos publicados sobre a caracterização das subpopulações de linfócitos B (LB) na HCC, como também não tem sido ainda bem definido um papel patogênico claro na progressão da doença hepática e na resposta terapêutica, especialmente em relação às drogas de ação direta. Objetivos: Determinar as subpopulações de LB em indivíduos com HCC e correlacionar com carga viral. Relacionar o perfil dos LB dos participantes com linfócitos T e NK. Estabelecer relações entre as subpopulações de linfócitos B e marcadores de lesão hepática, de autoimunidade e marcador tumoral. Metodologia: Nove pacientes com HCC e nove indivíduos saudáveis participaram desse estudo. A caracterização imunofenotípica das subpopulações de LB e outras subpopulações linfocíticas do sangue periférico foram determinadas por citometria de fluxo e os parâmetros bioquímicos pelo método cinético-UV, a crioglobulina sérica por crioprecipitação, autoanticorpos foram detectados por imunofluorescência indireta e a dosagem de fator reumatóide e alfa-fetoproteína foram realizadas através do método de microaglutinação automatizada. Resultados: Observamos uma frequência mais elevada de linfócitos B CD19+CD27+ IgM+ e de linfócitos B CD19+CD24hiCD38hi, que estavam inversamente correlacionadas com a carga viral nos pacientes. Quanto aos marcadores de autoimunidade, não encontramos diferenças estatística entre a presença ou ausência de crioglobulinemia e demais autoanticorpos. Conclusão: Esses dados sugerem uma maior participação dos LB na imunorregulação da HCC.

Introdução: A asma geralmente é caracterizada pela inflamação crônica das vias aéreas, cuja obstrução pode ser reversível com o uso de broncodilatadores (BD). No entantoindivíduos com asma não respondem ao tratamento o que pode, ao menos em parte, ser explicado pela variabilidade genética. Objetivos: Identificar possíveis loci farmacogenéticos relacionados à resposta ao broncodilatador (BDR) em uma população com asma. Métodos: Realizamos um GWAS, com 716 indivíduos com asma, para identificar as variantes associadas ao BDR, através da variação percentual do FEV1 após o uso do salbutamol. As variantes foram genotipadas usando chip MEGA (Illumina) com posterior imputação com painel de referência do CAAPA (Consórcio sobre Asma entre Populações com Ancestralidade Africana). Foram realizadas análises de enriquecimento de vias através do VEGAS2 e GARFIELD. Adicionalmente, foi realizada a quantificação de citocinas no sangue periférico através da tecnologia de Luminex e células T regulatórias produtoras de IL-10 foram avaliadas através de citometria de fluxo. Resultados: Considerando o resultado do GWAS três genes foram identificados através da análise das vias de enriquecimento, PTPRC, PRKCH e WWOX, nas quais apontaram o gene PTPRC envolvido com o PRKCH e o WWOX ligados a vias de processos metabólicos e comunicação celular respectivamente. Estes genes também estão ligados a mecanismos imunológicos. Seis variantes rs12406698-A (OR:2.53, IC95%:(1.70-3.75)), rs6669241-C (OR:2.53, IC95%:(1.70-3.75)), rs3754098-T (OR:2.21, IC95%:(1.57-3.12)), rs16843698-T (OR:2.43, IC95%:(1.65-3.58)), rs80120393-T (OR:2.43, IC95%:(1.65-3.58)) e rs16843712-A (OR:2.45, IC95%:(1.65-3.62)) no gene PTPRC foram associadas com BDR e níveis mais elevados de IL-10. Três variantes rs14095-G (OR:2.15, IC95%:(1.60-2.87)), rs3813410-A (OR:2.05, IC95%:(1.52-2.76)), and rs2246609-A (OR:1.80, IC95%:(1.38-2.34)) no PRKCH foram associadas a uma melhor BDR e rs2250772-C (OR:0.53, IC95%:(0.40-0.70) associadas a uma pior BDR. Três variantes rs57459665-A (OR:0.27, IC95%:(0.16-0.45)), rs75376533-C (OR:0.23, IC95%:(0.13-0.42)) e rs7200912-C (OR:0.29, IC95%:(0.17-0.51)) no WWOX foram associadas a uma pior resposta ao broncodilatador, este último SNV foi replicado na população do GALA II (OR:0.76, IC95%:(0.60-0.97)). Além disso, a rs76893638-T (OR:4,26, IC95%:(2,43-7,47)) no gene MYLIP, relacionado à miosina, foi associado a uma melhor BDR. Conclusões: Este trabalho sugere que genes associados a mecanismos imunológicos podem influenciar a resposta ao broncodilatador em pacientes com asma. Nosso estudo expande a compreensão da farmacogenética da resposta  medicamentosa em asma, fornecendo potencialmente novos alvos moleculares associados ao BDR e avança o conhecimento para a medicina de precisão na terapia da asma em poulações miscigenadas como a brasileira. 

A linfadenite caseosa (LC) é uma enfermidade que acomete principalmente pequenos ruminantes, e ainda não há vacinas que apresentem proteção significativa contra a doença tanto em caprinos quanto em ovinos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a proteína de fusão MBP:PLD:CP40 em ensaios in silico e in vivo como novo alvo imunoprofilático para a LC. Foram realizados ensaios in silico utilizando ferramentas de imunobioinformática para a construção da sequência de aminoácidos, montagem e validação da estrutura 3D, análises físico-químicas, antigenicidade, potencial alergênico, predição de epítopos específicos de linfócitos B e de peptídeos capazes de se ligarem a moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe I e II, e predição de ligação com o receptor Toll-Like 2 (TLR2). A expressão e purificação foi realizada in vitro em sistema heterólogo. 40 camundongos foram utilizados para a imunização, divididos em 4 grupos de 10 animais, com 2 imunizações ocorrendo num intervalo de 28 dias e 4 coletas de sangue ocorrendo num intervalo de 14 dias. Os animais foram desafiados 42 dias após a primeira imunização e observados por 30 dias. Foram feitas análises para a quantificação de anticorpos IgG total, IgG1 e IgG2a, além de cultivo de esplenócitos de 3 animais de cada grupo, com estímulo antigênico e posterior quantificação da expressão de IL-4, IL-12, IL-17, TNF e IFN-γ. As análises in silico demonstraram que a proteína de fusão apresentou antigenicidade sem alergenicidade, bem como a existência de vários epítopos para células B, e peptídeos capazes de se ligarem às moléculas de MHC I e II e ancoragem ao receptor TLR2. Através da clonagem e expressão da MBP:PLD:CP40, pode-se notar que a proteína tem estabilidade e apresenta o peso molecular de 115kDa. A proteína de fusão estimulou uma maior produção de IgG1 em relação a IgG2a, com estímulo significativo da expressão de mRNA de TNF e IL-17. A proteína de fusão foi capaz de proteger parcialmente os camundongos contra a infecção por C. 
pseudotuberculosis (57,14%), e pode ser considerada como um potencial novo imunógeno para o desenvolvimento de vacinas para a LC.

O Carcinoma Escamocelular Oral (CEO) representa o principal tumor da cavidade oral e apresenta alta agressividade e metástase. Particularmente no Brasil, o CEO corresponde ao quinto tumor maligno mais comum em homens. O monitoramento de células e outros marcadores sanguíneos a partir de exames convencionais pré-terapêuticos na qualidade de coadjuvantes no manejo clínico de pacientes com tumores malignos tem recebido crescente atenção devido ao seu potencial de fornecer informações prognósticas com facilidade e baixo custo. Razões neutrófilo-linfócito (NLR), linfócito-monócito (LMR) e plaqueta-linfócito (PLR), bem como a concentração de hemoglobina (HB), têm sido sugeridas como novas ferramentas com valor prognóstico para o CEO. No entanto, os principais dados são derivados de populações asiáticas, europeias e norte-americanas. Objetivo: Este estudo teve como objetivo investigar o valor prognóstico em CEO dos valores pré- operatórios de NLR, LMR, PLR, HB, contagem de glóbulos vermelhos (RBC), volume corpuscular médio (MCV), hemoglobina corpuscular média (MCH), concentração de hemoglobina corpuscular média (CMCH) e amplitude da distribuição do tamanho dos eritrócitos (RDW) em uma coorte de pacientes brasileiros com CEO. Pacientes e Métodos: Um total de 433 pacientes com CEO tratados entre 2008 e 2017 no Hospital Aristides Maltez (Salvador, Bahia) foram incluídos e avaliados retrospectivamente. Os dados foram coletados dos prontuários médicos. Para determinar os valores de cut-off dos parâmetros investigados, curvas ROC (Receiver Operating Characteristic) foram utilizadas. Em relação às razões calculadas, os valores das células foram obtidos a partir da contagem absoluta. Sobrevida global (OS), sobrevida específica da doença (DSS), sobrevida livre de doença locorregional (LRFS) e sobrevida livre de metástase (DRFS) foram analisadas usando o método de Kaplan-Meier e o teste log-rank. Análises univariada e multivariada foram realizadas por meio da regressão de Cox para analisar o quanto os parâmetros investigados estavam associados à evolução clínica dos pacientes. Resultados: A maior parte dos pacientes foi do sexo masculino (68,8%), preto ou pardo (94,5%), menor de 65 anos (68,8%), tabagista etilista (76,2%) e com estadiamentoTNM ao diagnóstico em IVA (35,9%) ou II (19,6%). O sítio anatômico tumoral mais comum foi a língua (40,4%). Durante um período médio de acompanhamento longitudinal de aproximadamente 30 meses, o evento morte ocorreu em 52,2% (n = 226) dos casos, morte por câncer em 49% (n = 212), recidiva locorregional em 24,5% (n = 106 ) e metástase à distância em 13,9% (n = 106). A análise univariada identificou valores elevados de NLR (≥ 2,1) ou PLR (≥ 131,5), assim como valores baixos de LMR (< 4,2), HB (< 13,2) e RBC (< 4,5) associados a piores OS e DSS (p < 0,05). A análise multivariada mostrou NLR com valor prognóstico independente para OS e DSS. Além disso, pacientes de estadiamento avançado (III e IV) tratados com ressecção cirúrgica que apresentavam valores elevados de NLR não melhoraram OS e DSS, ainda que submetidos a tratamento cirúrgico. Conclusão: Valores pré-terapêuticos elevados de NLR e PLR, assim como baixos valores de LMR, HB e e RBC estão associados a um desfecho clínico ruim para pacientes com CEO. A NLR apresenta potencial prognóstico para inferir resposta terapêutica no CEO, apoiando as decisões de manejo de pacientes em estadiamento clínico avançado que se beneficiariam com a cirúrgia. 

A prevalência de doenças respiratórias vem crescendo pelo mundo, dentre estas a asma e COVID-19 se destacam por afetarem uma grande parte da população mundial, com altas taxas de mortalidade e morbidade. A asma é uma doença multifatorial e complexa onde fatores genéticos e ambientais interagem para o desenvolvimento da sua imunopatologia, fisiopatologia e sintomatologia clínica. Um dos fatores que podem estar envolvidos no desencadeamento de episódios de exacerbação em asmáticos é o contato com o SARS-CoV-2; este contato pode levar a inflamações persistentes e nos casos mais graves ao remodelamento brônquico. No remodelamento brônquico ocorre o aumento de MMP-9 e ANGPT-1 que atuam diretamente na mudança na arquitetura brônquica. Essas alterações, bem como a frequência dos episódios de exacerbações estão diretamente  associadas a gravidade da asma, existe também uma associação entre polimorfismos genéticos e gravidade da doença. Assim, nosso objetivo foi avaliar como polimorfismos genéticos associados mediadores envolvidos na patologia da asma podem influenciar na sua gravidade. Para avaliar marcadores de remodelamento brônquico, fizemos um estudo incluindo 244 indivíduos participantes do WASP (Fenótipos de Asma no Mundo). Enquanto a análise de polimorfismos associados a gravidade de COVID-19 em asmáticos foi feita em 784 indivíduos do ProAR (Programa para Controle da Asma e Rinite Alérgica da Bahia). Nossos resultados mostram que polimorfismos em ANGPT-1 podem estar associados com a concentração de células inflamatórias no esputo em participantes do WASP. Na população do PROAR, polimorfismos nos genes ABO, FYCO1 e CCR9 estão associados a marcadores de gravidade em asmáticos. Assim, polimorfismos associados a medidores presentes no remodelamento brônquico e exacerbação de asma estão relacionados a gravidade da doença. 

A periodontite é um processo inflamatório consequente da disbiose do biofilme bacteriano estimulado por fatores modificáveis, relacionados ao estilo de vida, ou não modificáveis, nos quais variantes genéticas se enquadram. OBJETIVO: Realizar estudo de associação genética para identificar variantes que estejam associadas com a periodontite em uma população de Salvador. METODOLOGIA: Estudo transversal (n=506) desenvolvido em participantes do Programa para Controle de Asma na Bahia, classificados com presença(n=117) ou ausência(n=389) de periodontite, de acordo com critérios de Gomes Filho et al.(2007). Genotipagem foi realizada usando Illumina Multi-Ethnic Global Array (MEGA, Illumina), que inclui mais de 1,5 milhões de variantes. Foram realizados estudos para o melhor modelo de ajuste das análises, dos indicadores de risco, de associação positiva ou negativa de genes candidatos e estudo de ampla varredura genômica para associação com a periodontite. RESULTADOS: O melhor modelo de ajuste para regressão logística inclui as variáveis idade, escolaridade, obesidade, respiração pela boca, uso do fio dental e asma. Obesidade, o não uso de fio dental e asma são indicadores de risco para desenvolvimento da periodontite. Alelo A no rs75985579 do gene IFI16 está associado positivamente e alelo G no rs76457189 do gene AIM2 está associado negativamente com periodontite. A interação entre essas variantes apresentou que a presença dos 2 alelos de risco aumenta em mais de quatro vezes as chances de ter periodontite em comparação com indivíduos que possuem 1 ou nenhum dos alelos de risco (ORajustado = 4,61; IC 95% = 1,03 - 20,59; valor de p = 0,017). No estudo de ampla varredura genômica, há associação estatisticamente significativa entre rs10496038-T do gene RTN4, rs58327429-C e rs67797971-A do gene LINC02505 e associação sugestiva de 130 variantes com a presença de periodontite em uma população de Salvador. No cromossomo 2, um haplótipo de dois loci (rs10496038-rs74410951) pertencente aos genes RTN4 e MTIF2, respectivamente, tem sido associado à periodontite. No cromossomo 3, dois haplótipos de dois loci (rs74635888-rs11706761, rs114884128-rs73162961) e um haplótipo de cinco loci (rs710479-rs710480-rs850306-rs115314220-rs9990329) foram associados à periodontite. No cromossomo 5, indivíduos que herdam conjuntamente os alelos G e C do haplótipo de dois loci (rs57620661-rs73054303) do gene CTNND2 aumentam em 2,64 vezes as chances de desenvolver periodontite. Na interação entre genes, herdabilidade de 5 alelos de risco ou mais de variantes que apresentaram alto desequilíbrio de ligação está positivamente associada a cinco vezes mais para as chances de um indivíduo desenvolver periodontite em algum momento da vida. Estes resultados são o alicerce para muitos outros estudos de confirmação de associação em outras populações, bem como de alvos terapêuticos para o tratamento e controle da periodontite.

Schistosoma mansoni é um parasito causador da esquistossomose, doença que, no Brasil, ocorre em uma grande área endêmica tendo cerca de sete milhões de indivíduos infectados. Esse parasito apresenta um complexo ciclo de vida e a infecção dos hospedeiros vertebrados ocorre pela penetração ativa de cercárias através da pele. O processo envolve ação vibratória da cauda da cercária e o esvaziamento das glândulas acetabulares, promovendo a secreção de proteases líticas que auxiliam na penetração da pele do hospedeiro. Estudos comprovam que a resposta imunidade à cercária é diferente em indivíduos que já foram previamente infectados e que nunca tiveram contato com os antígenos do parasita, sendo que a ativação desses mecanismos e as moléculas da cercária que participam deles ainda não foram completamente elucidados. Estudos anteriores descreveram diversas proteínas presentes na secreção de cercárias, sendo que a serino protease elastase (SmCE) é a proteína mais abundante e também a protease mais importante na penetração ativa da pele do hospedeiro. Deste modo, foi levantada a  hipótese de que as proteínas liberadas pela cercária no momento da penetração ativa na pele do hospedeiro vertebrado, em especial a proteína elastase cercariana, promovem diferentes eventos imunológicos em indivíduos que tiveram ou não contato prévio com o parasito. Em um primeiro momento, realizou-se uma revisão da literatura sobre os eventos imunológicos nos momentos iniciais da infecção por S. mansoni destacando as diferenças de uma primeira infecção em relação a casos de reinfecção. Os mecanismos e as moléculas do parasita que fazem parte do processo de penetração ainda não são completamente conhecidos, mas a proteína elastase se destaca nesse processo e, portanto, despertou o interesse para estudos mais específicos. Para tanto, realizou-se a produção heteróloga em bactéria da forma mais abundante da elastase cercariana, SmCE 1a. Além disso, foram realizados experimentos iniciais para a sua caracterização enzimática a partir de ensaios in vitro com substrato cromogênico para elastase. Como resultados, a elastase recombinante foi produzida na cepa Rosetta da bactéria E. coli. Após a purificação, a proteína foi submetida testes enzimáticos que identificaram que, dentre as condições testadas, a melhor atividade enzimática foi obtida com 20 µg de elastase, após 360 min de incubação com o substrato a 37 ºC, em pH 9,0. Mais estudos são necessários para uma melhor caracterização dessa enzima e de seu papel na infecção, mas esses resultados, em conjunto com a revisão realizadas, servem de base para futuras pesquisas e geração de saber a respeito da penetração da cercária de S. mansoni. 

A asma é uma doença inflamatória crônica que causa impacto na vida de milhões de pessoas em todo o mundo. Existem vários fenótipos e endofenótipos dessa patologia, e alguns estão associados ao aumento dos eosinófilos no sangue e no escarro. Esse aumento pode causar maior gravidade da doença e estudos mostram que este aumento pode estar associado a genes relacionados às células linfoides inatas do tipo 2 (ILC2) e citocinas liberadas por estas células. A proposta deste trabalho é avaliar a associação entre polimorfismos em genes relacionados às ILC2 (TSLP, IL25, GATA3 e RORA) com asma e seus endofenótipos. Este é um estudo caso-controle não convencional composto por pacientes do Programa de Controle da Asma e Rinite Alérgica na Bahia (ProAR), com pacientes maiores de 18 anos e residentes em Salvador-BA. Sixteen SNPs nos genes estudados foram associados significativamente com variáveis de asma e atopia. Utilizamos modelos aditivos de regressão logística para todos os genes. Os SNPs do gene TSLP apresentaram associações de proteção para asma e gravidade da asma corroborando com análises de dosagem de eotaxina, que se mostrou diminuída em pacientes com alelo alternativo. Porém, SNPs no gene GATA3 demonstraram associações de risco para asma e atopia. Os SNPs no gene IL25 apresentaram associações de risco para asma e atopia, três deles demosntram associações tanto de risco quanto de proteção para falta de controle da asma e teste cutâneo para alérgenos (atopia). Além disso, seus alelos alternativos também diminuíram os níveis de eotaxina em plasma de paciente asmáticos. O gene RORA se mostrou bastante polimórfico, com resultados significativos de associações tanto de risco quanto proteção para todas as variáveis do estudo e dados significantes para dosagem de citocinas. Estes dados demonstram que variantes nos genes TSLP, IL25, GATA3 e RORA causam diferentes impactos sobre a asma e seus diferentes endofenótipos na população do ProAR, que é composta por indivíduos adultos e de descendência africana. Contudo, estudos funcionais são necessários para elucidar os mecanismos envolvidos nestes resultados.

Giardia duodenalis é um protozoário encontrado no intestino delgado de animais e humanos. Embora os fatores de virulência não sejam completamente elucidados,acredita-se que a patogenicidade esteja associada à assemblage. Previamente foram relatadas alterações na morfologia intestinal, bem como em células epiteliais,em neurônios e células da glia entérica após a infecção por assemblages AII e BIV de G. duodenalis. Desta forma, o objetivo do presente estudo é avaliar os efeitos da patogenicidade das assemblages AII e BIV de G. duodenalis sobre as células e tecidos que compõem a parede do duodeno e do jejuno de camundongos. Os procedimentos foram analisados e aprovados pela Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEEA; Nº. 1070/2014). Vinte e um camundongos Swiss foram distribuídos, aleatoriamente, em três grupos (n=7), dos quais dois foram inoculados com 1000 cistos das assemblages AII ou BIV de G. duodenalis e um grupo controle. Quinze dias após a inoculação, os camundongos foram submetidos à eutanásia. O duodeno e o jejuno foram coletados, fixados, embebidos em parafina e submetidos à rotina histopatológica. Cortes transversais com quatro micrometros de espessura foram corados em hematoxilina e eosina, Azul de Toluidina ou Picro- Sirius Red. As análises, realizadas em células e tecidos que compõem a parede do duodeno e jejuno de camundongos infectados, demonstraram alterações morfométricas nas áreas dos perfis de gânglios dos plexos mioentérico e submucoso; alterações histopatológicas, incluindo a presença de infiltrados inflamatórios, perda da histoarquitetura, comprometimento de criptas intestinais, duodenite e criptite; aumento no número de mitoses, mastócitos e remodelação das fibras de colágeno tipo I e III. Apesar das assemblages utilizadas neste estudo apresentarem perfis moleculares diferentes, exceto pela deposição de colágeno III no duodeno de camundongos infectados com a assemblagem BIV, os efeitos da patogenicidade foram semelhantes sobre os parâmetros avaliados. Em conjunto,
nossos resultados fornecem evidências suficientes para sugerir que as alterações observadas intensificaram significativamente o processo fisiopatológico que ocorreu independente da assemblage de G. duodenalis. Novos estudos são necessários para avaliar o código químico dos neurônios do sistema nervoso entérico e identificar
os mediadores envolvidos na resposta tecidual à infecção desencadeada pelas assemblages AII e BIV de G. duodenalis. 

Astrócitos e microglia são as principais células gliais da resposta imune no sistema nervoso central (SNC) e suas ativações podem fazer parte da patogênese de enfermidades neurodegenerativas. Estas células podem ser
ativadas por diferentes indutores químicos ou físicos e assumir perfis de resposta pró-inflamatória, regulatória, neurotóxica ou neuroprotetora. Diante disso, diferentes modelos in vitro têm sido propostos para o estudo da
neuroinflamação. Modelos clássicos de cultura de cerebelo utilizam protocolos com aparente baixo rendimento de neurônios e não caracterizam todas as células gliais durante a resposta inflamatória. Neste estudo desenvolvemos um novo protocolo de cultura primária de células do cerebelo para obtenção de maior rendimento de neurônios e para caracterizar as mudanças morfológicas em células gliais e neurônios frente a estímulo inflamatório. Para tanto, culturas primárias de cerebelo foram cultivadas com fatores de crescimento (bFGF, insulina) e meio condicionado autócrino. Posteriormente as culturas foram expostas a 1 μg/mL de lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS) e feitas análises de integridade de neurônios por coloração com Fluoro Jade B (FJB) e análises imunocitoquímica para os marcadores de neurônios: proteína beta tubulina 3 do citoesqueleto neuronal (β-TUB III); de astrócitos: proteína ácida fibrilar glial-GFAP e membro da família L1 aldeído desidrogenase 1 (ALDH1 L1); de microglia: molécula adaptadora ionizada de ligação ao cálcio 1 (Iba1) e de precursores de oligodendrócitos (OPCs): fator de transcrição Olig2 (Olig2), seguidas de contagem da população neuronal e análise de morfologia glial por microscopia de fluorescência. O novo modelo de cultura apresentou uma proporção de 58% de neurônios, 27% de astrócitos, 6% de microglia e 8% de OPC. Após estímulo com LPS foi possível observar que a cultura preservou o padrão de resposta glial, apresentou neurodegeneração expressiva e mudanças morfológicas em neurônios e microglia. Este conjunto de dados ainda não havia sido descrito em estudos anteriores com modelos clássicos de cultura primária do cerebelo, por isso, sugerimos a sua aplicação como uma ferramenta valiosa para estudar mudanças morfológicas associadas à neuroinflamação e neurodegeneração. 

A asma é caracterizada como uma doença obstrutiva das vias aéreas, que envolve inflamação crônica do trato respiratório. Uma das principais estratégias terapêuticas é a broncodilatação dependente da via β2-adrenérgica (ADRβ2). Nas células musculares lisas das vias aéreas, a ativação desta via resulta na elevação intracelular do cAMP devido à ativação da adenilato ciclase, levando a broncodilatação, através da fosforilação de diversas estruturas intracelulares pela PKA (proteína kinase A). MicroRNAs têm o potencial de interferir na via ADRβ2, que pode ter impacto nos níveis de expressão gênica e podem apresentar variantes genéticas que interfiram na sua atividade regulatória. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi investigar a associação de polimorfismos, em gene que codificam microRNAs, que modulam a via ADRβ2 com a gravidade e resposta terapêutica na asma. Para isso, foram incluídos indivíduos com asma leve (n = 383), asma grave (n = 366) e sem asma (n = 335) - todos adultos, residentes em Salvador e incluídos no estudo do ProAR (Programa para Controle na Bahia). Foram encontrados 10 SNPs no MIR4500 e 01 SNP no MIR4458 significativamente associados a pelo menos um dos desfechos. Indivíduos com asma possuindo ao menos um alelo de risco das variantes rs11619479, rs4540935, rs9517210, rs12021224 e rs9300492 apresentaram pelo menos 40% de chance de possuir a forma mais grave da doença. Já no gene MIR4458, indivíduos com asma e possuindo ao menos um alelo G do rs75563522, tem menor chance de apresentar uma doença mais grave. Os SNPs rs111999812 (alelo A) e rs2992106 (alelo A) se apresentaram como fator de risco, sendo que indivíduos com o rs111999812 apresentaram quase duas vezes mais chances de não responderem à terapia. A variante rs2992106 também se apresentou como fator de proteção para a falta de controle da doença, assim como o rs55854519. Com isso, podemos concluir que variantes em MIR4500 e MIR4458 podem influenciar na resposta broncodilatadora do tratamento de indivíduos asmáticos. Estudos funcionais de replicação e validação permitirão uma melhor caracterização do impacto dessas variantes, o que pode contribuir para uma resposta terapêutica mais personalizada. 

A doença de Parkinson é caracterizada principalmente pela perda dos neurônios do paminérgicos que contêm neuromelanina na substância nigra pars compacta. Os mecanismos responsáveis por esta neurodegeneração permanecem desconhecidos, contudo, algumas desordens celulares e moleculares são consideradas envolvidas neste processo, tais como, acúmulo de α-sinucleina, estresse oxidativo, dano mitocondrial, disfunção proteossomal, disfunção autofágica e neuroinflamação. Dentre estas, a neuroinflamação em modelo in vivo
ainda não foi associada com os efeitos deletérios induzidos pela neurotoxina endógena, aminocromo. Essa molecula tem origem a partir da oxidação da dopamina em pH citosólico e é um precusor da neuromelanina, que em condições especificas pode se acumular em neurônios dopaminérgicos e gerar citotocixidade. Neste sentido, este trabalho tem como principal objetivo de estudo caracterizar a resposta neuroinflamatória induzida pelo aminocromo em modelo in vivo de estudo de DP com foco na ativação de células gliais e sua regulação por composto neuroprotetor. Neste sentido, esta tese inicia com um capítulo de revisão, no qual abordamos os principais aspectos da neuroinflamação na DP e marcadores moleculares que possam a ser investigados nos dois seguintes capítulos contendo dados experimentais. Assim, para o segundo e terceiro capítulo, ratos Wistar foram divididos em 5 grupos (1: Controle negativo, 2: rutina 10 mg/ kg, 3: 6-hidroxidopamina 32 nmol; 4: aminochrome 6 nmol e 5: aminochrome + rutin). Os animais receberam rutina por via oral 30 minutos antes da injeção estereotáxica de aminocromo ou 6-OHDA no corpo estriado e diariamente tratados por via oral com rutina até o 14o dia experimental. Após a eutanásia, os cérebros foram fixados em paraformaldeido 4%, cortes em micrótomo e análises imunohistoquímicas para Iba-1, CD68, GFAP, S100b e Tirosina hidroxilase (TH) foram realizadas. Além disso, foi coletado material para análise de mRNA para IL-1β, TNF-α, NRLP3, CCL5, and CCR2 por RT-qPCR. Observamos que aminocromo e 6-OHDA foram capazes de gerar aumento no número total de microglia, bem como aumentar a quantidade de microglia ativada evidenciada por células Iba-1+/CD68+ co- localizadas. Também foi observado que a ativação astrocitária é marcada por um aumento da expressão co-localizada de GFAP+/S100b+ além do aumento na densidade astrocitaria evidenciando uma astrogliose. A perda neuronal dopaminérgica (células TH+) também foi observado nos grupos tratados com aminocromo ou 6-OHDA. Por outro lado, a rutina apresentou efeito neuroprotetor por inibição do efeito do aminocromo em termos de ativação microglial, astrogliose e perda neuronal dopaminérgica e ainda, elevou níveis de fatores neurotróficos. Pode-se concluir com estes resultados que o aminocromo constitui uma boa ferramenta para estudar neuroinflamação em modelo induzido da DP e que o flavonoide rutina exerce efeito neuroprotetor neste modelo. Assim, este estudo contribui para a caracterização de um modelo mais fisiológico para se estudar a patogênese da DP e subsidiar futuros ensaios clínicos de aplicação da rutina na terapêutica de pacientes com DP.

A toxocaríase é uma zoonose parasitária negligenciada de importância global. Objetivo:Desenvolver vacina visando o controle da toxocaríase canina por meio de imunoprofilaxia. Metodologia: estudos pré-clínicos selecionaram duas proteínas recombinantes de T. canis (rTcVcan e rTcCad) que protegeram camundongos contra a migração larval. No presente trabalho, essas proteínas mais três adjuvantes (Alhydrogel®, PAM3CSK4® e Quil-A®) foram usados para imunizar camundongos contra a toxocaríase; três amostras de sangue foram coletadas para dosagem de IgG, IgG1, IgG2a, IgA e IgE por ELISA indireto. IL-5, TNF-α e IL-10 foram medidas no sobrenadante de esplenócitos e larvas de T. canis foram quantificadas em tecidos. O melhor par proteína + adjuvante encontrado (rTcVcan+Quial-A®) foi usado para imunizar filhotes caninos livres de T. canis (n = 18) que foram experimentalmente infectados com T. canis e filhotes infectados naturalmente (n = 6). Foram analisados imunoglobulinas, carga parasitária (ovos nas fezes), número de adultos expulsos, ovos extraídos do útero feminino e seus percentuais de fertilidade. Resultados e discussão: Em camundongos, foi observada uma redução significativa (73%) de larvas teciduais, um perfil de citocinas misto (Th1/Th2) e títulos de anticorpos anti-T. canis (IgG, IgG1, IgG2a) usando a mistura rTcVcan+Quial-A®. Em caninos, rTcVcan+Quial-A® promoveu redução de ovos nas fezes (95%) e redução dos ovos obtidos no útero de fêmeas adultas expulsas farmacologicamente (58,38%). Conclusões: este é o primeiro ensaio clínico canino de uma vacina com proteínas recombinantes de T. canis. A formulação usada demonstrou estimular de forma eficiente o sistema imune, diminuindo consistentemente a parasitose de camundongos e cães. Futuros testes devem ser desenvolvidos para avaliar a duração do efeito protetor e analisar outras vias imunológicas que podem ser estimuladas pela formulação utilizada.

Estima-se que aproximadamente 358 milhões de pessoas no mundo são acometidas pela asma, afetando até 1 a 18% da população em diferentes países do globo. Na imunopatogenia da asma, os macrófagos são células efetoras essenciais e estão presentes em grande quantidade no pulmão, tendo participação na manutenção da homeostase pulmonar, mas contribuindo significativamente para o desenvolvimento da asma por meio de sua heterogeneidade e plasticidade funcional. Estudos demonstraram evidências de que infecções por helmintos, principalmente Schistosoma spp. ou produtos desse parasito, é capaz de modular a resposta inflamatória na asma. O objetivo desse trabalho foi investigar a participação de diferentes fenótipos de macrófagos derivados de monócitos in vitro na patogenia da asma e o potencial dos antígenos recombinantes do Schistosoma mansoni, Sm29 e SmKI-1, na modulação dessas células.  Metodologia: Monócitos foram isolados de CMSP de oito indivíduos com asma leve a moderada (ALM) e oito com asma grave (AG), além de quatro controles sadios e cultivados por 7 dias com M-CSF para diferenciação em macrófagos. No terceiro dia de cultura foi feita a adição de IFN-γ+LPS, IL-4+IL-13 e IL-10, para polarização em macrófagos M1, M2a e M2c, respectivamente. As frequências das diferentes moléculas e das citocinas intracelulares foram realizadas utilizando a técnica de citometria de fluxo. Os níveis de IL-10 e MMP-9 foram avaliados nos sobrenadantes das culturas por ELISA sanduíche. Na primeira parte do estudo, foi realizada uma correlação entre a frequência dos macrófagos e a função pulmonar avaliada pela medida do volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF-1) e da capacidade vital forçada (CVF), ambos pré e pós uso do broncodilatador (BD). Assim como a frequência de macrófagos correlacionada com a frequência e número absoluto de eosinófilos e neutrófilos do sangue periférico dos pacientes asmáticos. Para avaliação do efeito dos antígenos na regulação dos macrófagos, as culturas foram estimuladas no sexto dia da diferenciação das populações de macrófagos, com os antígenos recombinantes Sm29 e SmKI-1 por 20h e então avaliadas pelos métodos supracitados. Resultados: Foi observada uma correlação inversa entre a frequência dos macrófagos M1 e M2a tanto com o VEF1 quanto com o CVF, pré e pós BD. Interessantemente, a frequência de macrófagos M2a foi positivamente correlacionada com o número e frequência de neutrófilos do sangue periférico. Em relação a expressão intracelular de TNF observou-se uma maior frequência de macrófagos M1 TNF⁺ no grupo de pacientes com AG em comparação com pacientes com ALM. Observou-se elevados níveis de MMP-9 nos sobrenadante das culturas de macrófagos M1 e M2a no grupo de indivíduos com AG em relação aos controles sem asma. Em relação ao efeito da adição dos antígenos do Schistosoma mansoni às culturas de macrófagos, observamos que a adição de Sm29 levou a uma redução na frequência da população M1 no grupo com ALM e com AG, e a adição de SmKI-1 reduziu esta população no grupo com AG. Além disso, os antígenos foram capazes de reduzir a frequência da população M1 expressando a citocina pró-inflamatória IL-1β, tanto na ALM estimulada com Sm29 quanto na AG após o estímulo com Sm29 e com SmKI-1. No grupo de AG o SmKI-1 induziu o aumento da frequência de macrófagos M2c expressando TGF-β⁺. Apesar de não ter sido observado aumento da frequência de macrófagos M1 ou M2a expressando IL-10 quando estimulados com os antígenos Sm29 ou SmKI-1, quando se avaliou o sobrenadante destas culturas, foi observado um aumento na produção desta citocina pelo estímulo com Sm29. Conclusão: A populações de macrófagos M1 e M2a estão associadas a patogenia da asma e os antígenos Sm29 e SmKI-1 do S. mansoni possuem potencial para modificar o perfil fenotípico dessas células e, desse modo controlar o processo inflamatório exacerbado responsável pela patogenia da asma.

Corynebacterium pseudotuberculosis(C.p) é um agente infeccioso de grande interesse na produção de pequenos ruminantes. É uma bactéria que apresenta sua toxicidade através de genes de virulência, assim como pela produção de biofilme, que protege a bactéria de ambientes hostis. Dessa forma é importante compreender a biologia e o reconhecimento do potencial de virulência de cepas de C.pseudotuberculosis produtoras e não produtoras de biofilme e o mecanismo de patogenicidade desta bactéria no hospedeiro e sua forma de defesa no sistema imune do animal. Além disso, buscar subsídios que possa contribuir para o aprimoramento de vacinas e diagnóstico contra a linfadenite caseosa. Nesse sentido, o presente trabalho verificou a capacidade de formação e estruturação do biofilme bacteriano in vitro e também acompanhou a progressão da resposta imune ao longo de 180 dias de infecção por C. pseudotuberculosis em caprinos, utilizando para tanto duas linhagens virulentas de cepas produtoras e não produtoras de biofilme. Para o estudo in vitro realizou-se a extração e a caracterização da matriz extracelular polimérica da cepa produtora de biofilme para avaliar a reatividade de proteínas presentes na matriz, verificando também a composição bioquímica produzida por esta cepa. Para a extração da matriz foi utilizado o cloreto de sódio (Nacl) a 1M e para verificar a composição bioquímica foi utilizado enzimas como: proteinase K, DNase I e metaperiodato de sódio. No estudo in vivo foram utilizados dezoito caprinos da raça Canindé onde estes foram divididos em três grupos, sendo um controle, um grupo infectado com a cepa produtora de biofilme e outro grupo infectado com a cepa não produtora de biofilme. A inoculação dos animais foi realizada contendo 2x106 UFC bacteriana. As amostras de sangue total de cada caprino foram colhidas nos tempos 0,7,14, 28,45,60, 90,120,150 e 180 dias. A cinética da resposta imune humoral foi acompanhada pela detecção de anticorpos IgG através do teste ELISA indireto sensibilizado com o antígeno BHI. A cinética da reatividade celular foi avaliada pela dosagem in vitro de interferon gamma, através do kit Bovigam, a partir de cultura de células de sangue periférico. Em relação ao estudo da extração da matriz extracelular observou-se uma reatividade do soro de caprinos infectados e não infectados por C.pseudotuberculosis que foram analisados por westen blotting. Também verificou-se o perfil da concentração de glicose total da matriz extracelular da cepa CAPJ4 (76) foi maior do que da cepa CAP3w (21). Sugerindo que a cepa CAPJ4 (76) produz um biofilme de polissacarídeo. Além disso, pode-se encontrar no biofilme dessa cepa o DNA extracelular (eDNA). No experimento in vivo, após a infecção dos animais foi possível observar que a cepa produtora de biofilme tem maior resistência causando danos aos animais. Na análise sorológica, a soroconversão com produção de igG ocorreu a partir de 14 dias após a infecção, atingindo um pico de produção aos 180 dias. Uma maior produção de INF- γ foi observada nos caprinos infectados com a bactéria produtora de biofilm. Essas informações são importantes para fututos testes diagnósticos e aprimoramento de vacinas contra a Linfadenite Caseosa.

Introdução: O envolvimento da resposta imunológica no desenvolvimento e na manutenção das formas clínicas da infecção do T.cruzi. Diante disso, buscamos um reagente que pudesse ser utilizado como tratamento adjuvante e que mobilizasse populações celulares. O alfa-tocoferol pode estar envolvido no aumento de uma resposta celular efetora em outros modelos experimentais. Material e Métodos: A parasitemia e mortalidade foram avaliadas ao longo do período de estudo. Foram realizados os seguintes experimentos: dosagem de IgG anti-T.cruzi, fenotipagem de células do baço e músculo pela citometria de fluxo e o estudo histopatológico do coração e músculo. Resultados: Há redução da parasitemia e aumento da sobrevida nos grupos alfa+agsTc ou alfatocoferol. Os animais imunizados com alfa+agsTc e não infectados, após 90 dias da imunização aumentam os títulos de IgG anti-T.cruzi. Na fase aguda o uso do alfatocoferol promoveu aumento da produção de IFN-γ, células T produtoras IL-10 no baço e músculo esquelético, maior número de células T efetoras no baço, menor expressão de PD1 por células T. Na fase crônica, o uso do alfatocoferol promove o  aumento de TCD8+IL-10+ baço e TCD4+IL-10+ TCD8+IL-10+  no músculo, redução do número de células TCD8+ IFN-γ +, redução de células NK+Perforina+ e NKT+Perforina+, e de células TCD4+PD-1+, CD3+PD-L1+ e CD11b+PD-L1+ todas as análises no baço. A utilização do alfatocoferol e/ou alfa+agsTc também está associado a melhora da imunopatogênese característica da infecção pelo T.cruzi constatado com a redução do infiltrado inflamatório e fibrose nos tecidos, nas fases aguda e crônica. Conclusão: Os resultados apresentados no trabalho demonstra que o alfatocoferol promove no modelo de infecção pelo T.cruzi, uma resposta modulada , com aumento de citocinas e células capazes de controlar a infecção, sem promover aumento no dano tecidual característico da infecção pelo T.cruzi. 

Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, intracelular facultativa, imóvel, bacilo não esporulado com capacidade de causar uma doença crônica em pequenos ruminantes, como caprinos e ovinos. A linfadenite caseosa acarreta grandes a caprino e ovinocultura. A doença é diagnosticada a partir dos sinais clínicos que são aumentos significativos dos linfonodos superficiais, entretanto, pode acometer órgãos e vísceras, que neste caso torna-se difícil o diagnóstico e tratamento desses animais. O tratamento atual se dá a partir da remoção do granuloma que contém o material caseoso e antibióticos, toda via, esse tipo de tratamento não é tão eficaz pois as bactérias continuam viáveis dentro de macrófagos, pois muitos desses antibióticos não conseguem atravessar a parede celular. A elaboração de métodos de diagnóstico que consigam detectar a presença da LC de forma prévia nesses animais, principalmente quando não possuem sinais clínicos visíveis, é de estrema importância. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar in silico os epítopos ligantes de anticorpos em proteínas de Corynebacterium pseudotuberculosis e validar sua antigenicidade in vitro. A etapa de in silico foi realizada usando o proteoma da cepa de Corynebacterium pseudotuberculosis C231, esse proteoma é composto por 2090 proteínas, usando softwares públicos foi possível identificar possíveis proteínas patogênicas e a disposição real das mesmas dentro do proteoma. Desta forma, foram selecionadas proteínas extracelulares e alinhadas a mais de um software para a confirmação da localização e chegando ao total de 111 proteínas e dessas, 76 proteínas possuíam epítopos de 10 aminoácidos eram epítopos lineares de células B, esta etapa foi realizada utilizando os algoritmos Bepipred, LBtope, Método Chou & Fasman Beta, Método Emini Surface Accessibility, Método Karplus & Schulz Flexibility e Método Parker. Essas 76 proteínas e seus respectivos epítopos foram comparados com 75 proteomas de Corynebacterium pseudotuberculosis existentes na base de dados do UNIPROT, e como resultado temos a conservação de 9 proteínas com uma ou mais regiões conservadas, ou até mesmo epítopos de doze a 16 aminoácidos conservados. Foram selecionados 4 epítopos para serem sintetizados quimicamente, o critério utilizado para esta seleção foi o grau de conservação dessas regiões que possuíam variações de 97,1 a 98,6% dentro dos proteomas. Os testes in vitro foram realizados testando as concentrações de 0,5μl, 1μl, 2μl e 4μl de cada peptídeo para as diluições séricas de caprinos e ovinos de animais positivos e negativos para a linfadenite caseosa. O reconhecimento antigênico para ambas as espécies foi bastante satisfatório. Sugerindo que peptídeos são capazes de reconhecer anticorpos presentes no soro de animais infectados.

A asma é uma doença complexa e heterogênea caracterizada pela hiper-responsividade
brônquica, obstrução e inflamação crônica das vias aéreas. A sua heterogeneidade está associada à
fatores ambientais e variabilidades individuais e, por isso, o interesse no estudo da genética da asma
tem crescido ao longo dos anos. Variantes no gene DENND1B foram descritas aumentando a
susceptibilidade à asma e estão relacionadas com a modulação negativa do receptor de células T
(TCR), através do controle da sua internalização nas células T; mutações ou diminuição na expressão
do DENND1B estão associadas com o aumento de resposta Th2 e asma. O objetivo deste trabalho foi
investigar a associação de polimorfismos no DENND1B, bem como seus respectivos impactos
funcionais, com atopia e os diferentes fenótipos de asma, em indivíduos adultos acompanhados pelo
Programa para o Controle da Asma na Bahia (ProAR). A genotipagem foi realizada utilizando um
painel comercial da Illumina (MEGA) em 1.177 participantes do ProAR. As associações entre
polimorfismos do gene e asma e marcadores de atopia foram analisadas por meio de regressão
logística, empregando as covariáveis sexo, idade e marcadores de ancestralidade como
confundidoras. Treze polimorfismos no DENND1B foram associados a diferentes fenótipos, tais
como asma, asma grave e marcadores de atopia. A comparação dos níveis de citocinas e contagem
de células de acordo com o genótipo foram efetuadas com o emprego do teste T (paramétrico) ou
Mann-Whitney (não-paramétrico). Apenas um SNP apresentou resultado significante para produção
de IL-33 e dois SNPs para a produção de eosinófilos, células epiteliais e neutrófilos. A expressão
gênica foi analisada utilizando o método CT comparativo (método 2–ΔΔCT) e não houve resultado
estaticamente significante. Em conclusão, polimorfismos no DENND1B foram significantemente
associados a asma e atopia e estes polimorfismos podem influenciar na expressão deste gene.

O Zingiber officinale Roscoe, gengibre, é uma planta bastante utilizada na medicinal tradicional. Estudos prévios demonstram os efeitos dos componentes do gengibre sobre a função de macrófagos, contudo a ação do seu fitocomplexo ainda é pouco explorada. Neste estudo, buscamos avaliar o efeito do extrato bruto de gengibre sobre a produção de citocinas de macrófagos derivados de THP-1. Para isto, células TPH-1 diferenciadas em macrófagos foram estimuladas com 50 e 100 µg/mL de extrato. A caracterização fitoquímica do extrato compreendeu a quantificação de compostos fenólicos,flavonoides e capacidade antioxidante total. O teor de endotoxinas do extrato foi mensurado pelo método LAL. O ensaio de anexina V-PE e 7-AAD foi usado para verificar a indução de apoptose. Os níveis de IL-2, IL-4, IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-17 e IL-10 foram mensurados no sobrenadante das culturas por CBA. Utilizou-se os testes ANOVA e Games-Howell para analisar a diferença entre os estímulos, com nível de significância de p&lt;0,05. Os resultados mostraram que o teor de compostos fenólicos do extrato foi 44,34 mg EAG/g, flavonoides 63,87 mg EQ/g e a capacidade antioxidante 86,5%. A quantidade de endotoxina foi baixa, 4,68 UE/mL. As células permaneceram viáveis nas concentrações de 50 e 100 µg/mL de extrato, 88,76 e 87,40%, respectivamente. Além disso, verificou-se que o extrato reduziu de forma significativa a produção de IL-6, TNF e IL-10, p &lt;0,05. O extrato bruto de gengibre tem potencial para modular a secreção de citocinas por macrófagos. Mais estudos para investigar os efeitos e os mecanismos do fitocomplexo do gengibre sobre macrófagos e outras células imunes devem ser realizados, a fim de favorecer possíveis aplicações clínicas.

A coinfecção pelos vírus da Imunodeficiência Adquirida (HIV) e o vírus Linfotrópico da célula T Humana (HTLV), representa um problema de saúde em todo o mundo. Um estudo demonstrou que Salvador-Ba, apresenta uma prevalecia de 16,3% de coinfecção pelo HIV-1/HTLV-1. Indivíduos coinfectados tem um maior risco em desenvolver as patologias associadas a ambos os vírus. As células T regulatórias (TReg) executam uma função fundamental na manutenção da tolerância imunológica, evitando respostas autoimunes. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a expressão de células TReg na coinfecção HIV-1/HTLV-1. Participaram do estudo, 15 pacientes monoinfectados pelo HIV-1, 14 pacientes monoinfectados pelo HTLV-1, 15 pacientes coinfectados HIV-1/HTLV-1 e 5 indivíduos hígidos. A expressão das células TReg foram obtidas por Citometria de fluxo e analisadas estatisticamente. No presente estudo, observou-se que, pacientes coinfectados apresentam uma menor expressão de células CD4+CD25+Foxp3+, CD4+CD25+CTLA-4 e células CD4+CD25+HLA-DR+ em comparação aos pacientes monoinfectados pelo HIV-1 e HTLV-1 (p= 0.00). Observou-se ainda entre os pacientes coinfectados e os pacientes HTLV-1 positivos que apresentam manifestação clínicas associadas ao HTLV-1 um aumento significante da expressão de células CD4+CD25+Foxp3+ (p= 0.029 e p= 0.03, respectivamente), sugerindo que o aumento da supressão imunológica pode favorecer a replicação viral e progressão das doenças.

O uso de produtos naturais para o tratamento de doenças está relacionado a moléculas bioativas que possuem atividade antimicrobiana, analgésica, antifúngica e potencialmente imunomoduladora. As espécies do gênero Lippia (Verbenaceae) constituem uma importante fonte de compostos químicos que apresentam propriedades medicinais, como terpenos (timol, carvacol, linalol, limoneno e óxido de piperitenona), podendo ter efeitos positivos em doenças como asma brônquica, helmintíase, distúrbios gastrointestinais e periodontite. A periodontite é uma doença crônica que acomete os tecidos periodontais, causada pela disbiose no microambiente subgengival, que gera um processo inflamatório e imunológico nos tecidos do hospedeiro em resposta a microrganismos. O seu tratamento consiste na remoção mecânica e o uso de agentes químicos para o controle do biofilme subgengival. Entretanto, os agentes químicos apresentam diversos efeitos deletérios, como alterações nas papilas gustativas, resistência microbiana e danos ao meio ambiente. Diante do exposto, o presente estudo buscou avaliar o efeito imunomodulador e antimicrobiano dos extratos metanólicos das folhas de Lippia origanoides Kunth e Lippia insignis Moldenke. A produção das citocinas INF-γ, IL-6, IL-13, IL-17, IL-10 e IL1-β por células do sangue periférico humanas cultivadas com os extratos em presença ou não do patógeno-chave periodontal Porphyromonas gingivalis foi mensurada pelo método de absorbância imunoenzimático. A citotoxicidade foi medida em Artemia salinas Leach pela taxa de letalidade dos náuplios e em células mononucleares humanas, por meio do teste colorimétrico de conversão de brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) em formazan. A atividade antimicrobiana foi analisada com teste de difusão em disco e concentração mínima inibitória (MIC), utilizando as bactérias Bacillus subtilis, Escherichia coli, Micrococus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Salmonella choleraesuis, e os fungos Candida albicans e Candida glabrata. Os extratos metanólicos das folhas de L. origanoides Kunth e L. insignis Moldenke foram capazes de modular, in vitro, a produção das citocinas INF-γ, IL-6, IL-13, IL-17, IL-10 e IL1-β, frente ao entímulo de P. gingivalis. Além disso, os extratos apresentaram baixa citotoxicidade e foram considerados bacteriostáticos para todas as espécies bacterianas testadas, fungistáticos para o fungo C. albicans e fungicidas para C. glabrata. Logo, os extratos das folhas possuem efeitos imunomodulador, antibacteriano e antifúngico que os tornam promissores no tratamento da periodontite e de outras doenças infecciosas causadas pelos microrganismos testados.

A infecção pelo zika vírus (ZIKV) surgiu recentemente como uma grande
preocupação mundial devido à sua forte associação com complicações
neurológicas associadas à esta infecção, denominada Síndrome Congênita do
Zika vírus (SCZV). Biomarcadores imunológicos e genéticos, podem fornecer
informações prognósticas que permitam fazer previsões sobre a progressão e
severidade de uma determinada enfermidade. Neste contexto, o presente
trabalho caracterizou os aspectos imunológicos e genéticos de crianças
portadoras da Síndrome Congênita do Zika Vírus, a fim de identificar possíveis
biomarcadores envolvidos nesse desfecho. Após realização do
sequenciamento total do exoma da família de gêmeos discordantes para o
desfecho (SCZ) e aplicação de filtros para priorização de genes candidatos, foi
identificado um SNP diferente entre o indivíduo portador da SCZ e o não
afetado. Esta mutação está localizada no gene MTOR e sua MAF na população
mundial é relativamente frequente com de cerca de 20%. A via mTOR, uma via
de sinalização celular que está envolvida na neurogênese, estando muito ativa
durante o desenvolvimento embrionário. Vírus como o Zika podem bloquear
essa cascata de sinalização e isso pode estar associado a malformações do
sistema nervoso central. O perfil de citocinas revelou a presença de uma
resposta inflamatória exacerbada, nas crianças com quadro mais grave da
síndrome, apresentando níveis elevados para IL-2, IL-6 e IL15. Esses
resultados ajudarão a compreender um pouco mais os mecanismos
moleculares da interação entre o vírus Zika e a resposta imunológica do
hospedeiro humano que resultam em complicações neurológicas da infecção.
Porém, muitos outros estudos são necessários para demonstrar quais os
mecanismos envolvidos no desenvolvimento da SCZV, sendo esse um passo
inicial no sentido de também identificar possíveis genes envolvidos na
ocorrência desta condição.

Reação hansênica é uma manifestação inflamatória aguda ou subaguda cuja etiologia está associada a alterações do sistema imunológico, possivelmente, frente a quadros infecciosos concomitantes a hanseníase. É um fenômeno imunológico pouco compreendido, porém, acredita-se que o seu surgimento possa estar relacionado a gestação, infecções concorrentes, uso de drogas, estresse físico ou psicológico. O objetivo desse estudo foi investigar a associação entre os marcadores microbiológicos e imunológicos relacionados à periodontite e a ocorrência de reações hansênicas. Trata-se de um estudo epidemiológico observacional, analítico, do tipo caso controle realizado com 202 indivíduos diagnosticados com hanseníase que apresentaram ou não reações hansênicas. Foi realizada a padronização de um por imunoensaio enzimático (ELISA) indireto para a verificação de subclasses de IgG séricas específicas para antígenos de Porphyromonas gingivalis: extrato bruto, HmuY e Kgp12 (anti-P. gingivalis, anti-HmuY e anti-Kgp12). Os níveis salivares de IgA específica para os mesmos antígenos também foram testados por ELISA indireto. O fluxo e o pH salivar também foram mensurados. Além disso, foi realizado o sequenciamento do DNA para estimar a população microbiana presente no biofilme subgengival de uma subamostra de indivíduos do estudo. Os resultados da padronização do ELISA para IgG indicaram a concentração de 5g/mL do extrato bruto de P. gingivalis, HmuY e Kgp12 para todas as subclasses, com exceção da IgG2, cujo valor foi de 10g/mL. Houve associação significativa entre os níveis salivares de IgA anti-P. gingivalis (p=0,03) e anti-Kgp12 (p=0,01) e a reação hansênica. Não houve diferença estatisticamente significante entre caso e controle na média do fluxo e pH salivar. Entre as amostras com reação e periodontite, Streptococcus oralis foi a espécie mais abundante, seguida de Porphyromonas gingivalis na reação tipo 1 e Fusobacterium canifelinum no tipo 2. Concluindo, a padronização do teste ELISA para subclasses de IgG em soro permitiu diferenciar a ausência e presença de periodontite em indivíduos com e sem reação hansênica com o uso do extrato de Porphyromonas gingivalis, o que auxiliará estudos futuros sobre a relação entre as duas condições. Foi demonstrada a associação entre os níveis salivares de IgA anti-P. gingivalis e a reação hansênica. A abundância de microrganismos relacionados à periodontite foi relativamente maior nos indivíduos com reação hansênica.

Eczema é uma doença multicausal que inclui fatores imunológicos e genéticos, dentre outros. Neste estudo, avaliamos a associação entre polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) e eczema em uma população brasileira com alta ancestralidade africana através de dois estudos: um de ampla varredura genômica (GWAS) e outro com o gene Filagrina (FLG). Para isso, participantes do estudo SCAALA, Salvador, foram genotipados e classificados como casos ou controles. Então, testamos a associação através de regressão logística. Nós investigamos as características funcionais dos SNPs associados e o impacto deles sobre expressão gênica. Ademais, realizamos uma análise de genes e vias metabólicas com base em nossos dados do GWAS e também verificamos se a associação em FLG variou de acordo com a quantidade de ancestralidade africana. No GWAS identificamos dois SNPs ligados à suscetibilidade para eczema (rs6783507 e rs79142431), localizados nas regiões 3q21 e 7p21, respectivamente. A via do receptor da IL-1 e os genes IL1RAP e SEMA7A, localizados nas regiões 3q28 e 15q24, respectivamente, foram os mais importantes em nossos dados GWAS. Em nosso estudo com FLG, mostramos que o alelo T do rs6587666 pode estar relacionado à proteção contra eczema em nossa população. Interessantemente, a quantidade de ancestralidade africana na estrutura genética dos indivíduos foi capaz de modificar a associação observada. Esse foi o primeiro estudo de associação genética para eczema numa população brasileira miscigenada. Nós mostramos novos loci com papel relevante na fisiopatogenia dessa doença em nossa população e fornecemos novos alvos para pesquisas posteriores em eczema. 

Pacientes com HAM/TSP apresentam alta carga viral, altas produções de citocinas pró-inflamatórias além de uma linfoperoliferação quando comparados com controles saudáveis, assintomáticos e pacientes com BH-HTLV-1. Além disso, a HAM/TSP é caracterizada por uma neurodegerenação do SNC. O objetivo do nosso trabalho foi de avaliar o papel das MMP, TIMP e S100B na patogênese da infecção pelo HTLV-1. As metalopeoteinases (MMP-3 e MMP- 9), os inibidores de metaloproteinases (TIMP-1, TIMP-3 e TIMP-4) e S100B foram determinados pela técnica de ELISA, no soro, sobrenadante e líquor dos diferentes grupos de indivíduos infectados pelo HTLV-1 (portador assintomático, indivíduos com bexiga hiperativa e HAM/TSP). A frequência de linfócitos e monócitos que foram quimioatraidos pela técnica de Transwell foi analisada por citometria de fluxo. Pacientes com HAM/TSP apresentaram maior concentração de MMP-9, no soro e no sobrenadante, quando comparado com os demais grupos estudados grupos (p<0,05) bem como maior razão entre MMP-9/TIMP-1, no soro, quando comparado com os demais grupos estudados grupos (p<0,05). A S100B em HAM/TSP não houve diferença estatística com os grupos estudados, tanto no soro quanto no sobrenadante (p>0,05), embora no líquor houvesse uma menor concentração quando comparado com BH- HTLV-1 (p<0,05). Embora não houvesse diferença estatística monócitos e linfócitos de pacientes com HAM/TSP apresentaram uma maior migração em modelo de quimiotaxia, porém sem diferença estatística. Esses achados confirmam a participação da MMP-9 na destruição da BHE, facilitando a entrada de células infectadas para dentro do SNC.

Introdução: A asma é uma doença crônica caracterizada por inflamação das vias
aéreas, obstrução e hiperresponsividade. Evidências vem sendo acumuladas de que
a infecção crônica por helmintos, particularmente pelo Schistosoma sp ou produtos do
parasito, são capazes de modular a resposta inflamatória nas doenças de bases
alérgicas. Objetivo: Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da adição in vitro
dos antígenos recombinantes Sm29 e SmKI.1 do Schistosoma mansoni na produção
de IL-10 e frequência dos linfócitos T e B regulatórios e monócitos de pacientes com
asma. Metodologia: Foram avaliados 32 indivíduos, sendo 12 com asma leve a
moderada (ALM), 12 com asma grave (AG) e 8 como controle sadio sem asma (CSA).
Os linfócitos e monócitos foram obtidos através das CMSP, e posteriormente
estimulados com os antígenos Sm29 e SmKI.1. A técnica de citometria foi empregada
para avaliar a frequência dos linfócitos T (CD3+CD4+

), T regulatórios

(CD3+CD4+CD25hi), linfócitos B (CD19+

), linfócitos B regulatórios

(CD19+Cd24hiCD38hi), monócitos totais (CD14+

) e as subpopulações de monócitos:

clássicos(CD14+CD16

neg), intermediários (CD14+CD16+

) e não clássicos

(CD14dimCD16+

), além da expressão intracelular de moléculas regulatórias, IL-10
FoxP3 e TGF-β. Resultados: Os monócitos foram a fonte produtora de IL-10 entre as
população e os linfócitos T e B após estimulo pelo Sm29 nos grupos com ALM e AG.
As frequências de linfócitos T CD4+CD25hi no grupo com AG aumentou nas culturas
estimuladas com Sm29 em comparação com as culturas sem estímulo. Nos grupos
com ALM e AG, a frequência dos linfócitos T CD4+CD25hiFoxP3+ aumentaram na
presença do antígeno recombinante Sm29 do S. mansoni. Nos indivíduos com ALM,
a expressão de TGF-β nos linfócitos B CD19+CD24hiCD38hi foram mais altas nas
culturas estimuladas pelo Sm29 em comparação às sem estímulo. O antígeno Sm29
foi ainda capaz de reduzir as frequências dos monócitos clássicos e totais nos grupos
com ALM e CSA. Nos grupos com e sem asma a adição do antígeno Sm29 levou a
um aumento na expressão de IL -10 tanto pelos monócitos totais, como pelos
monócitos clássicos e intermediários. O antígeno SmKI.1 não alterou a expressão de
IL-10 nas populações celulares avaliadas nos grupos ALM, AG ou CSA. Conclusão:
O antígeno Sm29 foi capaz de induzir a expressão de IL-10, CD25hi e FoxP3,
importantes moléculas associadas a regulação da resposta inflamatória exacerbada
na asma.

A Artrite é sinal clínico importante presente em diversas doenças, possui característica inflamatória crônica, podendo ser desencadeada por distúrbios autoimunes como a Artrite Reumatoide (AR). O tratamento atual para condições inflamatórias, como a inflamação articular envolve medicamentos que atuam na modulação de substâncias importantes para o desencadeamento e manutenção da inflamação, os glicocorticoides; os anti-inflamatórios não esteroidais (AINES) e as drogas antirreumáticas modificadoras da doença (DARMD) são as principais classes farmacológicas prescritas. Entretanto, sua baixa adesão afeta a eficácia da terapêutica, tanto no sentido da baixa eficiência, quanto pelos conhecidos eventos adversos graves. Nessa perspectiva a busca por novos tratamentos principalmente na ótica de drogas anti-inflamatórias e analgésicas ainda é bastante promissor. Os modelos animais contribuem para o progresso de novos medicamentos. Nesse sentido, existem diversas estratégias para modelos de artrite, como a artrite induzida por zymozan (AIZ), modelo agudo que utiliza a injeção intra-articular, para a aplicação desse método a anestesia animal se faz necessária, porém, anestésicos como isoflurano, podem modular a inflamação e limitá-la. Outra questão importante para busca de fármacos com melhor adesão é a seletividade do alvo terapêutico. No contexto da inflamação, a inibição da síntese de prostaglandinas pode facilitar o desencadeamento de eventos adversos, a mPGES-1, enzima terminal da prostaglandina E2 (PGE2) em processos inflamatórios por exemplo, destaca-se como um alvo promissor. Nessa perspectiva, esse estudo inicialmente, buscou na literatura, de forma sistemática, como a (PGE2) atua na ativação das células TH17 e neutrófilos na patogênese da AR. Logo após, padronizou um modelo de AIZ sem anestesia e este novo modelo foi utilizado para avaliar a atividade anti-inflamatória de novos inibidores da mPGES-1. Observou-se que a PGE2 atua nas células sinoviais promovendo a diferenciação das células TH17 que produzem a IL-17, citocina que atua também nessas células sinoviais, facilitando a migração de neutrófilos. A padronização da contenção animal é uma estratégia experimental que facilita a aplicação da técnica sem a utilização da anestesia animal, que contribui para a modulação do modelo, com a redução do edema articular. Duas moléculas obtidas por triagem virtual (inibidoras da mPGES-1), que possuem atividade antipirética observada em estudo anterior (8 e 9), apresentaram atividade anti-inflamatória, sem característica dose-dependente. A molécula 8 não foi capaz de reduzir a migração leucocitária. Estudos posteriores nos possibilitarão a afirmar o tipo de inibição gerada pelas moléculas.

A asma é uma doença caracterizada pela inflamação das vias aéreas inferioresmediantehiper-reatividade, produção de muco e obstrução das vias aéreas.O gene ADRB2, que codifica os receptoresβ2 adrenérgicos, importantes alvos farmacológicos nessa patologia, apresenta polimorfismos associados a alterações na açãobroncodilatadora de agonistas endógenos e exógenos desses receptores, porémhá poucas informações do papel dessas variantessobre a asma na população brasileira. Este trabalho objetivou avaliar a associação de variantes no ADRB2com asma, gravidade da doença, resposta aguda a broncodilatadores (reversibilidade), controle da asma e status da atopia em 1177 indivíduos recrutados pelo Programa para o Controle de Asma na Bahia (PRoAR). Os polimorfismos no ADRB2 foram genotipados usando o kit IlluminaInfiniumMulti-Ethnic AMR / AFR-8 cujos dados passaram por uma análise de associação mediante uso do software Plink 1.9.  Como resultados identificou-se que a variante rs1042713 (Gly16Arg) foi associada à gravidade da asma, marcadores de atopia, à falta de reversibilidade nos pacientes asmáticos, especialmente aqueles comasmaleve ou moderada, mas não em pacientes com asma grave. A presença da combinação (haplótipo) Arg16Gly16-Gln27Glu27 foi associada à gravidade da asma. Em análise incluindo todos os pacientes asmáticos ou apenas aqueles com asma leve/moderada, os que apresentaram a combinação Arg16Arg16–Glu27Glu27 tiveram menor resposta aguda ao broncodilatador. Por outro lado, o haplótipoGly16Gly16-Gln27Glu27 foi associado à falta de reversibilidade na análise considerando apenaspacientes com asma grave em dois modelos de comparação. Em conclusão, evidencia-se que variantes no ADRB2 podem influenciar a gravidade da asma, o desenvolvimento de atopia e comprometer a resposta ao broncodilatador agonista adrenérgico, representando uma vertente potencialmente importante para a medicina personalizada e paramelhor compreensão da asma e atopia

A imunonutrição baseia-se em modelos para modular/melhorar as funções biológico-fisiológicas de pacientes.  O uso de nutrientes específicos é cada vez mais freqüente e a glutamina por desempenhar diferentes papéis no metabolismo e função celular tem tido grande uso. Não esta disponível o mecanismo dos efeitos desta sobre os componentes de processos imunoinflamatorios. O objetivo do trabalho foi avaliar aspectos/parâmetros bioquímicos e imunológicos na suplementação oral com glutamina de indivíduos saudáveis.  Aprovado pelo CEP Prof. Dr. Celso Fiqueirôa, Hospital Santa Izabel - Salvador, CAAE: 93716618.0.0000.5520. Métodos: Indivíduos voluntários (n=27), sem queixas clínicas, de ambos os sexos, com idade entre 19 e 57 anos, não obeso, utilizaram 20g/dia de glutamina por via oral durante 10 dias. Amostras de sangue foram coletadas em cinco momentos (T0, T24h, T72h, T7d e T10d) para leucometria, imunofenotipagem, dosagem de citocinas (Perfil TH1, TH2 e TH17) e marcadores bioquímicos (ALT, AST, GGT, FA, PCR, Globulina e Albumina). A antropometria foi realizada em T0 e T10d. Resultados: Pela leucometria a celularidade não foi alterada. Foi observado aumento de Média de Intesindade de Fluorencencia de Linfócitos T helper e Linfócitos T citotoxico (CD3,CD4/CD8) em 24  horas (p<0,05) e uma tendência de aumento de citocinas perfil Th1 (IFN-γ) ao longo do tempo. Não houve alteração ALT, AST, GGT, FA e PCR (p>0,05). Observou-se maior produção de globulina ao longo do uso da gln (p<0,05). Conclusão: Não se observa danos hepáticos quando utilizada em período curto em dosagens de 20g/dia por 10 dias. Parece regular positivamente a produção de IFN-γ e a expressão de moléculas funcionais (CD3/CD4/CD8) de LTh e LTc nas 24hs, com  retorno da manutenção/adaptação após esse tempo.

Produtos naturais representam uma fonte promissora para a descoberta de medicamentos. Um grande número de produtos naturais é reconhecido por modular a resposta imune e contribuir para o tratamento de várias doenças. O uso prolongado de uma variedade de drogas imunomoduladoras está associado a efeitos colaterais e há certas condições inflamatórias ainda sem opções terapêuticas de eficácia. Sendo assim, a descoberta de novos agentes torna-se necessário. O presente trabalho tem por objetivo investigar o efeito imunomodulador de um extrato etanólico concentrado de Physalis angulata (EEPA) em modelos experimentais in vitro e in vivo. Inicialmente foi determinada a citotoxicidade do EEPA em macrófagos peritoneais através do método do Alamarblue^®. Em seguida, em concentrações não tóxicas, foi avaliado o efeito do extrato sobre a produção de citocinas e óxido nítrico (NO) em cultura de macrófagos estimulados com LPS + IFN-γ. As citocinas forammensuradas pelo método de ELISA e o NO foi quantificado pela reação de Griess. O efeito do EEPA sobre a proliferação de linfócitos também foi avaliado utilizando cultura de esplenócitos estimuladas com concanavalina A, pelo método de incorporação de ³H-timidina. Através do método de ELISA, também foi avaliado o efeito do EEPA sobre a produção de citocinas. O efeito do EEPA sobre o ciclo celular e na morte celular delinfócitos foi avaliado através da marcação com iodeto de propídio e anexina Veanálise por citometria de fluxo. In vivo, realizamos testes toxicológicos e examinamos o efeito do EEPA em modelo experimental de peritonite e em modelo de hipersensibilidade do tipo tardia. Foi observada uma potente atividade imunomoduladora do EEPA sobre macrófagos e linfócitos. O tratamento de macrófagos com o EPPA diminuiu significativamente (P < 0.05) a produção de TNF-α, IL-6, IL-12 e NO, quando comparado com células apenas estimuladas com LPS+ IFN-γ. Em adição, o EEPA inibiu a linfoproliferação e a secreção de IL-2, IL-6 e IFN-γ, enquanto aumentou a secreção de IL-4 por esplenócitos ativados. A análise de citometria de fluxo em culturas de linfócitos mostrou que o tratamento com EEPA induz a parada do ciclo celular nas fases S e G2/M, seguido de morte celular por apoptose. Além disso, o EEPA a 100 ou 200 mg/Kg não mostrou sinais de toxicidade e alterações nos componentes séricos. Por último, observamos que o EEPA a 50 ou 100 mg/Kg reduziu a migração de neutrófilos (88,5% e 72,3%, respectivamente) e reduziu significativamente o edema da pata no modelo de DTH induzido por BSA na dose de 100 mg/Kg. Nossos resultados demonstram um forte potencial do extrato etanólico de Physalis angulata como alternativa para o tratamento de doenças imunoinflamatórias.

Introdução: As reações hansênicas são manifestações inflamatórias agudas, responsáveis por danos neurais e incapacidades irreversíveis. Seu surgimento e exacerbação estão associados a infecções concorrentes a hanseníase, dentre elas a periodontite. Esta doença inflamatória crônica que acarreta a destruição dos tecidos de suporte dentário, tem caráter multifatorial, e o seu fator etiológico primário é a presença de um biofilme disbiótico, que tem em Porphyromonas gingivalis (Pg) como o patógeno-chave relacionado ao desenvolvimento e progressão da doença. Objetivo: Avaliar o papel da resposta imune humoral específica para imunoglobulina G (IgG) face aos antígenos de Pg (extrato, proteína recombinante HmuY e peptídeo Kgp12) no soro de indíviduos com e sem reação hansênica. Método:Foi realizado um estudo do tipo caso-controle em adultos assistidos em serviço de referência para hanseníase, na cidade de Salvador, Bahia. O grupo caso foi composto por 69 indivíduos diagnosticados com reação hansênica e o grupo controle por 63 indivíduos sem reação. Foi aplicado questionário estruturado aos participantes e realizado exame clínico bucal para diagnóstico de periodontite. Após a coleta de soro e processamento das amostras, foi empregado ensaio imunoenzimático para detectar a presença de IgG específica para o extrato sonicado bruto de Pg, para o peptídeo de gingipaína Kgp-12 e para a proteína HmuY. Resultados: Indivíduos com periodontite e reação hansênica apresentaram níveis de IgG mais elevados para todos os antígenos testados (extrato, Hmuy e Kgp12), porém sem significância estatística. Houve diferença estatisticamente significante para os níveis de IgG anti-hmuy (p<0,01) e anti-kgp 12 (p=0,01) entre os indivíduos com reação hansênica e maior tempo de uso da terapia anti reacional. Conclusão: Não houve associação estatisticamente significante entre os níveis de IgG e reação hansênica. Estudos longitudinais são sugeridos para melhor avaliar a relação entre periodontite e a ocorrência de reações hansênicas.

As reações hansenicas são um processo de agudização da hanseníase que pode ocorrer no curso ou após o tratamento da doença. Estudos anteriores relatam uma possível relação do seu aparecimento a periodontite, visto que no processo de estabelecimento desta, existe participação de citocinas que agiriam na manutenção e estabelecimento de processos inflamatórios, como visto em outras doenças já bem descritas pela literatura. O presente estudo trata-se de um caso controle cujo objetivo foi caracterizar o perfil de citocinas em pacientes com reação hansênica tipo I e pacientes com a doença que não desenvolveram a reação. Para tanto, Amostras de sobrenadante de cultura de células mononucleares do sangue periférico de invidivudos com hanseníase foram estimuladas com antígenos de Porphyromonas gingivalis, seguindo avaliação, por citometria de fluxo, das seguintes citocinas: INF- γ, TNF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL 17. Desta forma foram obtidos maiores médias para citocinas pró-inflamatóras com destaque para TNF. Baixa produção de IL-4 e tendência de piores condições bucais para os indivíduos do grupo caso com periodontite. O presente estudo incentiva mais pesquisas abordando outras citocinas dos perfis de resposta, com inclusão do grupo com eritema nodoso hansênico, para melhor compreensão do tema.

Porphyromonas gingivalis é considerado patógeno-chave na periodontite, por apresentar fatores de virulência que o tornam capaz de influenciar diretamente na resposta do hospedeiro e na composição da microbiota. Dentre estes fatores, HmuY e K gingipaínas atuam na captação de nutrientes, além do potencial imunogênico que possuem. O processo inflamatório apresentado pela doença pode ser regulado pelos macrófagos, que predominam nos tecidos gengivais. As vias de sinalização MAPK e NF-κB são as principais na regulação de células da resposta inata estimuladas por Porphyromonas gingivalis. Neste estudo foi possível descrever a indução de citocinas IL-1β, IL-6, IL-10 e IL-17A em macrófagos, com e sem inibição para as vias MAPK p38, JNK e ERK 1/2 estimuladas pelo extrato sonicado, rHmuY e peptídeos de K gingipaínas (Kgp12, Kgp17 e Kgp18) de P. gingivalis. Para tanto foi feita a expansão das células de linhagem THP-1 e diferenciação destas em macrófagos através do tratamento por 24 horas com PMA. Estes macrófagos distribuídos em poços de cultura foram tratados com inibidores das vias JNK, MAPK p38 e ERK 1/2 por poço, em seguida foram estimulados com o extrato sonicado, rHmuY e peptídeos de K gingipaínas de P. gingivalis, por 48 horas em estufa de CO2 a 5%. Após este período foi realizado o ELISA direto no sobrenadante de cultura para dosagem dos níveis de citocinas. Os principais achados deste trabalho apontam para um possível papel da via MAPK p38, JNK e ERK 1/2 na síntese de IL-1β pelos macrófagos ao serem estimulados por HmuY e pelos peptídeos de Kgp; da via MAPK p38 como reguladora negativa de IL-17A sob estímulo de Kgp18; da via JNK como reguladora positiva de IL-6 sob estímulo dos peptídeos de Kgp, de IL-10 sob estímulo de HmuY e de IL-17A quando estimulado com Kgp17; e da via ERK 1/2 como reguladora positiva de IL-6 sob estímulo dos peptídeos de Kgp e negativa para IL-10 sob estímulos de HmuY e dos peptídeos de Kgp. Conclui-se que as vias MAPKs podem contribuir de diferentes formas sobre os níveis macrofágicos das citocinas estudadas, seja ativando sua produção ou mesmo regulando-a de forma negativa, influenciando, assim, no perfil inflamatório assumido pelos macrófagos. Diante destes achados, é importante ampliar os estudos para o melhor entendimento da ação destas vias em macrófagos e no seu comportamento no microambiente periodontal.

INTRODUÇÃO: As infecções hepáticas de causa viral, por seu caráter endêmico e epidêmico, constituem um sério problema para a saúde pública.  OBJETIVOS: Avaliar a  soroprevalência de marcadores sorológicos das hepatites A, B, C e E (IgG anti-HAV, IgG anti-HEV, IgG anti-HCV e anti-HBc total)  de uma  população de 30-70 anos de residentes em Salvador. MÉTODOS: Estudo de corte transversal com nascidos entre 1945 e 1985 atendidos em laboratório da rede pública de saúde. O georrefernciamento foi  feito com o mapa de Kernell com IBGE,QGIS /SIRGAS 2000 com sorologia anti-VHA e anti-VHE e dados geográficos de 500 individuos. Testes sorológicos para IgG anti-VHA, VHE, HBc,VHC e outros marcadores de hepatite B foram realizados com 650 amostras. Os voluntários responderam a questionário contendo perguntas sobre hábitos, condutas, procedimentos médicos e dados sóciodemográficos.  RESULTADOS:  No primeiro estudo  com 500 individuos , os sororretivos analisados por georrefernciamento  apresentaram  distribuição geográfica ampla na cidade de Salvador tanto quanto ao VHA quanto ao VHE, sendo 453 (90,6%) com sororeatividade ao anti- VHA, 10 (2,0%) ao anti- VHA / anti-VHE e 2 (0,4%) exclusivamente anti-VHE.Dos 440 (88,0%) que referiram o acesso ao sistema de esgotos, 12 (2,72%) eram anti-VHE positivos. Dos 12 participantes soropositivos para VHE, 6 (50%) que retornaram à consulta médica após contato telefônico, relataram contato anterior com suinocultura.  No segundo estudo com 650 participantes, 301(46,31%) tinham idade entre 31-50 anos  e 349 (53,69%) de 51 a 70 anos, IgG anti-VHA (92,46%), anti-VHE (2,15%), anti-HBc (17,76%) e anti-VHC (3,69%), concomitante de IgG anti-VHA/anti-VHE(1,85%) e  anti-HBc/ anti-VHC (1,38%). Não foi  encontrada  associação entre fatores de risco comuns para o contato com VHA e/ou VHE na população estudada, entretanto não se pode afastar a associação da VHE com a proximidade do contato/manejo com suínos referida por alguns participantes. A soroprevalência de VHB e VHC foi associada a sexo desprotegido, compartilhamento de seringas e agulhas no grupo mais velho e uso de drogas injetáveis. O grupo de indivíduos mais velhos e do sexo masculino apresentou maior prevalência de contato com os vírus B e C. CONCLUSÃO: Os dados primários mostraram alta prevalência de anti-VHA e baixa prevalência de reatividade sérica anti-VHE com ampla distribuição nos diversos bairros da cidade. Embora os participantes tenham relatado acesso ao saneamento básico, houve contato com vírus VHA e VHE. A análise dos dados sugere que a associação entre consumo inadequado e manuseio de carne de porco / caça com infecção por VHE não deve ser descartada.De todas as hepatites,  foi encontrada a maior soroprevalência de contato com VHA, seguida de VHB, VHC e VHE. O grupo de mais velhos e os do sexo masculino apresentaram maior soroprevalencia de contato com VHB e VHC. A soroprevalencia concomitante foi baixa tanto nas hepatites de transmissão enteral quanto nas de transmissão parenteral/sexual.

Neuroinflamação e desmielinização são aspectos comuns em muitas condições neuropatológicas. Neste estudo, foram investigados os efeitos neuroprotetores, mielinogênicos e anti-inflamatórios do flavonoide agathisflavona. Co-culturas de neurônios/glia, derivadas do córtex de ratos Wistar, foram expostas a estímulo neuroinflamatório induzido por lipopolissacarídeo (LPS,1μg/mL) ou interleucina IL-1β (10ng/mL) por 24 horas e depois tratados com agathisflavona (1μM) por mais 24 horas. A imunocitoquímica mostrou que a agathisflavona protege os neurônios contra a neuroinflamação, aumentando o número de neurônios βIII-tubulina+ (βIII-tub), enquanto diminui células caspase-3+/βIII-tub+ e a intensidade de fluorescência por Fluro-Jade B. Além disso, a agathisflavona reduziu significativamente a proliferação microglial (Iba1+/BrdU+) e a proporção de células com um fenótipo pró-inflamatório M1 (CD68+/NFκB+) e controlou a astrogliose (GFAP+). RT-qPCR demonstrou que a agathisflavona regula a expressão de moléculas inflamatórias (TNF,IL-1β,NOS2,CCL5 and CCL2) e regulatória (IL-10). Em seguida, os efeitos da agathisflavona na desmielinização foram examinados em fatias cerebelares tratadas com lisolecitina (LCT, 0.5 mg/mL). Fatias de camundongos transgênicos Sox10-EGFP, Plp1-DsRed ou GFAP-EGFP (P10-P12) foram mantidas por 7 dias in vitro (DIV) e a desmielinização foi induzida por LCT por 17 h, seguido de tratamento com agathisflavona (5 ou 10μM) por 2 dias. LCT reduziu significativamente a mielinização (imunomarcação de MBP/Neurofilamento). Por outro lado, o tratamento com agathisflavona protegeu contra a desmielinização e aumentou o número de células progenitoras de oligodendrócitos NG2+. Além disso, o LCT induziu um desvio na microglia para um fenótipo inflamatório (razão M1/M2;IBA-1,CD16/CD32,CD206) e induziu aumento da expressão de mRNA de TNF, IL-1β e iNOS, o que foi revertido pela agathisflavona. Adicionalmente, agathisflavone aumentou a expressão de importantes moléculas envolvidas na diferenciação de oligodendrócitos e neuroproteção, tais como ARG1, TGFβ, CNTF, ACVR1B, OLIG2, CSPG4, FGF2, GAS6, LIF, e do receptor purinérgico P2Y2 acoplado à proteína G. Usando imageamento de cálcio em nervo óptico de camundongos, demonstramos um aumento significativo na sinalização de cálcio mediada por ATP após tratamento com agathisflavona. Acoplamento molecular confirmou que agathisflavona age via receptores de estrógeno e de ácido retinóico. Este estudo demonstrou que a agathisflavona tem um efeito protetor significativo contra neuroinflamação e desmielinização, induzindo uma mudança proeminente na microglia para um fenótipo anti-inflamatório, e desponta, portanto, como uma molécula promissora para o tratamento de doenças neurodegenerativas.

A asma se tornou um problema de saúde pública e sua prevalência tem aumentado rapidamente. Trata-se de uma doença multifatorial, com evidência de inflamação crônica das vias aéreas, caracterizada por sintomas de sibilos, aperto no peito, falta de ar e tosse, que podem variar em intensidade e com o tempo. Estima-se que 334 milhões de pessoas são afetadas no mundo por esta doença, acometendo indivíduos de todas as idades. A imunopatogênese envolve resposta exacerbada do tipo Th2, com produção de citocinas e quimiocinas inflamatórias, como IL-4, IL-5, CCL11, IL-13, que medeiam a ativação de células, hipersecreção de muco e hiperresponsividade brônquica contribuindo pra a gravidade da doença. Nesse contexto, células regulatórias (Treg) têm sido reconhecidas com função supressora, manutenção da tolerância periférica prevenção e limitação das doenças autoimunes e inflamatórias, como a asma. Tais funções e desenvolvimento das Treg deve-se a expressão de Foxp3, que é um fator de transcrição codificado pelo gene FOXP3. Variações genéticas no FOXP3 podem afetar a expressão dessa molécula e, portanto, a suscetibilidade da asma. Sabe-se que há contribuição da genética para o risco de asma, mas poucos estudos de associação genética foram realizados no Brasil, e nenhum envolvendo asma grave e FOXP3. O objetivo desse estudo foi investigar variantes genéticas do FOXP3 em indivíduos com asma grave em uma população brasileira. Para isso, o DNA foi extraído do sangue periférico de 1.418 indivíduos recrutado do ProAR, estudo de caso-controle, em Salvador, Brasil. As variantes rs2280883, rs2294021, rs3761548 e rs2232365 foram genotipados usando a tecnologia TaqMan. Análises para associações genéticas foram realizadas por meio de regressões logísticas utilizando o software PLINK 1.9, ajustado para idade, sexo e cor da pele. A frequência das células T reguladoras no sangue foi determinada por citometria de fluxo e avaliada no software Graphpad. Amostras de soro foram testadas para um painel de citocinas e quimiocinas (IL-5, IL-10, IL-13, IL-8, IFN-γ e CCL11) usando o MILLIPEX Kit ® e sistema Luminex MAGPIX®, sendo os dados processados pelo software MILLIPLEX® Analyzer 5.1 e analisados no software Graphpad. Análises in silico foram realizadas a partir das plataformas rSNPbase e RegulomeDB. Nossos resultados mostraram que o alelo C de rs2294021 foi positivamente associado à asma e à sua gravidade. Nas mulheres, o alelo C de rs2294021 foi positivamente associado à asma e à asma leve. A freqüência de células T CD4+ CD25h expressando Foxp3 foi significativamente maior no genótipo CC de rs2294021 e no genótipo TT de rs2232365. Os níveis de CCL11 foram significantes entre os genótipos do rs2294021 com aumento da quimiocina para indivíduos CC quando comparados com indivíduos CT. Por outro lado, houve diferença significante nos níveis de IL-5 entre os genótipos do SNV rs2232365 com diminuição da citocina em indivíduos CT quando comparados aos indivíduos CC. Estes achados sugerem que variantes no FOXP3 podem influenciar na gravidade da asma. No entanto, são necessários mais estudos sobre a genética da asma envolvendo o gene FOXP3, uma vez que há controversias e poucas evidências dessas variantes genéticas, para melhor compreensão da asma grave.

Segundo cifras da OMS quase um quarto da população mundial é atingida por parasitoses. Estas doenças são em sua grande maioria negligenciadas, e dentre elas a toxocaríase causada por nematelmintos do gênero Toxocara (T. canis e T. cati) é mais prevalente e mais negligenciada. Esta infecção é distribuída amplamente no mundo, porém os países que se encontram em área tropicais e em desenvolvimento são os mais atingidos. Os hospedeiros definitivos destes parasitos são o cão e o gato. No ser humano ou outro mamífero, causam infecção paratênica posto que os parasitos não conseguem se desenvolver até seu estágio adulto, ocasionando diferentes síndromes como a larva migrans visceral (LMV) a larva migrans ocular (SLMO) a neuro-toxocaríase e a infecção assintomática. O tratamento da toxocaríase é baseado na administração de drogas anti-helmínticas, que não resolvem a infecção, dada às reinfecções constantes que ocorrem nas áreasendêmicas. De igual forma esse método de tratamento pode perder a eficácia com o decorrer do tempo devido à possível resistência dos arasitos a estas drogas. Baseado nestas premissas, este trabalho objetivou identificar mediante análises in silico, oteínas do T. canis capazes de gerar uma resposta imune protetora contra a infecção do parasito. Para alcançar esse objetivo, o presente trabalho teve 3 etapas: revisão da literatura para identificar proteínas candidatas para vacinas que estivessem relatadas e análises in silico de suas sequencias genicas. Foram pré-selecionadas 30 genes codificadores de proteínas alvos e selecionadas 4 proteínas (rTcGPRs, rTcCad, rTcVcan e rTcCys) que tiveram os melhores resultados nas análises in silico. Outra abordagem foi testar 4 proteínas TES 26, TES 32, MUC-3 e CTL-4 selecionados por espectrometria de massa como imunorreativas. Em seguida as condições de expressão e purificação das proteínas foram padronizadas e sete destas proteínas foram expressas, purificadas e testadas quanto aos seus potenciais imunogênicos em soros de cães ou humanos. Os resultados indicaram que as proteínas recombinantes eram reconhecidas pelos anticorpos presentes nos soros dos cães infectados ou em indivíduos soropositivos pelo método de ELISA. Superadas estas etapas foi desenvolvido um modelo murino de toxocaríase onde as proteínas recombinantes foram testadas para avaliar o potencial profilático das mesmas. Os experimentos in vivo mostraram que as proteínas recombinantes foram capazes de estimular a produção de anticorpos IgE e IgG e as subclasses IgG1 e IgG2a observados em soros dos camundongos vacinados. Observou-se também uma redução na migração das larvas nos animais vacinados e desafiados com ovos infectantes de T.  canis. Nos ensaios ex vivo foi possível observar que os grupos vacinados tiveram uma maior expressão de citocinas produzidas por células mononucleares do sangue periférico, tanto de perfil Th1 como Th2 comparado com os grupos controles, sendo rTcCad e rTcVcan as moléculas mais promissoras para vacinação de animais contra toxocaríase. 

O vírus linfotrópico de células T humano tipo 1 (HTLV-1) é um retrovírus que pode ativar uma resposta imune intensa com proliferação linfocítica espontânea e produção de quimiocinas e citocinas pró-inflamatórias. A via de sinalização Notch participa da determinação do destino celular, da proliferação, da sobrevivência e de vários mecanismos de regulação no sistema imunológico. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da inibição de Notch1, Notch3 e da enzima γ-secretase na resposta imune de indivíduos infectados pelo HTLV-1. Para isso, estudou-se o bloqueio dos receptores Notch1 (anti-Notch1) e Notch3 (anti-Notch3) e a inibição da enzima γ-secretase em cultura de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de portadores do HTLV-1. A utilização do inibidor de γ-secretase éster-t-butílico-de-N-[N-(3,5-difluorofenacetil)-l-alanil]-S-fenilglicina (DAPT) diminuiu a produção de IFN-γ, TNF e CXCL9, e aumentou produção de IL-1β. O outro inibidor de γ-secretase 7-Amino-4-chloro-3-metoxi-1H-2-benzopirano (JLK6) diminuiu a produção da maioria das citocinas e quimiocinas estudadas, IL-1β, IL-6, IFN-γ, CXCL9. A utilização de anti-Notch1 levou ao aumento de IL-1β, IL-6 e TNF, e permitiu menor produção de IFN-γ, CXCL9 e CXCL10. Ao se utilizar o anti-Notch3, foi observado o aumento da produção de IL-1β, IL-6 e TNF. Foi observado um aumento significativo na carga proviral do HTLV-1 no tratamento com JLK6, enquanto que com bloqueio de Notch1 e Notch3 não houve interferência. Observamos que a sinalização Notch e o funcionamento da enzima γ-secretase estão envolvidos no controle da resposta imune do HTLV-1. Os mecanismos avaliados neste estudo possibilitam à compreensão de estratégias terapêuticas a serem utilizadas no controle da resposta imune exacerbada que é observada na infecção pelo HTLV-1.

A microglia surge como um ator central na patogênese das doenças neurodegenerativas associadas à neuroinflamação, dentre elas, a Doença de Parkinson e a Doença de Alzheimer. Diversos flavonoides, dentre eles a rutina, têm importante influência na modulação da resposta microglial e fatores solúveis liberados. O grupo de pesquisa do Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular descobriu recentemente que a rutina modula a ativação microglial/ macrofágica para um fenótipo M2, que é associado à neuroproteção. Estudos demonstraram que essas células são capazes de liberar fatores que interferem na biologia dos neurônios, em termos de diferenciação e viabilidade celular. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da ativação microglia sobre neurônios e sua modulação pelo flavonoide rutina. Para tanto, culturas primárias de microglia de ratos P0-2 Wistar foram tratadas com 0,1% de DMSO (controle negativo) ou LPS (1 μg/ mL) e/ ou rutina (0,5 e 1 μM). Após 24 h de tratamento, o meio de cultura foi substituído. E o novo meio foi coletado após 24 h para uso como meio condicionado de microglia (MCM). A microgliose foi avaliada através de imunocitoquímica para Iba1 e análise de morfologia. Células PC12 foram tratadas por 24 h com os MCMs, em seguida, alterações morfológicas em células PC12 foram avaliadas através da coloração de Rosenfeld. A indução de autofagia em células PC12 foi analisada por Western Blot para LC3II e a função lisossômica foi analisada por colocação com laranja de acridina. A modulação de citocinas e neurotrófinas foi analisada em microglia por qPCR. Observou-se que o MCM derivado do tratamento com rutina (1 μM) induziu mudanças na morfologia das células PC12 poligonais, que passaram a contrair o corpo celular e emitir prolongamentos citoplasmáticos. Por outro lado, não foram observadas alterações em termos de vacuolização, expressão de LC3-II e acidificação lisossomal em células PC12 sob quaisquer condições de tratamento de MCM. De fato, os resultados de qPCR demonstraram que a rutina aumenta os níveis de mRNA GDNF e ARG em microglia, por outro lado o LPS aumenta o nível de mRNA da TNF, IL-6 e NLRP3. Estes resultados sugerem que o MCM dos tratamentos com rutina induz morfogênese em células PC12, e este efeito pode estar relacionado à modulação positiva do GDNF em microglia. Este efeito não pode ser visualizado em células PC12 que receberam MCM derivado de tratamento com LPS + RUT, o que sugere que fatores inflamatórios interferem negativamente no efeito morfogênico visualizado.

A asma uma doença inflamatória crônica das vias aéreas inferiores, caracterizada por hiperreatividade brônquica, hiperprodução de muco e variável limitação do fluxo aéreo, muitas vezes a asma é influenciada pela atopia, que é uma tendência a produzir imunoglobulina E (IgE) em resposta a alérgenos comuns estando envolvida em inúmeras condições denominadas atópicas, incluindo a asma alérgica, que se trata de uma doença heterogênea onde fatores ambientais e genéticos vão contribuir para o seu desenvolvimento. A imunopatologia das doenças perfil atópico é liderada por moléculas do tipo Th2, especialmente citocinas (IL4, IL-5, IL13) resultando na produção de IgE, recrutamento de eosinófilos para o local da inflamação e hiperprodução de muco, este tipo de resposta celular induzida também está envolvida na defesa contra helmintos. Dentre os mediadores inflamatórios neste contexto destacam-se os leucotrienos cisteínicos (CysLTs), que são moléculas que contribuem para sintomas, tais como, broncoconstrição, hiperresponsividade das vias respiratórias, aumento da permeabilidade vascular e eosinofilia. Os CysLTs atuam principalmente através de dois receptores, o receptor de leucotrienos tipo 1 (CysLTR1) e o receptor de leucotrienos tipo 2 (CysLTR2), desempenhando papel importante na imunopatologia dessas doenças, inclusive seus inibidores sendo, atualmente, alvos terapêuticos. Alguns estudos vêm associando polimorfismos genéticos em CYSLTR1 e CYSLTR2 com fenótipos de asma, atopia, resistência a medicamentos e até mesmo resposta diferenciada aos seus ligantes endógenos. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar a associação destes polimorfismos com asma, marcadores de atopia e infecções helmínticas. Os polimorfismos foram genotipados através de um painel commercial da Illumina para as duas coortes usadas neste trabalho, uma populacional SCAALA (Mudanças Sociais, asma e alergia na américa latina) e outra, um estudo caso-controle para asma grave do ProAr (Programa de Controle da Asma e da Rinite Alérgica na Bahia). Verificamos que os SNVs no CYSLTR2 rs1323556, rs1575464, rs61735177) foram associados com asma, gravidade de asma (rs61735175, rs7996072, função pulmonar (rs9595960, rs73182544)marcadores de alergia (rs9595965, rs73182544, rs9595960) ) e resposta a helmintos (rs11843756, rs1359108, rs78149855, rs12875723), evidenciando o importante papel destes receptores na resposta efetora tipo T2 envolvida nestas condições. Estudos adicionais são necessários para investigar o impacto funcional destas variantes.
Palavras-chave:

A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas inferiores,
caracterizada pela hiperreatividade, produção de muco e obstrução das vias
aéreas. Diversos fatores influenciam na sua susceptibilidade e
desenvolvimento, entre eles a variabilidade genética. O gene NR3C1 codifica o
receptor de glicocorticoides (GR), um importante fator tanto na patologia da
asma quanto na resposta terapêutica. Este receptor interage com o cortisol ou
seus análogos corticosteroides levando a respostas celulares responsáveis
pela modulação da resposta imunológica exacerbada. Estudos atuais buscam
mostrar associações entre variantes no NR3C1 com diversas doenças, entre
elas a asma, além de tentar entender melhor como o GR age no
desenvolvimento e tratamento da asma. O objetivo deste trabalho é investigar
como variantes no NR3C1 estão associadas com a asma, atopia e resposta
terapêutica. O estudo foi realizado na população do PROAR, onde 1178
amostras de indivíduos adultos foram genotipadas utilizando o chip Illumina
Infinium Multi-Ethnic AMR/AFR-8 Kit. As análises de associação foram
realizadas utilizando o software Plink. As variantes rs6190, rs17209237, rs6198
e rs4607376 foram associadas com obstrução das vias aéreas. Enquanto que
as variantes rs4912650, rs73797465, rs6190, rs6877893, rs56149945 e
rs4912650 foram associadas com a falta de resposta a broncodilatadores, em
indivíduos com asma e asma grave. Além disso, oito variantes foram
associadas com marcadores de atopia. Portanto, esses SNVs podem auxiliar
na melhor compreensão da asma e sua estratégia terapêutica e tem potencial
para futuros estudos funcionais para melhor entender esta via.

Neospora caninum (Nc) é um protozoário intracelular obrigatório que infecta animais domésticos e selvagens, através da ingestão de oocistos ou da infecção congênita por taquizoitos. As células do sistema nervoso central (SNC) podem ser infectadas por este parasita. O processo de infecção ocorre com a ativação de astrócitos e microglia para produzir citocinas mediadoras da resposta inflamatória, capazes de controlar o crescimento do parasita, preservando o tecido nervoso. O trabalho objetivou avaliar os padrões de mudança morfológica dessas células, em resposta à infecção por Nc. Os camundongos C57BL/6 foram submetidos à inoculação de taquizoitos da cepa Nc-1 pelo método estereotáxico, sendo avaliados diariamente para identificação de possíveis alterações clínicas decorrentes da infecção. Após 3 ou 7 dias de infecção, os animais foram sacrificados e amostras de cérebros foram coletadas para os procedimentos analíticos. O marcador de proteína ácida fibrilar glial (GFAP) e a molécula adaptadora de ligação ao cálcio ionizado 1 (Iba-1) foram utilizados para caracterizar por imunohistoquímica, respectivamente, os fenótipos astrocitário e microglial em animais controle e infectados. Expressão relativa de citocinas TNF, IL-6, IL-10 e da Arg-1 foram analisadas em tecido nervoso por RT-PCR. Durante a infecção intracerebral de camundongos com Nc-1 não foram observadas alterações neurocomportamentais e as alterações da glia não caracterizaram um processo inflamatório instalado. A expressão relativa de citocinas TNF, IL-6, IL-10 e Arg-1 também foi condizente com ausência de inflamação, o que sugere modulação da resposta imune por parte do parasito, em prol da manutenção da homeostase cerebral e sua consequente sobrevivência.

A asma é uma doença respiratória complexa caracterizada por obstrução intermitente das vias aéreas resultante de uma combinação de fatores ambientais e genéticos. O Fator Transformador de Crescimento - β1 (TGF-β1) desempenha um papel importante no remodelamento das vias aéreas e na asma através da sua atividade imunoregulatória. Polimorfismos no gene TGFB1 tem sido implicados na susceptibilidade à asma, porém os resultados são controversos. O objetivo do presente estudo foi explorar as associações entre variantes genéticas no gene TGFB1 com risco de asma grave em um estudo caso-controle em Salvador, Bahia, Brasil. Este estudo incluiu 975 pacientes com asma (465 indivíduos com asma leve e 510 com asma grave) e 443 indivíduos sem asma recrutados no ProAR (Programa de Controle de Asma e Rinite Alérgica na Bahia). Quatro polimorfismos de nucleotídeo único - SNPs (rs1800469, rs1800469, rs2241712, rs2241715) no gene TGFB1 foram genotipados usando a metodlogiaTaqMan. Este estudo avaliou a associação entre polimorfismos no gene TGFB1e asma, função pulmonar e respostas ao teste cutâneo (SPT). O impacto desses polimorfismos sobre a frequência de linfócitos T CD4 + expressando TGF-β1, IL-10 e FOXP3 também foram avaliados. A associação entre genotíposdesses SNPs e asma foi avaliada através de regressão logística ajustada por sexo, idade e cor da pele. Para os quatro polimorfismos analisados, não foram observadas diferenças significativas nas freqüências de alelos ou genótipos entre indivíduos saudáveis e pacientes asmáticos (p> 0,05), pacientes com asma refratária ou não refratária e testes de função pulmonar (FEV₁) (p> 0,05). No entanto, o rs2241715 (Alelo A) e o rs1800469 (Alelo A) foram associados positivamente com asma grave quando comparado à asma leve (OR = 1,45; IC 1,07 - 1,97 e OR = 1,38; IC 1,02 - 1,87, respectivamente). Todos os SNPs foram associados com SPT paraDermatophagoides farinae (p <0,05); e o rs2241712 foi positivamente associado com SPT para A. alternata (OR = 1,80,81; CI 1,02 -3,14). Os rs1800469 (A), rs2241712 (C) e rs2241715 (A) foram associados a maior frequência de linfócitos T CD4+ expressando IL-10 e FOXP3. Nenhum dos polimorfismos alteram a expressão de mRNA para TGF-β1 em células de sangue total através de análise in silico. Estes resultados sugerem que os polimorfismos no gene TGFB1 podem desempenhar um papel importante na gravidade da asma