PPGIM PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM IMUNOLOGIA (PPGIM) INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE Telefone/Ramal: Não informado
Dissertações/Teses

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2024
Dissertações
1
  • LORENA MIRANDA DE SOUZA
  • Avaliação do potencial alergênico do ácaro de poeira doméstica Glycycometus malaysiensis

  • Orientador : CARINA DA SILVA PINHEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CARINA DA SILVA PINHEIRO
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • NATALIA GOMES DE MORAIS CONEGLIAN
  • Data: 29/01/2024

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  •  Introdução: Os ácaros da poeira doméstica são considerados uma das principais fontes de aeroalergénios e estão associados ao desenvolvimento de doenças alérgicas. O contato recorrente com o alérgeno pode levar a uma inflamação crônica, resultando no aparecimento de doenças alérgicas como asma, rinite e dermatite atópicas. No Brasil, os ácaros mais prevalentes pertencem aos gêneros Dermatophagoides e Blomia. Entretanto, em estudo anterior realizado pelo nosso grupo, identificamos pela primeira vez a presença do ácaro Glycycometus malaysiensis, que havia sido relatado como agente sensibilizador em países asiáticos. Tanto o ácaro G. malaysiensis como o B. tropicalis apresentam semelhanças morfológicas, levantando a possibilidade de reatividade cruzada entre os seus alergênicos. No entanto, os alérgenos específicos desta espécie de ácaro ainda não foram completamente caracterizados. Objetivos: Isolamento e Identificação do ácaro G.malaysiensis da poeira doméstica e avaliação da reatividade antigênica no soro de pacientes atópicos. Material e Métodos: Os extratos alergênicos foram identificados utilizando a técnica de multiplex PCR e caracterizados através de SDS-PAGE e Western blot. Um total de 57 soros de pacientes atópicos teve sua reatividade à IgE referente a esses extratos avaliados por ELISA indireto Resultados: Através Westernblot sem inibição e com inibição ao extrato de D. pteronyssinus observamos uma reatividade positiva dos pacientes atópicos às bandas referentes ao ácaro G. malaysiensis. Além disso, os pacientes testados apresentaram uma reatividade à IgE maior aos extratos identificado com os ácaros D. pteronyssinus e G. malaysiensis em comparação com o extrato contendo apenas o ácaro D. pteronyssinus Conclusão: Neste estudo, foi possível observar o potencial imunogênico de G. malaysiensis e a sua importância nos indivíduos avaliados.


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  • Introduction: Dust mites are considered one of the main sources of aeroallergens and are associated with the development of allergic diseases. Recurring contact with the allergen can lead to chronic inflammation, which may result in the onset of allergic diseases such as asthma, rhinitis and atopic dermatites. In Brazil, the most prevalent mites belong to the genera Dermatophagoides and Blomia. However, in a previous study conducted by our group we identified for the first time the presence of the mite Glycycometus malaysiensis, which had already been reported as a sensitizing agent in Asian countries. Both G. malaysiensis and B. tropicalis mites exhibit morphological similarities, raising the possibility of cross-reactivity between their allergens. Nevertheless, the specific allergens of this mite species have not been fully characterized. Objectives: Identification and isolation of the mite G.malaysiensis from house dust and evaluation of antigen reactivity in serum from atopic patients. Material and Methods: The allergenic extracts were identified using the multiplex PCR technique and characterized using SDS-PAGE and Western Blot. A total of 57 sera from atopic patients had IgE reactivity to these extracts assessed by indirect ELISA. Results: Using Western blots without inhibition and with inhibition to the extract of D. pteronyssinus, was observed a positive reactivity of the atopic patients to the bands referring to the G. malaysiensis mite. In addition, the patients tested showed greater IgE reactivity to the extracts identified with the D. pteronyssinus and G. malaysiensis mites compared to the extract containing only the D. pteronyssinus mite. Conclusions: In this study, we could observe the immunogenic potential of G. malaysiensis and its possible significance in the evaluated indiviudals.

2
  • TAILA TAMILLE DOS SANTOS
  • EFEITOS DA LUTEOLINA SOBRE A MUCOSITE INTESTINAL INDUZIDA POR IRINOTECANO NO DUODENO E CÓLON DE CAMUNDONGOS

  • Orientador : MARCELO BIONDARO GOIS
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCAS ANTONIO DUARTE NICOLAU
  • JUCIELE VALERIA RIBEIRO DE OLIVEIRA
  • MARCELO BIONDARO GOIS
  • Data: 21/02/2024

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  • IntroduçãoA mucosite é uma reação inflamatória complexa que ocorre no trato gastrointestinal de pacientes submetidos a quimioterapia ou radioterapia. Atualmente, não existe um tratamento totalmente eficaz para essa condição. Estudos recentes têm explorado os flavonoides como uma alternativa para esse problema. Objetivo: Investigar os efeitos da administração oral de 30 mg/kg de luteolina sobre as células e tecidos que compõem a parede do duodeno e cólon de camundongos com mucosite intestinal induzida por irinotecano. Métodos: Dezoito camundongos foram distribuídos em grupo Controle, Veículo e Luteolina. O grupo controle não foi tratado. O grupo veículo recebeu água por 14 dias. O grupo Luteolina recebeu diariamente 30 mg/kg de luteolina por 14 dias. Dos dias 7 a 10, os grupos Veículo e Luteolina receberam irinotecano (75 mg/kg) para induzir a mucosite intestinal. Os camundongos foram sacrificados 72 horas após a última dose de irinotecano. Duodeno e cólon foram coletados e fixados. Análises histoquímicas e imuno-histoquímicas foram realizadas. Resultados: Demonstramos que o tratamento com luteolina apresentou efeitos benéficos na mucosite intestinal induzida pelo irinotecano. Esses benefícios incluíram a melhoria das alterações histopatológicas, aumento na produção de muco e expressão de MUC-2, aumento do número de células de Paneth, redução do número de mastócitos, preservação da morfologia neuronal e aumentou a deposição de fibras de colágeno tipo III. Conclusão: A luteolina reduz os danos da mucosite intestinal induzida por irinotecano, indicando seu potencial terapêutico promissor.


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  • Introduction: Mucositis is a complex inflammatory reaction that occurs in the gastrointestinal tract of patients undergoing chemotherapy or radiotherapy. There is currently no fully effective treatment for this condition. Recent studies have investigated flavonoids as an alternative for this problem. Aim: To investigate the effects of oral administration of 30 mg/kg luteolin on the cells and tissues of the duodenum and colon wall of mice with irinotecan-induced intestinal mucositis. Methods: Eighteen mice were divided into a control, a vehicle and a luteolin group. The control group was not treated. The vehicle group received water for 14 days. The luteolin group received 30 mg/kg luteolin daily for 14 days. From day 7 to 10, the vehicle and luteolin groups received irinotecan (75 mg/kg) to induce intestinal mucositis. The mice were sacrificed 72 hours after the last irinotecan dose. The duodenum and colon were removed and fixed. Histochemical and immunohistochemical analyses were performed. Results: We demonstrated that treatment with luteolin had beneficial effects on irinotecan-induced intestinal mucositis. These beneficial effects included improvement of histopathological changes, increased mucus production and MUC-2 expression, increased number of Paneth cells, decreased number of mast cells, preservation of neuronal morphology and increased deposition of type III collagen fibres. Conclusion: Luteolin reduces the damage of irinotecan-induced intestinal mucositis, indicating its promising therapeutic potential.

3
  • LAÍS SALES DOS SANTOS
  • PAPEL DE POLIMORFISMOS NO GENE INTERFERON-GAMA EM

    FENÓTIPOS DE ASMA T2 E NÃO-T2

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • CANDACE MACHADO DE ANDRADE
  • Gabriela Pimentel Pinheiro das Chagas
  • Data: 28/02/2024

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  • Introdução: A asma é uma doença inflamatória multidimensional que se caracteriza pela presença de sintomas respiratórios desencadeadores de processos inflamatórios que podem estar associados ou não à atopia. Apesar da asma T2 ser o principal fenótipo mais conhecido, o fenótipo não-T2 está ligado a vários mecanismos, incluindo a via TH1 liderada pelo interferon-gama, principalmente ligada à falta de resposta e à doença grave. Objetivo: Investigar o papel das variantes genéticas do gene do interferon gama (IFNG) nos fenótipos de asma T2 e não-T2. Metodologia: Foram selecionados 601 indivíduos com asma do Programa para o Controle da Asma na Bahia (ProAR), os quais foram estratificados em asma T2, aqueles que apresentavam eosinófilos (≥ 260UI/mL), teste cutâneo positivo para pelo menos um alérgeno e/ou IgE positivo, e não T2, para aqueles que não atendiam a esses requisitos. As análises de regressão foram realizadas através do PLINK 1.9 e o SPSS foi utilizado para realizar estatísticas como qui-quadrado, testes de normalidade e gráficos. Resultados: No total, 7 SNVs foram associados à gravidade da asma, 2 associados negativamente (rs2430561 e rs2069718) e 5 associados positivamente (rs2069723, rs2069719, rs2069717, rs2069715 e rs74099994). Quanto à reversibilidade, foram identificadas 3 variantes significativas (rs2069713, rs1861493 e rs2069718) e para a atopia uma variante (rs2069713) foi associada negativamente. Em relação à produção de citocinas, o grupo com asma moderada/grave do fenótipo T2 produziu maior quantidade em comparação ao grupo com asma leve. Conclusão: Os SNVs do IFNG estão associados à gravidade e reversibilidade da asma em indivíduos com fenótipos T2 e não-T2, bem como, associado a atopia em asmáticos.


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  • Introduction: Asthma is a multidimensional inflammatory disease that is characterized by the presence of respiratory symptoms triggering the inflammatory processes which can be associated or not with atopy. Despite T2 asthma is the main well-known phenotype, non-T2 phenotype is linked to various mechanisms, including the TH1 pathway led by the interferon-gamma mainly and linked to lack of response and severe disease. Objective: To investigate the role of interferon-gamma gene (IFNG) genetic variants on T2 and non-T2 asthma phenotypes. Methodology: 601 individuals with asthma were selected from Programa para o Controle da Asma na Bahia (ProAR), which were stratified into T2 asthma, those who had eosinophils (≥ 260UI/mL), positive skin test for at least one allergen and/or positive IgE, and non T2 asthma, for those who did not meet these requirements. Regressions analyses were carried out through PLINK 1.9 and SPSS was used to  perform statistics such as chi-square, normality tests and figures. Results: In total, 7 SNVs were
    associated with asthma severity, 2 negatively associated (rs2430561 and rs2069718) and 5 positively associated (rs2069723, rs2069719, rs2069717, rs2069715 and rs74099994). Regarding reversibility, 3 significant variants were identified (rs2069713, rs1861493 and rs2069718) and for atopy one variant (rs2069713) was negatively associated. Regarding cytokine production, the group with moderate/severe asthma of the T2 phenotype produced a greater amount compared to the group with mild asthma. Conclusion: IFNG SNVs are associated to asthma severity and reversibility in individuals with T2 and non-T2 phenotypes and atopy among asthmatics. 

4
  • KARINA COSTA DA SILVA
  • FLAVONOIDE AGATISFLAVONA APRESENTA EFEITO ANTITUMORAL EM CÉLULAS DE GLIOBLASTOMA: MODULAÇÃO DA EXPRESSÃO DE CITOCINAS INFLAMATÓRIAS E MICRO-RNAs

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • GISELLE PINTO DE FARIA LOPES
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 29/04/2024

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  • O glioblastoma (GBM) é o tipo de tumor cerebral mais frequente, altamente agressivo e de difícil tratamento e mau prognóstico. O microambiente do GBM é composto em grande parte das células vasculares e estromais com infiltrados inflamatórios, células-tronco tumorais, microglia e demais células presentes no microambiente que
    suportam a progressão do tumor. A comunicação entre as células tumorais e as células não-tumorais é significativa e envolve fatores inflamatórios e de crescimento e, cada vez mais, o papel de alguns microRNAs (miRNAs) tem sido relacionados ao prognóstico do GBM. Assim, é importante investigar novas alternativas terapêuticas que tenham como alvo a modulação da expressão de componentes de sinalização entre células no microambiente do GBM. Agatisflavona é um biflavonoide que tem apresentado in vitro efeitos neuroprotetores e anti-inflamatórios, assim como efeito seletivo antitumoral em células de GBM no controle da viabilidade, migração e diferenciação por mecanismos ainda pouco compreendidos. Neste estudo, investigamos o efeito do flavonoide agatisflavona na modulação da expressão de componentes da resposta inflamatória e miRNAs e associação como o efeito no crescimento de células de GBM. Para isso, culturas de células de GBM humanas (GL-15) de glioma de ratos (C6) e co-culturas de células C6 com microglia isoladas do córtex cerebral de ratos Wistar, foram tratadas com o agatisflavona (1-30 μM) e, após 24 h, submetidas a análise da viabilidade celular pelo teste do MTT, da migração pelo ensaio de ranhura de tapete celular e da expressão de mediadores inflamatórios e de miRNAs por RT-qPCR. Foi observado que a agatisflavona (5-30 μM) reduziu a viabilidade e inibiu migração e proliferação em monoculturas de células GL-15 e C6, bem como nas co- culturas C6/microglia. A análise por RT- qPCR mostrou que a agatisflavona (5 μM) reduziu a expressão de miR-125 no secretoma oriundo de células GL-15. Agatisflavona também regulou positivamente a expressão de mRNA para os  ediadores inflamatórios IL1-β, IL-6, TNF e TGFβ. Nesse sentido, nossos resultados reforçam o efeito antitumoral desse flavonoide e destacam os efeitos regulatórios para mediadores associados ao microambiente, o que pode ser considerado para uma futura estratégia adjuvante para o tratamento do GBM.


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  • Glioblastoma (GBM) is the most common type of brain tumor, highly aggressive, difficult to treat and with a poor prognosis. The microenvironment of GBM is largely composed of vascular and stromal cells with inflammatory infiltrates and, specifically, the prognosis has been related to the tumor stem cells, microglia and mesenchymal cells present in the microenvironment that support tumor progression. Communication between tumor cells and healthy cells is significant and involves inflammatory and growth factors, and the role of some microRNAs (miRNAs) has increasingly been linked to the prognosis of GBM. Therefore, it is important to investigate new therapeutic alternatives that target signaling components between cells in the GBM microenvironment. Agathisflavone is a biflavonoid that has shown neuroprotective and anti-inflammatory effects in vitro, as well as a selective antitumor effect in GBM cells controlling viability, migration and differentiation through mechanisms that are still poorly understood. In this study, we investigated the effect of the flavonoid agathisflavone on modulating the expression of inflammatory response components and miRNAs and association with the effect on the growth of GBM cells. For this, cultures of human GBM (GL-15) and rat glioma (C6) cells and co- cultures of C6 cells with microglia, obtained from the cerebral cortex of Wistar rats, were treated with agathisflavone (1-30 μM). After 24 h treatments they were analyzed in terms of cell viability by the MTT test, cell migration using the scratch assay, and expression of inflammatory mediators and miRNAs by RT-qPCR. It was observed that agathisflavone (5-30 μM) dose-dependently reduced cell viability and inhibited migration in monocultures of GL15 and C6 cells, as well as in C6/microglia co- cultures. RT-qPCR showed that 3 μM agathisflavone down-regulated the expression of miR-125 and miR155 in exosomes of GL-15 cells. Agatisflavone also upregulated the expression of IL1-β, IL-6, TNF, TGFβ and Arginase-1 in GBM cells. In this sense, our results reinforce the antitumor effect of the flavonoid and highlight the regulatory effects for mediators associated with the tumor microenvironment, which can be considered for adjuvant treatment for malignant glioma. 

Teses
1
  • Bianca Sampaio Dotto Fiuza
  • PERFIL DA MICROBIOTA INTESTINAL EM INDIVÍDUOS ASMÁTICOS E SEU PAPEL IMUNOMODULADOR

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • GUSTAVO NUNES DE OLIVEIRA COSTA
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • MARCELO BIONDARO GOIS
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • Data: 05/02/2024

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  • O fenômeno da disbiose no microbioma intestinal pode influenciar o desenvolvimento imunológico do hospedeiro e a incidência de doenças alérgicas. Acredita-se que as interações microbioma-hospedeiro, ou seja, a simbiose, contribuam para o desenvolvimento adequado do sistema imunológico, enquanto a disbiose microbiana tem sido associada a uma variedade de distúrbios inflamatórios, incluindo a asma. O objetivo deste estudo é caracterizar o perfil taxonômico da microbiota intestinal de indivíduos asmáticos, participantes do World Asthma Phenotypes (WASP), e associá-lo a mecanismos imunomoduladores associados. A avaliação da microbiota intestinal foi realizada a partir do sequenciamento da região V4 do gene 16S rRNA do DNA bacteriano extraído de amostras de fezes, seguido de análise de bioinformática no software QIIME2. A associação com a resposta imune foi realizada utilizando marcadores como a positividade ao teste cutâneo, celularidade do escarro induzido e dosagem de citocinas no lavado nasal. Embora todos os filos predominantes, como Tenericutes, Proteobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes e Actinobacteria, tenham sido consistentes entre asmáticos e não asmáticos, observaram-se diferenças nas abundâncias relativas. Não foram identificadas diferenças significativas na riqueza ou diversidade bacteriana entre asmáticos e não asmáticos, com base na diversidade alfa. No entanto, uma dissimilaridade estatisticamente significativa na diversidade beta foi observada. O gênero Bacteroides destacou-se como o mais abundante, contribuindo para a dissimilaridade entre o grupo asmático, enquanto Prevotella foi mais prevalente em não asmáticos. A presença de Bacteroides na microbiota dos asmáticos correlacionou-se com a produção de IL-4 no lavado nasal. Esses resultados reforçam a compreensão das diferenças na comunidade microbiana entre indivíduos asmáticos e não asmáticos.


  • Mostrar Abstract
  • The phenomenon of dysbiosis in the intestinal microbiome can influence the host's immune development and the incidence of allergic diseases. It is believed that microbiome-host interactions, i.e., symbiosis, contribute to the proper development of the immune system, while microbial dysbiosis has been associated with a variety of inflammatory disorders, including asthma. The aim of this study is to characterize the taxonomic profile of the intestinal microbiota in asthmatic individuals participating in the World Asthma Phenotypes (WASP) and associate it with related immunomodulatory mechanisms. The assessment of the intestinal microbiota was conducted through sequencing the V4 region of the 16S rRNA gene from bacterial DNA extracted from stool samples, followed by bioinformatic analysis using the QIIME2 software. Association with the immune response was investigated using markers such as skin prick test positivity, induced sputum cellularity, and cytokine levels in nasal lavage. Although all predominant phyla, such as Tenericutes, Proteobacteria, Firmicutes, Bacteroidetes, and Actinobacteria, were consistent between asthmatics and non-asthmatics, differences in relative abundances were observed. No significant differences in bacterial richness or diversity were identified between asthmatics and non-asthmatics based on alpha diversity. However, a statistically significant dissimilarity in beta diversity was observed. The genus Bacteroides was the most abundant, contributing to the dissimilarity within the asthmatic group, while Prevotella was more prevalent in non-asthmatics. The presence of Bacteroides in the microbiota of asthmatics correlated with IL-4 production in nasal lavage. These results reinforce the understanding of differences in the microbial community between asthmatic and non-asthmatic individuals.

2
  • ROGERIO REIS CONCEICAO
  • DESCRIÇÃO DO PERFIL DE LINFÓCITOS E CITOCINAS DE INDIVÍDUOS COM LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA
    ASSOCIADO AOS GENES FLT3-ITD E NPM1 ANTES E APÓS QUIMIOTERAPIA DE INDUÇÃO

  • Orientador : SONGELI MENEZES FREIRE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BÁRBARA DA COSTA REIS MONTE-MÓR
  • EUGÊNIA TERRA GRANADO PINA
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • MARCO AURELIO SALVINO DE ARAUJO
  • SONGELI MENEZES FREIRE
  • Data: 08/03/2024

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  • O sistema imunológico pode interferir na resposta clínica à quimioterapia e à progressão leucemia mieloide aguda (LMA), mas os mecanismos da interação do sistema imune e LMA não são totalmente elucidados. As alterações nos genes FLT3 e NPM1 também estão intimamente relacionadas a resposta ao tratamento e a sobrevida. Este estudo teve como objetivo principal descrever o perfil de linfócitos e citocinas de indivíduos com LMA de novo estratificados por alterações moleculares associadas ao prognóstico e submetidos a quimioterapia de indução (Protocolo “7+3”). Os subtipos de linfócitos no sangue periférico,incluindo células B, células T e células NK e as concentrações séricas das citocinas Th1 (IL-2, IL-6, TNF, INF-γ), Th2 (IL-4, e IL-10) e IL-17 foram analisados por citometria de fluxo (BD FACSCantoTM II. Foram identificadas diferenças entre os grupos com mutação FLT3-ITD+ e FLT3-ITD nas variáveis: leucócitos, linfócitos B, linfócitos T, plasmoblastos e TNF. Foi
    observado também redução na contagem das subpopulações de células absolutas e, em termos relativos. A quimioterapia induziu um aumento na porcentagem de linfócitos T e linfócitos T CD4+ e uma redução na porcentagem de Natural Killer, linfócitos B e linfócitos B1. A presença das mutações em NMP1 e FLT3-ITD e a idade refletem em mudanças de linfócitos e citocinas de indivíduos com LMA e a quimioterapia baseada no esquema “7+3” pode induzir uma reorganização imunológica.


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  • The immune system can interfere with the clinical response to chemotherapy and acute myeloid leukemia (AML) progression, but the mechanisms of the interaction of the immune system and AML are not completely elucidated. Mutations in the FLT3 and NPM1 genes are also closely related to treatment response and survival. This study aimed to describe the lymphocyte and cytokine profile of individuals with de novo AML stratified by molecular alterations associated with prognosis and undergoing induction chemotherapy (Protocol “7+3”). Peripheral blood lymphocyte subtypes, including B cells, T cells, and NK cells, and serum concentrations of Th1 
    (IL-2, IL-6, TNF, INF-γ), Th2 (IL-4, and IL-10) cytokines ) and IL-17 were analyzed by flow cytometry (BD FACS CantoTM II. Differences were identified between the groups with FLT3- ITD+ and FLT3-ITD- mutation in the variables: leukocytes, B lymphocytes, T lymphocytes, plasmablasts and TNF. It was observed also a reduction in the count of absolute cell subpopulations and, in relative terms. Chemotherapy induced an increase in the percentage of T lymphocytes and CD4+ T lymphocytes and a reduction in the percentage of Natural Killer, B lymphocytes and B1 lymphocytes. The presence of mutations in NMP1 and FLT3-ITD and age reflect modifications in lymphocytes and cytokines in individuals with AML and chemotherapy based on the “7+3” Protocol can induce immunological reorganization.

3
  • MONIQUE REIS DE SANTANA
  • CARACTERIZAÇÃO DOS MECANISMOS MOLECULARES RELATIVOS AOS EFEITOS ANTIGLIOMA DEFLAVONOIDES ASSOCIADOS À INTERAÇÃO COM RECEPTOR DE HIDROCARBONETOS ARÍLICOS (AHR)

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • CICERO FRANCISCO BEZERRA FELIPE
  • CLAUDIANA LAMEU GOMES
  • GISELLE PINTO DE FARIA LOPES
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 25/04/2024

  • Mostrar Resumo
  • O glioblastoma (GBM) é reconhecido pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como a forma mais agressiva de tumor cerebral primário, caracterizado por rápido  rescimento. Essa agressividade é atribuída a mecanismos complexos, como proliferação celular acelerada e indução de imunossupressão que, combinados, conferem ao GBM, resistência a terapias convencionais. Estudos têm evidenciado que o receptor de hidrocarbonetos arílicos (AHR), um fator de transcrição, encontra-seconstitutivamente ativado em células tumorais, o que está associado à um prognóstico desfavorável em GBM. Este estudo teve como objetivo elucidar os potenciais efeitos antagônicos dos flavonoides no AHR para identificar candidatos com
    potencial terapêutico promissores. Os flavonoides são uma classe de compostos naturais reconhecidos por seus diversos efeitos biológicos benéficos. Apesar dos esforços consideráveis de pesquisa, os mecanismos moleculares subjacentes, especialmente no contexto do câncer, ainda não está completamente esclarecida. A atividade transcricional do AHR foi avaliada medindo a indução do citocromo P4501A (CYP1A1) pelo ensaio deatividade EROD em células MCF 7. O Docking Molecular foi empregado para explorar variações estruturais e interações hipotéticas entre flavonoides e AHR. Crisina, naringenina, apigenina, agatisflavona e quercetina foram altamente eficazes na inibição da ativação de AHR demaneira dose-dependente. Com execção da agathisflavona, os flavonoides testados apresentaram escores de afinidade de ligação ao AHR e destacam os seus distintos efeitos moduladores, com ênfase específica no potencial antagônico da naringenina. A viabilidade celular de GBM foi avaliada pelos ensaios MTT e SRB, bem como os efeitos da naringenina na migração e ciclo celular. O efeito do flavonoide na expressão de citocinas inflamatórias foi investigado por RT-qPCR. Além disso, a capacidade da naringenina em inibir a formação de tumor foi avaliada pelo ensaio deformação de micro tecidos tumorais. Os resultados revelaram uma redução na viabilidade celular (100 μM) e na migração celular com o tratamento de naringenina (30 μM) dependente do tempo. Além disso, a naringenina (30μM) demonstrou modular a expressão de marcadores inflamatórios em C6 associada à redução dos níveis de expressão de ácidoribonucléico mensageiro (mRNA) para Interleucina - 6 (IL-6) e Ligante 2 de quimiocina (motivo CC) (CCL2). Por outro, o tratamento com o flavonoide demonstrou aumentar significativamenteos níveis de Fatores de Necrose Tumoral (TNF) havendo uma reversão deste efeito quando as células foram tratadas com um agonista do AHR concomitantemente. No ensaio de formação de micro tecidos tumorais, a naringenina demonstrou potencial em reduzir a capacidade de células C6 e U87 em formar agregados celulares. Os dados apresentados destacam o possível papel da naringenina na regulação do AHR em células de glioblastoma. Os resultados deste estudo ressaltam o potencial do flavonoide naringenina como agente antitumoral e aprofundam nossa compreensão de seus mecanismos moleculares subjacentes. 


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  • Glioblastoma (GBM) is recognized by the World Health Organization (WHO) as the most aggressive form of primary brain tumor, characterized by rapid growth. This aggressiveness is attributed to complex mechanisms, such as accelerated cell proliferation and induction of immunosuppression, which, combined, make GBM resistant to conventional therapies. Studies have shown that the aryl hydrocarbon receptor (AHR), a transcription factor, is constitutively activated in tumor cells, which is associated with an unfavorable prognosis in GBM. This study aimed to elucidate the potential antagonistic effects of flavonoids on AHR to identify candidates with promising therapeutic potential. Flavonoids are a class of natural compounds recognized for their diverse beneficial biological effects. Despite considerable research efforts, the underlying molecular mechanisms, especially in the context of cancer, are still not completely understood. The transcriptional activity of AHR was evaluated by measuring the induction of  cytochrome P4501A (CYP1A1) by the EROD activity assay in MCF 7 cells. Molecular Docking was used to explore structural variations and hypothetical interactions between flavonoids and AHR. Chrysin, naringenin, apigenin, agatisflavone, and quercetin were highly effective in inhibiting AHR activation in a dose-dependent manner. Except for agathisflavone, the tested flavonoids presented binding affinity scores to the AHR and highlight their distinct modulatory effects, with specific emphasis on the antagonistic potential of naringenin. GBM cell viability was assessed by MTT and SRB assays, as well as the effects of naringenin on migration and cell cycle. The effect of the flavonoid on the expression of inflammatory cytokines was investigated by RT-qPCR. Furthermore, the ability of naringenin to inhibit tumor formation was evaluated by the tumor micro tissue deformation assay. The results revealed a time-dependent reduction in cell viability (100 μM) and cell migration with naringenin (30 μM) treatment. Furthermore, naringenin (30μM) has been shown to modulate the expression of inflammatory markers in C6 associated with reduced messenger ribonucleic acid (mRNA) expression levels for Interleukin - 6 (IL-6) and Chemokine Ligand 2 (CC motif) (CCL2 ). On the other hand, treatment with the flavonoid was shown to significantly increase the levels of Tumor Necrosis Factors (TNF), with a reversal of this effect when the cells were treated with an AHR agonist concomitantly. In the tumor  micro tissue formation assay, naringenin demonstrated potential in reducing the ability of C6 and U87 cells to form cellular aggregates. The data presented highlight the possible role of naringenin in the regulation of AHR in glioblastoma cells. The results of this study highlight the potential of the flavonoid naringenin as an antitumor agent and deepen our understanding of its underlying molecular mechanisms. 

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  • RODRIGO BARRETO CARREIRA
  • CARACTERIZAÇÃO DE MECANISMOS DE NEUROPROTEÇÃO DOS FLAVONOIDES AGATISFLAVONA (BIS-APIGENINA) E APIGENINA RELACIONADOS A PLASTICIDADE OLIGODENDROGLIAL

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BELMIRA LARA DA SILVEIRA ANDRADE DA COSTA
  • ELISABETH APARECIDA FERRAZ DA SILVA TORRES
  • PATRICIA FERNANDA SCHUCK
  • SILVIA LIMA COSTA
  • SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • Data: 30/04/2024

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  • As células gliais desempenham um papel fundamental na manutenção da homeostase do tecido nervoso. Em resposta à lesão, estas células podem exacerbar a sua atividade, resultando na libertação de fatores inflamatórios, espécies recativas de oxigénio e radicais livres, levando à degeneração neuronal. A isquemia cerebral leva a danos no tecido cerebral, morte de células neuronais e infarto cerebral. As células gliais aumentam sua reatividade em resposta ao dano isquêmico: a micróglia reativa libera citocinas inflamatórias que induzem lesão no tecido neuronal, enquanto os astrócitos reativos apresentam morfologia hipertrófica e secretam citocinas inflamatórias, formando uma cicatriz glial junto com a micróglia. A isquemia e a resposta inflamatória levam à morte de oligodendrócitos e à desmielinização. As características protetoras dos flavonoides agatisflavona e seu monômero apigenina já foram demonstradas. Ambos os flavonoides revelam efeitos importantes no controle da inflamação através da modulação da resposta neuroinflamatória da micróglia. Além disso, os flavonoides podem ser considerados proativos contra o dano oxidativo em eventos hipóxicos devido às suas propriedades antioxidantes. O objetivo deste estudo foi caracterizar os efeitos neuroprotetores dos flavonoides agatisflavona e apigenina relacionados à plasticidade oligodendroglial e à resposta glial em modelo ex vivo de dano isquêmico. Para tanto, foram utilizadas fatias cerebelares de camundongos p8-p12 da linhagen C57BL/6, e camundongos transgênicos Gfec e Sox-10 com gene repórter de Proteína Verde Fluorescente Aumentada (EGFP) expressa sob o controle da expressão da Proteína Ácida Fibrilar Glial (GFAP) de astrócitos e do Fator de Transcrição codificado no gene HMG-BOX 10 (SOX-10) em oligodendrócitos e seus precursores respectivamente. Os flavonoides agatisflavona (10 μM) e apigenina (10, 15 e 20 μM) foram administrados preventivamente 60 minutos antes do dano isquêmico, que foi induzido por privação de oxigênio e glicose por 60 minutos, e o grupo controle foi mantido em oxigênio e glicose normais. Foi avaliado por imunofluorescência para MBP, NF70, NG2, GS e CB, e RT-qPCR para TNF-α, IL-1β e IL-10. Observou-se que uma hora de privação de oxigênio e glicose não diminuiu a densidade dos oligodendrócitos na camada granulosa, mas alterou a morfologia dos oligodendrócitos, fazendo com que os processos se retraíssem, e os flavonoides impediram essa retração. Por outro lado, o dano isquêmico aumentou a reatividade astrocitária e os flavonoides impediram essa reatividade e impediram a perda da glutamina sintetase, enzima responsável pela destoxificação do glutamato, observada no dano isquêmico. Os flavonoides também demonstraram uma função neuroprotetora contra danos isquêmicos nas células de Purkinje. De acordo com este estudo, concluiu-se que os flavonoides induzem uma resposta neuroprotetora, possivelmente mediada pela modulação glial frente ao dano isquêmico.


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  • Glial cells play a pivotal role in maintaining nervous tissue homeostasis. In response to injury, these cells can exacerbate their activity, resulting in the release of inflammatory factors, reactive oxygen species, and free radicals, leading to neuronal degeneration. Cerebral ischemia leads to brain tissue damage, neuronal cell death, and cerebral infarction. Glial cells increase their reactivity in response to ischemic damage: reactive microglia release inflammatory cytokines that induce injury in neuronal tissue, meanwhile reactive astrocytes present hypertrophic morphology and secreting inflammatory cytokines, forming a glial scar together with microglia. Ischemia and the inflammatory response lead to the death of oligodendrocytes and demyelination. The protective characteristics of flavonoids agathisflavone and its monomer apigenin have already been demonstrated. Both flavonoids reveal important effects in the control of inflammation through modulation of the neuroinflammatory response of microglia. Furthermore, flavonoids can be considered proactive against oxidative damage in hypoxic events due to their antioxidant properties. The objective of this study was to characterize the neuroprotective effects of the flavonoids agathisflavone and apigenin related to oligodendroglial plasticity and glial response in an ex vivo model of ischemic damage. For this purpose, cerebellar slices from p8-p12 mice of the C57BL/6 lineage were used, and Gfec and Sox-10 transgenic mice with Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) reporter gene expressed under the control of Glial Fibrillar Acidic Protein (GFAP) expression of astrocytes and the Transcription Factor encoded in the HMG-BOX 10 (SOX-10) gene in oligodendrocytes and their precursors respectively. The flavonoids agathisflavone (10 μM) and apigenin (10, 15 and 20 μM) were administered preventively 60 minutes before ischemic damage, which was induced by oxygen and glucose deprivation for 60 minutes, and the control group was maintained in oxygen and glucose normal. It was evaluated by and immunofluorescence for MBP, NF70, NG2, GS and CB, and RT-qPCR for TNF-α, IL-1β and IL-10. It was observed that one hour of oxygen and glucose deprivation did not decrease the density of oligodendrocytes in the granulosa layer, but it altered the morphology of the oligodendrocytes, causing the processes to retract, and the flavonoids prevented this retraction. On the other hand, ischemic damage increased astrocytic reactivity and the flavonoids prevented this reactivity and prevented the loss of glutamine synthetase, an enzyme responsible for glutamate detoxification, observed in ischemic damage. Flavonoids have also shown a neuroprotective function against ischemic damage in Purkinje cells. According to this study, it was concluded that flavonoids induce a neuroprotective response, possibly mediated by glial modulation in the face of ischemic damage.

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  • RAPHAEL CHAGAS SILVA
  • Toxocaríase: Soroprevalência, fatores de risco e avanços no imunodiagnóstico com proteínas quiméricas recombinantes.

  • Orientador : CARINA DA SILVA PINHEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CARINA DA SILVA PINHEIRO
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
  • DEBORAH BITTENCOURT MOTHE
  • AFRÂNIO FERREIRA EVANGELISTA
  • Data: 23/05/2024

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  • Introdução: A toxocaríase humana está entre as doenças helmínticas mais negligenciadas no mundo. As infecções por Toxocara spp., estão associadas à fatores de risco aos quais os indivíduos estão expostos. O diagnóstico desta infecção é realizado através de ELISA usando antígenos excretados-secretados do Toxocara spp. como padrão-ouro. No entanto, esse método enfrenta desafios como reatividade cruzada e variação nos parâmetros de precisão. Objetivos: Determinar a soroprevalência da toxocaríase em um estudo prospectivo (2005-2013), avaliar os fatores de risco envolvidos e desenvolver proteínas quiméricas recombinantes para uso no imunodiagnóstico. Metodologia: Soros de 926 participantes do estudo epidemiológico SCAALA (2005 e 2013) foram imunodiagnosticados por ELISA indireto, e foram avaliadas as associações da infecção com aspectos clínicos e sociodemográficos. Proteínas quiméricas (rSHORT e rFULL) baseadas em epítopos de células B foram expressas e utilizadas no imunodiagnóstico de toxocaríase em 232 soros provenientes do Programa de Controle de Asma e Rinite de Salvador. Resultados: A prevalência de anticorpos IgG anti-Toxocara foi de 48% em 2005 e 53% em 2013, com 25% de novos casos em 2013. O aumento da idade e exposição a animais de estimação foram fatores de risco, enquanto maior escolaridade materna e residir em ruas pavimentadas foram fatores protetores para essa infecção. Indivíduos positivos apresentaram correlação negativa com a reatividade ao SPT, enquanto níveis elevados de IL-10 e eosinófilos em ambos os anos foram positivamente associados. A proteína rSHORT apresentou sensibilidade de 98,6% e 99,3%, e especificidade de 94,4% e 97,8% em soros adsorvidos e não adsorvidos, respectivamente. A proteína rFULL apresentou sensibilidades de 93.7% e 89.4%, e especificidade de 86.7% e 81.1% nos mesmos tipos de soros. Conclusão: Os padrões de infecção por Toxocara spp. em nossa população de estudo estavam principalmente associados ao terceiro grupo etário e à presença de gatos ou cães em casa. Aumentar o nível de educação materna em conjunto com melhores condições de habitação também são um fator importante para mitigar a infecção por Toxocara spp. Tanto no Dot Blot quanto no ELISA indireto a proteína rSHORT utilizada como antígeno no imunodiagnóstico da toxocaríase apresentou resultados superiores e mais confiáveis em comparação a proteína rFULL. Comparativamente com as moléculas parentais a proteína rSHORT demonstrou maior potencial para ser utilizada como um antígeno alternativo no imunodiagnóstico da toxocaríase.


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  • Introduction: Human toxocariasis is among the most neglected helminthic diseases worldwide. Infections by Toxocara spp. are associated with risk factors to which individuals are exposed. Diagnosis of the infection is typically performed through ELISA using excretory-secretory antigens of Toxocara spp. as the gold standard; however, cross-reactivity and variation in precision parameters are some disadvantages of this test. Objectives: This study aimed to determine the seroprevalence of toxocariasis in a prospective study (2005-2013); assess the associated risk factors; and produce recombinant chimeric proteins for use in immunodiagnostics. Material and Methods: Sera from 926 participants in the SCAALA epidemiological follow-up (2005 and 2013) were immunodiagnosed using indirect ELISA, and associations of the infection with clinical and sociodemographic aspects of the individuals were evaluated. Chimeric proteins (rSHORT and rFULL), based on B-cell epitopes, were expressed and used in the immunodiagnosis of toxocariasis in 232 sera from the Salvador Asthma and Rhinitis Control Program.  Results: The prevalence of anti-Toxocara IgG antibodies was 48% in 2005 and 53% in 2013, with 25% of new cases occurring in 2013. Increasing age and exposure to pets were consistent risk factors, while higher maternal education and living on paved streets were protective factors. Positive individuals showed a negative correlation with SPT reactivity, while elevated levels of IL-10 and eosinophils in both years were positively associated. The rSHORT protein showed sensitivities of 98.6% and 99.3% in adsorbed and non-adsorbed sera, respectively, while in specificities it reached 94.4% and 97.8%. The rFULL protein showed sensitivities of 93.7% and 89.4%, respectively, and specificities of 86.7% and 81.1%. Conclusion: The infection patterns of Toxocara spp. in our study population were primarily linked to the third age group and the presence of cats or dogs at home. Elevating maternal education levels alongside improved housing conditions also emerged as significant factors in mitigating Toxocara spp. infection. Both in Dot Blot and indirect ELISA, the rSHORT protein used as an antigen in the immunodiagnosis of toxocariasis showed superior and more results that are reliable compared to the rFULL protein. Comparatively to the parental molecules, the rSHORT protein demonstrated greater potential to be used as an alternative antigen in the immunodiagnosis of toxocariasis. 

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  • LAIANE DA CRUZ PENA
  • RASTREIO IMUNOGENÉTICO LIGADO À GRAVIDADE E SUSCEPTIBILIDADE DA COVID-19 NO BRASIL

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RENAN PEDRA DE SOUZA
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • NATALIA MACHADO TAVARES
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • Data: 10/07/2024

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  • A pandemia da COVID-19, foi responsável por milhares de mortes em todo o mundo. A apresentação clínica da infecção pode variar desde assintomático, à sintomas característicos da síndrome gripal, podendo, ainda, evoluir para a forma mais grave, com insuficiência respiratória e inflamação sistêmica. O método profilático da vacinação favoreceu como medida de controle da doença. Além disso, estudos emonstraram que aspectos genéticos do indivíduo influenciam no defecho da infecção. Todavia, no que se refere à fatores genéticos da população brasileira, ainda são pouco elucidativos. Desta forma, sugere-se que os fatores genéticos ligados ao hospedeiro possam estar associados à gravidade e susceptibilidade da COVID-19. Assim, o objetivo deste estudo é investigar fatores genéticos do hospedeiro ligados à susceptibilidade e gravidade da COVID-19. O desenho metodológico compreende dois grupos populacionais: o grupo 1, onde avaliou- se gravidade da doença, composto por 306 indivíduos com COVID-19 grave e 33 com a forma leve da doença; o grupo 2 inclui 1614 indivíduos positivos e negativos para a doença. Foram analisados polimorfismos nos genes ABO, ACE, ACE2, TMPRSS2, LZTFL1, TNFA e OAS; dosagem das citocinas IL-6 e TNF, utilizando o método de ELISA. A expressão gênica foi avaliada para àqueles que apresentarem associações significantes. As análises estatísticas utilizaram o PLINK versão 1.9 e GraphPad versão 8.4.2. Nossos resultados em relação à gravidade demonstraram uma associação positiva entre o rs11385942 no LZTFL1 e admissão na UTI (OR=2,08; valor de P=0,02) e associação negativa do rs1800629 no TNFA e a forma grave da doença (OR=0,17; valor de P=0,005). Na análise da IL-6, observamos um aumento de sua produção para  homozigoto polimórfico (CC) do ACE2 (rs4240157) e aumento da citocina no grupo homozigoto polimórfico (AA) do gene ABO (rs657152). Em relação à dosagem de TNF, foi verificada uma redução na produção da citocina para o genótipo polimórfico AA, condizente com a associação negativa na análise de associação. Verificamos uma redução da sobrevivência na avaliação do rs1799752 do gene ACE, para homozogose do alelo da deleção. Não foram observadas associação relacionadas à  usceptibilidade ou na expressão gênica. Nossos resultados indicam potencial genético no curso da infecção pelo SARS-CoV-2, sugerindo papel no estímulo de citocinas fundamentais na inflamação da COVID-19. Desta forma, faz-se emergente a elucidação dos mecanismos pelos quais as variantes genéticas impactam no curso da COVID-19, bem como os mecanismo chave para desenvolvimento de processos inflamatórios. 


  • Mostrar Abstract
  • The COVID-19 pandemic has been responsible for thousands of deaths worldwide. The clinical presentation of the infection can range from asymptomatic, to symptoms characteristic of flu-like syndrome, and can also evolve into the most severe form, with respiratory failure and systemic inflammation. The prophylactic method of vaccination has been favored as a measure to control the disease. In addition, studies have shown that genetic aspects of the individual influence how the infection develops. However, as far as the genetic factors of the Brazilian population are concerned, they are still not very clear. Thus, it is suggested that genetic factors linked to the host may be associated with the severity and susceptibility of COVID-19. Thus, the aim of this study is to investigate host genetic factors linked to COVID-19 susceptibility and severity. The methodological design comprises two population groups: group 1, where disease severity was assessed, composed of 306 individuals with severe COVID-19 and 33 with the mild form of the disease; group 2 includes 1614 individuals positive and negative for the disease. Polymorphisms in the ABO, ACE, ACE2, TMPRSS2, LZTFL1, TNFA and OAS genes were analyzed; dosage of the cytokines IL-6 and TNF, using the ELISA method. Gene expression was assessed for those with significant associations. Statistical analyses used PLINK version 1.9 and GraphPad version 8.4.2. Our results in relation to severity showed a positive association between rs11385942 in LZTFL1 and admission to the ICU (OR=2.08; P-value=0.02) and a negative association between rs1800629 in TNFA and the severe form of the disease (OR=0.17; P-value=0.005). In the analysis of IL-6, we observed an increase in its production in the ACE2 polymorphic homozygote (CC) group (rs4240157) and an increase in the cytokine in the ABO gene polymorphic homozygote (AA) group (rs657152). With regard to TNF dosage, a reduction in cytokine production was seen for the AA polymorphic genotype, consistent with the negative association in
    the association analysis. We found a reduction in survival when evaluating rs1799752 of the ACE gene, for homozygosity of the deletion allele. No association related to  susceptibility or gene expression was observed. Our results indicate genetic potential in the course of SARS-CoV-2 infection, suggesting a role in stimulating key cytokines in COVID-19 inflammation. In this way, it is important to elucidate the mechanisms by which genetic variants impact on the course of COVID-19, as well as the key mechanisms for the development of inflammatory processes. 

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  • TIAGO OLIVEIRA RIBEIRO
  • CÉLULAS MESENQUIMAIS ESTROMAIS E FATOR DE
    CRESCIMENTO DERIVADO DE PLAQUETAS:
    CARACTERIZAÇÃO E POTENCIAL TERAPÊUTICO EM
    LESÕES ASSOCIADAS À DOENÇA FALCIFORME

  • Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BRUNO SOLANO DE FREITAS SOUZA
  • JAIME RIBEIRO FILHO
  • NATALIA MACHADO TAVARES
  • SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • VITOR ANTONIO FORTUNA
  • Data: 11/07/2024

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  • Osteonecrose e úlceras de perna são lesões teciduais associadas a complicações
    microvasculares comumente encontradas em pacientes com doença falciforme (DF). Uma
    vez que essas comorbidades apresentam opções limitadas de tratamento, a utilização de
    células estromais mesenquimais ou fatores de crescimento pode ser uma abordagem
    terapêutica eficaz para o tratamento de osteonecrose e úlceras crônicas de perna em pacientes
    com doença falciforme, melhorando os desfechos clínicos e acelerando a cicatrização
    tecidual. Este estudo propôs quantificar a população de células estromais mesenquimais em
    amostras de medula óssea de pacientes com DF e osteonecrose e compará-la com pacientes
    com complicações osteoarticulares não relacionadas à DF além de investigar os efeitos
    PDGF-BB recombinante humano (rh-PDGF) no processo de cicatrização de feridas cutânea
    em modelo murino de DF. Nosso primeiro trabalho revelou que a população de células
    estromais mesenquimais CD271+CD45-/low foi maior no aspirado total e no concentrado de
    células mononucleares de medula óssea em pacientes com DF e osteonecrose do que em
    pacientes com complicações osteoarticulares não relacionadas a DF. Demonstramos uma
    correlação significativa (r = 0:7483; p = 0:0070) entre o número de células CD271+CD45-
    /low e a contagem de unidades formadoras de colônias de fibroblastos (CFU-F) in vitro nas
    amostras oriundas de DF. Nossos dados revelaram que a aplicação do PDGF-BB contribuiu
    para um maior fechamento da ferida no dia 3 pós-lesão (46.71 ± 3.87%) vs (33.82 ± 2.72 %)
    nas feridas tratadas com PBS. As feridas tratadas com PDGF apresentaram maior deposição
    de colágeno e aumento na quantidade de vasos sanguíneos e células perivasculares no dia 3
    pós-lesão. Entretanto, foi observada uma maior presença de infiltrado inflamatório nas
    feridas tratadas com PDGF corroborando com os níveis elevados de mediadores próinflamatórios
    encontrados nas análises de expressão gênica. Em conclusão, estes trabalhos
    demonstram o potencial promissor da aplicação de células estromais mesenquimais e fatores
    de crescimento no tratamento de complicações microvasculares relacionadas a doença
    falciforme.
    Palavras


  • Mostrar Abstract
  • Osteonecrosis and leg ulcers are tissue injuries associated with microvascular complications
    commonly found in patients with sickle cell disease (SCD). Since these comorbidities have
    limited treatment options, the use of mesenchymal stromal cells or growth factors may be an
    effective therapeutic approach for treating osteonecrosis and chronic leg ulcers in patients with
    sickle cell disease, improving clinical outcomes and accelerating tissue healing. This study
    aimed to quantify the population of mesenchymal stromal cells in bone marrow samples from
    patients with SCD and osteonecrosis and compare it with patients with osteoarticular
    complications not related to SCD, as well as to investigate the effects of human recombinant
    PDGF-BB (rh-PDGF) on the wound healing process in a murine model of SCD. Our first study
    revealed that the population of CD271+CD45-/low mesenchymal stromal cells was higher in both
    the total aspirate and the bone marrow mononuclear cell concentrate in patients with SCD and
    osteonecrosis compared to patients with osteoarticular complications not related to SCD. We
    demonstrated a significant correlation (r = 0.7483; p = 0.0070) between the number of
    CD271+CD45-/low cells and the colony-forming unit-fibroblast (CFU-F) count in vitro in
    samples from SCD patients. Our data revealed that the application of PDGF-BB contributed to
    greater wound closure on day 3 post-injury (46.71 ± 3.87%) vs (33.82 ± 2.72%) in wounds
    treated with PBS. Wounds treated with PDGF showed greater collagen deposition and an
    increase in the number of blood vessels and perivascular cells on day 3 post-injury. However,
    there was a higher presence of inflammatory infiltrate in PDGF-treated wounds, corroborating
    the elevated levels of pro-inflammatory mediators found in gene expression analyses. In
    conclusion, these studies demonstrate the promising potential of applying mesenchymal
    stromal cells and growth factors in the treatment of microvascular complications related to
    sickle cell disease.

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  • TARCIANO NASCIMENTO PEREIRA
  • MECANISMOS IMUNOLÓGICOS INDUZIDOS PELO
    ANTÍGENO Sm29 NA REGULAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE

    INDUZIDA POR MACRÓFAGOS

  • Orientador : LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARISTELA GOMES DA CUNHA
  • ALLYSON GUIMARÃES DA COSTA
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
  • Data: 22/08/2024

  • Mostrar Resumo
  • A resposta imune induzida pelo antígeno recombinante Sm29 do
    Schistosoma mansoni é capaz de modular doenças imunomediadas. O S. mansoni
    pode regular a resposta imune do hospedeiro através de vias, como dos receptores
    do tipo toll 2 e 4 (TRL 2/4), 5 - lipoxigenase (5-LOX) e ciclo-oxigenase 1 e 2 (COX-
    1/2). O objetivo deste estudo foi avaliar os mecanismos imunológicos induzidos pelo
    antígeno Sm29 na regulação in vitro de macrófagos. Materiais e Métodos:
    Macrófagos de indivíduos saudáveis foram diferenciados a partir de monócitos do
    sangue periféricos usando beads magnéticas e adição de M-CSF e então
    estimulados in vitro com a proteína recombinante Sm29 ou LPS como controle. A
    expressão das enzimas COX 1/2, 5-LOX e FLAP e das moléculas HIF1-α e TGF-
    beta foi avaliada por RT-PCR. A expressão dos receptores tipo toll (TLR)-2 e TLR-4
    e das prostaglandinas e leucotrienos foi avaliada pelo bloqueio destes e avaliação
    dos níveis das citocinas IL-10 e IL-1β por ELISA. Resultados: O Sm29 é capaz de
    regular, através da expressão de COX-2, HIF1-α e de níveis de IL-10 das culturas de
    macrófagos. O Sm29 parece não induzir regulação através das vias TRL e COX,
    mas induz regulação pela via 5-LOX. Conclusão: Sendo assim, esse antígeno
    necessita de mais estudos de possam esclarecer por quais mecanismos induz
    regulação.


  • Mostrar Abstract
  • The immune response induced hair antigen recombinant Sm29 do
    Schistosoma mansoni is capable of modulating immune-mediated pain. S. Manson
    can regulate the host immune response through pathways, such as two receptors
    of the toll type 2 and 4 (TRL 2/4), 5 − lipoxygenase (5-LOX) and cyclooxygenase 1 and 2 (COX-
    1/2). The aim of this study was to evaluate the immune mechanisms induced hair
    Sm29 antigen in in vitro regulation of macrophages. Materials and Methods:
    Macrophages from Saudi individuals foram differentiated from monocytes do
    peripheral blood using magnetic beads and the addition of M-CSF to
    stimulated in vitro with recombinant protein Sm29 or LPS as control. A
    expressing COX 1/2, 5-LOX, and FLAP enzymes and molecules HIF1-α and TGF-
    beta was validated by RT-PCR. The expression of two toll-like receptors (TLR)-2 and TLR-4
    and prostaglandins and leukotrienes was evaluated by blocking these evaluations
    two levels of IL-10 and IL-1β cytokines by ELISA. Results: The Sm29 is able to
    regulation, through the expression of COX-2, HIF1-α and IL-10 levels in cultures of
    macrophages. O Sm29 does not seem to induce regulation through the TRL and COX pathways,
    further induced hair regulation via 5-LOX. Conclusion: Being so, being antigenic
    needs further studies to possam clarify by which mechanisms induce
    regulation.

     

     

2023
Dissertações
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  • BRUNA RAMOS TOSTA
  • IMPACTO DE VARIANTES NO GENE MTOR NA GRAVIDADE DA COVID-19 EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • CINTHIA VILA NOVA SANTANA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 03/02/2023

  • Mostrar Resumo
  • A pandemia de SARS-CoV-2 causou milhares de mortes em todo o mundo. A
    gravidade da doença está associada à idade, sexo, comorbidades, e uma resposta inflamatória
    sistêmica exacerbada e descontrolada resultante da tempestade de citocinas. As tempestades
    de citocinas são caracterizadas por uma grande liberação desregulada de citocinas que podem
    ser desencadeadas por infecções virais e moduladas por várias vias de sinalização. A proteína
    alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR) é uma serina treonina quinase capaz de moldar a
    ativação celular e a resposta inflamatória inata das células, que é a primeira linha de defesa
    contra os vírus. A via mTORC1 mostrou ser afetada pelo SARS-CoV-2 e hiperativada em
    pacientes graves de COVID-19, o que sugere que a desregulação desta via pode desempenhar
    um papel importante no mau prognóstico da doença. Além disso, a genética dos pacientes
    poderia contribuir para esse desfecho. Objetivos: Investigar o envolvimento de variantes no
    gene MTOR com a gravidade da COVID-19 na população brasileira. Métodos: Indivíduos
    com COVID-19 grave e leve foram recrutados e amostras de sangue periférico e dados
    sociodemográficos foram coletados. Os SNPs rs1057079 e rs2536 do gene MTOR foram
    genotipados através de RT-qPCR. Realizamos análise de regressão logística e curvas de
    sobrevivência Kaplan-Meier. Aplicamos um escore de risco genético para estimar a
    contribuição cumulativa dos alelos de risco. Os níveis de plasma das citocinas TNF e IL-6
    foram medidos através de ELISA e analisados. Resultados e Conclusões: O alelo T de
    rs1057079 foi associado ao risco de gravidade e a COVID-19 crítica, bem como ao aumento
    dos níveis plasmáticos de TNF. Enquanto isso, o alelo T de rs2536 foi associado com o óbito
    por COVID-19. Os alelos de risco das variantes mostraram um risco cumulativo quando
    herdadas juntas e podem ser úteis para prever um resultado mais grave da COVID-19.


  • Mostrar Abstract
  • SARS-CoV-2’s pandemic has caused thousands of deaths worldwide. The
    disease’s severity is associated with age, sex, ongoing comorbidities along with exacerbated
    and uncontrolled systemic inflammatory response resulting from cytokine storm. Cytokine
    storms are characterized by a large dysregulated release of cytokines that can be triggered by
    viral infections and modulated by various signaling pathways. The target protein of rapamycin
    in mammals (mTOR) is a serine threonine kinase capable of shaping cellular activation and
    inflammatory innate response of cells, which is the first line of defense against viruses. The
    mTORC1 pathway has been shown to be affected by SARS-CoV-2 and hyperactivated in
    COVID-19’s severe patients which suggest that dysregulation of this pathway might play an
    important role in poor prognosis of disease. In addition, the genetic background of patients
    could possibly contribute to this outcome. Objectives: To investigate the involvement of
    variants in the MTOR gene with the severity of COVID-19 in the Brazilian population.
    Methods: Individuals with severe and mild COVID-19 were recruited and peripheral blood
    samples and sociodemographic data were collected. The SNPs rs1057079 and rs2536 of the
    MTOR gene were genotyped by RT-qPCR. We performed logistic regression analysis and
    Kaplan-Meier survival curves. We applied a genetic risk score to estimate the cumulative
    contribution of risk alleles. Plasma levels of the cytokines TNF and IL-6 were measured by
    ELISA and analyzed. Results and Conclusions: The T allele of rs1057079 was associated
    with risk of severity and critical COVID-19, as well as increased plasma levels of TNF.
    Meanwhile, the T allele of rs2536 was associated with death from COVID-19. The variant
    risk alleles showed a cumulative risk when inherited together and may be useful in predicting
    a more severe outcome of COVID-19.

2
  • Thais Maia Miranda de Barreto
  • CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS E GENÉTICAS DE PACIENTES PEDIÁTRICOS COM SÍNDROME INFLAMATÓRIA MULTISSITÊMICA ASSOCIADA À INFECÇÃO PELO SARS-COV-2.

  • Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • SIMONE HASHIMOTO
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 09/02/2023

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  • Introdução: A Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) é uma complicação potencialmente fatal associada à infecção pelo SARS-CoV-2. Trata-se de uma condição pós infecciosa, cujos sintomas e achados  laboratoriais demonstram hiperinflamação sistêmica. Ainda existem muitas incertezas sobre fatores de risco, manejo ideal e diferentes cursos clínicos, mas estudos vêm sendo desenvolvidos, numa tentiva de desvendar a genética da susceptibilidade à síndrome. Objetivo: Identificar variantes genéticas implicadas na SIM-P. Métodos: Trata-se de uma série de casos de pacientes previamente sadios e não vacinados para a COVID-19, diagnosticados com SIM-P no Brasil. Foram coletados dados clínicos e laboratoriais de prontuários médicos eletrônicos, bem como células dos pacientes para extração de DNA e realização do sequenciamento do exoma. A priorização de variantes foi realizada com foco em 126 genes humanos que codificam proteínas envolvidas em mecanismos pelos quais o SARS-CoV-2 modula a resposta imune, a partir de lista disponível na

    base de dados Reactome. Para análise da ancestralidade, utilizamos como referência o Projeto 1000 Genomas e dados genéticos de BR-MIS-C, empregando variantes autossômicas com MAF > 0,1 comuns a ambos. Consideramos europeus, africanos e nativos americanos como grupos de formação da população brasileira. Para análise funcional, foram obtidas as sequências de aminoácidos, estrutura e os domínios funcionais de IL-17RC, IFNA10 e NLRP12 e avaliada a conservação evolutiva das posições dos aminoácidos. Resultados: 21 pacientes com SIM-P participaram do estudo; destes, 62% (n=13) eram do sexo masculino e 67% (n=14) foram declarados pardos. A mediana de idade foi de 8 anos (IQR, 5-12). Os sintomas mais prevalentes foram febre (100%) dor abdominal (74%), seguido por rash cutâneo (57%) e dispneia (57%). O principal desfecho observado foi choque (48%). Através da análise de priorização de variantes codificantes em genes implicados no processo de infecção pelo SARS-CoV-2, identificamos variantes raras e deletérias, potencialmente envolvidas no desenvolvimento da SIM-P, em 38% (n=8) dos indivíduos estudados. Cinco dos 21 (24%) pacientes apresentavam mutações funcionais no gene NLRP12, localizado no 19q13.42, que codifica uma
    proteína citoplasmática envolvida na supressão das respostas inflamatórias em monócitos ativados. Indentificou-se também 3 mutações no gene IL17RC, localizado no cromossomo 3p25.3, que codifica uma das cadeias do receptor da IL-17, e também uma variante sem sentido no gene IFNA10, localizado no agrupamento de genes no lócus 9p21.3, que codifica o fator IFN-α10 e tem grande potencial deletério. A análise de ancestralidade revelou um padrão miscigenado das crianças brasileiras com MIS-C, com uma variação de 0,77 ascendência europeia (P7) a 0,78 ascendência africana (P1). Variantes em IL17RC, IFNA10 e NLPR12 foram herdados com mais frequência de europeus.  A avaliação da conservação evolutiva dos aminoácidos revelou grau de conservação intermediário a alto para posições de aminoácidos em IL-17RC, IFNA10 e NLRP12. Conclusão: Mutações raras e deletérias em regiões codificantes dos genes NLRP12, IL17RC e IFNA10, podem contribuir para a ocorrência da SIM-P.


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  • Introduction: Multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) is a potentially fatal complication of SARS-CoV-2 infection. It is a post-infectious condition, whose symptoms and laboratory findings demonstrate systemic hyperinflammation. There are still many doubts about risk factors, ideal management and different clinical courses, but studies have been developed to unravel the genetics of the syndrome's susceptibility. Ain: To identify genetic variants that are determinant for MIS-C. Methods: This is a case series study of patients with no prior health conditions, diagnosed with MIS-C in Brazil. Clinical and laboratory data were collected from medical records, as well as patient cells to perform exome sequencing. The prioritization of variants was carried out focusing on 126 human genes that encode proteins involved in the mechanisms by which SARS-CoV-2 modulates the immune response, from a list available in the Reactome database. For ancestry analysis, it was used the 1000 Genomes Project and genetic data from BR-MIS-C as a reference, using autosomal variants with MAF > 0.1 common to both. We have considered Europeans, Africans and Native Americans as forming groups of the Brazilian population. For functional analysis, the amino acid sequences, structure and functional domains of IL- 17RC, IFNA10 and NLRP12 were obtained and the evolutionary conservation of amino acid positions was evaluated. Results: A total of 21 patients with MIS-C was enrolled in this study; of these, 62% (n=13) were male and 67% (n=14) were declared as mixed race. The median age was 8 years (IQR, 5-12). In addition to fever, observed in 100% of patients, the most prevalent symptoms were abdominal pain (74%, n=15), followed by skin rash (57%, n=12) and dyspnea (57%, n=12). The main outcome observed was shock (48%). By  analyzing the prioritization of coding variants in genes that participate of the SARS-CoV-2 infection process, we identified rare deleterious variants potentially involved in the development of MIS-C in 38% (n=8) of the individuals studied. Five out of twenty one (24%) patients had functional mutations in the NLRP12 gene, located at 19q13.42, which encodes a cytoplasmic protein involved in the suppression of inflammatory responses in activated monocytes. We also identified three mutations in the IL17RC gene, located on chromosome 3p25.3, which encodes one of the IL-17 receptor chains, and also a nonsense variant in the IFNA10 gene, located in the gene cluster at locus 9p21.3, which encodes the IFN-α10 factor and has great deleterious potential. Ancestry analysis revealed an admixed pattern of Brazilian children with MIS-C, ranging from 0.77 European ancestry (P7) to 0.78 African ancestry (P1). Variants in IL17RC, IFNA10 and NLPR12 were more frequently inherited from Europeans. Evaluation of evolutionary conservation of amino acids revealed intermediate to high degree of conservation for amino acid positions in IL-17RC, IFNA10 and NLRP12. Conclusion: Rare and deleterious mutations in coding regions of the NLRP12, IL17RC and IFNA10 genes may contribute to the occurrence of MIS-C. 

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  • Rildo Batista Freire
  • ASSOCIAÇÃO DE POLIMORFISMOS NOS GENES IL1B, IL6 E IL10 COM PERIODONTITE

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • DEISE SOUZA VILAS BOAS
  • RAIMON RIOS DA SILVA
  • Data: 13/02/2023

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  • A periodontite envolve a perda óssea do tecido de sustentação e consequente perda das unidades dentárias o que impacta significativamente na qualidade de vida de indivíduos de todas as camadas sociais. A presença de comunidades microbianas disbióticas e uma resposta imunológica exacerbada podem acarretar na destruição da microarquitetura do periodonto de sustentação. Fatores ambientais e genéticos estão associados ao desenvolvimento da doença, sendo necessário elucidar o papel da genética no seu desenvolvimento e progressão. Objetivo: Investigar a associação de polimorfismos dos genes IL1B, IL6 e IL10 com a periodontite; e determinar as frequências alélicas dos polimorfismos IL1B, IL,6 e IL10 nas populações africana, americana e europeia. Materiais e métodos: Estudo transversal,realizado com 506 indivíduos adultos, classificados com presença (n=117) ou ausência (n=389) de periodontite, participantes da coorte do Programa de Controle da Asma da Bahia (ProAR) em Salvador/Bahia – Brasil. O DNA genômico foi extraído e genotipado utilizando-se a plataforma Illumina Multi- Ethnic Global Array (MEGA, Illumina). As plataformas NCBI, RegulomeDB, ENCODE (Encyclopedia of DNA Elements), Haploview 4.2 e rSNPBase foram consultadas. A análise estatística foi realizada no software PLINK 1.9 e a regressão logística foi ajustada por idade, obesidade, hábito de respirar pela boca, uso de fio dental, asma e ancestralidade. Para controle de qualidade utilizou-se o equilíbrio de Hardy-Weinberg <0,05, taxa de genotipagem <0,98 e frequência do menor alelo (MAF) <1%. Resultados: Dois polimorfismos foram associados à periodontite no gene IL1B. O rs3136557 alelo A apresentou associação negativa com a periodontite tanto no modelo aditivo como no dominante, respectivamente (OR = 0,48; IC 95% = 0,24-0,94) e (OR = 0,48; IC 95 % = 0,24-0,97; p<=0,05). O rs1143630 alelo T apresentou associação positiva (OR = 1,49; IC 95% = 1,02-2,18) no modelo aditivo, enquanto no modelo dominante (OR = 1,61; IC 95% = 1,02-2,53, p<=0,05). No gene IL6 o polimorfismo rs2069841alelo A foi associado positivamente à periodontite no modelo aditivo (OR = 2,61; IC 95% = 1,05-6,50) e no modelo dominante (OR = 2,61; IC 95% = 1,05- 6,50). Na análise dos polimorfismos da IL10 não foram encontradas associações significativas com a periodontite na população estudada. A frequência do menor alelo A da variante rs3136557 é presente em 8% na população estudada de Salvador, semelhante a população americana que possui aproximadamente a mesma frequência, enquanto a população africana possui 5%. A variante rs1143630 (alelo T) possui frequência de 20% na população estudada, enquanto a população africana apresenta 28%, a população americana e europeia apresenta 6%. O MAF da variante rs2069841 (alelo A) foi de 2% no grupo estudado, semelhante a população africana que apresentou 3%. Conclusão: Polimorfismos nos genes das interleucinas IL-1B e IL-6 foram associados positivamente e negativamente à periodontite. Não foram encontradas associações de polimorfismos do gene IL10 com a periodontite, nesta população da cidade de Salvador. A frequência alélica dos polimorfismos mostra-se semelhante àquelas encontradas em outras populações, como a africana e europeia. 


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  • Introduction: Periodontitis involves bone loss of support tissue and consequent loss of dental units, which significantly impacts the quality of life of individuals from all social strata. The presence of dysbiotic microbial communities and an exacerbated immune response may result in the destruction of the microarchitecture of the supporting periodontium. Environmental and genetic factors are associated with the development of the disease, and it is necessary to elucidate the role of genetics in its development and progression. Objective:To investigate the association of polymorphisms of the IL1 B, IL6 and IL10 genes with periodontitis; and to determine the allelic frequencies of IL1 B, IL,6 and IL10 polymorphisms in African, American and European populations. Materials and methods: Cross-sectional study, conducted with 506 adult individuals, classified with presence (n=117) or absence (n=389) of periodontitis, participants in the cohort of the Bahia Asthma Control Program (ProAR) in Salvador/Bahia – Brazil. Genomic DNA was extracted and genotyped using the Illumina Multi-Ethnic Global Array (MEGA, Illumina) platform. The platforms NCBI, RegulomeDB, ENCODE (Encyclopedia of DNA Elements), Haploview 4.2 and rSNPBase were consulted. Statistical analysis was performed using the PLINK 1.9 software and logistic regression was adjusted for age, obesity, mouth breathing habit, flossing, asthma and ancestry. For quality control, Hardy-Weinberg equilibrium <0.05, genotyping rate <0.98 and frequency of the lowest allele (MAF) <1% were used. Results: Two polymorphisms were associated with periodontitis in the IL1 B gene. The rs3136557 A allele showed a negative association with periodontitis in both the additive and dominant models , respectively (OR = 0.48; CI 95% = 0.24-0.94) and (OR = 0.48; CI 95 % = 0.24-0.97; p<=0.05). The rs1143630 T allele showed a positive association (OR = 1.49; CI 95% = 1.02-2.18) in the additive model, while in the dominant model (OR = 1.61; CI 95% = 1.02-2.53, p<=0.05). In the IL6 gene, the rs2069841allele A polymorphism was positively associated with periodontitis in the additive model (OR = 2.61; CI 95% = 1.05-6.50) and in the dominant model (OR = 2.61; CI 95% = 1.05- 6.50). In the  analysis of IL10  polymorphisms, no significant associations with periodontitis were found in the population studied. The frequency of the lowest A allele of the rs3136557 variant is present in 8% of the studied population of Salvador, similar to the American population that has approximately the same frequency, while the African population has 5%. The rs1143630 variant (T allele) has a frequency of 20% in the population studied, while the African population presents 28%, the American and European population presents 6%. The MAF of the rs2069841 variant (A allele) was 2% in the studied group, similar to the African population that presented 3%. Conclusion: Polymorphisms in the genes of interleukins IL- 1B and IL-6 were positively and negatively associated with periodontitis. No associations of IL10 gene polymorphisms with periodontitis were found in this population of the city of Salvador. The allelic frequency of polymorphisms is similar to those found in other populations, such as African and European. 

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  • LUANA ARAUJO DAS MERCÊS
  • EFEITOS DA IMUNOESTIMULAÇÃO PELA Echinacea purpurea (L.) MOENCH SOBRE A HISTOARQUITETURA
    DA PAREDE DO CÓLON DE RATOS INFECTADOS POR Toxoplasma gondii.

  • Orientador : MARCELO BIONDARO GOIS
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • MARCELO BIONDARO GOIS
  • WENDELL MARCELO DE SOUZA PERINOTTO
  • Data: 15/02/2023

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  • O objetivo do presente estudo é avaliar as alterações em células e tecidos que compõem a parede do cólon de ratos inoculados com oocistos de T. gondii (cepa RH, genótipo I) e imunoestimulados com 100 mg/kg de E. purpurea (L.) Moench. Vinte e quatro Rattus norvegicus machos foram separados aleatoriamente em quatro grupos (n=6), a saber: grupo controle (GC); grupo infectado com 500 oocistos de T. gondii e não imunoestimulados (GI); grupo controle imunoestimulado com 100 mg/kg de E. purpurea (GC+EP); e grupo infectado e imunoestimulado com 100 mg/kg de E. purpurea (GI+EP). O protocolo experimental (nº 7633021018) foi aprovado pelo comitê de Ética para a utilização de animais em experimentação. Vinte e oito dias após a inoculação, com 93 dias de idade, os ratos foram submetidos à eutanásia. O cólon de cada foi coletado, fixados e analisado por meio de técnicas histoquímica e imuno- histoquímica. A infecção toxoplásmica, bem como a imunoestimulação com 100 mg/kg de E. purpurea causaram alterações histomorfométricas, aumento na distribuição de mastócitos totais e mastócitos e células enterocromafins que expressam 5-HT e na proporção de linfócitos intraepiteliais no cólon de ratos. Demonstramos que houve aumento em todos os fenótipos de células caliciformes avaliados no epitélio da mucosa do cólon. Em adição, demonstramos que a infecção causou alterações histopatológicas à parede do cólon as quais foram atenuadas pela imunoestimulação com 100 mg/kg de E. purpurea. Em conjunto, nossos resultados sugerem que parte das alterações em células e tecidos que compõem a parede do cólon foram atenuadas pela imunoestimulação com 100 mg/kg de E. purpurea (L.) Moench sugerindo que pode ser utilizado futuramente
    como coadjuvante ao tratamento convencional; porém, para tanto, novos estudos são necessários.


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  • The objective of the present study is to evaluate changes in cells and tissues that make up the colonic wall of rats inoculated with oocysts of T. gondii (strain RH, genotype I) and immunostimulated with 100 mg/kg of E. purpurea (L.) Moench. Twenty-four male Rattus norvegicus were randomly divided into four groups (n=6),
    namely: control group (CG); group infected with 500 T. gondii oocysts and not immunostimulated (GI); control group immunostimulated with 100 mg/kg of E. purpurea (GC+EP); and group infected and immunostimulated with 100 mg/kg of E. purpurea (GI+EP). The experimental protocol (nº 7633021018) was approved by the Ethics Committee for the use of experimental animals. Twenty-eight days after inoculation, at 93 days of age, the rats were euthanized. The colon of each was collected, fixed and analyzed using histochemical and immunohistochemical techniques. Toxoplasmic infection, as well as immunostimulation with 100 mg/kg of E. purpurea, caused histomorphometric alterations, increase in the distribution of total mast cells and mast cells and enterochromaffin cells that express 5-HT and in theproportion of intraepithelial lymphocytes in the colon of rats. We demonstrated that there was an increase in all goblet cell phenotypes evaluated in the colonic mucosal epithelium. In addition, we demonstrated that the infection caused histopathological hanges to the colon wall which were attenuated by immunostimulation with 100 mg/kg of E. purpurea. Taken together, our results suggest that part of the changes in cells and tissues that make up the colonic wall were attenuated by immunostimulation with 100 mg/kg of E. purpurea (L.) Moench, suggesting that it can be used in the future as an adjunct to conventional treatment; however, for that, new studies are necessary. 

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  • CÍNTIA SENA CARVALHO
  • DESENVOLVIMENTO DE UMA PROTEÍNA MULTI-EPÍTOPO COM POTENCIAL IMUNOGÊNICO E PROSPECÇÃO DE NOVOS FÁRMACOS CONTRA INFECÇÕES CAUSADAS POR Corynebacterium pseudotuberculosis.

  • Orientador : THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
  • SANDEEP TIWARI
  • THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • Data: 28/02/2023

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  • Corynebacterium pseudotuberculosis é um patógeno Gram-positivo e intracelular facultativo conhecido por causar doenças de importância veterinária. Dentre estas doenças está a Linfadenite Caseosa (LC), uma enfermidade que acomete caprinos e ovinos gerando abscessos nos linfonodos e órgãos internos, ocasionando perdas econômicas para os criadores desses animais. A profilaxia é a alternativa de melhor custo-benefício para o controle de doenças infecciosas, no entanto ainda não há uma vacina efetiva contra a LC. Diversas metodologias in silico têm contribuído para a seleção de alvos moleculares que podem ser explorados no desenvolvimento de estratégias terapêuticas, métodos diagnósticos e imunógenos recombinantes. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo a seleção de alvos vacinais e terapêuticos, bem como a construção de uma proteína quimérica potencialmente imunogênica e o screening de compostos que possam ser utilizados no tratamento da LC. A partir de dados da literatura, as proteínas reativas RpfB, SlpA, Nlpc/P60 e os fatores de virulência CP40 e PLD foram selecionadas e avaliadas quanto a sua conservação intraespecífica e homologia com proteínas dos hospedeiros caprino e ovino. Posteriormente, foram preditos e avaliados epítopos de MHC-I, MHC-II e células B presentes nestas proteínas. Além disso, proteínas compartilhadas por todas as linhagens de C. pseudotuberculosis, citoplasmáticas e essenciais foram selecionadas para análise de ancoragem molecular com compostos naturais. Uma proteína quimérica foi construída a partir dos epítopos das proteínas RpfB, SlpA, Nlpc/P60, CP40 e PLD. Esse potencial imunogêno se mostrou estável, solúvel, antigênico e não alergênico nas análises in silico. Já na abordagem terapêutica, as proteínas WP_013241317.1, WP_013241598.1, WP_014522829.1, WP_013242887.1, WP_013241937.1 e WP_013241997.1 foram selecionadas e os compostos naturais ZINC04258889, ZINC04235924, ZINC04236001, ZINC04235972, ZINC08300419 e ZINC67902338 foram os melhores ligantes para elas, respectivamente. Esses resultados irão contribuir para a profilaxia e tratamento da LC bem como de outras doenças causadas por C. pseudotuberculosis.  


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  • Corynebacterium pseudotuberculosis is a Gram-positive and intracellular facultative pathogen known to cause diseases of veterinary importance. Among these diseases is Caseous Lymphadenitis (CLA), a disease that affects goats and sheep, generating abscesses in the lymph nodes and internal organs, causing economic losses for the breeders of these animals. Prophylaxis is the most cost-effective alternative for controlling infectious diseases, however there is still no effective vaccine against CLA. Several in silico methodologies have contributed to the selection of molecular targets that can be explored in the development of therapeutic strategies, diagnostic methods and recombinant immunogens. Therefore, the present work aimed to select vaccine and therapeutic targets, as well as to construct a potentially immunogenic chimeric protein and to screen out compounds that could be used in the treatment of CLA. Based on data from the literature, the reactive proteins RpfB, SlpA, Nlpc/P60 and the virulence factors CP40 and PLD were selected and evaluated for their intraspecific conservation and homology with proteins from goat and sheep hosts. Subsequently, epitopes of MHC-I, MHC-II and B cells present in these proteins were predicted and evaluated. In addition, proteins shared by all C. pseudotuberculosis strains, both cytoplasmic and essential, were selected for virtual screening and molecular docking analysis with natural compounds. A chimeric protein was constructed from the epitopes of RpfB, SlpA, Nlpc/P60, CP40 and PLD proteins. This immunogenic potential proved to be stable, soluble, antigenic and non-allergenic in in silico analyses. In the therapeutic approach, The proteins WP_013241317.1, WP_013241598.1, WP_014522829.1, WP_013242887.1, WP_013241937.1 and WP_013241997.1 were selected and natural compounds ZINC04258889, ZINC04235924, ZINC04236001, ZINC04235972, ZINC08300419 and ZINC67902338 were the best binders for them, respectively. These results will contribute to the prophylaxis and treatment of CLA as well as other diseases caused by C. pseudotuberculosis.

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  • Gabriel Barroso de Almeida
  • MARCADORES INFORMATIVOS DE ANCESTRALIDADE E RESPOSTA IMUNOLÓGICA EM INDIVÍDUOS COM COVID-19

  • Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • POLYANNA CAROZO DE OLIVEIRA
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • THAIS FERREIRA BOMFIM PALMA
  • Data: 09/03/2023

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  • A COVID-19 é caracterizada por um amplo espectro de manifestações clínicas e as respostas imunológicas podem determinar desfechos desfavoráveis durante o curso da infecção pelo SARS-CoV-2. Alguns grupos étnicos minoritários parecem ser mais vulneráveis à infecção ou apresentar quadros clínicos severos, seja por fatores biológicos ou sociodemográficos. Existem poucos dados relacionados à ancestralidade genômica e desfechos clínicos da doença, por esta razão, este estudo teve como objetivo estimar o perfil ancestral por meios de Marcadores Informativos de Ancestralidade (AIMs) e avaliar o perfil hematológico e linfocitário de indivíduos com COVID-19 oriundos das cidades de Salvador-Ba e Feira de Santana-Ba. Foram analisados 58 indivíduos com COVID-19 classificados em quadros clínicos leves e graves. A genotipagem ocorreu por meio da PCR e a identificação do perfil linfocitário por meio de imunofenotipagem. Em relação ao perfil ancestral, o grupo grave apresentou 40,2%, 30,4% e 29,4% de perfil ancestral europeu, africano e ameríndio, respectivamente. Enquanto o grupo leve apresentou 44,8%, 30,9% e 24,3% de perfil europeu, ameríndio e africano, respectivamente. O grupo grave apresentou: aumento de leucócitos totais e neutrófilos; redução nos parâmetros de hemácia, hemoglobina, hematócrio e linfócitos na comparação com grupo leve, bem como diminuição dos perfis celulares de TCD4+, TCD8+ e linfócitos B. Não foi possível associar ancestralidade à severidade da doença, porém no quesito perfil celular, nossos achados corroboram com dados que descrevem que a resposta imunológica do indivíduo pode ter papel crucial na patogênese da doença.


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  • COVID-19 is characterized by a wide spectrum of clinical manifestations and immune responses can determine unfavorable outcomes during the course of SARS-CoV-2 infection. Some minority ethnic groups seem to be more vulnerable to infection or to present severe clinical conditions, whether due to biological or sociodemographic factors. There are few data related to genomic ancestry and clinical outcomes of the disease, for this reason, this study aimed to estimate the ancestral profile by means of Ancestry Informative Markers (AIMs) and to evaluate the hematological and lymphocyte profile of individuals with COVID-19 from from the cities of Salvador-Ba and Feira de Santana-Ba. 58 individuals with COVID-19 classified into mild and severe clinical conditions were analyzed. Genotyping was performed using PCR and the lymphocyte profile was identified using immunophenotyping. Regarding the ancestral profile, the severe group presented 40.2%, 30.4% and 29.4% of European, African and Amerindian ancestry profiles, respectively. While the light group had 44.8%, 30.9% and 24.3% of European, Amerindian and African profile, respectively. The severe group presented: increase in total leukocytes and neutrophils; reduction in the parameters of erythrocytes, hemoglobin, hematocrit and lymphocytes in comparison with the mild group, as well as a decrease in the cell profiles of TCD4+, TCD8+ and B lymphocytes. with data describing that the individual's immune response may play a crucial role in the pathogenesis of the disease.

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  • Vitor Cordeiro Pereira
  • COMPARAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE HUMORAL E CELULAR DE OVINOS IMUNIZADOS COM UMA VACINA RECOMBINANTE E UMA VACINA MÚLTIPLA INATIVADA DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS.

  • Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • SIBELE BORUSK
  • MARCOS BORGES RIBEIRO
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • Data: 13/03/2023

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  • Corynebacteriumpseudotuberculosis(C. pseudotuberculosis)éumabactériagram-positiva,anaeróbiafacultativa e intracelular facultativa. Esse agente etiológico causa a linfadenite caseosa, doençainfecciosadecarátercrônicoqueafeta principalmente pequenosruminantes.Osanimaisinfectadosapresentam como sinal clínico, lesões granulomatosas em linfonodos superficiais, internos, alem de poderacometer órgãos vitais.Perdaseconômicasprovocadaspelainfecção por C. pseudotuberculosis associado ao diagnóstico tardio e a falta de um protocolo de imunização eficiente, servem como incentivo para o desenvolvimento de estudos relacionados a linfadenite caseosa. Assim, o objetivo destetrabalhoé avaliar a imunomodulação humoral e celular de ovinos imunizados com uma vacina de subunidaderecombinante constituídapelosantígenosrNanh, rSodC e rPknG de C. pseudotuberculosis, comparando-a com uma vacina comercial múltipla inativada disponível no mercado brasileiro.Comometodologia utilizou-se sistema heterólogo para e expressão das proteínas rNanH, rPknG e rSodCde C. pseudotuberculosis. Doze ovinos foram separados randomicamente em três grupos, sendo G1 grupo controle que recebeu solução salina 0,9%, G2 grupo que foi imunizado com uma vacina múltipla inativada e G3 grupo que foi imunizado com vacina composta pelas proteínas rNanH, rSodC e rPknG. Todos os animais foram desafiados com a cepa CAPJ4 de C. pseudotuberculosis. Ensaio imunoensimático (ELISA) foi utilizado para verificar a indução da respostaimunehumoral. A verificação da resposta imune celular foi realizada a partir da quantificação, por qPCR, das citocinas IFN-y, IL10 e IL12. Além da quantificação de interferon-gama (IFN-y) por ELISA. Ao utilizar os antígenos de C. pseudotuberculosis secretados em meio BHI foi possível verificar que os animais que receberam a vacina múltipla inativada (G2) tiveram um aumento dos níveis de anticorpos específicos IgG quando comparado com os animais que receberam a vacina recombinante (G3). Quando as proteínas recombinantes foram utilizadas como antígeno no ELISA, foi possível observar que o G3 apresentou aumento nos níveis de anticorpos após aplicação das duas doses da vacina quando comparado com G2, grupo esse que não foi possível observar o aumento dos níveis de anticorpos. Na indução da resposta imune celular, não foi possível verificar diferença significativa nos animais do G3 quando comparado com o G2. Portanto, foi possível inferir que a utilização das proteinas rNanH, rPknG e rSodCde C. pseudotuberculosis em uma formulação vacinal foi capaz de induzir a resposta imune humoral em ovinos, fornecendo anticorposespecíficos contraesses antígenos vacinais.


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  • Corynebacteriumpseudotuberculosis (C.pseudotuberculosis) is a gram-positive,facultativeanaerobic,facultativeintracelularbacterium.Thisetiologicalagentcausescaseouslymphadenitis,a chronicinfectiousdiseasethatmainlyeffectssmallruminants. Infectedanimals presente as aclinicalsign,granulomainsuperficialandinternallymphnodes,whichcanaffectvitalorgans. Economic lossses causes byC. pseudotuberculosisinfectionassociatedwith late diagnosisandthelackofanefficientimmunizationprotocol serve as an incentive for thedevelopmentofstudiesrelatedtocaseouslymphadenitis. Thus, theobjectiveofthisworkistoevaluatethe humoral andcellularimmunomodulationofsheepimmunizedwith a recombinantsubunitvaccineconstitutedbytherNanh, rSodCandrPknGantigensofC. pseudotuberculosis, comparing it with a commercialmultipleinactivatedvaccineavailable in theBrazilianmarket. As a methodology, a heterologussytem for expressionofrNanH, rPknGandrSodCproteinsfromC.pseudotuberculosis. Twelvesheepswererandomlydivididintothreegroups : G1, a controlgroupthatreceived 0,9% saline solution, G2 a groupwasimmunizedwiththeinactivadedmultiplevaccineand G3 a groupthatwasimmunizedwith a vaccinecomposedofrNanh, rSodCandrPknGproteins. Allanimalswerechallengedwiththe CAP 76 strainofC.pseudotuberculosis.Immunoenzymaticassay (ELISA) wasusedtoverifytheinductionofthe humoral imune response. The verificationofcellularimmune response wasperformedfromthequantification, byqPCR, ofthecytokinesIFN-y, IL-10 and IL-12. In additiontothequantificationof interferon-gammaby ELISA. The C.pseudotuberculosisantigenssecreted in the BHI mediumshowedthatreceivedtheinactivatedmultiplevaccine (G2) had a increase in specific IgG levelswhencomparedtoyheanimalsthatreceivedtherecombinantvaccine (G3). When therecombinantproteinswereused as antigen in the ELISA, it waspossibleto observe thatthe G3 presentedanincrease in antibodylevelsaftertheapplicationoftwo doses ofthevaccinewhencomparedwithto G2, a group in which it wasnotpossibleto observe anincrease in antibodylevels. In theinductionofcerllularimmune response, it wasnotpossibletoverfythesignificantdifferencein animalsfrom G3 whencomparedto G2.Therefore,itwaspossibletoinferthatthe use ofrNanh, rSodCandrPknGproteinsfromC. pseudotuberculosisin a vaccineformulationwasabbletoinduce a humoral immune response in sheep, providingespecificantibodyagainstvaccineantigens

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  • Fabiane da Silva Reis Góes
  • AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DOS GENES SELPLG, ITGA4, ARG1, NOS2 EM LEUCÓCITOS TOTAIS E NÍVEIS PLASMÁTICOS DAS PROTEÍNAS P-SELECTINA  E PSGL-1  EM PACIENTES COM COVID-19 E SUA CORRELAÇÃO COM GRAVIDADE.

  • Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CYNARA GOMES BARBOSA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • VITOR ANTONIO FORTUNA
  • Data: 19/05/2023

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  • INTRODUÇÃO: A COVID-19, doença causada pelo vírus SARS-COV-2 pode progredir para

    casos graves e promover a Síndrome do Desconforto Respiratório Agudo (SDRA). A fisiopalotogia da COVID grave não está bem esclarecida, mas parece estar relacionada à disfunção endotelial combinada a uma resposta imune desregulada e tempestade de citocinas. A COVID-19 evolui rapidamente para casos graves, portanto é de grande importância avaliar exames laboratoriais e biomarcadores indicadores da resposta imune do hospedeiro que sejam eficazes para predizer a evolução de casos graves, com objetivo de otimizar o manejo clínico e a terapêutica para evitar desfecho desfavorável, como óbito. OBJETIVO: Avaliar a expressão dos genes ARG1, NOS2, ITGA4 e SELPLG em leucócitos totais e mensurar os níveis das proteínas P-selectina e PSGL-1 no plasma de pacientes com COVID-19 associando com a gravidade do quadro clínico e ao prognóstico da doença. METODOLOGIA: No presente estudo observacional submetido e aprovado pelo CONEP (Nº Parecer: 4.014.165) Recrutamos 117 pacientes com diagnóstico confirmado da doença COVID-19 (grave = 58 e leve = 59). Parâmetros demográficos, clínicos e laboratoriais foram coletados na admissão ao estudo. Usamos o ensaio de RT-qPCR para mensurar a expressão relativa dos genes. Avaliamos níveis plasmáticos da P-selectina e PSGL-1 com ensaio de ELISA. RESULTADOS: Encontramos que homens, idosos com presença de comorbidades pré-existentes (p<0,0001) tiveram maiores chances para desfecho grave. A razão neutrofilo-linfócito (RNL) e razão plaquetas-linfócitos (RPL) (p<0,0001), estavam alteradas no grupo grave. Os pacientes com sintomas grave exibiram expressão aumentada dos genes ARG1 (p=0,032) e SELPLG (p<0,0001), assim como maiores concentrações plasmáticas das protéinas P-selectina (p=0,031) e PSGL-1 (p<0,002). CONCLUSÃO: Nossos dados sugerem que exames laboratoriais como RNL, RPL, expressão elevada dos genes SELPLG / ARG1 em leucócitos e níveis aumentados de P-selectina e PSGL-1 no plasma, podem ser potenciais biomarcadores de diagnóstico e prognóstico úteis para a doença grave,  orientando tratamento estratégico para o COVID-19.

     


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  • INTRODUCTION: COVID-19, a disease caused by the SARS-COV-2 virus, can progress to

    severe cases and promote Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). The pathophysiology of severe COVID is not well understood, but it appears to be related to endothelial dysfunction combined with a dysregulated immune response and cytokine storm. COVID-19 evolves quickly into severe cases, so it is of great importance to evaluate laboratory tests and biomarkers that are indicators of the host's immune response that are effective in predicting the evolution of severe cases, with the aim of optimizing clinical and therapeutic management to avoid adverse outcomes. unfavorable events, such as death. OBJECTIVE: To evaluate the expression of the ARG1, NOS2, ITGA4 and SELPLG genes in total leukocytes and to measure the levels of P-selectin and PSGL-1 proteins in the plasma of patients with COVID-19, associating it with the severity of the clinical picture and the prognosis of the disease . METHODOLOGY: In the present controlled observational study approved by CONEP (Opinion No.: 4,014,165) we recruited 117 patients with a confirmed diagnosis of COVID-19 (severe = 58 and mild = 59). Demographic, clinical, and laboratory parameters were collected at study admission. We used the RT-qPCR assay to measure the relative expression of genes. We evaluated plasmatic levels of P-selectin and PSGL-1 with ELISA assay. RESULTS: we found that men, elderly people with pre-existing comorbidities (p<0.0001) were more likely to have a severe outcome. The neutrophil-lymphocyte ratio (NLR) and platelet-lymphocyte ratio (PLR) (p<0.0001) were altered in the severe group. Patients with severe symptoms exhibit increased expression of the ARG1 (p=0.032) and SELPLG (p<0.0001) genes, as well as higher plasma concentrations of P-selectin (p=0.031) and PSGL-1 (p<0.002) proteins. CONCLUSION: Our data suggest that laboratory tests such as RNL, RPL, elevated expression of SELPLG / ARG1 genes in leukocytes and increased levels of P-selectin and PSGL-1 in plasma, may be potential useful diagnostic and prognostic biomarkers for severe disease, guiding strategic treatment for COVID-19.

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  • CATARINA DE JESUS NUNES
  • Investigação do potencial neuroprotetor e anti-inflamatório de extratos de espécies de esponjas marinhas

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CLAUDENER SOUZA TEIXEIRA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 13/06/2023

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  • INTRODUÇÃO: As doenças neurodegenerativas são caracterizadas pela perda progressiva de neurônios, resultando em incapacidade e morte. A busca por novas terapias a partir de compostos naturais visa investigar substâncias com potencial anti-inflamatório no SNC. As esponjas estão entre os organismos marinhos mais prolíficos para novas substâncias, e estudos in vitro mostraram atividade anticancerígena e anti-inflamatória de extratos ou compostos purificados de algumas espécies. OBJETIVOS: Avaliar in vitro a toxicidade de
    extratos de espécies de esponjas marinhas; o potencial neuroprotetor contra danos inflamatórios em neurônios e a associação à modulação da resposta de microglias. MÉTODOS: Culturas de células neuronais PC12 foram tratadas com 20 diferentes extratos (0,1 a 200 µg/mL) obtidos com solventes diclorometano (DCM), acetato de etila (AcOEt) e metanol (MeOH) de espécies de esponjas marinhas dos gêneros Aplysina, Cladocroce, Chondrilla,
    Callyspongia e Haliclona. A viabilidade celular foi determinada após 72 h do tratamento pelo teste MTT. Células PC12 foram submetidas ao dano inflamatório com LPS a 5 µg/mL por 12 h e após tratadas por 24 h com o extrato de A. fulva (0,1 e 1 µg/mL), ou com o seu composto purificado AF-H1 (1 e 10 µM) e viabilidade celular avaliadas pela exclusão de Azul de Tripan e Iodeto de Propídeo. Microglias, obtidas do córtex cerebral de ratos Wistar neonatos, foram tratadas por 24 h com meio condicionado derivado de células PC12 nessas condições e o fenótipo destas e de células PC12 nas diferentes condições foi avaliado por microscopia de contraste de fase e coloração pancrômica de Rosenfeld. RESULTADOS: A maioria dos extratos apresentaram toxicidade nas concentrações de 100 e 200 µg/mL, exceto os extratos Ac-OEt que foram a partir de 10 μg/mL. O extrato MeOH de A. fulva (AF-MeOH) e seu composto AF-H1 não foram tóxicos em nenhuma das concentrações testadas. Células PC12 submetidas a dano com LPS apresentaram corpos celulares contraídos, efeito que não foi observado em culturas tratadas com extrato AF-MeOH e AF-H1 nas concentrações adotadas. Microglias tratadas com meio condicionado de culturas de PC12 submetidas ao LPS mostraram forma semelhante à ameboide; em contraste, microglias submetidas ao meio condicionado de células PC12 tratadas com LPS e AF-MeOH ou LPS e AF-H1 apresentaram fenótipo mais ramificado, similar ao de microglias em condições controle. CONCLUSÕES: O extrato MeOhH de A. fulva (AF-MeOH) e seu componente AF-H1 são capazes de proteger estas células frente ao dano inflamatório com LPS e modular a resposta inflamatória de microgliais para um fenótipo neuroprotetor.


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  • INTRODUCTION: Neurodegenerative diseases are characterized by progressive loss of neurons, resulting in disability and death. The search for new therapies from natural compounds aims to investigate substances with anti-inflammatory potential in the CNS. Sponges are among the most prolific marine organisms for new substances, and in vitro studies have shown anti- cancer and anti-inflammatory activity of extracts or purified compounds from some species. OBJECTIVES: To evaluate in vitro the toxicity of extracts from marine sponge species; the neuroprotective potential against inflammatory damage in neurons and the association with the modulation of the microglial response. METHODS: Cultures of PC12 neuronal cells were treated with 20 different extracts (0.1 to 200 µg/mL) obtained with dichloromethane (DCM), ethyl acetate (EtOAc) and methanol (MeOH) solvents from marine sponge species of the genus Aplysina , Cladocroce, Chondrilla, Callyspongia and Haliclona. Cell viability was determined after 72 h of treatment by the MTT test. PC12 cells were subjected to inflammatory damage with LPS at 5 µg/mL for 12 h and then treated for 24 h with A. fulva extract (0.1 and 1 µg/mL), or with its purified compound AF-H1 (1 and 10 µM) and cell viability evaluated by exclusion of Trypan Blue and Propidium Iodide. Microglia, obtained from the cerebral cortex of newborn Wistar rats, were treated for 24 h with conditioned medium derived from PC12 cells under these conditions and the phenotype of these and PC12 cells under different conditions was evaluated by phase contrast microscopy and Rosenfeld panchromic staining. RESULTS: Most extracts showed toxicity at concentrations of 100 and 200 µg/mL, except for Ac- EtO extracts which were from 10 µg/mL. The MeOH extract of A. fulva (AF-MeOH) and its compound AF-H1 were not toxic in any of the tested concentrations. PC12 cells subjected to damage with LPS showed contracted cell bodies, an effect that was not observed in cultures treated with AF-MeOH and AF-H1 extracts at the adopted concentrations. Conditioned medium-treated microglia from PC12 cultures subjected to LPS showed amoeboid-like shape; in contrast, microglia subjected to conditioned medium from PC12 cells treated with LPS and AF-MeOH or LPS and AF-H1 showed a more branched phenotype, similar to that of microglia under control conditions. CONCLUSIONS: A. fulva MeOhH extract (AF-MeOH) and its AF-H1 component are able to protect these cells against inflammatory damage with LPS and modulate the inflammatory response of microglials towards a neuroprotective phenotype. 

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  • MONICA DE SOUSA PITA
  • Influência Da Coinfecção Por Trypanossoma Cruzi Na Resposta Imune E No Desfecho Clínico De Pacientes Com Leishmaniose Cutânea Da Área Endêmica De Corte De Pedra

  • Orientador : LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • AUGUSTO MARCELINO PEDREIRA DE CARVALHO
  • Data: 14/06/2023

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  • Em diversas áreas da América Latina, a distribuição geográfica da leishmaniose cutânea (LC) se sobrepõe a áreas de transmissão da doença de Chagas, sendo a infecção por Trypanosoma cruzi documentada em 12 a 70% dos pacientes com sintomas clínicos de leishmaniose. Estudos mostram diferença na frequência de células T em pacientes com LC coinfectados com T.ruzi em relação a pacientes com leishmaniose isolada. O objetivo deste estudo é investigar se a resposta imune de pacientes com LC causada por Leishmania braziliensis e coinfectados com T. cruzi está associada à evolução clínica da leishmaniose. Foi realizado um inquérito sorológico com cento e oitenta soros de pacientes com LC causada por L. braziliensis, onde foram utilizadas proteínas quiméricas específicas do T. cruzi para detectar a coinfecção nesses pacientes. Foram identificados 20 pacientes com LC coinfectados com T.cruzi, todos com títulos de anticorpos anti-Leishmania superiores aos pacientes infectados apenas pela Leishmania. Quanto a produção de citocinas, IL-6 foi a que apresentou maiores níveis no grupo de pacientes coinfectados comparado com o grupo somente com leishmaniose. Não houve diferença estatística na produção de IFN-γ, TNF, IL-1β entre pacientes coinfectados com Leishmania braziliensis e T.cruzi. Em relação ao desfecho clínico, quatorze (70%) dos coinfectados falharam a terapia com antimônio, e dos pacientes com apenas infecção por Leishmania, um total de sessenta e dois (42%) falharam. Esses resultados indicam que a coinfecção pode interferir na resposta imune, e influencia na resposta ao tratamento de pacientes com LC causada por L. braziliensis.

     


  • Mostrar Abstract
  • In several areas of Latin America, the geographic distribution of cutaneous leishmaniasis (CL) overlaps with areas of Chagas disease transmission ranging from 12 to 70% of patients with clinical symptoms of leishmaniasis. Studies show a difference in the expression of T cells in CL and in patients coinfected with Trypanosoma cruzi in relation to patients with isolated Leishmania. The aim of this study is to investigate whether the immune response of patients with CL caused by L. braziliensis and coinfected with T. cruzi is associated with the clinical course of leishmaniasis. A case-control study was carried out with one hundred and eighty sera from patients with CL caused by L. braziliensis, where chimeric proteins specific to Trypanosoma cruzi were used to detect coinfection with Chagas disease. We identified 20 patients with CL who were coinfected with T.cruzi, all of whom had higher anti-Leishmania antibody titers than patients infected with Leishmania alone. As for the production of cytokines, IL-6 was the one with the highest levels in the group of co-infected patients compared to the group with leishmaniasis alone. There was no statistical difference in the production of IFN-γ, TNF, IL-1β between patients coinfected with Leishmania braziliensis and T.cruzi. With regard to clinical outcome, fourteen (70%) of the co-infected patients failed antimonial therapy, and of patients with Leishmania infection alone, a total of sixty-two (42%) failed. These results indicate that co-infection can interfere with the immune response and influence the response to treatment of patients with CL caused by L. braziliensis

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  • Nívia Nonato Silva
  • "Avaliação da Expressão do Interferon Tipo 1 e Receptores (IFNAR1 e IFNAR2), Interleucina 17A, Retrovírus Endógenos Humanos (HERVK-10 e HERVW-1) no sangue periférico e associação com a gravidade nos pacientes com COVID-19."

  • Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ELISANGELA VITORIA ADORNO
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • VITOR ANTONIO FORTUNA
  • Data: 28/06/2023

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  • Introdução: A COVID-19 caracteriza-se pela hiperativação do sistema imunológico e liberação descontrolada de citocinas. Recentes estudos apontam que a sinalização prejudicada dos IFNA1 e seus receptores, IL17A, HERVs e IFNG pode estar associada à gravidade da COVID-19. Objetivo: Analisar a expressão dos genes IFNA1 e receptores IFNAR1/IFNAR2, IL17A e HERVs (HERVK-10 e HERVW-1) em leucócitos totais e níveis basais de IFNG no plasma de pacientes com COVID-19. Métodos: Estudo prospectivo, observacional e transversal com 117 pacientes recrutados (grave=58 e leve=59). Dados demográficos e clínicos foram coletados. Os leucócitos do sangue periférico foram isolados e o ensaio RT-qPCR foi realizado para análise da expressão gênica. Os níveis plasmáticos de IFNG foram mensurados pelo método ELISA. Resultados: Na amostra avaliada, observou-se prevalência do sexo masculino (p<0,05), idosos (p<0,0001), negros (p<0,0001) e comorbidades pré-existentes (p<0,0001). Os pacientes com COVID-19 grave apresentaram leucocitose, neutrofilia, contagem elevada de plaquetas e linfócitos reduzidos em comparação com os pacientes leves (p<0,0001). Os índices SII, AISI e SII/Hb foram significativamente maiores em pacientes graves (p<0,0001). Os níveis de expressão gênica de IFNA1, HERVW-1 e IL17A foram significativamente maiores em pacientes graves (p<0,05, p<0,05, p<0,001, respectivamente). Entretanto, os níveis plasmáticos de IFNG não foram significativos. A análise ROC apontou que os índices SII e SII/Hb são bons marcadores prognósticos de gravidade da COVID-19, com AUC (0,98 e 0,99, p<0,0001, respectivamente). Conclusão: Nossos resultados apontam que o segmento mais afetado pela COVID-19 compreende homens, idosos, negros e portadores de comorbidades, com maior expressão gênica de IFNA1, HERVW-1 e IL17A. Índices como SII e SII/Hb podem ser prognósticos promissores de gravidade para a COVID-19.


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  • COVID-19 is characterized by hyperactivation of the immune system and uncontrolled release of cytokines. Recent studies indicate that impaired signaling of IFNA1 and its receptors, IL17A, HERVs and IFNG may be associated with the severity of COVID-19. Objective: To analyze the expression of IFNA1 genes and IFNAR1/IFNAR2 receptors, IL17A and HERVs (HERVK-10 and HERVW-1) in total leukocytes and baseline levels of IFNG in the plasma of patients with COVID-19. Methods: Prospective, observational and croos-sectional study with 117 recruited patients (severe=58 and mild=59). Demographic and clinical data were collected. Peripheral blood leukocytes were isolated and RT-qPCR assay was performed for gene expression analysis. Plasma levels of IFNG were measured by the ELISA method. Results: Among the evaluated sample, there was a prevalence of males (p<0.05), elderly (p<0.0001), blacks (p<0.0001) and pre-existing comorbidities (p<0.0001). Patients with severe COVID-19 had leukocytosis, neutrophilia, and elevated platelet counts with reduced lymphocytes compared with mild patients (p<0.0001). The SII, AISI and SII/Hb indexes were significantly higher in critically ill patients (p<0.0001). IFNA1, HERVW-1 and IL17A gene expression levels were significantly higher in critically ill patients (p<0.05, p<0.05, p<0.001, respectively). However, plasma levels of IFNG were not significant. ROC analysis showed that SII and SII/Hb indexes are good prognostic markers for the outcome of COVID-19, with AUC (0.98, 0.99, p<0.0001, respectively). Conclusion: Our results indicate that the segment most affected by COVID-19 comprises men, the elderly, black people and those with comorbidities, with higher gene expression of IFNA1, HERVW-1 and IL17A. Indices such as SII and SII/Hb can be promising predictors of severity for COVID-19.

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  • Leticia Reis de Oliveira
  • IDENTIFICAÇÃO DE microRNA DIFERENCIALMENTE EXPRESSOS EM PACIENTES COM DISFUNÇÃO CARDÍACA DECORRENTE DE SEPSE E A CORRELAÇÃO COM AS VIAS INTRACELULARES DE SINALIZAÇÃO: ANÁLISE IN SILICO DE POTENCIAIS BIOMARCADORES DE PROGNÓSTICO

  • Orientador : SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • NATALIA MACHADO TAVARES
  • SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • Data: 13/07/2023

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  • Introdução: A sepse é uma condição clínica com elevado risco de morte, definida como uma disfunção orgânica decorrente de uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, sendo a disfunção cardíaca uma das
    principais complicações dos pacientes com sepse e está intimamente associada à elevada mortalidade induzida por esta condição clínica. Atualmente, a incidência e a mortalidade da sepse ainda são elevadas, apontando a importância do uso de biomarcadores no diagnóstico precoce e no  seu prognóstico. Nesse cenário, os microRNA surgem como candidatos potenciais com alta especificidade e sensibilidade para a sepse. Diante desse contexto, o presente estudo visou investigar o perfil de expressão dos miRNA e sua correlação com as vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio decorrente da sepse. Métodos &amp; Resultados : O levantamento dos transcriptomas publicamente disponíveis em NCBI, GEO e ENA, resultou na obtenção do conjunto de dados GSE171546. Este conjunto dispõe de 20 amostras : 5 compondo o grupo controle e 15 amostras constituindo o grupo com cardiomiopatia séptica, separadas nos intervalos de tempo: 24h, 48h e 72h. A importação e análise desse conjunto de dados foram feitas a partir da plataforma online do Galaxy. Foi então avaliado o valor de p &lt;0,05 e Fold change para encontrar os Genes Diferencialmente Expressos (GDE) e microRNA Diferencialmente Expressos (MDE). A partir desta análise, 768 GDE foram encontrados no período de 24h, 312 no grupo 48h e 255 GDE no intervalo de 72h, além de dois MDE (miR-8110 e miR-574-5p). As análises de enriquecimento de vias e de ontologia genética foram feitas pelo Webgestalt. A verificação dos mRNA alvos dos MDE foi realizado através do Mirwalk e posterior construção de rede de interação entre GDE e MDE, no Cytoscape. Conclusão : Os dois miRNA identificados estão relacionados a diversas vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio associado à disfunção cardíaca decorrente da sepse e estão diferencialmente modulados no transcriptoma analisado neste estudo, sugerindo um papel relevante como potenciais biomarcadores de prognóstico da cardiomiopatia decorrente da sepse.


  • Mostrar Abstract
  • Introdução: A sepse é uma condição clínica com elevado risco de morte, definida como uma disfunção orgânica decorrente de uma resposta desregulada do hospedeiro à infecção, sendo a disfunção cardíaca uma das principais complicações dos pacientes com sepse e está intimamente associada à elevada mortalidade induzida por esta condição clínica. Atualmente, a incidência e a mortalidade da sepse ainda são elevadas, apontando a importância  do uso de biomarcadores no diagnóstico precoce e no seu prognóstico. Nesse cenário, os microRNA surgem como candidatos potenciais com alta especificidade e sensibilidade para a sepse. Diante desse contexto, o presente estudo visou investigar o perfil de expressão dos miRNA e sua correlação com as vias intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio decorrente da sepse. Métodos &amp; Resultados : O levantamento dos transcriptomas publicamente disponíveis em NCBI, GEO e ENA, resultou na obtenção do conjunto de dados GSE171546. Este conjunto dispõe de 20 amostras : 5 compondo o grupo controle e 15 amostras constituindo o grupo com cardiomiopatia séptica, separadas nos intervalos de tempo: 24h, 48h e 72h. A importação e análise desse conjunto de dados foram feitas a partir da plataforma online do Galaxy. Foi então avaliado o valor de p &lt;0,05 e Fold change para encontrar os Genes Diferencialmente Expressos (GDE) e microRNA Diferencialmente Expressos (MDE). A partir desta análise, 768 GDE foram encontrados no período de 24h, 312 no grupo 48h e 255 GDE no
    intervalo de 72h, além de dois MDE (miR-8110 e miR-574-5p). As análises de
    enriquecimento de vias e de ontologia genética foram feitas pelo Webgestalt. A
    verificação dos mRNA alvos dos MDE foi realizado através do Mirwalk e
    posterior construção de rede de interação entre GDE e MDE, no Cytoscape.
    Conclusão : Os dois miRNA identificados estão relacionados a diversas vias
    intracelulares envolvidas no remodelamento do miocárdio associado à
    disfunção cardíaca decorrente da sepse e estão diferencialmente modulados
    no transcriptoma analisado neste estudo, sugerindo um papel relevante como
    potenciais biomarcadores de prognóstico da cardiomiopatia decorrente da
    sepse.

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  • LARA SOUSA CRUZ OLIVEIRA PORTELA RODRIGUES
  • Identificação De Genes Diferencialmente Expressos Em Pacientes Com Sepse e a Correlação com o perfil inflamatório: Análise In Silico De Potenciais Biomarcadores.

  • Orientador : SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALINE CRISTINA ANDRADE MOTA MIRANDA MASCARENHAS
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • Data: 13/07/2023

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  • A sepse é um problema de saúde pública mundial e representa a principal causa de morbidade e mortalidade no mundo em unidades de terapia intensiva não destinadas a pacientes cardiopatas. Apesar de toda a dedicação para uma investigação mais minuciosa a fim de um diagnóstico e prognóstico precoce e preciso nas últimas décadas, esta abordagem continua sendo um desafio considerável e crescente aos cuidados de saúde. Neste contexto de desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico rápidas, acessíveis e adequadas para melhorar a identificação, prevenção e tratamento da sepse, destaca-se o uso dos genes diferencialmente expressos (GDE) como potenciais biomarcadores no diagnóstico e prognóstico da sepse. Portanto, o objeti vo dessa pesquisa foi estudar o perfil de expressão dos genes e sua correlação com as vias intracelulares moduladas por citocinas e fatores decrescimento associadas à progressão e severidade da sepse. Para isso, foi feita uma pesquisa nos bancos de dados do NCBI e GEO e, posteriormente,  selecionados três conjuntos de dados de sequenciamento, o GSE12624, GSE131761 e GSE69063. Foram escolhidos os GDE que possuíam um p-valor &lt;0,05 e cuja expressão apresentava FC menor que -1,1 ou maior que +1,1. Os genes foram analisados segundo o programa de enriquecimento de vias Enrichr para verificar se a expressão gênica dos indivíduos é consistente com a doença estudada. Foi construída uma rede de interações entre os genes através do programa String. A análise de ontologia dos genes das principais vias intracelulares apresentou expressão significativamente aumentada.Através do diagrama de Venn identificou-se cinco genes presentes nos três estudos, esses cinco genes foram analisados no String. Foi construída uma rede de interações entre os genes através do programa. Foram feitas as análises dos genes avaliados quanto à sensibilidade e especificidade com base na intensidade de sinal de cada amostra através da ferramenta estatística SPSS 20.0 e os genes ARG1, HPGD, DAAM2 e PCOLCE2 apresentaram boa especificidade e sensibilidade para identificar a sepse. Estes resultados colaboram para o entendimento do papel dos 4 genes na sepse e irá ajudar na construção de um perfil de assinatura para o diagnóstico precoce da doença. 


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  • Sepsis is a global public health problem and represents the leading cause of morbidity and mortality worldwide in non-cardiac intensive care units. Despite all the dedication to a more thorough investigation for early and accurate diagnosis and prognosis in the last decades, this approach remains a considerable and growing challenge to healthcare. In this context of developing rapid, accessible, and appropriate diagnostic tools to improve sepsis identification, prevention, andtreatment, the use of differentially expressed genes (DEGs) as potential biomarkers in sepsis diagnosis and prognosis stands out. Therefore, the objective of this research was to study the gene expression profile and its correlation with intracelular pathways modulated by cytokines and
    growth factors associated with sepsis progression and severity. For this purpose, a search was conducted in the NCBI and GEO databases, and subsequently, three sequencing datasets, namely GSE12624, GSE131761, and GSE69063, were selected. DEGs with a p-value <0.05 and expression fold change (FC) less than -1.1 or greater than +1.1 were chosen. The genes were analyzed using the Enrichr pathway enrichment program to verify if the gene expression of individuals is consistent with the studied disease. An interaction network between the genes was constructed using the String program. Based on this, we obtained preliminary results, and the ontology analysis of genes in the main intracellular pathways showed significantly increased expression. Through the Venn diagram, five genes present in all three studies were identified, and these five genes were further analyzed using the String program to construct an interaction network. The genes evaluated for sensitivity and specificity were analyzed based on the signal intensity of each sample through the statistical tool SPSS 20.0 and the genes ARG1, HPGD, DAAM2 and PCOLCE2 showed good specificity and sensitivity to identify sepsis. These results contribute to the understanding of the role of the 4 genes in sepsis and will help in the
    construction of a signature profile for the early diagnosis of the disease. 

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  • Taiane de Macêdo Gondim
  • EXPRESSÃO DE IFN, IL-17, IL-2, CCL2, CCL3 E HERVs ASSOCIADA À GRAVIDADE DA COVID-19

  • Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARCOS DA COSTA SILVA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • VERA LUCIA COSTA VALE
  • Data: 25/07/2023

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  • A COVID-19 é uma doença respiratória aguda causada pelo novo coronavírus (SARS-CoV-2). Embora a maioria dos casos sejam assintomáticos ou cursem comsintomas leves, cerca de 20% dos acometidos pela doença desenvolvem sua forma grave. A progressão da COVID-19 tem sido associada a hipóxia, inflamação sistêmica desregulada e coagulopatias, porém os fatores de risco para sua evolução para a forma grave ainda não são totalmente compreendidos. O mau prognóstico da doença parece estar associado a fatores envolvidos na interação vírus-hospedeiro, como a sinalização prejudicada do IFN tipo I principal linha de defesa inata para montagem de uma resposta imune antiviral efetiva associada a uma expressão desregulada da citocina pró-inflamatórias. Além disso, os retrovírus endógenos humanos (HERVs), remanescentes de inserções genômicas virais ancestrais, parecem ser reativados em resposta a agentes infecciosos como o SARS-CoV-2, modulando a resposta imune inata e levando a vários efeitos deletérios sistêmicos, porém com papel no agravamento da COVID-19 ainda são incipientes. O presente estudo analisou a expressão gênica e níveis plasmáticos de algumas moléculas apontadas como marcadores de gravidade da COVID-19, comparando os quadros leve e grave da doença. Foram avaliados 71 indivíduos (46 casos leves e 25 graves) para análise da expressão gênica, e 139 para dosagem plasmáticas de citocinas (58 casos leves e 81 graves). As expressões dos genes de IFN e seus receptores (INFAR1 e INFAR2), IL-17 e HERVs foram analisadas em ambos os grupos, bem como as citocinas IL-2, CCL2 e CCL3. O gene INFAR2 e a citocina IL-2 foi mais elevada no grupo leve, enquanto os níveis da quimiocina CCL3 foram mais significativos no grupo grave. Esses achados potencializam as evidências de como a dinâmica da resposta imunológica do hospedeiro pode impactar o desfecho clínico da infecção pelo SARS-CoV-2.


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  • COVID-19 is an acute respiratory illness caused by the new coronavirus (SARS-CoV-2). Although most cases are asymptomatic or have mild symptoms, about 20% of those affected by the disease develop its severe form. The progression of COVID-19 has been associated with hypoxia, systemic physiological dysregulation and coagulopathies, but the risk factors for its evolution to the severe form are not yet fully understood. The poor prognosis of the disease seems to be associated with factors involved in the virus-host interaction, such as impaired IFN type I signaling the main innate line of defense for mounting an effective antiviral immune response associated with dysregulated expression of the pro-inflammation cytokine. Furthermore, human endogenous retroviruses (HERVs), remnants of ancestral viral genomic insertions, appear to be reactivated in response to infectious agents such as SARS-CoV-2, modulating the innate immune response and leading to various deleterious systemic effects, but with a role the worsening of COVID-19 are still incipient.This study analyzed gene expression and plasma levels of some molecules identified as markers of COVID-19 severity, comparing mild and severe disease. We evaluated 71 individuals (46 mild and 25 severe cases) for gene expression analysis, and 139 for plasma cytokine dosage (58 mild and 81 severe cases). Expressions of IFN genes and their receptors (INFAR1 and INFAR2), IL-17 and HERVs were analyzed in both groups, as well as IL-2, CCL2 and CCL3 cytokines. The INFAR2 gene and the IL-2 cytokine were higher in the mild group, while CCL3 chemokine levels were more significant inthe severe group. These findings add to the evidence of how the dynamics of the host's immune response can impact the clinical outcome of SARS-CoV-2 infection.

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  • EDSON HENRIQUE BISPO AMARAL
  • Identificação de mecanismos genéticos e imunológicos associados ao uso nocivo de álcool em uma população latino-americana miscigenada

  • Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAROLINE ALVES FEITOSA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • THIAGO MAGALHÃES DA SILVA
  • Data: 03/08/2023

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  • Introdução: O uso nocivo do álcool (UNA) é um problema de saúde pública que impõe custos consideráveis aos sistemas de saúde em todo o mundo. O consumo de etanol afeta a qualidade de vida dos usuários, levando a uma série de problemas de saúde mental e física. Os transtornos associados ao uso de álcool são condições complexas influenciadas por diversos fatores, como: alterações nos sistemas de neurotransmissão, mediadores imunes/inflamatórios e variantes genéticas. Tais distúrbios apresentam herdabilidade estimada entre 50% e 60%. Estudos de associação genômica ampla revelaram diversas variantes genéticas associadas aos fenótipos relacionados ao uso álcool, em particular em genes envolvidos no metabolismo da droga. No entanto, a maioria desses estudos se concentrou em populações de ascendência europeia ou asiática, limitando possíveis extrapolações para outros grupos étnicos. Objetivo: Investigar mecanismos genéticos/imunogenéticos associados ao UNA em indivíduos latino-americanos miscigenados. Metodologia: O Teste de Identificação de Transtorno por Uso de Álcool (AUDIT) foi usado para avaliar o risco de UNA em 2.840 indivíduos da cidade de Pelotas (Brasil). Os indivíduos foram genotipados para 2,3 milhões de Variantes de Nucleotídeo Único (SNVs) utilizando a plataforma Illumina HumanOmni 2.5-8v1 BeadChip, seguido por processo de imputação de genótipos. Os padrões de ancestralidade dos participantes foram investigados através de análise de Componentes Principais e pelo método ADMIXTURE. Análises de associação genética foram realizadas através de regressão logística multivariada. Os potenciais funcionais das variantes associadas ao UNA foram avaliados através de análises in silico. Além disso, foram realizadas análises de enriquecimento e interação de vias para identificar mecanismos potencialmente envolvidos no desenvolvimento de UNA. Resultados: As análises de ancestralidade evidenciaram o padrão miscigenado da população de Pelotas. Os indivíduos com alto risco de UNA apresentaram mediana de ancestralidade europeia significativamente maior do que os participantes com risco baixo/moderado [0.84 e 0.82, respectivamente; p = 2.13x10-2). Notavelmente, foi identificada associação significativa do fenótipo de UNA com uma variante intrônica no gene Citocromo P450 Família 4 Subfamília B Membro 1 (CYP4B1) (rs1097611; [p = 4.88x10-8odds ratio (OR) = 1.8, intervalo de confiança (IC) = 1.46-2.23]. Diversas variantes em desequilíbrio de ligação com rs1097611 podem ter implicações funcionais no locus e são associadas à expressão diferencial do gene CYPB1 em múltiplos tecidos em humanos. Também foi observada associação sugestiva (5x10-8 < p < 10-5) com SNV situada no gene Fator de Troca de Nucleotídeo Guanina Vav 1 (VAV1) (p = 6.33x10-6, OR = 3.16, IC = 1.92-5.20), que codifica produto com função imune. Por fim, foi possível evidenciar diversas vias relacionadas aos sistemas nervoso e imunológico potencialmente implicadas no UNA. Conclusão: Em conjunto, esses dados suportam a natureza multifatorial do UNA, apoiando a hipótese da participação do sistema imune e de vias de neurotransmissão nos comportamentos de consumo da droga. Estudos como este, com indivíduos de grupos étnicos subrepresentados, são fundamentais para identificar novas variantes associadas ao UNA.


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  • Introduction: Harmful use of alcohol (HUA) is a public health problem that imposes considerable costs on healthcare systems worldwide. Ethanol consumption affects the quality of life of users, leading to a range of mental and physical health issues. Alcohol-related disorders are complex conditions influenced by various factors, such as alterations in neurotransmission systems, immune/inflammatory mediators, and genetic variants. These disorders have an estimated heritability of 50% to 60%. Genome-wide association studies have revealed numerous genetic variants associated with alcohol-related phenotypes, particularly in drug metabolism-related genes. However, most of these studies have focused on populations of European or Asian ancestries, limiting potential extrapolations to other ethnic groups. Objective: To investigate genetic/immunogenetic mechanisms associated with HUA in admixed Latin American individuals. Methods: The Alcohol Use Disorder Identification Test (AUDIT) was used to assess the risk of HUA in 2,840 individuals from the city of Pelotas (Brazil). The participants were genotyped for 2.3 million Single Nucleotide Variants (SNVs) using the Illumina HumanOmni 2.5-8v1 BeadChip platform, followed by genotype imputation. Ancestry patterns were investigated through Principal Component Analysis and ADMIXTURE method. Genetic association analyses were conducted using multivariate logistic regression. The potential functional implications of variants associated with HUA were evaluated through in silico analyses. Additionally, pathway enrichment and interaction analyses were performed to identify mechanisms potentially involved in HUA. Results: Ancestry analyses revealed the admixed pattern of the Pelotas population. Individuals with high risk of HUA exhibited significantly higher median European ancestry compared to low/moderate-risk participants (0.84 and 0.82, respectively; p = 2.13x10-2). Notably, a significant association of the HUA phenotype was identified with an intronic variant in the Cytochrome P450 Family 4 Subfamily B Member 1 (CYP4B1) gene (rs1097611; [p = 4.88x10-8odds ratio (OR) = 1.8, confidence interval (CI) = 1.46-2.23]. Several variants in linkage disequilibrium with rs1097611 may have functional implications at the locus and are associated with differential CYPB1 gene expression in multiple human tissues. A suggestive association (5x10-8 < p < 10-5) was also observed with an SNV located in the Vav Guanine Nucleotide Exchange Factor 1 (VAV1) gene (p = 6.33x10-6, OR = 3.16, CI = 1.92-5.20), which encodes a product with immune function. Finally, multiple pathways related to nervous and immune systems are involved in HUA. Conclusion: Taken together, these findings support the multifactorial nature of HUA, suggesting the involvement of the immune system and neurotransmission pathways on drug consumption behaviors. Studies like this, with individuals from underrepresented ethnic groups, are essential to identify new variants associated with HUA.

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  • Itamara Raquel dos Anjos
  • A INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA SOBRE A REATIVIDADE ASTROCITÁRIA EM CULTURAS PRIMÁRIAS DE RATOS NEONATOS

  • Orientador : CLARISSA DE SAMPAIO SCHITINE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CLARISSA DE SAMPAIO SCHITINE
  • QUIARA LOVATTI ALVES
  • REJANE CONCEICAO SANTANA
  • Data: 10/08/2023

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  • Os astrócitos são células gliais heterogênea, essenciais para o funcionamento do SNC. Eles fornecem nutrientes, recaptam neurotransmissores em excesso, contribuem com a plasticidade neuronal, remover espécies reativas de oxigênio, contribuem para a integridade e permeabilidade da BHE, possuem funções neurogênicas, sinaptogênicas, além de crescimento axonal e sobrevivência neuronal . Os astrócitos também estão envolvidos na modulação das respostas inflamatórias liberando citocinas pró-inflamatórias, regulatórias e antiinflamatórias. Dentro deste contexto, os astrócitos respondem a lesões teciduais ou estímulos danosos através de alterações morfológicas como a hipertrofia, proliferação exacerbada, alterações nos prolongamentos, e aumento da expressão de marcadores como o GFAP, em um processo conhecido como astrogliose reativa. Essa resposta astrocitária está presente em vários cenários patológicos incluindo doeças neurodegenerativas e infecções. Uma característica muito comum em muitas infecções é a alteração da temperatura. Além disso, o choque térmico pode estar associado com a indução ou severidade de doenças neurodegenerativas. Portanto, o objetivo principal do trabalho é avaliar a influência da temperatura na reatividade astroglial, analisando os efeitos do estresse térmico na expressão do principal marcador astrocitário, a proteína GFAP, a viabilidade e o impacto desse insulto térmico na modulação da resposta astrocitária. Para investigar um possível efeito da temperatura, culturas primárias de astrócitos foram preparadas de ratos pós-natais de dois dias e submetidas a uma temperatura de 42 graus Celsius por 30 min. Após esse período, as culturas foram recuperadas a 37°C em C02 por mais 24 horas. A fim de verificar a viabilidade celular nas culuras enriquecidas de astrócitos submetidas ao choque térmico, realizamos o ensaio de de MTT e não observamos diferença significativa no numero de células viaveis nas culturas submetidas ao choque termico em relação as culuras controle. Em seguida, analisamos a morfologia das culturas enriquecidas de astrócitos através da coloração de Rosenfeld, ensaio de ICQ, onde obtivemos uma resposta associada a astrogliose com a presença de prolongamentos extensos, formação de aglomerados celulares, células com ramificações expandidas e a presença de células binucleadas. Além disso, os ensaio de ICQ mostraram aumento na quantidade de células positivas para GFAP, dado que contrastou com os resultados obtidos com a técnica de Western blot, que evidenciou que a expressão de GFAP em culturas expostas a alta temperatura não difere significantemente da cultura controle. Para avaliar a modulação inflamatória induzida pela alta temperatura, dosamos concentração de NO e não houve alteração nos seus níves entre os grupos experimentais. Em adição, analisamos o perfil inflamatório da culturas enriquecidas de astrocitos dosando as citocinas IL-10, IL-1B e a proteína GFAP através da expressão gênica por qRT-PCR. Os resultados indicam que a alta temperatura, de 42 graus Celsius, por 30 minutos, induz a uma remodelação da expressão de GFAP em astrócitos em aproximadamente 40%, sem haver aumento da quantidade da proteina expressa ou da transcrição do gene conforme os dados obtidos. Também não houve mudança do perfil de citocinas expressas nas culturas expostas ao choque térmico, sugerindo a presença de uma reatividade astroglial inicial induzida pelo choque térmico. Dessa forma, novos experimentos devem ser realizados para complementar e aprofundar a dinâmica assim como a progressão da reatividade astrocitária em modelos de choque térmico. 


    INGLÊS

  • Mostrar Abstract
  • Astrocytes are heterogeneous glial cells, essential for the functioning of the CNS. They provide nutrients, reuptake excess neurotransmitters, contribute to neuronal plasticity, remove reactive oxygen species, contribute to the integrity and permeability of the BBB, have neurogenic and synaptogenic functions, and axonal growth and neuronal survival. Astrocytes are also involved in modulating inflammatory responses by releasing pro-inflammatory, regulatory, and anti-inflammatory cytokines. Within this context, astrocytes respond to tissue injury or harmful stimuli through morphological changes such as hypertrophy, exacerbated proliferation, changes in processes, and increased expression of markers such as GFAP, in a process known as astrogliosis reactive. This astrocytic response is present in several pathological scenarios including neurodegenerative diseases and infections. A prevalent feature in many infections is the change in temperature. Furthermore, heat shock may be associated with the induction or severity of neurodegenerative diseases. Therefore, the main objective of this work is to evaluate the influence of temperature on astroglial reactivity, analyzing the effects of thermal stress on the expression of the main astrocytic marker, the GFAP protein, the viability and the impact of this thermal insult on the modulation of the astrocytic response. To investigate a possible effect of temperature, primary cultures of astrocytes were prepared from two-day postnatal mice and subjected to a temperature of 42 degrees Celsius for 30 minutes. After this period, the cultures were recovered at 37°C in C02 for another 24 hours. In order to verify cell viability in enriched cultures of astrocytes subjected to heat shock, we performed the MTT test. We did not observe a significant difference in the number of viable cells in cultures subjected to heat shock compared to control cultures. Then, we analyzed the morphology of enriched astrocyte cultures through Rosenfeld staining, and ICQ assay, where we obtained a response associated with astrogliosis with the presence of extensive extensions, formation of cell clusters, cells with expanded ramifications, and the presence of binucleated cells. In addition, the ICQ assays showed an increase in the number of GFAP-positive cells, which contrasted with the results obtained with the Western blot technique, which showed that GFAP expression in cultures exposed to high temperature does not differ significantly from the culture control. To evaluate the inflammatory modulation induced by high temperature, we measured the concentration of NO and there was no change in NO levels between the experimental groups. In addition, we analyzed the inflammatory profile of enriched cultures of astrocytes measuring IL-10, IL-1B, and GFAP protein through gene expression by qRT-PCR. The results indicate that the high temperature, 42 degrees Celsius, for 30 minutes, induces remodeling of GFAP expression in astrocytes by approximately 40%, without increasing the amount of expressed protein or gene transcription according to the data obtained. There was also no change in the profile of cytokines expressed in cultures exposed to heat shock, suggesting the presence of an initial astroglial reactivity induced by heat shock. Thus, new experiments must be carried out to complement and deepen the dynamics and progression of astrocytic reactivity in thermal shock models.

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  • Natália da Rocha Lopes
  • AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE FATOR PROMOTOR DE RESSUSCITAÇÃO DE Corynebacterium pseudotuberculosis

  • Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARCOS BORGES RIBEIRO
  • NUBIA SEYFFERT
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • Data: 10/08/2023

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  • A caprino-ovinocultura são atividades prevalentes no Nordeste brasileiro. No entanto, esses animais sofrem com doenças infectocontagiosas como a linfadenite caseosa (LC), causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, que apresenta dificuldade no tratamento. Compreender o comportamento de fatores promotores de ressuscitação (Rpf) pode auxiliar nessa problemática, sendo também indicada relação entre a capacidade de produzir biofilme e a expressão de rpf. Para observar a expressão de rpfB nessa bactéria, como um possível alvo terapêutico, buscou-se avaliar a expressão desse gene nas cepas CAP3W e CAPJ4 de C. pseudotuberculosis, não produtora e produtora de biofilme, respectivamente. Para as análises foram realizados cultivos dessas cepas em caldo BHI nutritivo e em estresses oxidativo e ácido. Os estresses foram aplicados no início e meio da fase exponencial, assim como foram coletadas alíquotas em tempos pré-determinados. As alíquotas foram armazenadas a -70 ºC em TRI Reagente®, realizou-se extração de RNA que foi convertido a cDNA, sendo utilizado para avaliar a expressão de rpfB por RT-qPCR. Houve expressão de rpfB em ambas as cepas e em todas as condições analisadas. No cultivo nutritivo, observou-se expressão significativa de rpfB nas primeiras horas na cepa CAPJ4. Os estresses ácido e oxidativo induziram expressão significante do gene na cepa CAPJ4 na ressuscitação, exceto o oxidativo no início da fase exponencial. Com isso, podemos afirmar que as cepas de C. pseudotuberculosis estudadas apresentaram expressão de rpfB nas condições avaliadas. A cepa CAPJ4, conhecida por sua capacidade na formação de biofilme, se destacou na produção de rpfB.


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  • Goat and sheep breeding are prevalent activities in the Brazilian Northeast. However, these animals suffer from infectious and contagious diseases such as caseous lymphadenitis (CL) caused by Corynebacterium pseudotuberculosis bacteria, which presents challenges in treatment. Understanding the behavior of resuscitation-promoting factors (Rpf) may aid to solve this issue, as there is an indication of a correlation between the ability to produce biofilm and the expression of rpf. To observe the expression of rpfB in the bacteria as a potential therapeutic target, we aimed to evaluate the expression of this gene in the CAP3W and CAPJ4 strains of C. pseudotuberculosis, non-biofilm producer and biofilm producer strains, respectively. To analyze, these strains were cultured in nutritive BHI broth and subjected to oxidative and acid stresses. The stresses were applied at the early and middle of exponential phases, and aliquots were collected at predetermined times. The aliquots were stored at -70°C in TRI Reagent®, and RNA extraction was performed, followed by conversion to cDNA and used this to evaluate rpfB expression by RT-qPCR. There was expression of rpfB in both strains under all conditions analyzed. In the nutritive culture, significant expression of rpfB was observed in the early hours in CAPJ4 strain. Acid and oxidative stresses induced significant gene expression in CAPJ4 strain during resuscitation, except for oxidative stress at early exponential phase. Therefore, we can conclude that the studied strains of C. pseudotuberculosis presented rpfB expression under all evaluated conditions. The CAPJ4 strain, known for its biofilm-forming capacity, showed higher rpfB production.

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  • Ingrid Marins de Almeida
  • ESTUDO DE VARIANTES NO GENE AKT1 E O SEU PAPEL NA GRAVIDADE DA COVID-19

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • CINTHIA VILA NOVA SANTANA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 10/08/2023

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  • A pandemia de COVID-19, causada pelo vírus SARS-CoV-2, é uma crise global. O Brasil é o segundo país com maior número de mortes ocorridas devido à COVID-19 no mundo, 701.494 mortes. Muitos fatores podem determinar a gravidade da COVID-19, incluindo carga viral, fatores genéticos, presença de comorbidades, idade, sexo e inflamação descontrolada. Estima-se que aproximadamente 5% dos casos desenvolvem síndrome do desconforto respiratório agudo grave devido à tempestade de citocinas. Uma via de sinalização celular que pode estar envolvida nesse processo é a PI3K/AKT/MTOR. Estudos demonstram que a inibição de AKT pode potencialmente suprimir a inflamação patológica, tempestade de citocinas, fibroproliferação e ativação plaquetária associada a COVID-19. Objetivos: Investigar a associação entre variantes do gene AKT1 com a gravidade da COVID-19. Métodos: Amostras de sangue periférico e dados sociodemográficos foram coletados de 508 indivíduos com COVID-19, 216 casos leves e 292 casos graves, de abril de 2020 a abril de 2021. As concentrações plasmáticas de citocinas foram medidas por ELISA. A genotipagem dos SNPs, rs1130214 e rs2494746, e a expressão do gene AKT1 foram realizadas usando kits da Thermo Fisher e analisadas por qRT-PCR no QuantStudio 12K (Applied Biosystems). Resultados e Conclusões: O alelo rs2494746-C foi associado à gravidade, internação na UTI e morte por COVID-19. Enquanto isso, o alelo C de rs1130214 foi associado a níveis elevados de TNF-α e D-dímero. Além disso, as variantes demonstraram um risco cumulativo associado à gravidade, criticidade e morte por COVID-19. Na análise preditiva, o rs2494746 obteve acurácia de 71%, sugerindo alta probabilidade do teste determinar a gravidade da doença. Portanto, o presente estudo contribui para entender a influência do gene AKT1 e suas variantes no dano imunológico em indivíduos infectados com SARS-CoV-2, o que pode ser útil no futuro para auxiliar na previsão de um pior resultado do COVID- 19.


  • Mostrar Abstract
  • The COVID-19 pandemic, caused by the SARS-CoV-2 virus, is a global crisis. Brazil is the second country with the highest number of deaths due to COVID-19 in the world, 701,494 deaths. Many factors can determine the severity of COVID-19, including viral load, genetic factors, presence of comorbidities, age, gender, and uncontrolled inflammation. It is estimated that approximately 5% of cases develop severe acute respiratory distress syndrome due to cytokine storm. A cell signaling pathway that may be involved in this process is PI3K/AKT/MTOR. Studies demonstrate that AKT inhibition can potentially suppress pathologic inflammation, cytokine storm, fibroproliferation, and platelet activation associated with COVID-19. Objectives: To investigate the association between AKT1 gene variants and the severity of COVID-19. Methods: Peripheral blood samples and sociodemographic data were collected from 508 individuals with COVID-19, 216 mild cases and 292 severe cases, from April 2020 to April 2021. Plasma cytokine concentrations were measured by ELISA. Genotyping of the SNPs, rs1130214 and rs2494746, and AKT1 gene expression were performed using Thermo Fisher kits and analyzed by qRT-PCR in the QuantStudio 12K (Applied Biosystems). Results and Conclusions: The rs2494746-C allele was associated with severity, ICU admission, and death from COVID-19. Meanwhile, the C allele of rs1130214 was associated with elevated TNF-α and D-dimer levels. In addition, variants demonstrated a cumulative risk associated with severity, criticality, and death from COVID-19. In the predictive analysis, the rs2494746 obtained an accuracy of 71%, suggesting a high probability of the test determining the severity of the disease. Therefore, the present study contributes to understanding the influence of the AKT1 gene and its variants on immune damage in individuals infected with SARS-CoV-2, which may be useful in the future to help predict a worse outcome of COVID-19.

     

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  • Irlã Santos Lima
  • Caracterização de mecanismos antitumorais e imunomodulatórios do flavonoide rutina em células de glioma em interação com microglia e relação com expressão de miRNAs.

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • FABIOLA CARDILLO
  • GISELLE PINTO DE FARIA LOPES
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 24/08/2023

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  • O glioblastoma (GBM) é o tumor cerebral mais agressivo e resistente ao tratamento. No microambiente GBM, a interação com a microglia está associada à desregulação de citocinas, quimiocinas e miRNAs, que contribuem para angiogênese, proliferação, anti-apoptose e quimiorresistência. O flavonoide rutina tem demonstrado ser capaz de induzir a inibição do crescimento de células de glioma de rato associado à ativação microglial e produção de mediadores pró-inflamatórios por mecanismos ainda pouco esclarecidos. Caracterizar os mecanismos antitumorais e imunomodulatórios do flavonoide rutina em células de glioma em interação indireta com microglias e a relação com expressão de miRNAs. Para tanto foram utilizadas células de GBM humanas GL15 e microglias humanas da linhagem C20. A viabilidade celular foi analisada pelo teste de MTT em ambos os tipos celulares tratadas ou não com rutina (1-50 μM) por 24 h. A capacidade de migração de células GL-15 após tratamento com rutina (30 µM) foi analisada por microscopia de interferência em ensaio de lesão em monocamada. A expressão do miR-125b em células GL15 tratadas ou não com rutina (30 µM) e no secretoma foi avaliada 24 h após o tratamento por RT-qPCR. A expressão de mRNA para citocinas IL-1β, IL-6, IL-10, TNF e para a proteína sinalizadora STAT3 em microglia C20 controles, tratadas com meio condicionado de GL-15 em condições controle (MCGC) ou tratadas com meio condicionado de GL-15 tratadas com rutina (MCGR) foi avaliada 24 h após o tratamento por RT-qPCR. Adicionalmente, a expressão de proteína STAT3 nas células GL15 e C20, nas diferentes condições, foi avaliada por western blot, e a morfologia das células foi analisada por microscopia de interferência. Foi observado que rutina (30-50 μM) reduziu significativamente a viabilidade das células GL15 (50%) após 24 h, e aboliu a migração após 48 h, no entanto, não afetou a viabilidade de microglias. Somado a estes, o tratamento de células GL15 com rutina reduziu significativamente a expressão de miR-125b e da proteína STAT3. Por outro lado, microglias submetidas ao MCGR apresentaram alterações morfológicas sugestivas de reatividade e apresentaram redução na expressão de mRNA para IL-6, TNF e STAT3 e da proteína STAT3. Os resultados deste estudo reiteram o potencial antiglioma do flavonoide rutina e revelam a sua propriedade em modular a expressão de onco miRNA-125b que, pelos estudos de interação indireta com microglias, deve implicar na modulação do perfil inflamatório destas células para um fenótipo mais responsivo antitumoral. 


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  • Glioblastoma (GBM) is the most aggressive and treatment-resistant brain tumor. In the GBM microenvironment, interaction with microglia is associated with dysregulation of cytokines, chemokines, and miRNAs, which contribute to angiogenesis, proliferation, anti-apoptosis, and chemoresistance. The flavonoid rutin has been shown to induce inhibition of rat glioma cell growth associated with microglial activation and production of pro-inflammatory mediators by mechanisms that are still poorly understood. The present study aimed to characterize the antitumor and immunomodulatory mechanisms of the flavonoid rutin in human glioma cells in indirect interaction with microglia and the relationship with miRNA expression. For this, human GL15 GBM cells and human C20 microglia were used. Cell viability was analyzed by MTT test in both cell types treated or not with rutin (1-50 μM) for 24 h. The migration capacity of GL-15 cells after treatment with rutin (30 μM) was analyzed by interference microscopy in a monolayer lesion assay. The expression of miR-125b in GL15 cells treated or not with rutin (30 μM) and in their secretome was evaluated 24 h after treatment by RT-qPCR. The expression of mRNA for cytokines IL-1β, IL-6, IL-10, TNF and for the signaling protein STAT3 in C20 microglia controls, treated with conditioned medium of GL-15 under control conditions (GCCM) or treated with conditioned medium of GL-15 treated with rutin (MCGR) was evaluated 24 h after treatment by RT-qPCR. Additionally, the expression of STAT3 protein in GL15 and C20 cell in the different conditions was evaluated by Western blot, and the morphology of the cells was analyzed by interference microscopy. It was observed that rutin (30-50 μM) significantly reduced the viability of GL15 cells (about 50%) after 24 h, and abolished migration after 48 h, however, it did not affect the viability of microglia. In addition, the treatment of GL15 cells with rutin significantly reduced the expression of miR-125b and the STAT3 protein. On the other hand, microglia submitted to MCGR showed morphological changes suggestive of reactivity and showed a reduction in the expression of mRNA for IL-6, TNF and STAT3 and in STAT3 protein. The results of this study reiterate the antiglioma potential of the flavonoid rutin and reveal its property in modulating the expression of onco miRNA-125b which, by studies of indirect interaction with microglia, should be implyed in the modulation of the inflammatory profile of these cells for a more responsive antitumor phenotype. 

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  • CLARA MACÊDO MIMOSO
  • LESÃO TECIDUAL E REPARO INDUZIDOS PELO VENENO DE Bothrops leucurus NO MÚSCULO ESQUELÉTICO E POTENCIAL TERAPÊUTICO DA ADMINISTRAÇÃO DE G-CSF 

  • Orientador : LUCIANA LYRA CASAIS E SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCIANA LYRA CASAIS E SILVA
  • MARCIO CAJAZEIRA AGUIAR
  • VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
  • Data: 29/09/2023

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  • Os acidentes ofídicos são um importante problema de saúde pública em regiões tropicais do mundo, devido ao grande número de pessoas afetadas e ao risco de morbimortalidade após o envenenamento. Na Bahia aproximadamente 70% dos acidentes são causados pela espécie Bothrops leucurus. Os venenos são uma mistura complexa de substâncias orgânicas e inorgânicas que se diversificam entre espécies e de acordo com fatores como desenvolvimento evolutivo, variações geográficas, alimentares e biológicas, o que reforça a necessidade de investigar os mecanismos envolvidos na ação de cada veneno. As manifestações locais desencadeadas pelo envenenamento, como inflamação persistente, dano tecidual e mionecrose, são neutralizadas de forma ineficiente, podendo haver dano tecidual irreversível. Terapias coadjuvantes são propostas para reduzir os danos locais do envenenamento botrópico, entretanto ainda não existe uma terapia alternativa aplicada na clínica. Tratamentos com G-CSF tem sido utilizado nas recuperações funcionais e estruturais de músculos lesionados. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil temporal da lesão e reparo induzidos pelo envenenamento pelo veneno de B. leucurus, assim como o grau de comprometimento estrutural do músculo esquelético, o perfil de células inflamatórias e de citocinas liberadas após a inoculação do veneno, e avaliar o efeito do tratamento com G-CSF sobre o músculo esquelético envenenado em modelo experimental. Para isso, camundongos Swiss foram inoculados com 50 μg/mL do veneno total de B. leucurus e eutanasiados nos períodos experimentais de 3 h, 6 h e 24 h, 7 d, 14 d e 28 d. Animais inoculados com veneno B. leucurus foram tratados com G-CSF por dois dias consecutivos após completarem 7 d e 28 d do envenenamento. Amostras de soro e músculo foram coletadas, processadas e utilizadas para a avaliação da atividade miotóxica do veneno, através da dosagem de CK plasmática, da análise histopatológica das lesões musculares e quantificação de células inflamatórias, e da e expressão gênica de citocinas, por RT-qPCR. Os resultados de CK demonstraram pico de liberação após 6 h. Os cortes histológicos corados com HE evidenciaram infiltrado inflamatório em todos os períodos analisados, com predominância da concentração em 7 d e 14 d; presença de ‘lesão delta’, edema, hemorragia, mionecrose e hipercontração miofibrilar. A avaliação da expressão gênica de citocinas demostrou o aumento de TNF-α, IL-1β, INF-y, IL-6, IL-10, ARG e VEGF, nos diferentes tempos analisados. De forma geral o tratamento com G-CSF teve ação imunomoduladora do processo inflamatório, alterando a expressão das citocinas, mas não na avaliação histológica, indicando a possibilidade de desdobramento positivo no tratamento com G-CSF para lesões do músculo esquelético ocasionadas pelo envenenamento por B. leucurus, utilizando protocolo de tratamento diferente. 


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  • Ophidian accidents are a major public health problem in tropical regions of the world, due to the large number of people affected and the risk of morbidity and mortality after envenoming. In Bahia approximately 70% of the accidents are caused by the species Bothrops leucurus. Snake venoms are a complex mixture of organic and inorganic substances that change between species and according to factors such as evolutionary development, geographical, dietary and biological variations, which reinforces the need to investigate the mechanisms involved in the actions of each venom. Local manifestations triggered by envenoming, such as persistent inflammation, tissue damage and myonecrosis, are inefficiently neutralized and irreversible tissue damage may result. Coadjuvant therapies are proposed to reduce the local damage of bothropic envenoming, however there is still no alternative therapy applied in the clinic. G-CSF treatments have been used in the functional and structural recovery of injured muscles. The aim of this study was to characterize the temporal profile of injury and repair induced by B. leucurus venom envenomation, as well as the degree of structural impairment of skeletal muscle, the profile of inflammatory cells and cytokines released after venom inoculation, and to evaluate the effect of treatment with G-CSF on envenoming skeletal muscle in an experimental model. For this, Swiss mice were inoculated with 50 μg/mL of B. leucurus venom and euthanized in the experimental periods of 3 h, 6h and 24 h, 7 d, 14 d and 28 d. Animals inoculated with B. leucurus venom were treated with G-CSF for two consecutive days after completing 7 d and 28 d of envenomation. Serum and muscle samples were collected, processed and used to assess the myotoxic activity of the venom, through plasma CK dosage, histopathological analysis of muscle lesions and quantification of inflammatory cells and cytokine gene expression by RT-qPCR. CK results demonstrated peak release after 6 h. Histological sections stained with HE showed inflammatory infiltrate in all analyzed periods, with predominance of the concentration in 7 d and 14 d; presence of ‘delta lesion’, oedema, hemorrhage, myonecrosis and myofibrillar hypercontraction. The evaluation of cytokine gene expression showed an increase in TNF-α, IL-1β, INFy, IL-6, IL-10, ARG and VEGF at the different times analyzed. In general, the treatment with G-CSF had an immunomodulatory action on the inflammatory process, altering the expression of cytokines, but not in the histological evaluation, indicating the possibility of a positive development in the treatment with G-CSF for skeletal muscle injuries caused by envenoming by B. leucurus, using a different treatment protocol. 

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  • Allan Souza dos Santos
  • CARACTERIZAÇÃO DE SUBPOPULAÇÕES LINFOCITÁRIAS E MARCADORES PROGNÓSTICOS EM PACIENTES RECÉM DIAGNOSTICADOS COM MIELOMA MÚLTIPLO SUBMETIDOS À TERAPIA DE PRIMEIRA LINHA COM CICLOFOSFAMIDA, TALIDOMIDA, DEXAMETASONA E DARATUMUMABE.

  • Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • MARINHO MARQUES DA SILVA NETO
  • Data: 27/10/2023

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  • O mieloma múltiplo (MM) é a segunda neoplasia hematológica mais frequente, decorrente da proliferação de plasmócitos produtores de proteína monoclonal, afetando majoritariamente a população idosa. Na última década, os avanços terapêuticos têm possibilitado aumento da sobrevida global dos pacientes, contudo a doença permanece incurável. Protocolos terapêuticos combinando agentes alquilantes, imunomoduladores, imunossupressores e imunoterapia induzem a uma alteração imunológica ainda pouco compreendida. O objetivo deste estudo foi caracterizar subpopulações linfocitárias em pacientes com Mieloma Múltiplo elegíveis ao Transplante Autólogo de Células-Tronco Hematopoiéticas (TACTH), utilizando a terapia de primeira linha com ciclofosfamida, talidomida, dexametasona associado ao daratumumabe (CTd-Dara), anticorpo monoclonal anti-CD38. Entre 2018 e 2022, 23 pacientes com MM recém-diagnosticados tiveram seus perfis linfocitários analisados em cinco momentos distintos e a resposta terapêutica monitorada por Next-Generation Flow (NGF), através da pesquisa de doença residual mensurável (DRM). Observou-se que o tratamento induziu mudanças significativas no perfil linfocitário, com destaque para a diminuição de linfócitos B e células NK. A composição das subpopulações de linfócitos B alterou significativamente ao longo do tratamento. Na avaliação de variáveis prognósticas, a expressão da molécula CD38 na superfície dos plasmócitos, revelou-se um marcador promissor, correlacionando-se a menores níveis de DRM para esta terapia e ao sistema R-ISS. Embora as subpopulações linfocitárias e as Células Tumorais Circulantes (CTCs) não tenham alcançado significância estatística em termos prognósticos, elas indicam um padrão que merece uma investigação mais aprofundada. Estes resultados enriquecem nossa compreensão sobre os efeitos imunomoduladores de terapias no MM e sinalizam caminhos para otimizar tratamentos e monitoramento de pacientes.


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  • Multiple Myeloma (MM) is the second most common hematological malignancy, resulting from the proliferation of monoclonal protein-producing plasma cells, predominantly affecting the elderly population. In the last decade, therapeutic advances have led to an increase in the overall survival of patients, however the disease remains incurable. Therapeutic protocols combining alkylating agents, immunomodulators, immunosuppressants, and immunotherapy induce an immunological shift that is still not fully understood. The aim of this study was to characterize lymphocyte subsets in patients with Multiple Myeloma eligible for Autologous Stem Cell Transplant (ASCT) using first-line therapy with cyclophosphamide, thalidomide, dexamethasone combined with daratumumab (CTd-Dara), an anti-CD38 monoclonal antibody. Between 2018 and 2022, 23 newly-diagnosed MM patients had their lymphocyte profiles analyzed at five distinct time points, and the therapeutic response was monitored by Next Generation Flow (NGF), through the detection of measurable residual disease (MRD). It was observed that the treatment induced significant changes in the lymphocyte profile, with emphasis on the decrease in B cells and NK cells. The composition of the B cell subsets changed significantly throughout the treatment. When evaluating prognostic variables, the expression of the CD38 molecule on the surface of plasma cells emerged as a promising marker, correlating with lower MRD levels for this therapy and the R-ISS system. Although the lymphocyte subpopulations and Circulating Tumor Cells (CTCs) did not achieve statistical significance in prognostic terms, they indicate a pattern warranting further investigation. These findings enhance our understanding of the immunomodulatory effects of therapies in MM and signal ways to optimize treatments and patient monitoring.

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  • UENDERSON CONCEIÇÃO ROCHA
  • SOROPREVALÊNCIA DA INFECÇÃO PELO VÍRUS SARS-COV-2 EM DOADORES DE SANGUE NO INTERIOR DA BAHIA
  • Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RODRIGO FELICIANO DO CARMO
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • SARA NUNES DE OLIVEIRA ARAUJO
  • Data: 22/11/2023

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  • Introdução: A COVID-19 trouxe complicações para diversos países. No Brasil, a distribuição da infecção ocorreu, de modo geral, das capitais dos estados para as cidades do interior. Esse fluxo foi identificado também na Bahia, sendo importante traçar o nível de circulação viral e o impacto da infecção nas regiões do estado. Objetivo: Investigar a relação entre a soroprevalência para a infecção pelo SARS-CoV-2 em amostras de doadores de sangue e a notificação de casos de infecção pelo vírus no Interior da Bahia, em 2020. Material e Métodos: A amostra populacional constitui-se originalmente de 6.877 pessoas doadoras de sangue em 13 cidades, situadas em quatro regiões do estado da Bahia (norte, sul, leste e oeste). Posteriormente, as amostras de soro foram submetidas a teste para a detecção de anticorpos anti-SARS-CoV-2, utilizando o Kit TR COVID-19 IGM/IGG – Bio-Manguinhos. Foram realizadas análises estatísticas para estimar a soroprevalência bruta da infecção e utilizado o método de correção bayesiano para determinar a soroprevalência ajustada por região do estado. Os dados referentes a notificação/incidência têm como fonte a base de dados pública da Secretária de Saúde do Estado da Bahia (SESAB) e o DATASUS. Foram preservados apenas os registros cujo teste para COVID-19 tenha sido marcado como “POSITIVO” e “SRAG por COVID-19” no ano de 2020, entre os meses de abril e novembro. Resultados: Os doadores de sangue apresentaram idade mediana de 34 anos (IQR: 25-42). A maioria dos doadores testados era da região oeste da Bahia. A soroprevalência entre doadores de sangue e a incidência cumulativa de infecção/hospitalização entre abril e novembro de 2020 foram de 12,2% e 5,0%, respectivamente. Foi possível identificar diferenças entre a soroprevalência de doadores de sangue e a incidência acumulada de casos, principalmente nas regiões oeste e leste da Bahia, em novembro de 2020. Conclusão: Este estudo revela uma discrepância entre a soroprevalência de SARS-CoV-2 em doadores de sangue e os casos notificados de infecção na Bahia em 2020, particularmente nas regiões oeste e leste do estado. A prevalência de 12,2% entre os doadores de sangue, em comparação com a incidência cumulativa de 5,0% de infecções/hospitalizações, sugere uma subnotificação substancial dos casos de COVID-19. A pesquisa contribui para um maior entendimento da dinâmica da infecção do SARS-Cov-2 no interior da Bahia, fornecendo dados valiosos para o planejamento de estratégias de saúde pública mais direcionadas e eficientes na contenção da disseminação do vírus, especialmente em áreas menos acessíveis e em populações vulneráveis.


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  • Introduction: COVID-19 has brought complications to various countries. In Brazil, the spread of the infection generally moved from state capitals to interior cities. This pattern was also identified in Bahia, making it important to trace the level of viral circulation and the impact of the infection in the regions of the state. Objective: To investigate the relationship between the seroprevalence of SARS-CoV-2 infection in blood donor samples and the notification of virus infection cases in the Interior of Bahia in 2020. Materials and Methods: The population sample originally consisted of 6,877 blood donors in 13 cities, located in four regions of the state of Bahia (north, south, east, and west). Subsequently, serum samples were tested for the detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies using the TR COVID-19 IGM/IGG Kit – Bio-Manguinhos. Statistical analyses were conducted to estimate the crude seroprevalence of the infection and a Bayesian correction method was used to determine the seroprevalence adjusted by region of the state. The data on notification/incidence are sourced from the public database of the Secretary of Health of the State of Bahia (SESAB) and DATASUS. Only records marked as "POSITIVE" and "SRAG for COVID-19" in the year 2020, between April and November, were preserved. Results: The blood donors had a median age of 34 years (IQR: 25-42). Most of the tested donors were from the western region of Bahia. The seroprevalence among blood donors and the cumulative incidence of infection/hospitalization between April and November 2020 were 12.2% and 5.0%, respectively. Differences were identified between the seroprevalence of blood donors and the accumulated incidence of cases, mainly in the west and east regions of Bahia, in November 2020. Conclusion: This study reveals a discrepancy between the seroprevalence of SARS-CoV-2 in blood donors and the reported cases of infection in Bahia in 2020, particularly in the western and eastern regions of the state. The prevalence of 12.2% among blood donors, compared to the cumulative incidence of 5.0% of infections/hospitalizations, suggests substantial underreporting of COVID-19 cases. The research contributes to a better understanding of the dynamics of SARS-CoV-2 infection in the interior of Bahia, providing valuable data for planning more targeted and efficient public health strategies to contain the virus's spread, especially in less accessible areas and among vulnerable populations.

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  • Raquel Bispo de São Pedro
  • Avaliação de genes auto inflamatórios em crianças com Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) associada à infecção pelo SARS-CoV-2.

  • Orientador : PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • VIVIAN BOTELHO LORENZO
  • Data: 13/12/2023

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  • Introdução: A Síndrome Inflamatória Multissistêmica Pediátrica (SIM-P) é uma condição inflamatória associada à infecção pelo SARS-CoV-2. É caracterizada por febre, sintomas gastrointestinais proeminentes, manifestações mucocutâneas, sintomas respiratórios e choque. A ocorrência de SIM-P pode estar associada a erros inatos da imunidade, que afetam seletivamente a resposta imune do hospedeiro contra o SARS-CoV-2. Objetivo: Identificar variantes em genes envolvidos em condições autoinflamatórias primárias que podem ser determinantes para a SIM-P. Métodos: Foram coletadas células e informações clínicas e laboratoriais de 21 pacientes pediátricos com SIM-P, recrutados em três hospitais públicos da região Nordeste do Brasil. Os casos de SIM-P foram classificados como graves ou moderados, considerando-se a necessidade ou não, respectivamente, de Ventilação por Pressão Positiva (PPV) e/ou medicação vasopressora. Em seguida, foi realizado sequenciamento total do exoma (WES) dos indivíduos e aplicada estratégia de priorização de Variantes de Nucleotídeo Único (SNVs) com potencial deletério, com foco em 56 genes previamente implicados em doenças autoinflamatórias (de acordo com o Comitê de Imunidade da União Internacional das Sociedades de Imunologia, 2022). Resultados: Nove indivíduos apresentaram a forma moderada da SIM-P, enquanto os outros 12 foram incluídos no grupo de SIM-P grave. Na abordagem de priorização de variantes, foram identificadas 6 SNVs em 5 genes diferentes (ADAM17, CARD14, IKBKG, PSTPIP1 e SH3BP12). Todas essas variantes foram encontradas em crianças/adolescentes com a forma grave da SIM-P. Notavelmente, foram selecionadas duas variantes (rs1200631089 e rs144458353) no gene ADAM17. Tal gene codifica uma protease implicada no processamento do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e desempenha papel fundamental na infecção pelo SARS-CoV-2, clivando a Enzima Conversora de Angiotensina 2 (ECA-2), o principal receptor humano para o SARS-CoV-2. Conclusão: Nossos dados sugerem que variantes deletérias raras em genes previamente implicados em condições autoinflamatórias, incluindo ADAM17, IKBKG, PSTPIP1, SH3BP2 e CARD14, podem explicar a ocorrência de SIM-P em crianças e adolescentes brasileiros previamente sadios.


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  • Introduction: Multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) is an inflammatory condition associated with SARS-CoV-2 infection. It is characterized by fever, prominent gastrointestinal symptoms, mucocutaneous manifestations, respiratory symptoms, and shock. The occurrence of P-MIS may be linked to innate immunological errors that selectively affect the host's immune response against SARS-CoV-2. Ain: Identify variants in genes involved in primary autoinflammatory conditions that may be implicated in MIS-C. Methods: Cells and clinical/laboratory information were collected from 21 pediatric patients with MIS-C recruited from three public hospitals in the Northeast region of Brazil. The MIS-C cases were categorized as severe or moderate based on the need for Positive Pressure Ventilation (PPV) and/or vasopressor medication, respectively. Subsequently, whole exome sequencing (WES) was performed on the individuals, and a strategy for prioritizing Single Nucleotide Variants (SNVs) with potential deleterious effects was applied. The focus was on 56 genes previously implicated in autoinflammatory diseases (according to the International Union of Immunological Societies Immunodeficiency Committee, 2022). Results: Nine individuals presented with the moderate form of MIS-C, while the remaining 12 were included in the severe MIS-C group. In the variant prioritization approach, six Single Nucleotide Variants (SNVs) were identified in five different genes (ADAM17CARD14IKBKGPSTPIP1, and SH3BP12). All these variants were found in children/adolescents with the severe form of MIS-C. Notably, two variants (rs1200631089 and rs144458353) in the ADAM17 gene were selected. This gene encodes a protease implicated in the processing of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and plays a crucial role in SARS-CoV-2 infection by cleaving Angiotensin-Converting Enzyme 2 (ACE2), the primary human receptor for SARS-CoV-2. Conclusion: Our data suggest that rare deleterious variants in genes previously implicated in autoinflammatory conditions, including ADAM17IKBKGPSTPIP1SH3BP2, and CARD14, may account for the occurrence of P-MIS in previously healthy Brazilian children and adolescents.

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  • Verônica Moreira de Sousa
  • “CARACTERIZAÇÃO DA MODULAÇÃO DA RESPOSTA GLIAL PELO FLAVONOIDE AGATISFLAVONA EM MODELO IN VITRO DE TRAUMA CRÂNIO ENCEFÁLICO”

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANIBAL DE FREITAS SANTOS JUNIOR
  • DENIS DE MELO SOARES
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 14/12/2023

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  • A lesão cerebral traumática (LCT) é uma patologia complexa e multifatorial, sendo uma das principais causas de morte e incapacidade em humanos.Imediatamente após a LCT, astrócitos e microglias reagem com alterações morfológicas e funcionais complexas conhecidas como gliose reativa e formam, na área imediatamente adjacente à lesão, a cicatriz glial, é a principal barreira para a regeneração neuronal no sistema nervoso central. O flavonoide agatisflavona (bis-apigenina), presente nas folhas de Poincianella pyramidalis, tem demonstrado efeitos neurogênicos, neuroprotetores e anti-inflamatórios, conforme demonstrado em modelos in vitro de toxicidade induzida por glutamato, neuroinflamação e desmielinização. O presente estudo investigou o efeito da agatisflavona na integridade neuronal e na modulação da gliose em modelos ex vivo de LCT. Metodologia: Microdissecações do encéfalo de ratos Wistar (P6-8) foram preparadas e submetidas a lesão mecânica (LM), sendo tratadas ou não diariamente com agatisflavona (5 μM) por 3 dias. A reatividade dos astrócitos foi investigada pela mensuração de mRNA e expressão da proteína GFAP na área lesionada por imunofluorescência e western blot; a proporção de microglias foi determinada por imunofluorescência para Iba-1; a expressão de mRNA para o inflamassoma NRPL3 e interleucina-1 beta (IL-1β) foi determinada por RT-qPCR. Resultados: Observou-se que a lesão no tecido cortical induziu astrócitos a super expressar GFAP na típica cicatriz glial, e a agatisflavona modulou a expressão desta proteína nos níveis transcricional e pós-transcricional associados à redução da cicatriz. A LM induziu um aumento na proporção de microglias (Iba-1+) que não foi observado em culturas tratadas com agatisflavona. Além disso, o flavonoide modulou negativamente a expressão de mRNA tanto de NRLP3 quanto de IL-1β, que estavam aumentados na área lesionada do tecido. Conclusão: Todas essas descobertas reiteram a propriedade regulatória da resposta inflamatória das células gliais pela agathisflavona, que pode impactar na neuroproteção e deve ser considerada para futuros estudos pré-clínicos e clínicos em patologias do sistema nervoso central, incluindo a LCT.


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  • Introduction: Traumatic Brain Injury (TBI) is a complex and multifactorial pathology, being a major cause of death and disability for humans. Immediately after TBI, astrocytes and microglia react with complex morphological and functional changes known as reactive gliosis and forms, in the area immediately adjacent to the lesion, the glial scar, the major barrier to neuronal regeneration in the central nervous system. The flavonoid agathisflavone (bis-apigenin), present in Poincianella pyramidalis leaves, has been shown to have neurogenic, neuroprotective, and anti-inflammatory effects, demonstrated in in vitro models of glutamate-induced toxicity, neuroinflammation, and demyelination. The present study investigated, the effect of agathisflavone in neuronal integrity and in the modulation of gliosis in ex vivo models of TBI. Methodology: Microdissections from the encephalon of Wistar rats (P6-8), were prepared and subjected to mechanical injury (MI) and treated or not daily with agathisflavone (5 μM) for 3 days. Astrocyte reactivity was investigated by measuring mRNA and expression of GFAP protein in the lesioned area by immunofluorecence and westernblot; proportion of microglia was determined by immunofluorescence for Iba-1; mRNA expression for inflammasome NRPL3 and interleukin -1 beta (IL-1β) was determined by RT-qPCR. Results: It was observed that lesion of the cortical tissue induced astrocytes over expressing GFAP in the typical glial scar formed, and agathisflavone modulated GFAP expression at transcriptional and pos-transcriptional level associated with reduction of glial scar. MI induced increase in the proportion of microglia (Iba-1+) that was not observed in agathisflavone treated cultures. Moreover, the flavonoid modulated negatively both NRLP3 and IL-1β mRNA expression that was increases in the lesioned area of the tissue. Conclusion: All of these findings reiterate the regulatory property of the inflammatory response of glial cells by the flavonoid agathisflavone, which can impact in neuroprotection and should be considered for future pre-clinical and clinical studies for CNS pathologies, including TBI. 

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  • ADLAS MICHEL DE JESUS RIBEIRO
  • AVALIAÇÃO DO PERFIL CLÍNICO-DEMOGRÁFICO DE PACIENTES INFANTO-JUVENIS COM COVID-19 ATENDIDOS EM UM HOSPITAL EM SALVADOR/BA

  • Orientador : LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
  • LUCIANE AMORIM SANTOS
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • Data: 19/12/2023

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  • Introdução: A pandemia global de COVID-19 resultou em milhares de casos e óbitos em todo o mundo. A disseminação ampla e contínua do vírus SARS-CoV-2 em todo o mundo, propiciou condições para o surgimento de novas variantes. Crianças e adolescentes desempenham um papel importante na propagação do vírus. No Brasil, as variantes Gama, Delta e Ômicron estavam amplamente presentes, porém, há escassez de dados sobre o impacto dessas variantes nesse grupo demográfico. Assim, compreender as implicações dessas variantes na evolução da COVID-19 em crianças e adolescentes se torna crucial. Objetivo: Descrever as características clínicas e epidemiológicas dos pacientes menores de 18 anos com COVID-19 atendidos em um hospital privado, no município de Salvador, durante o período de maior prevalência das variantes Gama, Delta e Ômicron. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo que incluiu 619 participantes com 0 a 17 anos atendidos na emergência pediátrica do hospital. Foram coletados dados clínicos, laboratoriais e informações sobre internamento e óbito através de consulta aos prontuários eletrônicos. Resultados: Foi observado uma distribuição de casos confirmados para COVID-19 semelhante entre os períodos de prevalência da variante Gama e Ômicron, porém uma redução de casos durante o período de prevalência da variante Delta. Isso foi observado para as hospitalizações em UTI. A mediana do tempo de início dos sintomas variou entre 3 e 4 dias. Os principais sintomas relatados foram febre, tosse, coriza e Cefaléia. Tosse foi mais prevalente durante o período das variantes Delta e Ômicron. Foram observadas poucas comorbidades, ausência de mortalidade e apenas um caso de síndrome inflamatória multissistêmica (SIM-P) no período do estudo. Em relação aos marcadores inflamatórios, um aumento significativo da proteína C reativa associado à variante Ômicron, indicando um maior processo inflamatório ou infeccioso. Na avaliação do hemograma, os níveis de monócitos mostraram diferença entre os períodos, sugerindo que no período de Prevalência da variante Ômicron ocorreu uma resposta imune mais ativa. Conclusão: Este estudo oferece uma compreensão detalhada das características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais das variantes do SARS-CoV-2 em pacientes pediátricos, enfatizando a
    necessidade contínua de vilância e pesquisa para enfrentar as evoluções da COVID-19. 


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  • Introduction: The global COVID-19 pandemic has resulted in thousands of cases and deaths worldwide. The widespread and continuous spread of the SARS-CoV-2 virus has created conditions for the emergence of new variants. Children and adolescents play a significant role in the transmission of the virus. In Brazil, the Gamma, Delta, and Omicron variants were widely present; however, there is a scarcity of data on the impact of these variants in this demographic group. Therefore, understanding the implications of these
    variants in the evolution of COVID-19 in children and adolescents becomes crucial. Objective: The objective of this retrospective study is to describe the clinical and epidemiological characteristics of patients under 18 years old with COVID-19 treated at a private hospital in the city of Salvador during the period of highest prevalence of the Gamma, Delta, and Omicron variants. Methods: This is a retrospective study that included 619 participants aged 0 to 17 years treated in the pediatric emergency department of the hospital. Clinical and laboratory data, as well as information on hospitalization and death, were collected through electronic medical record reviews. Results: A similar distribution of confirmed COVID-19 cases was observed during the prevalence periods of the Gamma and Omicron variants, with a reduction in cases during the Delta variant prevalence period. The same pattern was observed for ICU hospitalizations. The median time of symptom onset varied between 3 to 4 days. The main reported symptoms were fever, cough, runny nose, and headache, with cough being more prevalent during the Delta and Omicron variant periods. Few comorbidities were observed, no mortality was recorded, and only one case of multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) was identified during the study period. Regarding inflammatory markers, a significant increase in C-reactive protein associated with the Omicron variant was observed, indicating a higher inflammatory or infectious process. In the hematological assessment, monocyte levels showed differences between the periods, suggesting a more active immune response during the Omicron variant prevalence period. Conclusion: This study provides a detailed understanding of the clinical, epidemiological, and laboratory characteristics of SARS-CoV-2 variants in pediatric patients. It underscores the ongoing need for surveillance and research to address the evolutions of COVID-19, particularly in contexts where new variants are in circulation. The data analysis contributes to a deeper understanding of the impact of these variants on children and adolescents, providing valuable insights for prevention and control strategies in this demographic group.

Teses
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  • ALINE CLARA DA SILVA
  • DESENVOLVIMENTO DE UM TESTE PARA DETECÇÃO QUANTITATIVA DE CÉLULAS INFECTADAS POR HTLV POR IMUNOFENOTIPAGEM

  • Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • EVERTON DA SILVA BATISTA
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MARCOS BORGES RIBEIRO
  • MARCOS DA COSTA SILVA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 10/02/2023

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  • A infecção por HTLV estabelece baixa carga proviral uma vez que a disseminação do vírus ocorre por sinapse virológica e por multiplicação mitótica das células infectadas. A expansão clonal das células infectadas, além de ser importante para latência da infecção, parece levar a disfunções no sistema imune do hospedeiro gerando autoimunidade (HAM/TSP, uveíte e doenças cardiovasculares) e malignidade (ATL). O comprometimento do sistema imune causado pela infecção por HTLV-1/2 torna o indivíduo infectado suscetível a outras doenças infecciosas como tuberculose e Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). HIV e HTLV apresentam organização genômica similar e tropismo por células do sistema imune (células T CD4+). No entanto, a influência do HTLV-1/2 na progressão da patologia desenvolvida pelo HIV vem sendo bastante discutida. Este trabalho pretende, através de citometria de fluxo, identificar a infecção intracitoplasmática de células infectadas por HTLV e em pacientes coinfectados, demonstrando a participação do sistema imune em ambos os pacientes.  Participaram da pesquisa 14 indivíduos monoinfectados por HTLV-1 e 15 indivíduos coinfectados por HTLV-1/HIV-1. A detecção da infecção intracelular por HTLV-1 foi realizada através da marcação de anticorpos monoclonais anti-CD4 e um mix de sondas complementares a um domínio LTR do HTLV-1 às proteínas alvos nas células. As células infectadas forma identificadas por citometria de fluxo e analisadas estatisticamente. Ao fim do estudo constatou-se que o mix de sonda anti-HTLV foi capaz de identificar células infectadas em diferentes tipos celulares, em mono ou coinfecção. Percebeu-se um menor número de monócitos CD4+ em indivíduos coinfectados, bem como em pacientes em uso de TARV. Ao se avaliar o perfil fenotípico de ativação celular, observou-se uma tendência a diminuição na expressão de HLA-DR e aumento na expressão de CTLA-4 em indivíduos monoinfectados com manifestações clínicas associadas ao HTLV-1. 

    Sugere-se que a metodologia apresentada seja utilizada como ferramenta na definição das populações celulares infectadas em pacientes com HTLV-1 o que abriria novas possibilidades para acompanhamento e definição terapêutica nesses indivíduos. 


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  • HTLV infection establishes a low proviral load since the spread of the virus occurs by virological synapse and by mitotic multiplication of infected cells. The clonal expansion of infected cells, in addition to being important for latency of infection, seems to lead to dysfunctions in the host's immune system, generating autoimmunity (HAM/TSP, uveitis and cardiovascular diseases) and malignancy (ATL). The impairment of the immune system caused by HTLV-1/2 infection makes the infected individual susceptible to other infectious diseases such as tuberculosis and Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). HIV and HTLV have similar genomic organization and tropism for cells of the immune system (CD4+ T cells). However, the influence of HTLV-1/2 on the progression of the pathology developed by HIV has been widely discussed. This work intends, through flow cytometry, to identify the intracytoplasmic infection of cells infected by HTLV and in coinfected patients, demonstrating the participation of the immune system in both patients. 14 individuals monoinfected by HTLV-1 and 15 individuals coinfected by HTLV-1/HIV-1 participated in the research. Detection of intracellular HTLV-1 infection was performed by labeling anti-CD4 monoclonal antibodies and a mix of probes complementary to an HTLV-1 LTR domain to target proteins in cells. Infected cells were identified by flow cytometry and statistically analyzed. At the end of the study, it was found that the anti-HTLV probe mix was able to identify infected cells in different cell types, in mono or co-infection. A smaller number of CD4+ monocytes was observed in co-infected individuals, as well as in patients using ART. When evaluating the phenotypic profile of cellular activation, a trend towards a decrease in the expression of HLA-DR and an increase in the expression of CTLA-4 was observed in monoinfected individuals with clinical manifestations associated with HTLV-1. It is suggested that the presented methodology be used as a tool in the definition of infected cell populations in patients with HTLV-1, which would open new possibilities for monitoring and therapeutic definition in these individuals.

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  • TALITA DOS SANTOS DE JESUS
  • AVALIAÇÃO DOS FATORES IMUNOGENÉTICOS ASSOCIADOS ÀS EXACERBAÇÕES GRAVES DE ASMA E SEUS FENÓTIPOS 

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • GUSTAVO NUNES DE OLIVEIRA COSTA
  • JAMILLE SOUZA FERNANDES
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • Data: 24/02/2023

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  • Exacerbações graves da asma levam a perda na qualidade de vida e altos custos para o SUS. Existem pacientes que mesmo sob tratamento apropriado não alcançam o controle da asma, o que pode ser ocasionado por variações genéticas. Estudos farmacogenéticos buscam identificar variantes interferindo na resposta ao tratamento. Neste âmbito, estudos visando identificar marcadores genéticos associados ao tratamento da asma são frequentes, especialmente em genes que são alvo terapêuticos, como os glicocorticoides e broncodilatadores β2-adrenérgicos. Objetivo: Avaliar o impacto de variantes em genes candidatos associadas à exacerbações graves de asma e fenótipos clínicos e funcionais da doença. Métodos: A princípio foi realizado uma revisão sistemática e metanálise em genes candidatos para exacerbações e resposta ao tratamento (ADRB2, GLCCI1, CRHR1, NR3C1). Foram pesquisados artigos até fevereiro de 2022 no PUBMED e Cochrane Library com os fenótipos e variantes de interesse. A metanálise foi realizada para a variante rs1042713 do ADRB2 utilizando o software RStudio 4.1.2. Foi realizado também um estudo de genes candidatos em 172 adultos participantes de uma coorte de exacerbação grave de asma, onde foram realizadas avaliações clínicas, coleta de material biológico, avaliação da função pulmonar e acompanhamento com equipe especializada no ProAR por um ano. Foi realizada a genotipagem de variantes no ADRB2 (rs1042713, rs1042714), ADCY9 (rs2601814,rs2601796) e NR3C1 (rs41423247,rs10052957). Foram realizadas regressões logísticas multivariadas para avaliar as associações entre as variantes estudadas com exacerbações e outros fenótipos funcionais. As análises estatísticas foram realizadas no PLINK V.1.9, RStudio, SPSS V.20, Graphpad Prism 20, além de outras plataformas online. Resultados: Os dados da metanálise demonstraram que o gene mais replicado para exacerbações é o ADRB2 (rs1042713) e que essa variante, alelo A (Arg) está associada posit ivamente com exacerbação em crianças quando estratificada por tratamento. Essa mesma variante foi também associada positivamente com exacerbação grave de asma na nossa coorte de exacerbação (OR 4.10 IC: 1.47-11.4, 7.19 IC:2.05-25.1, modelo aditivo e dominante, respectivamente), rs1042714 foi também associado com exacerbação, mas antes do acompanhamento no estudo (OR 1.79, IC 1.07-3.01), o rs2601814 (ADCY9) foi negativamente associado com o uso de corticosteroide oral e com asma não controlada, além do genótipo GG ter sido associado com um menor nível de neutrófilos no sangue. O rs10052957 (NR3C1) foi negativamente associado com uso de corticosteroide oral e com exacerbações graves antes do acompanhamento. Duas outras variantes não foram associadas significantemente com nenhum dos fenótipos analisados (rs41423247 e rs2601796). Conclusão: A variante rs1042713 vem se estabelecendo cada vez mais como um fator de risco para exacerbações graves de asma, devendo ser melhor estudada a fim de elucidar melhor os mecanismos pelo qual atua e começar a ser usada como uma variante preditiva. 


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  • Severe asthma exacerbations lead to loss in quality of life and high costs for the National Brazilian health system, SUS. There are patients who even under appropriate treatment do not reach asthma control, which can be caused by genetic variations. Pharmacogenetic studies seek to identify variants interfering in treatment response. In this context, studies aimed at identifying genetic markers associated with asthma treatment in 
    literature are frequent, especially, involving genes that are therapeutic target, such as bronchodilators β2-adrenergic and glucocorticoids. Objective: To evaluate the impact of variants on candidate genes associated with severe exacerbations of asthma and clinical and functional phenotypes of the disease. Methods: At first, a systematic review and meta-analysis in candidates genes (ADRB2, GLCCI1, CRHR1, NR3C1) for exacerbations and treatment response was done. Papers published until February 2022 in Pubmed and Cochrane Library with 
    phenotypes and variants of interest were included. Meta-analysis was performed for the ADRB2 (rs1042713) variant using RStudio 4.1.2 software. A study to evaluate candidate genes was also conducted in 172 adults participating in a severe asthma exacerbation cohort where clinical evaluations, biological material collection and evaluation of pulmonary function were performed. The participants were followed-up with a specialized team in ProAr for one year. The genotyping of variants in ADRB2 (rs1042713, rs1042714), ADCY9 (rs2601814, rs2601796) and NR3C1 (rs41423247, rs10052957) was conducted and logistic regressions for exacerbations
    and other functional phenotypes were done. Statistical analyzes were performed on PLINK v.1.9, RStudio, SPSS v.20, GraphPa D Prism 20, in addition to other online platforms. Results: In the metanalysis results we observed that the most replicated gene is ADRB2 (rs1042713) and that the A allele (Arg) of this variation is positively associated with exacerbation in children when stratified by treatment. This same variant was also positively associated to asthma exacerbation in our exacerbation cohort (OR 4.10 IC: 1.47-11.4, 7.19 IC: 2.05-25.1, additive and dominant model, respectively), rs1042714 was also positively associated with severe exacerbation, but before from follow-up in the study (OR 1.79, IC 1.07-3.01), the rs2601814 (ADCY9) was negatively associated with the use of oral corticosteroids and non-controlled asthma, and GG genotype was associated with a lower neutrophils level in the blood. The rs10052957 (NR3C1) was negatively associated with the use of oral corticosteroids and with severe exacerbations before follow-up. Two other variants were not significantly associated with any of the phenotypes analyzed (rs41423247 and rs2601796). CONCLUSION: The rs1042713 variant has been increasingly established a risk factor for severe asthma exacerbation, and should be better
    studied in order to elucidate the mechanisms by which it operates and start to be used as a predictive variant. 

3
  • Geraldo Pedral Sampaio
  • ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE CD105 (ENDOGLINA) EM PRECURSORES LINFOIDES NORMAIS E EM BLASTOS NEOPLÁSICOS DE PACIENTES PEDIÁTRICOS COM LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA DE CÉLULAS PRECURSORAS B NO ESTADO DA BAHIA

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BRUNO DIAZ PAREDES
  • EUGÊNIA TERRA GRANADO PINA
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
  • MARCO AURELIO SALVINO DE ARAUJO
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • Data: 06/03/2023

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  • A leucemia linfoide aguda (LLA), possui uma incidência bimodal, caracterizada pela perda de habilidade normal de diferenciação e proliferação, havendo um acúmulo de células progenitoras linfoides e expansão clonal em medula óssea, sangue periférico e outros tecidos. É a mais comum na infância e adolescência, tendo diversos fatores associados à sua etiologia. O uso da citometria de fluxo, em conjunto com a análise morfológica, é fundamental para o diagnóstico e acompanhamento de tais enfermidades. Nesse contexto, a análise da expressão de moléculas na curva maturativa de precursores linfoides normais e neoplásicos é uma ferramenta que contribui para elucidar o comportamento do ambiente medular na análise de Doença Residual Mensurável (DRM). A molécula endoglina (ENG, CD105) é um co-receptor da família do TGF-β que desempenha um papel crucial na regulação da angiogênese. Apesar de ser mais conhecida por sua expressão em células endoteliais, a endoglina também é expressa nas células-tronco hematopoiéticas (CTH) e recentemente tem sido sugerida como marcador de mau prognóstico para pacientes pediátricos com LLA de células precursoras B (LLA-cpB). Neste contexto, o presente trabalho avaliou a expressão do CD105 em precursores normais de células B, também denominados de hematogônias, e em blastos leucêmicos de pacientes pediátricos com LLA-cpB. O estudo foi realizado em amostras de pacientes onco-pediátricos do Hospital Aristides Maltez, Martagão Gesteira e Santa Casa de Itabuna, utilizando painéis pré-definidos para a análise da expressão do CD105. A aquisição dos eventos foi realizada no citômetro de fluxo BD FACSCalibur e as análises realizadas no software Infinicyt™ 9 1.8. As amostras dos pacientes, avaliados ao diagnóstico ou durante DRM, foram analisadas individualmente quanto à presença ou ausência da expressão antigênica de cada marcador utilizado na citometria de fluxo. O CD105, ao diagnóstico, foi expresso em 73,33% dos pacientes com LLA-cpB, tendo a maior expressão nos blastos leucêmicos. Já quando comparado com DRM, a maior expressão foi nas hematogônias em DRM negativa (67,28%), com média de intensidade de fluorescência (MIF) de 87,26. Quando analisado individualmente (paciente 1), os blastos tiveram uma maior expressão e MIF, 21,56% e 26,14, respectivamente. CD105 pode ser considerado um potencial marcador VII prognóstico para detecção de resposta à terapia de indução na infância LLA-B, e pode servir para otimizar as decisões para tratamento.


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  • Acute lymphocytic leukemia (ALL) has a bimodal incidence, characterized by loss of normal ability to differentiate and proliferate, with an accumulation of lymphoid progenitor cells and clonal expansion in bone marrow, peripheral blood, and other tissues. It is the most common in childhood and adolescence, with several factors associated with its etiology. The use of flow cytometry, in conjunction with morphological analysis, is essential for the diagnosis and followup of such diseases. In this context, the analysis of the expression of molecules in the maturation curve of normal and neoplastic lymphoid precursors is a tool that contributes to elucidating the behavior of the medullary environment in the analysis of Measurable Residual Disease (MRD). The endoglin molecule (ENG, CD105) is a co-receptor of the TGF-β family that plays a crucial role in the regulation of angiogenesis. Although best known for its expression in endothelial cells, endoglin is also expressed in hematopoietic stem cells (HSC) and has recently been suggested as a marker of poor prognosis for pediatric patients with B Cell Precursor ALL (BCP-ALL). In this context, the present work evaluated the expression of CD105 in normal precursors of B cells, also called hematogonia, and in leukemic blasts from pediatric patients with BCP-ALL. The study was carried out on onco-pediatric patients samples from Hospital Aristides Maltez, Martagão Gesteira, and Santa Casa de Itabuna, using pre-defined panels for the analysis of CD105 expression. Events were acquired using a BD FACSCalibur flow cytometer and analyzes were performed using the Infinicyt™ 9 1.8 software. Patient samples, evaluated at diagnosis or during MRD, were individually analyzed for the presence or absence of antigenic expression of each marker used in flow cytometry. CD105, at diagnosis, was expressed in 73.33% of VIII patients with BCP-ALL, with the highest expression in leukemic blasts. When compared with MRD, the highest expression was in hematogonia in negative MRD (67.28%), with a mean MFI of 87.26. When analyzed individually (patient 1), the blasts had a higher expression and MFI, 21.56 and 26.14, respectively. CD105 can be considered a potential prognostic marker for the detection of response to induction therapy in childhood BCP-ALL, and may serve to optimize treatment decisions.

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  • Maria Borges Rabêlo de Santana
  • Desenvolvimento de painel genético para predição de exacerbação grave da asma através de estudo amplo do genoma e de algoritmos de Machine Learning

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • LAURA MARIA DE LIMA BELIZARIO FACURY LASMAR
  • LEA CRISTINA DE CARVALHO CASTELLUCCI
  • PABLO DE MOURA SANTOS
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 31/03/2023

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  • As exacerbações graves da asma são definidas como a piora dos sintomas respiratórios e podem causar morte. No entanto, ainda faltam biomarcadores preditivos para esse desfecho. Nosso objetivo foi realizar estudos de associação genômica ampla (GWAS) para exacerbações graves de asma, e avaliar seu papel funcional. Adicionalmente, integrar dez algoritmos de Machine Learning usando uma lista dos principais Single Nucleotides Variants (SNVs) do GWAS anterior em indivíduos com asma ou asma grave com o objetivo de criar painéis genéticos preditivos de exacerbações graves. O GWAS para exacerbações graves de asma foi realizado em 727 brasileiros com asma, incluindo 12 milhões de variantes genéticas. A exacerbação foi definida como uso de corticoide sistêmico ≥ 3 dias e/ou consulta de emergência e/ou internação hospitalar no último ano. A replicação do GWAS para exacerbações graves foi avaliada no U-BIOPRED, GALA II e SAGE. Os efeitos epigenéticos das variantes foram avaliados in silico. As variantes com valor de p <0,05 no GWAS foram filtradas e modelos de predição integrativa foram construídos usando dez algoritmos de Machine Learning. Também foi feito um GWAS para falha terapêutica em 364 brasileiros com asma grave, seguido pela predição integrativa. As variantes intergênicas G-rs55670125, G-rs10854420, C-rs68160941, A-rs11910414 e A-rs35834033 estavam em completo desequilíbrio de ligação e estão associadas com exacerbações graves de asma (Odds ratio (OR): 2,5; valor de P: 3,47 e-8). Essas variantes estão localizadas próximas ao gene CXADR (receptor de coxsackievirus e adenovírus) no cromossomo 21. Nossos achados não foram validados na população U-BIOPRED, GALA II e SAGE. Quatro dos SNVs identificados foram associados à modificação de histonas de H3K4me1, que foi previamente associada à patogênese da asma. O melhor algoritmo preditivo foi o XGBoost, neste 68 variantes genéticas foram consideradas mais importantes para predizer efetivamente exacerbações graves de asma em indivíduos com asma, apresentando 80% de acurácia. Para indivíduos regularmente tratados com corticosteróide inalatório e Beta-agonistas de longa ação, o melhor algoritmo preditivo foi o C5.0, que considerou 14 variantes preditivas com acurácia de 81%. Esses painéis podem auxiliar na prática clínica na população brasileira. É necessário validar este método em outras populações.


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  • Severe asthma exacerbations are determined to worsen respiratory symptoms and can cause death. However, predictive biomarkers for this outcome are still lacking. Our aim was to perform genome-wide association studies (GWAS) for severe asthma exacerbations in patients with mild, moderate, and severe asthma, and to evaluate its functional role. Additionally, integrate ten Machine Learning algorithms using a list of top Single Nucleotide Variants (SNVs) from previous GWAS in subjects with asthma or severe asthma with the aim of creating predictive genetic panels of severe exacerbations. The GWAS for severe asthma exacerbations was performed in 727 Brazilians with asthma, including 12 million genetic variants. Exacerbation was defined as systemic corticosteroid use ≥ 3 days and/or emergency room visit and/or hospitalization in the last year. GWAS replication for severe exacerbations was evaluated in U-BIOPRED, GALA II and SAGE. The epigenetic effects of the variants were evaluated in silico. Variants with p-value <0.05 in the GWAS were filtered out and integrative prediction models were built using ten Machine Learning algorithms. A GWAS was also performed for treatment failure in 364 Brazilians with severe asthma, followed by integrative prediction. The intergenic variants G-rs55670125, G-rs10854420, C-rs68160941, A-rs11910414 and A-rs35834033 were in complete linkage and are related to severe asthma exacerbations (Odds ratio (OR): 2.5; P value: 3.47e-8). These variants are located close to the CXADR gene (coxsackievirus and adenovirus receptor) on chromosome 21. Our findings have not been validated in the U-BIOPRED, GALA II and SAGE populations. Four of the SNVs were identified associated with histone modification of H3K4me1, which was previously associated with the pathogenesis of asthma. The best predictive algorithm was XGBoost, in which 68 genetic variants were considered more important to effectively predict severe asthma exacerbations in individuals with asthma, with 80% accuracy. For individuals regularly treated with inhaled corticosteroids and long-acting beta-agonists, the best predictive algorithm was C5.0, which considered 14 predictive variants with an accuracy of 81%. These panels can help in clinical practice in the Brazilian population. It is necessary to validate this method in other tolerated ones.

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  • Maiara Nelma Bonfim Costa
  • O USO DE TERAPIAS ADJUVANTES E SEUS EFEITOS ANTITUMORAIS NO MELANOMA EXPERIMENTAL EM CAMUNDONGOS C57BL/6 

  • Orientador : FABIOLA CARDILLO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • DANIEL PEREIRA BEZERRA
  • FABIOLA CARDILLO
  • KARINE ARAUJO DAMASCENO
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 16/06/2023

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  • Imiquimode (IMIQ), é um agonista de TLR7 que potencializa a resposta antitumoral de forma rápida e persistente e o bacilo Calmette-Guérin (BCG) é uma vacina (cepa) atenuada do Mycobacterium bovis, que induz uma robusta ativação do sistema imune, o que pode ser uma importante ajuda na resposta antitumoral.

    Este estudo teve como objetivo testar os efeitos do IMIQ no melanoma experimental para determinar se ele é essencial para restringir o crescimento do tumor e para prolongar a sobrevida animal após o tratamento em camundongos C57Bl/6 selvagem (WT) e C57Bl/6 que não possuem a molécula de CD1 (CD1-/-). Tencionou-se ainda testar a vacina BCG como uma terapia adjuvante anti-melanoma em animais C57Bl/6 selvagens. Os camundongos foram tratados com IMIQ ou BCG depois da injeção de células tumorais por via subcutânea (s.c.) no pavilhão auricular.

    Foram avaliados parâmetros para ambos os tratamentos como: tamanho do tumor, sobrevivência e fenótipos de células esplênicas. Além disso, as citocinas intracelulares foram avaliadas após estimulação com anti-CD3. O tratamento com IMIQ restringiu, efetivamente, o crescimento inicial do tumor e aumentou a sobrevida apenas nos animais WT. As frequências de células apresentadoras de antígeno (APC) foram maiores em animais WT do que nos animais CD1-/-, independentemente do tratamento com IMIQ. Houve um aumento no número de células NKperforinaesplênicas em camundongos WT, e aumento de células T CD4esplênicas produtoras de IFN-estimuladas com anti-CD3 quando comparados camundongos WT com CD1-/tratados com IMIQ. Além disso existiu, também, o aumento de células T CD8esplênicas produtoras de TNFem células esplênicas não estimuladas dos animais WT em comparação com animais CD1-/-Nos animais tratados com a injeção de BCG in situ, houve redução no crescimento tumoral maior sobrevida quando comparados aos animais que só receberam tumor. A nível esplênico houve aumento de células dendríticas e diminuição de células Tregs esplênicas. A produção de citocinas revelou diminuição de IL-10, aumento de INF-γ, por células T CD4+ e T CD8+ esplênicas, aumento de INF-γ e dos fatores perforina e granzima B por células NK e aumento de INF-γ por células NKT. Também a nível de tumor por análises histopatológica foi avaliado que os animais tratados com BCG possuíam maior infiltrado celular e menor porcentagem de necrose e invasão tumoral muscular. Em conclusão, animais tratados com IMIQ: os camundongos WT foram protegidos da mortalidade precoce, com uma diminuição no desenvolvimento do melanoma. Já os animais tratados com BCG houve uma limitação do desenvolvimento do tumor e aumentou significativo da sobrevida dos camundongos C57Bl/6, além do aumento do número de células infiltrando o tumor e uma menor área de necrose e invasão tumoral muscular, o que forneceu evidências de uma forte ativação do sistema imune, caracterizada pelas respostas inata e adquirida.


  • Mostrar Abstract
  • Imiquimod (IMIQ) is a TLR7 agonist that potentiates the antitumor response quickly and persistently, and BCG is an attenuated vaccine (strain) of Mycobacterium bovis, which induces a increase in the activation of the immune system, which can be an essential aid in the antitumor response.

    This research aimed to test the effects of IMIQ on experimental melanoma to determine if it is essential to restrict tumor growth and to prolong animal survival after treatment in C57Bl/6 wild-type (WT) and C57Bl/6 CD1-knockout mice (CD1-/-). This study also aimed to test the BCG vaccine as an adjuvant anti- melanoma therapy in wild C57Bl/6 animals. Mice were treated with IMIQ or BCG after injection of tumor cells subcutaneously (s.c) into the pinna of the ear. Parameters for both treatments were evaluated, such as tumor size, survival, and splenic cell phenotypes were analyzed. Furthermore, intracellular cytokines were evaluated after stimulation with anti-CD3. Treatment with IMIQ effectively restricted initial tumor growth and increased survival only in WT animals. Antigen-presenting cell (APC) frequencies were higher in WT animals than in CD1-/animals, regardless of IMIQ treatment. There was an increase in the number of splenic perforinNKcells in WT mice and an increase in splenic IFN-γ-producing CD4T cells stimulated with anti-CD3 when compared to WT mice with CD1-/treated with IMIQ. In addition, there was also an increase in splenic CD8T cells producing TNFin unstimulated splenic cells from WT animals compared to CD1-/animals. In animals treated with BCG injection in situ, there was reduced tumor growth and increased survival compared to animals that only received tumor cells. There was an increase in dendritic cells and a decrease in splenic Treg cells at the splenic level. Cytokine production revealed a decrease in IL-10, an increase in INF-γ by splenic CD4+ and CD8+ T cells, an increase in INF-γ and perforin and granzyme B factors by NK cells, and an increase in INF-γ by NKT cells. Also, at the tumor level, the histopathological analysis indicated that the animals treated with BCG had a greater cellular infiltrate and a lower percentage of necrosis and muscle tumor invasion. In conclusion, animals treated with IMIQ: WT mice were protected by IMIQ from early mortality, with a decrease in melanoma development. Besides, BCG treatment limited tumor development and significantly increased survival in C57Bl/6 mice, which parallels with strong activation of the immune system, characterized by innate and adaptative responses, and had a more significant infiltration of inflammatory cells and less necrosis, and muscular tumor infiltration.

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  • Jordana Batista Santana
  • LINFÓCITOS T REGULATÓRIOS NA INFECÇÃO PELO SCHISTOSOMA MANSONI

  • Orientador : LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • THIAGO MARCONI DE SOUZA CARDOSO
  • SILVANE MARIA BRAGA SANTOS
  • Data: 03/07/2023

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  • Introdução: A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada com grande impacto na saúde pública; A infecção crônica pelo Schistosoma mansoni está associada a polarização da resposta imunológica do tipo 2, no entanto este helminto explora vias imunoregulatórias como mecanismos de sobrevivência. O objetivo deste estudo foi analisar a assinatura regulatória mediada pelos linfócitos T regulatórios (Treg) de indivíduos infectados por S. mansoni. Materias e Métodos: Os indivíduos recrutados, são residentes em uma área endêmica
    em esquistossomose na Bahia, município do Conde, a aproximadamente 150 Km da Capital, Salvador. Após avaliação parasitológica, observou-se uma prevalência de 24,21% de infecção pelo S. mansoni. Para avaliação imunológica, foram recrutados 19 indivíduos, sendo 12 (63,1%) infectados pelo S. mansoni e 7 (36,8%) não infectados, no momento do recrutamento. Os linfócitos regulatórios foram obtidos a partir de PBMC e estimulados com o antígeno solúvel do ovo do S. mansoni (SEA), para avaliação fenotípica e das citocinas intracelulares por citometria de fluxo. Em seguida, as células Treg depletadas utilizando-se beads magnéticas por seleção positiva, para utilização em culturas  depletadas de linfócitos Treg. Nestas culturas, os níveis de IL-10, IL-13 IL-17 e IFN- foram avaliados por ELISA. Resultados: Observamos maiores frequências dos linfócitos Treg (TCD4+ CD25+ FoxP3+), bem como maior expressão de IL-10 e TGF-β por estas células, no grupo de indivíduos infectados. Neste mesmo grupo, houve maiores frequências dos linfócitos TCD4+CD25+FoxP3+PD-1 +, ao tempo em que não houve diferença na expressão de CTLA-4 por estas células. Aumento na expressão do PD-1 e TGF-β também foram observados nas populações dos linfócitos T não regulatórios (CD4+CD25LowFOXP3neg) sugerindo que, algumas vias de regulação pode não ser exclusivas das populações Treg. Indivíduos infectados pelo S. mansoni tem maiores níveis no sobrenadante de PBMC de IL-10 e IL-13 e menores níveis de IFN-, comparados aos indivíduos não infectados. A depleção de células Treg reduziu os níveis de IL-10 e IL-13, ao passo em que não alterou os níveis de IFN-  no grupo de indivíduos infectados. Conclusão: A regulação mediada pelo S. mansoni parece envolver as vias da IL-10, TGF-β, PD-1, e as células Treg parecem ter um papel fundamental no controle da produção de IL-10 e IL-13. Estes resultados ampliam nossos conhecimentos sobre as vias exploradas por esses parasitos para sobreviverem no hospedeiro. 


  • Mostrar Abstract
  • Introduction: Schistosomiasis is a neglected tropical disease with a great impact on public health; Chronic infection by Schistosoma mansoni is associated with polarization of the type 2 immune response, however this
    helminth explores immunoregulatory pathways as a survival mechanism. The aim of this study was to analyze the regulatory signature mediated by regulatory T lymphocytes (Treg) of individuals infected with S. mansoni. Materials and Methods: The individuals recruited live in an endemic area for schistosomiasis in Bahia,  unicipality of Conde, approximately 150 km from the capital, Salvador. After parasitological evaluation, a prevalence of 24.21% of S. mansoni infection was observed. For immunological evaluation, 19 individuals were recruited, 12 (63.1%) infected by S. mansoni and 7 (36.8%) not infected at the time of recruitment. Regulatory lymphocytes were obtained from PBMC and stimulated with soluble S. mansoni egg antigen (SEA) for phenotypic and intracellular cytokine evaluation by flow cytometry. Then, the depleted Treg cells using magnetic beads by positive selection, for use in depleted cultures of Treg lymphocytes. In these cultures, the levels of IL-10, IL-13 IL-17 and IFN- were valuated by ELISA. Results: We observed higher frequencies of Treg lymphocytes (TCD4 + CD25 + FoxP3 + ), as well as higher expression of IL-10 and TGF-β by these cells, in the group of infected individuals. In this same group, there were higher frequencies of TCD4 + CD25 + FoxP3 + PD-1 + lymphocytes, while there was no difference in CTLA-4 expression by these cells. Increased expression of PD-1 and TGF-β were also observed in populations of non-regulatory T lymphocytes (CD4 + CD25 Low FOXP3 neg ) suggesting that some regulatory pathways may not be exclusive to Treg populations. Individuals infected with S. mansoni have higher PBMC supernatant levels of IL-10 and IL- 13 and lower levels of IFN- compared to non-infected individuals. Treg cell depletion reduced IL-10 and IL-13 levels, while it did not alter IFN-γ levels in the group of infected individuals. Conclusion: Regulation mediated by S. mansoni seems to involve IL-10, TGF-β, PD-1 pathways, and Treg cells seem to play a key role in controlling IL-10 and IL-13 production. These results expand our knowledge about the pathways explored by these parasites to survive in the host.

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  • Fabíola Ramos Jesus
  • ESTUDO DO ENVELHECIMENTO NA DOENÇA PULMONAR OBSTRUTIVA CRÔNICA: ASPECTOS IMUNE E ENDÓCRINO

  • Orientador : GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAROLINA ARRUDA DE FARIA
  • ERCY MARA CIPULO RAMOS
  • AQUILES ASSUNCAO CAMELIER
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 13/07/2023

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  • Considerada uma doença associada ao envelhecimento, a Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) apresenta limitação do fluxo aéreo associada à inflamação pulmonar crônica com envolvimento de alterações do sistema respiratório e sistêmico. Fatores de risco como tabagismo, inalação de gases nocivos e mutações genética podem influenciar no desenvolvimento da doença. A DPOC é resultado da interação complexa entre fatores genéticos e ambientais ao longo do tempo. O teste de função pulmonar é uma ferramenta útil na identificação de populações com risco de desenvolver DPOC. Um subtipo específico dessa doença é conhecido como espirometria com comprometimento da relação preservada (PRISm). Tanto a DPOC quanto o processo de envelhecimento compartilham mecanismos semelhantes da imunossenescência. Acredita-se que essas mudanças resultem em um processo de "envelhecimento acelerado" em pacientes com DPOC. A imunossenescência encontrada na DPOC possui relação com a clínica da doença e está associada com piora nas trocas gasosas, hiperinflação pulmonar e maior risco de mortalidade. A aceleração do envelhecimento endócrino foi identifica em indivíduos com DPOC por meio da análise dos níveis dos hormônios DHEA-S (deidroepiandrosterona-sulfato) e GH (hormônio do crescimento). O envelhecimento acelerado pulmonar, do sistema imune e endócrino na doença são discutidos muitas vezes isoladamente na literatura. Estudos que avaliem as interações desses sistemas requerem atenção renovada, visto que a DPOC não se limita a repercussões apenas a nível pulmonar. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil clínico, endócrino e imunológico em indivíduos diagnosticados com DPOC, bem como em indivíduos PRISm, além de revisar aspectos da imunossenescência na DPOC. Nesta tese, apresentamos uma revisão sistemática que aborda as alterações da imunossenescência na DPOC e discutimos as suas repercussões clínicas. Além disso, um artigo original apresenta o perfil imunoendócrino de indivíduos com DPOC e PRISm, bem como discute as implicações da influência desses hormônios na função pulmonar e nos marcadores imunológicos.


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  • Considered a disease associated with aging, Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) presents airflow limitation associated with chronic lung inflammation involving changes in the respiratory and systemic systems. Risk factors such as smoking, inhalation of harmful gases, and genetic mutations can influence the development of the disease. COPD results from the complex interaction between genetic and environmental factors over time. Both COPD and the aging process share similar mechanisms of immunosenescence. These changes are thought to result in an "accelerated aging" process in COPD patients. The immunosenescence found in COPD is related to the clinical course of the disease, associated with worsening gas exchange, pulmonary hyperinflation, and increased risk of mortality. Pulmonary function testing is a valuable tool in identifying patients at risk of developing COPD. A specific subtype of this disease is known as spirometry with impaired preserved relationship (PRISm). The interference of endocrine aging was identified in individuals with COPD by analyzing DHEA-S (dehydroepiandrosterone sulfate) levels and GH (growth hormone). Accelerated lung, immune, and endocrine aging in the disease are often discussed individually in the literature. Studies that assess how relaxing these systems are require renewed attention, given that COPD is not limited to repercussions only at the local level. The objective of this study was to evaluate the clinical, endocrine, and immunological profile in individuals diagnosed with COPD, as well as in individuals with risk factors for the development of the disease, in addition to reviewing the aspect of immunosenescence in COPD. This study presents a systematic review addressing immunosenescence changes in COPD and discussing their clinical repercussions. In addition, an original article presents the immunoendocrine profile of individuals with COPD and PRISm, as well as the influence of these hormones on lung function and immunological markers.

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  • Balbino Lino dos Santos
  • "EFEITO DO FLAVONÓIDE AGATHISFLAVONA NA MODULAÇÃO DO NRLP3-INFLAMOSSOMA, MICRO-RNAs E CITOCINAS PRÓ-INFLAMATÓRIAS ASSOCIADOS A RESPOSTA MICROGLIAL A ESTIMULOS INFLAMATORIOS E PEPTÍDEOS Aβ-AMILOIDE"

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • EDUARDO RIGON ZIMMER
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • JOSÉ CLÁUDIO FONSECA MOREIRA
  • SILVIA LIMA COSTA
  • SIMONE GARCIA MACAMBIRA
  • Data: 28/07/2023

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  • A ativação microglial desempenha papel crucial na patogenia de doenças neurodegenerativas (NDD), e o controle desta ativação têm sido alvo de investigações como estratégia ao desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para NDD. A agatisflavona, purificada de Cenostigma pyramidale (Tul.), demonstrou ser neuroprotetora em modelos in vitro de excitotoxicidade induzida por glutamato e danos inflamatórios. No entanto, o papel potencial da regulação microglial por agathisflavone nesses efeitos neuroprotetores ainda não está claro. Neste trabalho, nós investigamos em células microgliais do córtex de ratos e em células microgliais de linhagem humana induzidas ao dano inflamatório, os efeitos da agatisflavona em modular a resposta inflamatória com vistas a elucidar mecanismos de neuroproteção. Para isto, culturas de microglias humanas da linhagem C20 e microglias isoladas do córtex de ratos Wistar recém-nascidos foram expostas a oligômeros do peptídeo β-amilóide (500nM) por 4h ou a lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS, 1µg/mL) por 24h e então tratadas ou não com agatisflavona (1µM) por 24h. Culturas de células neuronais PC12 foram expostas ao meio condicionado da microglia de rato (MCM) tratado ou não com agatisflavona. Em um primeiro trabalho, observamos que o LPS induziu a microglia a assumir um estado inflamatório ativado (CD68 aumentado, com fenótipo mais arredondado/amoebóide). No entanto, a maioria das microglias expostas ao LPS e agatisflavona apresentaram um perfil anti-inflamatório (CD206 aumentado e fenótipo ramificado), associado à redução da expressão de NO, GSH, inflamassoma NRLP3, IL1-β, IL-6, IL-18, TNF, CCL5 e CCL2. O docking molecular também mostrou que a agatisflavona se ligou ao domínio inibitório NLRP3 NACTH. Além disso, nas culturas de células PC12 expostas ao MCM previamente tratado com o flavonoide, a maioria das células preservaram os seus neuritos e aumentaram a expressão de β-tubulina III. No segundo trabalho, observamos que o β-amilóide e o LPS induziram as culturas de microglia a assumir um estado inflamatório ativado, com aumento na expressão de miR-146a e miR-155 e dos mediadores inflamatórios IL1-β, IL-6 e NOS2. No entanto, nas células expostas ao dano inflamatório e tratadas com agatisflavona, observamos redução significativa na concentração de miR146a e miR-155, bem como das citocinas inflamatórias avaliadas. Observamos também nas células estimuladas apenas com β-amilóide, um aumento na relação das proteínas sinalizadoras p-STAT3/STAT3, e nas células estimuladas com β-amilóide e tratadas com flavonoide, redução nesta relação. Assim, estes dados reforçam a atividade anti-inflamatória e o efeito neuroprotetor da agatisflavona, associados ao controle do inflamassoma NLRP3 e de mediadores inflamatórios, com destaque também ao seu potencial na regulação de miRNAs associados a neuroinflamação. Estes resultados fortalecem o potencial deste flavonoide como uma molécula promissora ao tratamento ou a prevenção de doenças neurodegenerativas.


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  • Microglial activation plays a crucial role in the pathogenesis of neurodegenerative diseases (NDD), and the control of this activation has been the subject of investigations as a strategy for the development of new therapeutic approaches for NDD. Agatisflavone, purified from Cenostigma pyramidale (Tul.), has been shown to be neuroprotective in in vitro models of glutamate-induced excitotoxicity and inflammatory damage. However, the potential role of microglial regulation by agathisflavone in these neuroprotective effects remains unclear. In this work, we investigated in microglial cells from the cortex of rats and in microglial cells of human lineage induced to inflammatory damage, the effects of agatisflavone in modulating the inflammatory response in order to elucidate mechanisms of neuroprotection. For this purpose, cultures of human microglia of the C20 lineage and microglia isolated from the cortex of newborn Wistar rats were exposed to β-amyloid peptide oligomers (500nM) for 4h or Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS, 1µg/mL) for 24h and then treated or not with agathisflavone (1µM) for 24h. Cultures of PC12 neuronal cells were exposed to rat microglia conditioned medium (MCM) treated or not with agathisflavone. In a first study, we observed that LPS induced microglia to assume an activated inflammatory state (increased CD68, with a more rounded/amoeboid phenotype). However, most microglia exposed to LPS and agathisflavone showed an anti-inflammatory profile (increased CD206 and branched phenotype), associated with reduced expression of NO, GSH, NRLP3 inflammasome, IL1-β, IL-6, IL-18, TNF, CCL5 and CCL2. Molecular docking also showed that agathisflavone bound to the NLRP3 NACTH inhibitory domain. Furthermore, in cultures of PC12 cells exposed to MCM previously treated with the flavonoid, most cells preserved their neurites and increased expression of β-tubulin III. In the second study, we observed that β-amyloid and LPS induced microglia cultures to assume an activated inflammatory state, with increased expression of miR-146a and miR-155 and inflammatory mediators IL1-β, IL-6 and NOS2. However, in cells exposed to inflammatory damage and treated with agathisflavone, we observed a significant reduction in the concentration of miR146a and miR-155, as well as the inflammatory cytokines evaluated. We also observed in cells stimulated only with β-amyloid, an increase in the ratio of p-STAT3/STAT3 signaling proteins, and in cells stimulated with β-amyloid and treated with flavonoid, a reduction in this ratio. Thus, these data reinforce the anti-inflammatory activity and the neuroprotective effect of agathisflavone, associated with the control of the NLRP3 inflammasome and inflammatory mediators, also highlighting its potential in the regulation of miRNAs associated with neuroinflammation. These results strengthen the potential of this flavonoid as a promising molecule for the treatment or prevention of neurodegenerative diseases. 

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  • JESSICA VIEIRA CERQUEIRA
  • ESTUDO DE ASSOCIAÇÃO DE VARIANTES DO GENE BDNF COM FENÓTIPOS DE ASMA EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • CINTIA RODRIGUES MARQUES
  • LAURA MARIA DE LIMA BELIZARIO FACURY LASMAR
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • RAFAEL VALENTE VEIGA
  • Data: 07/08/2023

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  • "A asma é uma das doenças não transmissíveis mais comuns no mundo, afetando de 1 a 29% da população em diferentes países. O processo inflamatório da asma está associado com a ativação do sistema imunológico, hiperresponsividade das vias aéreas, ativação de células epiteliais, superprodução de muco e remodelamento das vias aéreas. É bem reconhecido que as células Th2 são as principais condutoras da inflamação alérgica eosinofílica das vias aéreas, gerando quantidades abundantes de IL-4, IL-5, IL-9 e IL-13. No entanto a asma em adultos é mais frequentemente não alérgica do que alérgica. Apesar da inflamação ser apresentada como característica-chave da resposta exacerbada na asma, a terapia com anti-inflamatórios apenas reduz essa resposta exagerada, mas não é capaz de suprimi-la, levando a hipótese de que outros fatores além do processo inflamatório, contribuem para os sintomas observados na asma. Os tecidos de barreira como os pulmões são inervados pelo sistema nervoso periférico, que detecta estímulos, incluindo os nocivos, e responde a eles regulando reações autonômicas. O sistema nervoso no trato respiratório desempenha um papel importante na regulação da secreção de muco, permeabilidade vascular, tônus da musculatura lisa das vias aéreas e fluxo sanguíneo. O BDNF é uma neurotrofina presente nas vias aéreas inferiores e pode contribuir para alterações da estrutura e função das vias aéreas. Neste contexto, esta pesquisa teve como objetivo avaliar o impacto de variantes no gene do BDNF nos fenótipos de asma. O estudo de associação das variantes foi desenvolvido com a população de adultos asmáticos do ProAR. Os resultados mostraram que o alelo G de rs962369 foi negativamente associado à asma leve (OR 0,74, IC 95% 0,564-0,985, p= 0,038). Os alelos A, G, G, G, T e A de rs6265, rs11030104, rs7103411, rs988748, rs10767664, rs2030323, respectivamente, foram positivamente associados à falta de reversibilidade. O alelo G de SNVs rs7124442 foi significativamente associado a menores chances de atopia (OR 0,75, IC 95% 0,575-0,989, p= 0,041). Enquanto os alelos G e A dos SNVs rs2030324 e rs7934165, respectivamente, foram associados a uma maior chance de atopia (OR 1,26, 95% CI 1,048-1,516, p= 0,014) e (OR 1,25, 95% CI 1,041-1,506, p= 0,016). O alelo G do rs7124442 e o alelo A do rs11030119 foram associados a uma maior chance de exacerbação (OR = 1,575, Pperm = 0,037 e OR = 1,823, Pperm = 0,029). Além disso, o alelo G dos SNVs rs7124442 reduziu os níveis de IL-5 e IgE e aumentou a contagem de neutrófilos no sangue. Estes dados mostram que variantes do gene BDNF possuem impacto na asma em nossa população."


  • Mostrar Abstract
  • "Asthma is one of the most common noncommunicable diseases in the world, affecting from 1 to 29% of the population in different countries. The inflammatory process of asthma is associated with immune system activation, airway hyperresponsiveness, epithelial cell activation, mucus overproduction, and airway remodeling. It is well recognized that Th2 cells are the main drivers of eosinophilic allergic airway inflammation, generating abundant amounts of IL-4, IL-5, IL-9 and IL-13. However, asthma in adults is more often non-allergic than allergic. Although inflammation appears as a key feature of the exacerbated response in asthma, anti-inflammatory therapy only reduces this exaggerated response but is not able to suppress it, leading to the hypothesis that other factors besides the inflammatory process contribute to the symptoms. observed in asthma. Barrier tissues, such as the lungs, are innervated by the peripheral nervous system, which detects stimuli, including harmful ones, and responds to them by regulating autonomic reactions. The nervous system in the tract plays an important role in regulating mucus intensity, vascular permeability, airway smooth muscle tone, and blood flow. BDNF is an NT present in the lower airways and may contribute to changes in airway structure and function. In this context, this research aimed to evaluate the impact of variants in the BDNF gene on asthma phenotypes. The association study of the variants was carried out with the population of asthmatic adults from the ProAR. The results showed that the G allele of rs962369 was negatively associated with mild asthma (OR 0.74, 95% CI 0.564-0.985, p= 0.038). The A, G, G, G, T and A alleles of rs6265, rs11030104, rs7103411, rs988748, rs10767664, rs2030323, respectively, were positively associated with a lack of reversibility. The G allele of SNVs rs7124442 was significantly associated with lower chances for atopy (OR 0.75, 95% CI 0.575-0.989, p= 0.041). While the G and A alleles of the SNVs rs2030324 and rs7934165, respectively, were associated with a higher chance of atopy (OR 1.26, 95% CI 1.048-1.516, p= 0.014) and (OR 1.25, 95% CI 1.041-1.506, p= 0.016). G allele of the rs7124442 and A allele of the rs11030119, were associated with an increased chance of exacerbation (OR = 1.575, Pperm =0.037 and OR = 1.823, Pperm = 0.029). Furthermore, the G allele of the SNVs rs7124442 reduced IL-5 and IgE levels and increased blood neutrophil counts. These data show that BDNF gene variants have an impact on asthma in our population.

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  • Brysa Mariana Dias Silveira
  • ASPECTOS REGENERATIVOS E IMUNOMODULATÓRIOS DAS CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS DO TECIDO ADIPOSO EM MODELO FALCIFORME

  • Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • VITOR ANTONIO FORTUNA
  • NATALIA MACHADO TAVARES
  • ELISANGELA VITORIA ADORNO
  • BRUNO SOLANO DE FREITAS SOUZA
  • JAIME RIBEIRO FILHO
  • Data: 08/08/2023

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  • Úlceras crônicas de perna (CLU) são complicações microvasculares comuns em pacientes com anemia falciforme. CLUs são recalcitrantes e na ausência de tratamento podem levar à amputação dos membros inferiores. As células estromais do tecido adiposo (ASC) representam uma alternativa para o tratamento de CLUs, devido a sua capacidade de secretar mediadores solúveis envolvidos no reparo tecidual. Desta forma, avaliamos os efeitos do secretoma de ASC em modelo in vitro de células endoteliais do cordão umbilical (HUVECs) e em modelo in vivo com camundongos C57BL/6 transgênicos e camundongos Towness falciformes. Nosso trabalho observou que o secretoma de ASC pré-condicionado em normóxia (condição com 20% de oxigênio) e hipóxia (condição com 5% de oxigênio) apresentou em sua composição marcadores de regeneração tecidual (ex: VEGF, MCP1, IL-8 e Angiogenina). A análise in vitro demonstrou que ambos os meios condicionados (MCs) exerceram ação anti-apoptótica e angiogênica em HUVECs, com melhor desempenho das células tratadas com MC em normóxia. Nosso modelo in vivo utilizando camundongos C57BL/6 transgênicos revelou aceleração do processo cicatricial de feridas tratadas com os MCs. Considerando que o nosso produto terapêutico apresentou melhor desempenho em condições de normóxia, analisamos o potencial terapêutico do MC normóxia em modelo de cicatrização com camundongos falciformes. Neste trabalho, buscamos avaliar o efeito pró- angiogênico e imunomodulatório em peles tratadas com o MC através das técnicas de imunohistoquímica, imunofluorescência e RT-PCR. Nossos resultados revelaram que a administração do MC foi capaz de estimular o processo de cicatrização através da redução da inflamação local, aumento do número de fibroblastos e maior produção de colágeno, bem como através da redução de transcritos inflamatórios, evidenciando o efeito terapêutico do MC
    sobre a imunomodulação. 


  • Mostrar Abstract
  • Chronic leg ulcers (CLU) are common microvascular complications in patients with sickle cell anemia. CLUs are recalcitrant and the absence of treatment can lead to lower limb amputation. Adipose tissue stromal cells (ASC) represent an alternative for the treatment of CLUs, due to their ability to secrete soluble mediators involved in tissue repair. Thus, we evaluated the effects of the ASC secretome in vitro model of umbilical cord endothelial cells (HUVECs) and in vivo model with transgenic C57BL/6 mice and sickle Towness mice. Our work found that the secret of ASC preconditioned in normoxia (condition with 20% oxygen) and hypoxia (condition with 5% oxygen) presented in its composition markers of tissue regeneration (eg: VEGF, MCP1, IL-8 and angiogenin). In vitro analysis  demonstrated that both conditioned media (CMs) exerted anti- apoptotic and angiogenic action on HUVECs, with better performance of cells treated with CM in normoxia. Our in vivo model using C57BL/6 transgenic mice revealed radiation from the healing process of wounds treated with MCs. Considering that our therapeutic product performed better under conditions of normoxia, we analyzed the therapeutic potential of MC normoxia in wound healing model with sickle cell mice. In this work, we sought to evaluate the pro- angiogenic and immunomodulatory effect in skins treated with CM using immunohistochemistry, immunofluorescence and RT-PCR techniques. Our results revealed that CM administration was able to stimulate the healing process by reducing local inflammation, increasing the number of fibroblasts and increasing collagen production. Just as we identified reduced expression of inflammatory transcripts, evidencing the therapeutic effect of MC on immunomodulation.

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  • Regina Santos Nascimento
  • Avaliação funcional de polimorfismos nos genes EBI3 e IL12A associados ao desenvolvimento de asma em uma coorte de crianças do município de Salvador-BA.

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • JAILTON DE AZEVEDO SILVA JUNIOR
  • JAMILLE SOUZA FERNANDES
  • TAMIRES CANA BRASIL CARNEIRO
  • Data: 09/08/2023

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  • A asma é doença inflamatória crônica das vias áreas, de caráter não transmissível, influenciada por fatores ambientais e genéticos. A asma alérgica é o fenótipo mais comum da doença e está associada com a exacerbação da resposta imune Th2. Vários tipos celulares estão envolvidos na regulação do sistema imunológico no pulmão, com destaque para as células regulatórias (Treg e Breg). Diversos mecanismos inibitórios desenvolvidos por estas células já foram descritos, dentre os quais estão a liberação de citocinas supressoras como IL-10, TGF-β e IL-35. A IL-35 é uma citocina heterodimérica, composta pelas subunidades EBI3 e IL12p35, que são codificadas respectivamente pelos genes EBI3 e IL12A. Alterações nos níveis dessa citocina têm sido associadas a asma e atopia. A relevância do componente genético no desenvolvimento da asma é amplamente discutida na literatura. Nesse contexto, dada a importância das células Treg e da susceptibilidade genética, este estudo se propôs a investigar o impacto funcional de polimorfismos nos genes regulatórios EBI3 e IL12A em uma população de crianças brasileiras. O DNA de 1.218 crianças foi genotipado usando o Illumina 2.5 Human Chip Omni Bead. Análises de regressão logística foram realizadas usando o software PLINK 1.9 para verificar a associação entre os polimorfismos em EBI3 e IL12A, asma e marcadores atópicos, ajustados para sexo, idade, infecções por helmintos e marcadores de ancestralidade. A expressão do mRNA foi realizada usando qPCR em tempo real. Um total de 4 marcadores para IL12A e 5 para EBI3 foram encontrados. Os resultados mostraram que o alelo C de rs2243131 em IL12A foi positivamente associado à asma (OR 1.35, CI 1.06–1.71), gravidade de asma (OR 1.36, CI 1.02–1.81), teste cutâneo positivo para Blatella germanica (OR 1.59, CI 1.09–2.22), e também positivamente associado para a produção espontânea da produção de IL-5 (OR: 1.71; CI: 1.11–2.62). O alelo A de rs568408 em IL12A também foi positivamente associado ao teste cutâneo positivo para B. germanica (OR 1.65, CI 1.10-2, 37). Já o rs582537 em IL12A foi negativamente associado ao teste cutâneo positivo para B. germanica (OR 0.64, CI 0.42-0.98) e Dermatophaoides pteronyssinus (OR 0.77, CI 0.60-0.98), além de negativamente associado com a produção espontânea de INF-y (OR: 0.52; CI: 0.52–0.99). Com relação a EBI3, todas as variantes encontradas foram negativamente associadas a marcadores de atopia: o alelo C de rs78749916 (OR 0.61, CI 0.40-0.93), o alelo G de rs77145509 (OR 0.66, CI 0.46-0.94), e o alelo A de rs76353132 (OR 0.68, CI 0.43-0.96), foram negativamente associados ao teste cutâneo positive para Periplaneta americana. A variante rs76353132 também foi negativamente associada a produção espontânea de INF-y (OR: 0.72; CI: 0.52-0.99). O alelo C de rs428253 foi negativamente associado com teste cutâneo positivo para pelo menos um alérgeno (OR: 0.64; CI: 0.44–0.92), e o alelo G de rs4905 foi negativamente associado com IgE positivo para pelo menos um alérgeno (OR 0.62, CI 0.40-0.95). Os níveis de expressão do mRNA de IL12A foram reduzidos em indivíduos asmáticos atópicos quando comparados aos controles. Os níveis de expressão de EBI3 foram diminuídos em indivíduos asmáticos atópicos em comparação com indivíduos não asmáticos e atópicos, e quando comparados aos controles. Neste estudo pudemos, pela primeira vez, descrever novas variantes na via regulatória da IL-35 ligada à asma e atopia, destacando a importância da regulação imune na patogênese da asma.


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  • Asthma is a chronic inflammatory disease of the airways, non-transmissible, influenced by environmental and genetic factors. Allergic asthma is the most common phenotype of the disease and is associated with an exacerbation of the Th2 immune response. Several cell types are involved in the regulation of the immune system in the lung, with emphasis on regulatory cells (Treg and Breg). Several inhibitory controls included by these cells have already been admitted, among which are the release of suppressive cytokines such as IL-10, TGF-β and IL-35. IL-35 is a heterodimeric cytokine, composed of the EBI3 and IL12p35 subunits, which are encoded by the EBI3 and IL12A genes, respectively. Changes in the levels of this cytokine have been associated with asthma and atopy. The consternation of the genetic component in the development of asthma is widely reported in the literature. In this context, given the importance of Treg cells and genetic susceptibility, this study set out to investigate the functional impact of polymorphisms in the regulatory genes EBI3 and IL12A in a population of Brazilian children. DNA from 1.218 children was genotyped using the Illumina 2.5 Human Chip Omni Bead. Logistic regression analyzes were performed using PLINK 1.9 software to verify the association between polymorphisms in EBI3 and IL12A, asthma and atopic markers, adjusted for sex, age, helminth survivors and ancestry markers. mRNA expression was performed using real-time qPCR. A total of 4 markers for IL12A and 5 for EBI3 were found. The surprising results that the C allele of rs2243131 in IL12A was positively associated with asthma (OR 1.35, CI 1.06–1.71), asthma severity (OR 1.36, CI 1.02–1.81), positive skin test for Blatella germanica (OR 1.59, CI 1.09–2.22), and also positively associated with the spontaneous production of IL-5 (OR: 1.71; CI: 1.11–2.62). The A allele of rs568408 in IL12A was also positively associated with a positive skin test for B. germanica (OR 1.65, CI 1.10-2, 37). rs582537 in IL12A was associated with a positive skin test for B. germanica (OR 0.64, CI 0.42-0.98) and Dermatophaoides pteronyssinus (OR 0.77, CI 0.60-0.98), in addition to being associated with the natural production of INF-y (OR : 0.52; CI: 0.52–0.99). With regard to EBI3, all the variants found were incorporated into atopy markers: the C allele of rs78749916 (OR 0.61, CI 0.40-0.93), the G allele of rs77145509 (OR 0.66, CI 0.46-0.94), and the A allele of rs76353132 (OR 0.68, CI 0.43-0.96), were associated with a positive skin test for Periplaneta americana. The rs76353132 variant was also associated with spontaneous INF-y production (OR: 0.72; CI: 0.52-0.99). The rs428253 C allele was associated with a positive skin test for at least one allergen (OR: 0.64; CI: 0.44–0.92), and the rs4905 G allele was associated with a positive IgE for at least one allergen (OR 0.62, CI 0 .40-0.95). IL12A mRNA expression levels were reduced in atopic asthmatic subjects when compared to controls. EBI3 expression levels were decreased in atopic asthmatic subjects compared to non-asthmatic and atopic subjects, and when compared to controls. In this study, we were able, for the first time, to describe new variants in the IL-35 regulatory pathway linked to asthma and atopy, highlighting the importance of immune regulation in the pathogenesis of asthma.

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  • LUCIANO GAMA DA SILVA GOMES
  • Análise de painel genético preditivo para o diagnóstico de asma e de fenótipos através de machine learning 

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MÔNICA VERSIANI NUNES PINHEIRO DE QUEIROZ
  • PAULO AUGUSTO MOREIRA CAMARGOS
  • RAFAEL VALENTE VEIGA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • Data: 14/08/2023

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  • A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas multifatorial. Sua heterogeneidade e a variabilidade da resposta ao tratamento são as principais barreiras para o sucesso do manejo adequado de determinados tipos de pacientes asmáticos. O objetivo principal do estudo foi realizar a modelagem computacional predição de painéis genéticos no desenvolvimento de asma e de seus endofenótipos, utilizando técnicas de machine learning. A coorte do ProAR incluiu indivíduos adultos com diagnóstico de asma. A análise de classe latente foi usada para agrupar indivíduos em diferentes fenótipos de asma com base em variáveis. O estudo se concentrou em 1.009.762 SNVs usando o algoritmo Boruta para seleção de variáveis. Dez algoritmos diferentes foram empregados para desenvolver modelos preditivos (KNN, NB, ANN, SVM, CART, C5.0, Bagging, AdaBoost, RF e XGBoost) para identificar com precisão os pacientes com asma e seus subtipos. O painel genético preditivo da asma em geral foi concluído com 155 variantes de nucleotídeo único, com 91,18% de precisão, 92,75% de sensibilidade e 89,55% de especificidade usando o algoritmo support vector machine. Além do mais, nosso estudo diferenciou subtipos distintos de asma e a partir desses definimos painéis genéticos com alta performance. Dessa forma, o aprendizado de máquina pode ser uma ferramenta útil na pesquisa de resultados complexos, capaz de auxiliar na predição da asma e contribuir para a personalização do manejo clínico.


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  • Asthma is a multifactorial chronic inflammatory disease of the airways. Its heterogeneity and the variability of the response to treatment are the main barriers to the success of adequately managing certain types of asthmatic patients. The main objective of the study was to carry out computational modeling and prediction of genetic panels in the development of asthma and its endophenotypes, using machine learning techniques. The ProAR cohort included adults diagnosed with asthma. Latent class analysis was used to group individuals into different asthma endotypes based on variables. The study focused on 1,009,762 SNVs using the Boruta algorithm for variable selection. Ten different algorithms were employed to develop predictive models (KNN, NB, ANN, SVM, CART, C5.0, Bagging, AdaBoost, RF, and XGBoost) to accurately identify patients with asthma and their subtypes. The predictive genetic panel of overall asthma was completed with 155 single nucleotide variants with 91.18% accuracy, 92.75% sensitivity, and 89.55% specificity using the support vector machine algorithm. Furthermore, our study   differentiated distinct subtypes of asthma, and from these, we defined genetic panels with high performance. In this way, machine learning can be a useful tool in researching complex outcomes, capable of helping to predict asthma and contributing to the personalization of clinical management. 

     

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  • Anaque de Oliveira Pires
  • ASSOCIAÇÃO DE VARIANTES GENÉTICAS NOS GENES DAD1 E OXA1L COM ASMA E ATOPIA EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • CARINA DA SILVA PINHEIRO
  • CINTHIA VILA NOVA SANTANA
  • TATIANE DE OLIVEIRA TEIXEIRA MUNIZ CARLETTO
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • Data: 31/08/2023

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  • A asma é uma doença imunomediada altamente complexa, caracterizada por uma obstrução reversível e intermitente das vias aéreas que apesar de ter uma prevalência maior na infância, tem apresentado uma alta incidência e mortalidade em adultos. Nos últimos anos, diversos estudos de associação genômica ampla (GWAS) identificaram um número expressivo de variantes genéticas responsáveis pela suscetibilidade à asma. Essas variantes têm demonstrado desempenhar um papel importante na regulação da expressão gênica e na hereditariedade da asma, dentre as quais se  destacam variantes nos genes DAD1 e OXA1L. O gene DAD1 é conhecido pelo seu papel na regulação da morte celular programada, e OXA1L é descrito pelo envolvimento na biogênese e fosforilação oxidativa mitocondrial. O presente estudo objetivou a identificação de novas variantes nos genes DAD1 e OXA1L e a avaliação da associação com asma e marcadores de atopia em indivíduos adultos. O estudo contou com a participação de 1.084 indivíduos adultos divididos em asma leve a moderada, asma grave e controles saudáveis pertencentes a uma coorte de estudo caso-controle do Programa para Controle da Asma na Bahia-ProAR. Análises de associações entre variantes nos genes estudados e variáveis de asma ou atopia foram realizadas usando um modelo de regressão logística multivariada ajustado para sexo, idade, índice de massa corporal (IMC), tabagismo, volume expiratório forçado em 1 segundo (VEF1) e componente principal de ancestralidade (PC1) usando o software PLINK 1.9. Modelos genéticos aditivos, dominantes e recessivos foram utilizados para todas as variáveis analisadas. Neste estudo, foram identificadas novas variantes nos genes DAD1 e OXA1L nunca antes descritas. Variantes nestes genes foram associadas com asma e marcadores de atopia tais como, teste cutâneo (SPT), IgE específica para aeroalérgenos, eosinófilos e produção de citocinas do tipo Th2. Análises de expressão gênica in silico, demonstraram que alguns dos polimorfismos em ambos os genes são capazes de afetar seus respectivos níveis de expressão gênica. Desta forma, nossos achados demonstram que variantes nos genes DAD1 e OXA1L podem ter influência na asma e atopia em indivíduos adultos brasileiros. 


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  • Asthma is a highly complex immune-mediated disease, characterized by a reversible and intermittent obstruction of the airways that, despite having a higher prevalence in childhood, has shown a high incidence and mortality in adults. In recent years, several genomic wide association studies (GWAS) have identified a significant number of genetic variants responsible for asthma susceptibility. These variants have been shown to play an important role in the regulation of gene expression and in the heritability of asthma, including variants in DAD1 e OXA1L genes. The DAD1 gene is known for its role in the regulation of programmed cell death, and OXA1L is described for its involvement in mitochondrial biogenesis and oxidative phosphorylation. The present study aimed to identify new variants in the DAD1 and OXA1L genes and to evaluate the association with asthma and atopy markers in adults. The study involved the participation of 1,084 adult individuals divided into mild to moderate asthma, severe asthma and healthy controls belonging to a case-control study cohort of the Programa
    para Controle da Asma na Bahia-ProAR. Analyzes of associations between variants in the studied genes and asthma or atopy were performed using a multivariate logistic regression model adjusted for sex, age, body mass index (BMI), smoking, forced expiratory volume in 1 second (FEV1) and ancestry (PC1) using PLINK 1.9 software. Additive, dominant and recessive genetic models were used for all analyzed variables. In this study, new variants in the DAD1 and OXA1L genes that had never been described before were identified. These genes have been associated with asthma and atopy markers such as skin prick test (SPT), specific IgE for  aeroallergens, eosinophils and Th2-type cytokine production. In silico gene expression analyzes demonstrated that some of the polymorphisms in both genes are able to affect their respective levels of gene expression. Thus, our findings demonstrate that variants in the DAD1 and OXA1L genes may influence asthma and atopy in Brazilian adults. 

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  • Flávia Martins da Silva
  • AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE HSPs EM Corynebacterium pseudotuberculosis

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BRUNO DE ALMEIDA LOPES
  • LILIA FERREIRA DE MOURA COSTA
  • MARCOS DA COSTA SILVA
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • SUZANA TELLES DA CUNHA LIMA
  • THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • Data: 15/09/2023

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  • A Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria intracelular responsável pela doença Linfadenite caseosa em ovino e caprinos que trazem grandes prejuízos econômicos a agropecuária. A resistência de C. pseudotuberculosis dentro de macrófagos, durante a infecção, aponta para a ativação de mecanismos moleculares envolvidos na adaptação aos estresses gerados pelo hospedeiro. Proteínas de choque térmico (HSPs) tem demonstrado importante papel dessas moléculas no aumento da resistência microbiana sob condições de estresse durante a infecção, além de serem imunologicamente importantes por serem reconhecidas pelo hospedeiro, são, portanto, capazes de induzir resposta da imunidade celular e humoral em mamíferos. Esta pesquisa tem por objetivo identificar e avaliar a expressão de possíveis genes de HSPs em C. pseudotuberculosis como resposta ao estresse que possam contribuir para o entendimento dos mecanismos resistência, virulência e patogenicidade utilizado por esse patógeno, e compará-los à condição fisiológica. O estudo simulou in vitro cinco condições de estresse (ácido, térmico, óxido nítrico, osmótico e oxidativo) com duas concentrações em três tempos de exposição (15min, 30min, 45 min) para avaliar a resistência de C. pseudotuberculosis. Três diferentes linhagens foram utilizadas: T1(atenuada), ER1409 (virulenta) e CapJ4 (76) (forte produtor de biofilme). As linhagens foram cultivadas em BHI monitorado o crescimento e isoladas alíquotas na fase exponencial inicial (DO600nm= 0,2) as quais foram submetidas aos estresses em seguida extraídos o RNA total. Os cDNAs gerados por transcrição reversa foram submetidos a ensaios de RT-qPCR (quantitative PCR) para quantificação dos 5 genes HSPs (ClpB, DnaJ, Hspr, Hsp10, Hsp65). Os resultados alcançados sugerem que as cepas ER1409 e CapJ4 (76) teve maior adaptabilidade apesar de apresentarem uma discreta perda de potencial replicativo que foi observado através da taxa de sobrevivência. Estas tiveram maior
    número de transcritos (Hsp65, Hsp10, HspR. Cpl -B, DnaJ) durante diferentes estresses. Essas HSPs estão envolvidos na resposta adaptativa, no crescimento bacteriano, e na virulência exercendo papel promissor na ativação do sistema imunológico. A descoberta da participação destes genes na resposta as condições
    celulares estressante s do hospedeiro podem auxiliar na busca de novos tratamentos para a linfadenite caseosa, através da possível redução na expressão destes genes de resistência, assim como novos mecanismos de combate a doença. 


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  • Corynebacterium pseudotuberculosis is an intracellular bacterium responsible for caseous lymphadenitis in sheep and goats, which brings great economic losses to agriculture. The resistance of C. pseudotuberculosis within macrophages, during infection, points to the activation of molecular mechanisms involved in adaptation to stress generated by the host. Heat shock proteins (HSPs) have demonstrated an important role for these molecules in increasing microbial resistance under stress conditions during infection, in addition to being immunologically important for being recognized by the host, they are therefore capable of inducing cellular and humoral immunity responses in mammals. This research aims to identify and evaluate the expression of possible HSP genes in C. pseudotuberculosis as a response to stress that may contribute to the understanding of resistance, virulence and pathogenicity mechanisms used by this pathogen, and compare them to the physiological condition. The study simulated in vitro five stress conditions (acid, thermal, nitric oxide, osmotic and oxidative) with two concentrations and three exposure times (15min, 30min, 45 min) to evaluate the resistance of C. pseudotuberculosis. Three different strains were used: T1(attenuated), ER1409 (virulent) and CapJ4 (76) (strong biofilm producer). The strains were cultivated in BHI with growth monitored and aliquots isolated in the initial exponential phase (OD600nm= 0.2) which were subjected to stress and then total RNA was extracted. The cDNAs generated by reverse transcription were submitted to RT- qPCR (quantitative PCR) assays to quantify the 5 HSPs genes (ClpB, DnaJ, Hspr, Hsp10, Hsp65). The results achieved suggest that the ER1409 and CapJ4 strains (76) had greater adaptability despite showing a slight loss of replicative potential that was observed through the survival rate. These had a higher number of transcripts (Hsp65, Hsp10, HspR. Cpl -B, DnaJ) during different stresses. These HSPs are involved in adaptive response, bacterial growth, and virulence, playing a promising role in activating the immune system. The discovery of the participation of these genes in the response to the host's stressful cellular conditions may help in the search for new treatments for caseous lymphadenitis, through the possible reduction in the expression of these resistance genes, as well as new mechanisms to combat the disease. 

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  • Pedro Augusto Silva dos Santos Rodrigues
  • "VARIANTES EM GENES NA VIA DO TNF CONTRIBUEM PARA PIOR RESPOSTA AO TRATAMENTO ANTI-TNF EM PACIENTES COM ARTRITE REUMATOIDE"

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • CHARLESTON RIBEIRO PINTO
  • GENARIO OLIVEIRA SANTOS JUNIOR
  • RAFAEL VALENTE VEIGA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 28/11/2023

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  • Nas últimas décadas, o uso de medicamentos biológicos (imunobiológicos) como os agentes anti-TNF vem ganhando destaque para o tratamento de doenças autoimunes, especialmente as reumatológicas, como a Artrite Reumatoide (AR). A presença do fator de necrose tumoral (TNF) como molécula de defesa imunológica crucial na patogênese de doenças autoimunes tornou a terapia anti-TNF um grande progresso no tratamento de desordens inflamatórias crônicas, porém parcela importante dos pacientes não respondem ou perdem sua resposta a esses medicamentos, necessitando de doses maiores ou substituição da terapia, o que, por vezes, têm sido associado a variações em fatores genéticos. Ainda não existem estudos que avaliem a resposta a esses medicamentos correlacionando-os com polimorfismos genéticos em população brasileira, desse modo, este estudo objetivou avaliar a associação de variantes genéticas na via do TNF com o diagnóstico de AR e o perfil de resposta aos imunobiológicos anti-TNF em pacientes acompanhados em centros de infusão públicos no estado da Bahia, Brasil. Neste estudo de coorte ambispectivo utilizamos de dados clínicos, sociodemográficos e genéticos para avaliar as associações de variantes nos genes TNF, TNFRSF1A e TNFRSF1B com o diagnóstico de AR, escores padronizados, exames laboratoriais e resposta ao tratamento com TNFi. Foram incluídos 360 controles saudáveis e 294 pacientes diagnosticados com AR. Em uma subamostra, foram realizadas medições dos níveis séricos de citocinas TNF e IL-6. Nossos principais resultados sugerem que o rs767455-C pode desempenhar um papel na resposta ao tratamento com anti-TNF, estando relacionado a uma melhor resposta terapêutica. Adicionalmente, outros SNPs como o rs1061622-G e o rs1800629-A parecem também interferir no perfil de resposta aos anti-TNF. Nossos modelos logísticos binários conseguiram predizer de forma significativa e a partir de poucas variáveis a resposta a anti-TNFs. O alelo rs1800629-A e elevado escore da Escala Visual Analógica demonstraram estar associados a uma pior resposta. Fenótipos como sexo masculino, uso de medicamentos sintéticos e uma AR soropositiva parecem contribuir para uma melhor resposta ao tratamento com TNFi. Nossos resultados destacam a importância de avaliar o efeito desses polimorfismos dentro do contexto clínico e sociodemográfico do indivíduo com o objetivo de desenvolver um painel útil na definição de condutas clínicas no manejo terapêutico da AR.


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  • In recent decades, the use of biological medications (immunobiologicals) such as anti-TNF agents has gained prominence for the treatment of autoimmune diseases, especially rheumatological ones, such as Rheumatoid Arthritis (RA). The presence of tumor necrosis factor (TNF) as a crucial immune defense molecule in the pathogenesis of autoimmune diseases has made anti-TNF therapy a major step forward in the treatment of chronic inflammatory disorders, but a significant portion of patients do not respond or lose their response to these medications, requiring higher doses or therapy replacement, which have sometimes been associated with variations in genetic factors. There are still no studies that evaluate the response to these medications by correlating them with genetic polymorphisms in the Brazilian population. Therefore, this study aimed to evaluate the association of genetic variants in the TNF pathway with the diagnosis of RA and the response profile to anti-TNF immunobiologics in patients followed in public infusion centers in the state of Bahia, Brazil. In this ambispective cohort study, we used clinical, sociodemographic and genetic data to evaluate the associations of variants in the TNF, TNFRSF1A and TNFRSF1B genes with the diagnosis of RA, standardized scores, laboratory tests and response to treatment with TNFi. 360 healthy controls and 294 patients diagnosed with RA were included. In a subsample, measurements of serum levels of cytokines TNF and IL-6 were performed. Our main results suggest that rs767455-C may play a role in the response to anti-TNF treatment, being related to a better therapeutic response. Additionally, other SNPs such as rs1061622-G and rs1800629-A also seem to interfere with the anti-TNF response profile. Our binary logistic models were able to significantly predict the response to anti-TNFs from a few variables. The rs1800629-A allele and high Visual Analogue Scale scores were shown to be associated with a worse response. Phenotypes such as male sex, use of synthetic medications and seropositive RA seem to contribute to a better response to TNFi treatment. Our results highlight the importance of evaluating the effect of these polymorphisms within the individual's clinical and sociodemographic context with the aim of developing a useful panel in defining clinical approaches in the therapeutic management of RA.

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  • PATRÍCIA MARES DE MIRANDA
  • ASSOCIAÇÃO ENTRE VARIANTES NOS GENES DAS METALOPROTEINASES E PERIODONTITE

  • Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ERICA DEL PELOSO RIBEIRO
  • PAULO JOSE LIMA JUIZ
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • VIVIANE ALMEIDA SARMENTO
  • Data: 05/12/2023

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  • A periodontite é uma doença inflamatória crônica caracterizada pela destruição dos tecidos de sustentação dos dentes e desencadeada pela resposta imune do hospedeiro à presença de um biofilme subgengival disbiótico. Dentre as diversas moléculas produzidas no processo patogênico da periodontite, enzimas proteolíticas, como as metaloproteinases (MMP) têm um papel de destaque na destruição tecidual. Este estudo transversal buscou avaliar a associação de SNV de genes das MMP 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14 e 16 com a periodontite em indivíduos maiores de 18 anos. A genotipagem SNV foi realizada através do Multi Ethnic Global Array. A associação das frequências genotípicas dos SNP de MMP com a periodontite foi investigada por meio de análise bivariada e múltipla, nos modelos aditivo, dominante e recessivo, considerando-se as SNV como exposição e a periodontite como desfecho. Covariáveis relacionadas a características socioeconômico-demográficas, de comportamento de estilo de vida e condições de saúde geral e bucal foram obtidas por meio de um questionário. Além disso, foram analisadas a expressão de locus de traço quantitativo (eQTL) e o desequilíbrio de ligação (LD). Não houve associação de genes das MMP 2, 3, 7, 8, 12,13 e 14 com a periodontite nos modelos testados. Houve associação positiva entre o SNV rs2071230 (G) da MMP-1 e a periodontite no  modelo aditivo (OR=1,42 e IC [95% 1,002-2,03]). Houve associação negativa entre a periodontite e o SNV da MMP-9 rs13925 (alelo A) no modelo dominante (OR=0,56 e IC 95% [0,33-0,95]), e os SNV da MMP-16 rs10097366 (alelo G) no modelo recessivo (OR=0.01; IC 95%=0.01-0.98) e rs6994019 (alelo A) nos modelos aditivo (OR=0.71; IC 95%=0.52-0.97) e recessivo (OR=0.53; IC 95%=0.29-0.95). Foi observada associação positiva com as variantes da MMP-16: rs13261974 (alelo G) nos modelos aditivo (OR=1.42; IC 95%= 1.03-2.00) e dominante (OR=1.67; IC 95%= 1.04-2.70), rs28986473 (alelo G) nos modelos aditivo (OR=2.472; IC 95%= 1.05-5.79) e dominante (OR=2.472; IC 95%= 1.05-5.79) e rs9771895 (alelo A) no modelo recessivo (OR= 1.75; IC 95%= 1.04-2.96). Na comparação in silico da expressão quantitativa em sangue total, o alelo G mostrou uma maior expressão em homozigose do que em heterozigose (p<0,01) para rs13925 da MMP-9. Tanto no gene da MMP-9 quanto no da MMP-16, muitos SNV estavam em alto desequilíbrio de ligação. Variantes em genes da MMP-9 e da MMP-16 aumentam a chance de ocorrência de periodontite. 


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  • Periodontitis is a chronic inflammatory disease characterized by the destruction of tooth-supporting tissues and triggered by the host's immune response to the presence of a dysbiotic subgingival biofilm. Among the various molecules produced in the pathogenic process of periodontitis, proteolytic enzymes, such as metalloproteinases (MMP) play a prominent role in tissue destruction. This cross-sectional study sought to evaluate the association of SNV of MMP 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14 and 16 genes with periodontitis in individuals over 18 years of age. SNV genotyping was performed using the Multi Ethnic Global Array. The association of genotypic frequencies of MMP SNPs with periodontitis was investigated using bivariate and multiple analysis, in additive, dominant and recessive models, considering SNV as exposure and periodontitis as outcome. Covariates related to socioeconomic-demographic characteristics, lifestyle behavior and general and oral health conditions were obtained through a questionnaire. Furthermore, quantitative trait locus (eQTL) expression and linkage disequilibrium (LD) were analyzed. There was no association of MMP 2, 3, 7, 8, 12,13 and 14 genes with periodontitis in the models tested. There was a positive association between MMP-1 SNV rs2071230 (G) and periodontitis in the additive model (OR=1.42 and CI [95% 1.002-2.03]). There was a negative association between periodontitis and the MMP-9 SNV rs13925 (A allele) in the dominant model (OR=0.56 and 95% CI [0.33-0.95]), and the MMP-16 SNV rs10097366 (G allele) in the recessive model (OR=0.01; 95% CI=0.01-0.98) and rs6994019 (A allele) in the additive (OR=0.71; 95% CI=0.52-0.97) and recessive (OR=0.53; CI) models 95%=0.29-0.95). A positive association was observed with the MMP-16 variants: rs13261974 (G allele) in the additive (OR=1.42; 95% CI= 1.03-2.00) and dominant (OR=1.67; 95% CI= 1.04-2.70) models, rs28986473 (G allele) in the additive (OR=2.472; 95% CI= 1.05-5.79) and dominant (OR=2.472; 95% CI= 1.05-5.79) models and rs9771895 (A allele) in the recessive model (OR= 1.75; CI 95%= 1.04-2.96). In the in silico comparison of quantitative expression in whole blood, the G allele showed greater expression in homozygosity than in heterozygosity (p<0.01) for rs13925 of MMP-9. In both the MMP-9 and MMP-16 genes, many SNV were in high linkage disequilibrium. Variants in MMP-9 and MMP-16 genes increase the chance of periodontitis occurring. 

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  • REJANE RODRIGUES SOUZA DOS SANTOS
  • “ASPECTOS DO PAPEL DA PILINA SpaC EM CORYNEBACTERIUM E AVALIAÇÕES IN SILICO EM CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS.”

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • SANDEEP TIWARI
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • VASCO ARISTON DE CARVALHO AZEVEDO
  • Data: 11/12/2023

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  • A linfadenite Caseosa doença de ocorrência mundial que acomete principalmente caprinos e ovinos no Brasil, tem como agente etiológico a Corynebacterium pseudotuberculosis, bactéria gram-positiva que apresenta parede celular com estrutura denominada pili responsável pela adesão e constituída por proteínas pilina, sendo a subunidade SpaC de grande importância na adesão celular, mantendo contato inicial com hospedeiro, além de agrupar epítopos capazes de estimular uma resposta imune contra C. pseudotuberculosis dados confirmados na literatura através de análises in silico, destacando  a importância de utilização deste método.  Ferramentas da bioinformática que caracterizam a análise in silico foram utilizadas nesse estudo com intuito de identificar epítopos da proteína SpaC referente as cepas PA01, NCTC 4681 e NCTC 4656 de C. pseudotuberculosis associados ao MHCI, MHCII e células B, para construção de uma proteína quimérica que proporcione efetiva resposta imunológica. Características como baixo número de domínios transmembrana, presença de domínios citoplasmáticos denominados peptídeos sinais, a identificação de proteínas como transmembranar, extracitoplasmática, análise dos parâmetros físico-químicos e a identificação de aminoácidos em regiões específicas dessas proteínas contribuíram para a seleção dos melhores epítopos na construção de uma proteína quimérica a base de peptídeos que possa ser utilizada no desenvolvimento de uma vacina sintética. A seleção final resultou em 12 epítopos associados ao MHC I e MHCII utilizados para construção da proteína quimérica. De acordo com as análises a proteína se apresentou não-alergênica, com grande potencial antigênico, exibindo parâmetros físico-químicos que garantem a estabilidade do modelo e interação com receptores Toll-like 2 confirmando seu potencial imuno protetor.


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  • Caseous lymphadenitis, a worldwide disease that mainly affects goats and sheep in Brazil, has as its etiological agent Corynebacterium pseudotuberculosis, a gram-positive bacterium that has a cell wall with a structure called pili responsible for adhesion and made up of pilin proteins, with the SpaC subunit being great importance in cell adhesion, maintaining initial contact with the host, in addition to grouping epitopes capable of stimulating an immune response against C. pseudotuberculosis, data confirmed in the literature through in silico analyses, highlighting the importance of using this method. Bioinformatics tools that characterize in silico analysis were used in this study with the aim of identifying epitopes of the SpaC protein referring to strains PA01, NCTC 4681 and NCTC 4656 of C. pseudotuberculosis associated with MHCII, MHCII and B cells, for construction of a chimeric protein that provides an effective immunological response. Characteristics such as a low number of transmembrane helices, the presence of cytoplasmic domains called signal peptides, the identification of proteins such as transmembrane, extracytoplasmic, analysis of physicochemical parameters and the identification of amino acids in specific regions of these proteins contributed to the selection of the best epitopes in the construction of a chimeric peptide-based protein that can be used in the development of a synthetic vaccine. The final selection resulted in 12 epitopes associated with MHC I and MHCII used to construct the chimeric protein. According to the analyses, the protein was non-allergenic, with great antigenic potential, exhibiting physicochemical parameters that guarantee the stability of the model and interaction with Toll-like 2 receptors, confirming its immunoprotective potential.

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  • Raísa Santos Coêlho
  • VARIANTES GENÉTICAS ESTÃO ASSOCIADAS COM OBESIDADE EM UMA POPULAÇÃO DE SALVADOR / GENETIC VARIANTS ARE ASSOCIATED WITH OBESITY IN A POPULATION IN SALVADOR

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CINTIA RODRIGUES MARQUES
  • GISELLE CALASANS DE SOUZA COSTA
  • LEA CRISTINA DE CARVALHO CASTELLUCCI
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 14/12/2023

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  • A obesidade é considerada uma doença crônica, de etiologia multifatorial, caracterizada por inflamação sistêmica de baixo grau, decorrente de alterações na secreção de citocinas/adipocinas, pelo tecido adiposo, e comumente associada à resistência à insulina. A obesidade poligênica, investigada em estudos de GWAS e gene candidato, resulta de efeitos cumulativos em grande número de variantes com consequências individuais modestas. Objetivos: Investigar a contribuição de variantes genéticas para a suscetibilidade de obesidade em uma população miscigenada, através de um estudo de ampla associação genômica (GWAS) e um estudo de gene candidato (genes LEP, LEPR, INS e INSR). MétodosOs estudos foram realizados com 1036 indivíduos (333 eutróficos e 703 com excesso de peso), provenientes do ProAR (Programa para o Controle da Asma na Bahia), para identificar variantes associadas à obesidade. O chip MEGA (Illumina) foi utilizado para a genotipagem. Posteriormente, no GWAS, realizamos imputação com o painel de referência do CAAPA (Consórcio sobre Asma entre Populações com Ancestralidade Africana). As análises foram realizadas no software Plink. Realizamos análises in silico no GTex, RegulomeDB, Ensembl, Haploreg e Var Elect Phenotyper. Além disso, 11 citocinas (Eotaxina, IFNγ, IL-10, IL-6, IL-12, IL-13, IL-17A, IL-1β, IL-5, IL-8 e TNFα) foram quantificadas no sangue periférico, em uma subamostra (n=657), e relacionadas com os genótipos das variantes associadas ao estudo GWAS. Resultados: No GWAS, trinta e cinco variantes foram sugestivamente associadas (5 x 10-8 < valor de p < 1 x 10-5) ao excesso de peso. O cromossomo 4 reuniu os principais genes associados ao desfecho (SPON2RNF212, COL4A3, TMED11P e PCSK2), expressos no tecido adiposo. Além destes, uma variante no gene ZZEF1, no cromossomo 17. As variantes rs10014526-T (OR 0.44 ; IC95%: 0.32 - 0.60) e rs77703123-T (OR 0.44 ; IC 95% : 0.32 - 0.60), no TMED11P apresentam elevado desequilíbrio de ligação (LD) com variantes no SPON2, rs75448245-G (OR 0.43 ; IC 95% : 0.31 - 0.60), rs11538062-T (OR 0,44 ; IC 95% : 0.32 - 0.61) e rs75654334-T (OR 0.44 ; IC 95% 0.32 – 0.60) e no COL4A3, rs13419630-A (OR 0.42 ; IC 95% 0.30 – 0.59). A variante rs781851-G, no gene ZZEF1, ao contrário das anteriores, associou-se positivamente com o desfecho (OR 1.70; IC95% 1.38 – 2.10). Os alelos polimórficos foram associados às citocinas IL-6, IL-10 e IL-12. No estudo de gene candidato, a associação foi investigada entre variantes nos genes LEP, LEPR, INS e INSR. A variante rs10954174-A, no gene LEP, foi positivamente associada ao excesso de peso (OR 1.74; IC 95% 1.06 – 2.87), assim como 10 das 11 variantes observadas no gene  do receptor da leptina (LEPR), com exceção do rs113424381-T (OR 0.53; IC 95% 0.30 – 0.93), negativamente associado ao desfecho. No gene da insulina (INS), apenas uma variante passou pelo controle de qualidade adotado e não se associou ao desfecho. Enquanto no gene do receptor (INSR), seis variantes foram associadas ao excesso de peso, apenas duas ao risco: rs148418658-G (OR 3.33; IC 95% 1.12 – 9.87) e rs10427021-C (OR 1.32; IC 95% 1.02 – 1.70). Conclusões: Nossa pesquisa sugere que genes associados ao excesso de peso, especialmente o SPON2, no GWAS, e os receptores para leptina (LEPR) e insulina (INSR), no estudo de gene candidato, apresentaram associação com o desfecho de obesidade, o que indica  possível relação com disfunções metabólicas que caracterizam a mesma, a serem investigadas. Nosso estudo apresenta algumas associações inéditas e pode contribuir para a medicina de precisão no tratamento da obesidade. 

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  • Obesity is considered a chronic disease, with multifactorial etiology, characterized by low-grade systemic inflammation, resulting from changes in the secretion of cytokines/adipokines, by adipose tissue, and commonly associated with insulin resistance. Polygenic obesity, investigated in GWAS and candidate gene studies, results from cumulative effects on large numbers of variants with modest individual consequences. Objectives: To investigate the contribution of genetic variants to obesity susceptibility in an admixed population, through a genome-wide association study (GWAS) and a candidate gene study (genes LEP, LEPR, INS and INSR genes). Methods: The studies were carried out with 1036 individuals (333 eutrophic and 703 overweight), from ProAR (Program for Asthma Control in Bahia), to identify variants associated with obesity. The MEGA chip (Illumina) was used for genotyping. Subsequently, in GWAS, we performed imputation with the CAAPA (Consortium on Asthma among Populations with African Ancestry) reference panel. Analyzes were performed using Plink software. We performed in silico analyzes in GTex, RegulomeDB, Ensembl, Haploreg and Var Elect Phenotyper. Furthermore, 11 cytokines (Eotaxin, IFNγ, IL-10, IL-6, IL-12, IL-13, IL-17A, IL-1β, IL-5, IL-8 and TNFα) were quantified in peripheral blood, in a subsample (n=657), and related to the genotypes of the variants associated with the GWAS study. Results: In GWAS, thirty-five variants were suggestively associated (5 x 10-8 < p-value < 1 x 10-5) with excess weight. Chromosome 4 brought together the main genes associated with the outcome (SPON2, RNF212, COL4A3, TMED11P and PCSK2), expressed in adipose tissue. In addition to these, a variant in the ZZEF1 gene, on chromosome 17. The variants rs10014526-T (OR 0.44; 95% CI: 0.32 - 0.60) and rs77703123-T (OR 0.44; 95% CI: 0.32 - 0.60), in TMED11P present elevated linkage disequilibrium (LD) with variants in SPON2, rs75448245-G (OR 0.43; 95% CI: 0.31 - 0.60), rs11538062-T (OR 0.44; 95% CI: 0.32 - 0.61) and rs75654334-T (OR 0.44; 95% CI 0.32 – 0.60) and in COL4A3, rs13419630-A (OR 0.42; 95% CI 0.30 – 0.59). The rs781851-G variant, in the ZZEF1 gene, unlike the previous ones, was positively associated with the outcome (OR 1.70; 95% CI 1.38 – 2.10). The polymorphic alleles were associated with the cytokines IL-6, IL-10 and IL-12. In the candidate gene study, the association was investigated between variants in the LEP, LEPR, INS and INSR genes. The rs10954174-A variant, in the LEP gene, was positively associated with excess weight (OR 1.74; 95% CI 1.06 – 2.87), as were 10 of the 11 variants observed in the leptin receptor (LEPR) gene, with the exception of rs113424381 -T (OR 0.53; 95% CI 0.30 – 0.93), negatively associated with the outcome. In the insulin gene (INS), only one variant passed the adopted quality control and was not associated with the outcome. While in the receptor gene (INSR), six variants were associated with excess weight, only two with risk: rs148418658-G  (OR 3.33; 95% CI 1.12 – 9.87) and rs10427021-C (OR 1.32; 95% CI 1.02 – 1.70). Conclusions: Our research suggests that genes associated with excess weight, especially SPON2, in the GWAS, and the leptin (LEPR) and insulin (INSR) receptors, in the candidate gene study, were associated with the outcome of obesity, which indicates a possible relationship with metabolic dysfunctions that characterize it, to be investigated. Our study presents some novel associations and may contribute to precision medicine in the treatment of obesity.
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  • Rebeca Pereira Bulhosa Santos
  • AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA DE OSTEOBLASTOS PRODUZIDOS EM BIOMATERIAIS (ABS M30i, PC-ISO, PLA)

  • Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCAS NOVAES TEIXEIRA
  • Antonio Pedro Fróes de Farias
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • VIVIANE ALMEIDA SARMENTO
  • Data: 15/12/2023

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  • Algumas lesões orofaciais estão relacionadas à perda da continuidade óssea e, consequentemente, a danos estruturais e funcionais que prejudicam a qualidade de vida. A produção de tecidos biológicos a partir de culturas celulares é sugerida como estratégia auxiliar para cirurgias reconstrutivas orofaciais, porém, a eficácia da técnica depende de uma estrutura de suporte que oriente a formação de tecidos funcionais de acordo com o leito receptor. Nesse contexto, foi investigada a assinatura de expressão gênica de células osteoblásticas (SAOS-2) cultivadas em matrizes rígidas produzidas com impressora tridimensional. Para isso, os osteoblastos cultivados em scaffolds de policarbonato de ácido polilático (PLA), acrilonitrila-butadieno-estireno (ABS M30i) e Policarbonato-ISO (PC-ISO) foram avaliados pelo sistema Array Real Time PCR para determinar a expressão de genes relacionados à diferenciação osteoblástica, mineralização óssea, ossificação, fatores de crescimento e fatores de transcrição envolvidos na inflamação e cicatrização. Os resultados obtidos revelaram que os arcabouços de ABS-M30i, com destaque nos genes bmp5, bmp6, col9A2, col11A1, spp1, Ibsp, fgf2, vegfA, smad4, smad9, runx2 / bmpr1A, fgfr1 e Igfr1, de PCISO com destaque nos genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, Ibsp, fgf2, vegfa, smad1, runx2, bmPr1a e Fgfr e do PLA destacando-se os genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, spp1, minpp1, ibsp, fgf2, tgfb2, smad1, smad5, smad4, bmpr1 e fgr1, permitem a expressão de grande parte de genes responsáveis pela formação óssea in vitro, no entanto o PLA parece ter permitido a expressão de forma mais exuberante nos genes que foram destacados, e o PC-ISO permitiu uma resposta global mais uniforme. Assim, a utilização dos três biomateriais na engenharia tecidual torna-se promissora.


  • Mostrar Abstract
  • Some orofacial injuries are related to the loss of bone continuity and, consequently, to structural and functional damage that impair quality of life. The production of biological tissues from cell cultures is suggested as an auxiliary strategy for orofacial reconstructive surgeries, but the effectiveness of the technique depends on a support structure that guides the formation of functional tissues according to the receptor bed. In this context, the gene expression signature of osteoblastic cells (SAOS-2) cultured on rigid matrices produced with a three-dimensional printer was investigated. To this end, osteoblasts cultured on polylactic acid polycarbonate (PLA), acrylonitrilebutadiene-styrene (ABS M30i) and Polycarbonate-ISO (PC-ISO) scaffolds were evaluated by Array Real time PCR system to determine the expression of genes related to osteoblastic differentiation, bone mineralization, ossification, growth factors, and transcription factors involved in inflammation and healing. The results obtained showed that the ABS-M30i scaffolds, with emphasis on the genes bmp5, bmp6, col9A2, col11A1, spp1, Ibsp, fgf2, vegfA, smad4, smad9, runx2 / bmpr1A, fgfr1 and Igfr1, the PC-ISO with emphasis on in the genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, Ibsp, fgf2, vegfa, smad1, runx2, bmPr1a and Fgfr and the PLA, highlighting the genes bmp5, bmp6, col19A1, col11A1, cfs2, spp1, minpp1, ibsp, fgf2 , tgfb2, smad1, smad5, smad4, bmpr1 and fgr1, allow the expression of a large number of genes responsible for bone formation in vitro, however, PLA seems to have allowed more exuberant expression in the genes that were highlighted, and PC-ISO allowed a more uniform overall response. Thus, the use of the three biomaterials in tissue engineering becomes promising. 

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  • CAIO LOPES BORGES ANDRADE
  • Uso de Aprendizado de Máquina na identificação de plasmócitos em lâminas de aspirado de medula óssea de casos de Mieloma Múltiplo

  • Orientador : SONGELI MENEZES FREIRE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • EDVAN DE QUEIROZ CRUSOE
  • JOÃO PAULO PEREIRA DE SÁ CANÁRIO
  • MARINHO MARQUES DA SILVA NETO
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SONGELI MENEZES FREIRE
  • Data: 20/12/2023

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  • O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica ocasionada por uma proliferação desregulada dos plasmócitos na medula óssea, que atinge geralmente pacientes com idades superiores aos 50 anos. Atualmente é a 2o oncohematologia mais frequente e responsável por 1% dos tipos de câncer no mundo. Para o estadiamento do mieloma os médicos responsáveis devem seguir os critérios do Sistema de Estadiamento Internacional (ISS), sendo o mielograma apresentando a infiltração de plasmócitos (>10%) um método observador dependente e que consome tempo considerável do profissional médico hematologista. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e treinar uma Inteligência Artificial para identificação de Plasmócitos e células nucleadas Não Plasmocitárias em lâmina de Medula Óssea de pacientes com diagnóstico de Mieloma Múltiplo. O setor de Imunofenotipagem do Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular (LABIMUNO-UFBA) disponibilizou lâminas de medula óssea codificadas de portadores de MM. A partir destas, foi realizada a aquisição das imagens por meio de aparelho celular acoplado ao microscópio para produção de banco digital de imagens. As imagens foram rotuladas com marcação de plasmócitos e outros grupos de células. As rotulações foram validadas por médicos e especialistas em hematologia. As imagens do banco passaram por processo de normalização para obter um padrão que facilitasse a visão computacional. Por fim, as imagens alimentaram o aprendizado profundo de máquina para desenvolvimento de IA. Com isso, foi possível obter um banco de imagens digital de lâminas de medula óssea de indivíduos com diagnóstico de MM, contendo imagens de plasmócitos e outros grupos celulares nucleados devidamente rotulados, que permitiu o avanço do projeto que inclui o desenvolvimento de uma IA com capacidade de identificação de plasmócitos e outros grupos celulares nucleados em imagens de lâmina de medula óssea. Uma IA com esta proposta poderá auxiliar a equipe médica na avaliação morfológica e quantitativa de células para o diagnóstico microscópico mais efetivo.


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  • Multiple myeloma (MM) is a hematological neoplasm caused by dysregulated regulation of plasma cells in the bone marrow, which generally affects patients over 50 years of age. It is currently the 2nd most common oncohematology and responsible for 1% of cancer types in the world. To stage myeloma, responsible physicians must follow the criteria of the International Staging System (ISS), with the myelogram showing plasma cell infiltration (>10%) being an observer-dependent method that takes specific time for the hematologist. The present study aims to develop and train Artificial Intelligence to identify Plasmocytes and Non-Plasmocyte nucleated cells in Bone Marrow slides from patients diagnosed with Multiple Myeloma. The Immunophenotyping sector of the Laboratory of Immunology and Molecular Biology (LABIMUNO-UFBA) made available coded bone marrow slides from MM carriers. As of today, images were acquired using a cell phone adapted specifically for the production of digital image banks. The images were labeled with plasma cells and other cell groups. The labels were validated by doctors and hematology experts. The stock images went through a normalization process to obtain a standard that facilitated computer vision. Ultimately, the images fed deep machine learning for AI development. With this, it was possible to obtain a bank of digital images of bone marrow slides from individuals diagnosed with MM, containing images of plasma cells and other properly labeled nucleated cell groups, which allowed the advancement of the project, which includes the development of an AI with capacity identification of plasma cells and other nucleated cell groups in bone marrow slide images. An AI with this proposal could assist the medical team in the morphological and quantitative evaluation of cells for a more effective microscopic diagnosis.

2022
Dissertações
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  • WASHINGTON SANTOS ANTUNES
  • Avaliação da atividade imunomoduladora do extrato etanólico de Physalis angulata em cultura de linhagem PC12

  • Orientador : ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANGELA CRISTINA DE OLIVEIRA LIMA
  • ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • LUCIANA DOS SANTOS FREITAS
  • Data: 06/07/2022

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  • Physalis angulata é uma planta que pode ser encontrada em regiões tropicais e subtropicais, onde é utilizada na medicina popular para o tratamento de inúmeras enfermidades. Diversos estudos utilizando diferentes componentes da P. angulata comprovaram ação antiinflamatória, antiparasitária, antioxidante e protetora. Diante disso, o presente trabalho buscou avaliar os efeitos do extrato etanólico bruto de P. angulata (EEPA) em culturas de células da linhagem PC12. O EEPA foi produzido a partir dos caules de P. angulata. A citotoxicidade de diferentes concentrações do EEPA foi determinada através do ensaio MTT. Para avaliar a morfologia celular e proliferação celular foi utilizado o corante Rosenfeld. O software ImageJ v.1.53e foi utilizado para realizar a contagem das células. Para verificar a resposta imunológica foram analisados os níveis de óxido nítrico, determinados pela mensuração do nitrito pelo método de Griess. Os resultados foram analisados pelo programa estatístico GraphPadPrism 7.0 e os dados foram expressos em média ± desvio padrão da média dos parâmetros avaliados. O tratamento com EEPA nas concentrações 0,5; 1; 5 μg/mL sugerem que não houveram citotoxicidade ou redução do número de células PC12. O extrato provocou alterações morfológicas nas células em todas as concentrações, sendo a mais perceptível a contração do corpo celular. A produção de NO foi reduzida em todas as concentrações, principalmente na concentração 0,5μg/mL. Os dados obtidos no nosso trabalho sugerem que o EEPA pode modular negativamente a produção de NO e alterar a morfologia de células PC12.


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  • Physalis angulata is a plant that can be found in tropical and subtropical regions,where it is used in folk medicine for the treatment of numerous diseases. Several studies using different components of P. angulata proved anti-inflammatory, antiparasitic, antioxidant and protective action. Therefore, the present work sought to evaluate the effects of the crude ethanolic extract of P. angulata (EEPA) in cell cultures of the PC12 lineage. EEPA was produced from the stems of P. angulata. The cytotoxicity of different concentrations of EEPA was determined using the MTT assay. To evaluate cell morphology and cell proliferation, Rosenfeld dye was used. ImageJ v.1.53e software was used to count the cells. To verify the immune response, nitric oxide levels were analyzed, determined by measuring nitrite using the Griess method. The results were analyzed by the statistical program GraphPadPrism 7.0 and the data were expressed as mean ± standard deviation of the mean of the evaluated parameters. Treatment with EEPA at concentrations 0.5; 1; 5 μg/mL suggest that there was no cytotoxicity or reduction in the number of PC12 cells. The extract caused morphological changes in cells at all concentrations, the most noticeable being the contraction of the cell body. NO production was reduced at all concentrations, mainly at 0.5μg/mL. The data obtained in our work suggest that EEPA can negatively modulate NO production and change the morphology of PC12 cells.

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  • NATÁLIA MICHELLY BRANDÃO MENDONÇA
  • EFEITO DO ANTÍGENO Sm29 DO SCHISTOSOMA MANSONI NA INFECTIVIDADE DE MACRÓFAGOS PELA LEISHMANIA BRAZILIENSIS

  • Orientador : NESTOR ADRIAN GUERRERO GUTIERREZ
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
  • NESTOR ADRIAN GUERRERO GUTIERREZ
  • SILVANE MARIA BRAGA SANTOS
  • Data: 12/07/2022

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  • A leishmaniose é uma doença endêmica na América do Sul e Central, África e Ásia, causada por uma variedade de espécies de parasitos do gênero Leishmania. Atualmente, 88 países de clima tropical e sub-tropical são afetados pela leishmaniose, sendo somente em 32 desses países a doença considerada de notificação compulsória, tendo assim um número substancial de casos não reportados. A resposta imune para este parasito é do tipo Th1, que é importante para ativação dos macrófagos e eliminação da Leishmania, mas também é a principal responsável pela patogênese da doença tegumentar, principalmente no que se refere à lesão tecidual. Por outro lado, antígenos derivados de parasitos com potencial modulatório da resposta imune, a exemplo do antígeno Sm29 do Schistosoma mansoni, vêm sendo avaliados quanto ao potencial em regular a exacerbação da resposta imune em doenças imuno-mediadas.  O objetivo deste estudo é avaliar o efeito do antígeno do S. mansoni Sm29 na infectividade de macrófagos derivados de monócitos in vitro infectados com L. braziliensis e analisar a secreção de citocinas e quimiocinas. Como resultado, foi observado que a adição do antígeno Sm29 só alterou a infectividade dos macrófagos pela L. Braziliensis quando adicionado antes da infecção. Foi visto também que no sobrenadante a produção das citocinas TNF e IL-10 e das quimiocinas CXCL9 e CXCL10 não tiveram alteração nas culturas infectadas e estimuladas com Sm29. Os resultados sugerem que o efeito regulatório já conhecido induzido pela proteína Sm29 em induzir a produção IL-10, não ocorreu nas fases iniciais da infecção dos macrófagos por L. Braziliensis, possivelmente precisando do envolvimento de outras células do sistema imune ou uma ativação prévia à infecção. 


  • Mostrar Abstract
  • Leishmaniasis is an endemic disease in South and Central America, Africa and Asia, caused by a variety of species of parasites of the genus Leishmania. Currently, 88 countries with tropical and subtropical climates are affected by leishmaniasis, and only 32 of these countries the notification is compulsory, leading to a substantial number of unreported cases. The immune response generated against this parasite is a Th1 type response, which is important for the activation of macrophages and elimination of Leishmania. However, is also the main responsible for the pathogenesis of the integumentary disease, especially regarding tissue damage. On the other hand, antigens derived from parasites with potential to modulate the immune response, such as the Sm29 antigen of Schistosoma mansoni, have been evaluated for their potential to regulate the exacerbation of the immune response in immune-mediated diseases. The objective of this study is to evaluate the effect of the S. mansoni Sm29 antigen on the infectivity of macrophages derived from monocytes in vitro infected with L. braziliensis and to analyze the secretion of cytokines and chemokines. As a result, it was observed that the addition of Sm29 antigen only did change the infectivity of macrophages by L. braziliensis when added before infection. It was also found that the production of the cytokines TNF and IL-10 and of the chemokines CXCL9 and CXCL10 did not change in the cultures infected and stimulated with Sm29. The results suggest that the already known regulatory effect induced by the Sm29 protein in inducing IL-10 production did not occur in the early stages of infection of macrophages by L. braziliensis, possibly requiring the involvement of other cells of the immune system or a previous activation before infection.  
    Keywords: Macrophages. Sm29. Leishmaniasis. Leishmania braziliensis 

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  • LUAN SANTANA MOREIRA
  • Indução da resposta imune humoral de ovinos pela associação de bacterina e proteínas recombinantes para o controle da linfadenite caseosa

  • Orientador : SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARCOS DA COSTA SILVA
  • RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • Data: 27/07/2022

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  • Corynebacterium pseudotuberculosis é o patógeno causador da linfadenite caseosa (LC), uma doençinfecciosa que acomete principalmente pequenos ruminantes, associada perdas econômicas nos rebanhos em todo mundo, inclusive no Brasil. A LC leva a formação de lesões granulomatosas nos linfonodos e órgãos internos. A imunização do rebanho é uma das estratégias mais utilizadas no controle da infecção e disseminação, porém as formulações vacinas disponíveis até o momento não conferem níveis adequados de imunoproteção. O objetivo do trabalho é avaliar o potencial imunomodulador de antígenos de C. pseudotuberculosis associado com bacterina desse patógeno e o adjuvante Montanide. Quatro antígenos recombinantes foram produzidos em sistema heterólogo purificadas por cromatografia de afinidade. Nove ovinos foram randomicamente divididos em trêgrupos foram imunizados com: Grupo (controle)  Cepa T1 inativada adjuvante Montanide (T1M); Grupo  rSpaC, rSodC, rPLD e T1M; Grupo 3 – rNanH, rSodC, rPLD e T1M. Os animais foram acompanhados por 240 dias, ocorrendo o desafio dos animais no dia 90, realizando coletas periódicas de sangue. A avaliação da resposta humoral foi feita através de ELISA, e a avaliação da resposta celular foi feita através da quantificação de interferon gama (IFN-y). As proteínas rSodC, rNanH e rPLD  foram capazes de induzir uma resposta imune humoral após a primeira e a segunda dose dos imunizantes e após o desafio, se mantendo constante até o final do experimento. Entretanto, não foi possível identificar nenhuma diferença estatística na resposta imune celular entre os grupos estudados e nem conferiu proteção contra C. pseudotuberculosisApesar de modular uma resposta imune humoral, as formulações vacinais não foram capazes de conferir proteção total contra as ovelhas, indicando a necessidade de novos estudos para melhorar a eficácia de vacinas baseadas em subunidades.


  • Mostrar Abstract
  • Corynebacterium pseudotuberculosis is the pathogen that leads to caseous lymphadenitis (CLA), an infectious disease that mainly affects small ruminants, associated with economic losses in herds all over the world, including Brazil. CLA leads to the formation of granulomatous lesions in lymph nodes and internal organs. Herd immunization is one of the most used strategies to control infection and spread, but the vaccine formulations available so far do not provide adequate levels of immune protection. The objective of this work is to evaluate the immunomodulatory potential of C. pseudotuberculosis antigens associated with the bacterin of this pathogen and the adjuvant Montanide. Four recombinant antigens were produced in a heterologous system purified by affinity chromatography. Nine sheep were randomly divided into three groups and immunized with: Group 1 (control) – inactivated T1 strain and Montanide adjuvant (T1M); Group 2 – rSpaC, rSodC, rPLD and T1M; Group 3 – rNanH, rSodC, rPLD and T1M. The animals were followed for 240 days, with the animals being challenged on day 90, performing periodic blood collections. The evaluation of the humoral response was done through ELISA, and the evaluation of the cellular response was done through the quantification of interferon gamma (IFN-y). The rSodC, rNanH and rPLD proteins were able to induce a humoral immune response after the first and second doses of the vaccine and after the challenge, remaining constant until the end of the experiment. However, it was not possible to identify any statistical difference in the cellular immune response between the studied groups, nor did it confer protection against C. pseudotuberculosis. Despite modulating a humoral immune response, the vaccine formulations were not able to provide full protection against sheep, indicating the need for further studies to improve the efficacy of subunit-based vaccines.

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  • AUREA MARIA ALVES NUNES ALMEIDA
  • INVESTIGAÇÃO DO PAPEL DE RECEPTORES DE GLICOCORTICOIDE EM CÉLULAS GLIAIS NA SINALIZAÇÃO DE AGATHISFLAVONA EM MODELO IN VITRO DE NEUROINFLAMAÇÃO

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RODRIGO PORTES URESHINO
  • SILVIA LIMA COSTA
  • SUZANA TELLES DA CUNHA LIMA
  • Data: 29/08/2022

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  • A neuroinflamação é característica de doenças neurodegenerativas, resultante da liberação de moléculas pró-inflamatórias por células gliais. Receptores nucleares, como o receptor de glicocorticoide (GR), são fatores de transcrição com ampla variedade de efeitos, incluindo efeito regulatório na neuroinflamação. GR é um dos principais fatores de transcrição regulatórios e seu maior nível de expressão é no sistema nervoso central. O biflavonoide agathisflavona é um dímero de apigenina, ambos com ação neurogênica, neuroprotetora e anti-inflamatória demonstradas em modelos in vitro de toxicidade induzida por glutamato e isquemia cerebral. Entretanto, seus mecanismos de ação ainda são pouco elucidados. O objetivo deste estudo foi investigar se a ação anti-inflamatória de agathisflavona é mediada por GR. Foi utilizado modelo in vitro de neuroinflamação induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em cultura primária de astrócitos e microglia corticais de ratos neonatos. As células foram tratadas com LPS (1 μg/mL), associado ou não a agathisflavona (1 μM), e na presença ou não de mifepristona (RU486; 1 μM), antagonista de GR. O perfil inflamatório microglial, foi avaliado por imunofluorescencia para molécula adaptadora ionizada de ligação ao cálcio (Iba-1), marcador microglial no sistema nervoso e para CD68, marcador de perfil pró-inflamatório microglial. O perfil inflamatório astrocitário foi avaliado por imunofluorescência e Western Blot para a proteína ácida fibrilar glial (GFAP). A ramificação microglial foi aumentada em resposta ao tratamento com agathisflavona, efeito inibido na presença de mifepristona. A expressão de CD68 foi reduzida em resposta ao mesmo tratamento, efeito inibido na presença de mifepristona. A expressão relativa de GFAP foi reduzida em resposta ao tratamento com agathiflavona, efeito inibido na presença de mifepristona. Estes resultados sugerem que agathisflavona modula a o perfil inflamatório microglial e astrocitário de forma dependente da atividade de GR após estímulo inflamatório, contribuindo para elucidação de seu mecanismo de ação molecular.


  • Mostrar Abstract
  • Neuroinflammation underlies neurogenerative diseases and results from release of pro- inflammatory factors by glial cells. Nuclear receptors, such as glucocorticoid receptor (GR), are transcription factors with a wide variety of effects, including regulatory on neuroinflammation. GR is one of the main regulatory transcription factors and its highest expression is in the central nervous system. The biflavonoid agathisflavone is a dimer of apigenin. Agathisflavone has neurogenic, neuroprotective and regulatory actions demonstrated in in vitro models of glutamate-induced toxicity, mechanical injury, as well as ex vivo remyelination and myelination studies. These studies have demonstrted that agathisflavone relies on estrogen receptor (ER) activity to exert its aforementioned effects. However, ataghisflavone’s mechanisms still need further ellucidation. The aim of this study was to investigate whether the regulatory action of agathisflavone is mediated by GR activity. An in vitro model of lipopolysaccharide (LPS) induced neuroinflammation in primary culture of astrocytes and microglia from neonatal rats was used. Cells were treated with LPS (1 μg/mL), associated or not with agathisflavone (1 μM), and in the presence or absence of mifepristone (RU486; 1 μM), a GR antagonist. Microglial inflammatory profile was evaluated by immunofluorescence against calcium-binding ionized adapter molecule (Iba-1), a microglial marker in the nervous system, and for CD68, a marker of microglial pro- inflammatory profile. The astrocytic inflammatory profile was evaluated by immunofluorescence and Western Blot against glial fibrillary acidic protein (GFAP). Microglial branching was increased in response to treatment with agathisflavone, an effect inhibited in the presence of mifepristone. CD68 expression was soon in response to the same treatment, effect of the presence of mifepristone. The relative GFAP was made in response to treatment with aga expression, an effect inhibited in the presence of mifepristone. These results suggest that agathisflavone attenuates microglial and astrocytic proinflammatory profile in a dependent manner of GR activity during inflammatory stimulus. These results contribute to elucidate the molecular mechanism of agathisflavone.

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  • BRENDA VALERIO SOUZA
  • AVALIAÇÃO DOS EFEITOS CITOTÓXICOS E ANTITUMORAIS DO EXTRATO ETANÓLICO DE Physalis angulata L. EM CÉLULAS DE LINHAGEM TUMORAL C6 DE GLIOBLASTOMA

  • Orientador : ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • ALEXSANDRO BRANCO
  • ANIBAL DE FREITAS SANTOS JUNIOR
  • Data: 14/12/2022

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  • Os glioblastomas são tumores cerebrais de células gliais de alto grau que apresentam um prognóstico ruim. Possuem grande capacidade de migração, proliferação e invasão ao tecido cerebral, o que reduz as chances de sucesso do tratamento. Novos alvos terapêuticos são estudados a fim de aumentar a eficácia dos tratamentos e diminuir efeitos colaterais. Análise e prospecção de metabólitos secundários de plantas são estudados surgindo como uma possibilidade no desenvolvimento de novas terapias. Physalis angulata L. é uma espécie vegetal rica em componentes químicos e promissora para a indústria farmacêutica. Possui dentre muitos benefícios comprovados, a ação antitumoral e citotóxica promovida pelas fisalinas e rutina. O objetivo deste trabalho foi estudar a ação do extrato etanólico de Physalis angulata L. (EEPA) em células de linhagem tumoral C6 de glioblastoma murino. Como metodologia, a citotoxicidade foi avaliada por MTT. O óxido nítrico foi dosado pelo método de Griess. A migração celular foi analisada a partir do ensaio de migração. A morfologia celular foi avaliada por imunocitoquímica com imunomarcação de EGFR e método de coloração Rosenfeld. A expressão de proteínas foi avaliada pelo método western blotting. A capacidade de restauração tecidual foi analisada pelo ensaio de migração celular. Os resultados foram analisados pelo programa estatístico Graphpad Prism 8.10 e os dados foram expressos em média ± erro padrão da média dos parâmetros analisados. Como resultados, notou-se através do ensaio de MTT, que o EEPA foi citotóxico acima da concentração 5 μg/mL, sendo então escolhidas as concentrações 0,5 μg/mL, 1 μg/mL e 2,5 μg/mL para modulação dos experimentos seguintes. Na análise da expressão do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) por imunocitoquímica, houve a diminuição da expressão do EGFR nas concentrações 1 μg/mL e 2,5 μg/mL. Já no Rosenfeld, nas concentrações 1 μg/mL e 2,5 μg/mL tivemos uma quantidade menor de células e presença de prolongamentos menores e mais finos, e corpo celular menor quando comparado aos controles. O western blotting demonstrou uma menor expressão do EGFR nas concentrações testadas quando comparado ao controle. O ensaio de migração demonstrou capacidade inibitória do composto na migração celular. Os resultados obtidos neste estudo podem indicar capacidade citotóxica, redução da expressão e da capacidade migratória das células C6 quando moduladas com o EEPA


  • Mostrar Abstract
  • Glioblastomas are high grade glial cell brain tumors that have a poor prognosis. They have a great capacity for migration, proliferation and invasion into brain tissue, which reduces the chances of treatment success. New therapeutic targets are studied in order to increase the efficacy of treatments and decrease side effects. Analysis and prospection of plant secondary metabolites are being studied as a possibility in the development of new therapies. Physalis angulata L. is a plant species rich in chemical components and promising for the pharmaceutical industry. It has, among many proven benefits, the antitumor and cytotoxic action promoted by physalins and rutin. The objective of this work was to study the action of Physalis angulata L. ethanolic extract (EEPA) on murine glioblastoma C6 tumor cells. As methodology, cytotoxicity was evaluated by MTT. Nitric oxide was dosed by Griess method. Cell migration was analyzed from migration assay. Cell morphology was evaluated by immunocytochemistry with EGFR immunolabeling and Rosenfeld staining method. Protein expression was evaluated by western blotting method. The ability of tissue restoration was analyzed by cell migration assay. The results were analyzed by Graphpad Prism 8.10 statistical program and the data were expressed as mean ± standard error of the mean of the analyzed parameters. As results, it was noted through the MTT assay that EEPA was cytotoxic above the concentration 5 μg/mL, so the concentrations 0.5 μg/mL, 1 μg/mL and 2.5 μg/mL were chosen for modulation of the following experiments. In the analysis of epidermal growth factor receptor (EGFR) expression by immunocytochemistry, there was a decrease in EGFR expression at concentrations 1 μg/mL and 2.5 μg/mL. In the Rosenfeld test, at concentrations 1 μg/mL and 2.5 μg/mL, we had fewer cells and the presence of smaller and thinner stretches and a smaller cell body when compared to controls. Western blotting demonstrated a lower expression of EGFR at the tested concentrations when compared to the control. The migration assay demonstrated an inhibitory capacity of the compound on cell migration. The results obtained in this study may indicate cytotoxic capacity, reduced expression and migratory capacity of C6 cells when modulated with EEPA.

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  • JANAINA RIBEIRO PEREIRA SOARES
  • Avaliação de atividade antioxidante e antineuroinflamatória de flavonoides e derivados de síntese em células gliais

  • Orientador : JUCIELE VALERIA RIBEIRO DE OLIVEIRA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JUCIELE VALERIA RIBEIRO DE OLIVEIRA
  • CLARISSA DE SAMPAIO SCHITINE
  • MARGARETE ZANARDO GOMES
  • Data: 16/12/2022

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  • Os astrócitos participam ativamente da regulação redox no cérebro. O desequilíbrio entre a superprodução de espécies reativas e mecanismos antioxidantes, pode resultar na astrogliose reativa. A astrogliose associada ao estresse oxidativo, pode promover mudanças na morfologia e na função celular, redução da atividade enzimática e aumento de citocinas e mediadores inflamatórios. Nesse contexto, os flavonoides, que possuem propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, são candidatos promissores para o estudo de terapias adjuvantes em doenças que tem como fisiopatologia o estresse oxidativo. Este trabalho avaliou, in vitro, a citotoxicidade e atividade antioxidante de flavonoides e derivados de síntese (naringenina, (S) – naringenina, 7,4’-O-diprenilnaringenina, (S)-7,4’-O-diprenilnaringenina, 7-O-prenilnaringenina, naringina, hesperidina, crisina, apigenina e rhoifolina), associados ao controle da resposta inflamatória glial. A atividade antioxidante celular dos flavonoides e derivados de síntese (1, 10 e 50μM por 15min) foi determinada pela reação de eliminação do radical livre 2,2-difenil-1-picril-hidrazil (DPPH). Hesperidina e o derivado diprenilado (S)-7,4’-O-diprenilnaringenina apresentaram maiores potenciais antioxidantes e naringenina e seus demais derivados prenilados apresentaram atividade antioxidante moderada após este teste livre de células em reação de 15min. Foram utilizadas culturas primárias de glia enriquecidas de astrócitos derivadas de ratos Wistar neonatos (P0-P2) expostas ao lipopolissacarídeo (LPS, 1 µg/mL por 24 h) e tratadas com as moléculas (5 ou 10 µM por 24 h). Observou-se efeito antioxidante através do aumento dos níveis de GSH, promovidos pela naringenina e seus derivados, através do teste de depleção da glutationa com o monoclorobimano após tratamentos (5 µM por 24 h). Nos níveis enzimáticos de SOD, LPS e crisina aumentaram SOD e demais moléculas não interferiram nos níveis enzimáticos. Através do teste de citotoxicidade (MTT) foi demonstrado que o derivado prenilado 7-O-prenilnaringenina (1, 10 e 50 e 100μM por 24 h) foi o mais citotóxico para as células proliferativas de GL15 (humana) e C6 (murino), no entanto sem apresentar toxicidade e mudanças morfológicas para as células da cultura primária de glia enriquecida de astrócitos. Na coloração de Rosenfeld apigenina e crisina (10 µM por 24 h), induziram mudanças morfológicas como retração do citoplasma e núcleo das células da cultura primária de glia enriquecida de astrócitos e demais moléculas atenuaram mudanças morfológicas promovidas pelo LPS (1 µg/mL) quando em tratamento concomitante. Além disso, os flavonoides e derivados de síntese (10 µM, 24 h) promoveram redução dos níveis de óxido nítrico (NO) e não induziram produção de NO em tratamento isolado. Juntos, esses achados indicam que flavonoides e derivados de síntese têm capacidade antioxidante e antineuroinflamatória significativas, in vitro, podendo ser aliados como candidatos a tratamentos adjuvantes em doenças neurodegenerativas


  • Mostrar Abstract
  • Astrocytes actively participate in redox regulation in the brain. The imbalance between overproduction of reactive species and antioxidant mechanisms can result in reactive astrogliosis. Astrogliosis associated with oxidative stress can promote changes in cell morphology and function, reduced enzymatic activity and increased cytokines and inflammatory mediators. In this context, flavonoids, which have antioxidant and anti-inflammatory properties, are promising candidates for the study of adjuvant therapies in diseases whose pathophysiology is oxidative stress. This work evaluated, in vitro, the cytotoxicity and antioxidant activity of flavonoids and synthetic derivatives (naringenin, (S) – naringenin, 7,4'-O-diprenylnaringenin, (S)-7,4'-O-diprenylnaringenin, 7 -O-prenylnaringenin, naringin, hesperidin, chrysin, apigenin and rhoifolin), associated with the control of the glial inflammatory response. The cellular antioxidant activity of flavonoids and synthesis derivatives (1, 10 and 50μM for 15min) was determined by the free radical scavenging reaction 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH). Hesperidin and the diprenylated derivative (S)-7,4'-O-diprenylnaringenin showed higher potential antioxidants and naringenin and its other prenylated derivatives showed moderate antioxidant activity after this cell-free test in a 15min reaction. Primary cultures of astrocyte-enriched glia derived from neonatal Wistar rats (P0-P2) exposed to lipopolysaccharide (LPS, 1 µg/mL for 24 h) and treated with the molecules (5 or 10 µM for 24 h) were used. An antioxidant effect was observed through the increase in GSH levels, promoted by naringenin and its derivatives, through the glutathione depletion test with monochlorobimane after treatments (5 µM for 24 h). The enzymatic levels of SOD, LPS and chrysin increased SOD and other molecules did not interfere with enzymatic levels. Through the cytotoxicity test (MTT) it was demonstrated that the prenylated derivative 7-O-prenylnaringenin (1, 10 and 50 and 100μM for 24 h) was the most cytotoxic for the proliferative cells of GL15 (human) and C6 (murine), however, without presenting toxicity and morphological changes for primary culture cells of astrocyte-enriched glia. In the Rosenfeld staining, apigenin and chrysin (10 µM for 24 h) induced morphological changes such as retraction of the cytoplasm and nucleus of cells from the primary culture of astrocyte-enriched glia and other molecules attenuated morphological changes promoted by LPS (1 µg/mL) when in concomitant treatment. In addition, flavonoids and synthetic derivatives (10 µM, 24 h) promoted a reduction in nitric oxide (NO) levels and did not induce NO production in isolated treatment. Together, these findings indicate that flavonoids and synthesis derivatives have significant antioxidant and antineuroinflammatory capacity, in vitro, and may be allied as candidates for adjuvant treatments in neurodegenerative diseases.

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  • Alberto Junqueira Pinto Neto
  • FREQUÊNCIA DA VARIANTE GENÉTICA VAL66MET EM PACIENTES PORTADORES DE GLAUCOMA EM SALVADOR

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • VERÔNICA FRANCO DE CASTRO LIMA
  • BRUNO CASTELO BRANCO
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • Data: 19/12/2022

  • Mostrar Resumo
  • O glaucoma é uma condição bastante frequente e tem o diagnóstico muitas vezes difícil e tardio. O BDNF é um neuropeptídeo, cuja função trófica ajuda na proteção das células ganglionares da retina. A diminuição dos níveis do BDNF no glaucoma tem sido tema de vários estudos. Na procura por elucidação da fisiopatologia glaucomatosa, neste trabalho, pretendemos descrever a frequência de uma variante genética, val66met (rs6265), numa população de portadores de glaucoma e associar a presença desta variante aos diferentes fenótipos da doença. Para isso, um total de 200 pacientes foram recrutados na clínica Oftalmodiagnose Os pacientes são acompanhados nesta clínica pelo Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas do Glaucoma, no qual os pacientes recebem acompanhamento regular da doença e colírios para o seu tratamento. O diagnóstico de glaucoma primário de ângulo aberto é feito com pressão intraocular acima de 21mmHg, escavação papilar acima de 0,5 DP e/ou defeito de visão no campo visual. Foram obtidos 8ml de sangue de cada paciente, separado plasma para dosagem de BDNF via Luminex e o buffy coat foi utilizado para extração de DNA genômico. A genotipagem foi realizada através de PCR em tempo real usando a tecnologia Taqman em equipamento QuantStudio 12K. A população teve uma média de idade de 65,43 (10,42) anos. 46,8%/38,1% dos pacientes tinham doença avançada/grave em OD/OS respectivamente e 53,2%/61,9% foram classificados como tendo doença precoce/moderada (OD/OE).. Encontramos uma frequência genotípica baixa (7,8%) do alelo variante (T) em relação ao mais comum (C). Não encontramos diferenças significantes entre a gravidade do glaucoma e as frequências alélicas. Testamos os níveis plasmáticos de BDNF entre os casos e controles. Recrutamos até o momento dez controles sem a doença e seus níveis também foram medidos. A média de valores foi de 17,01 (DP 3,92) pg/ml para casos e 365,46 (DP 111,59) pg/ml para controles. Essa diferença foi sugere uma significância estatística (p<0,01), apesar do pouco número de amostras já examinadas. Nosso estudo sugere que o BDNF pode ser um biomarcador para o diagnostico do glaucoma.


  • Mostrar Abstract
  • Glaucoma is a very common condition and its diagnosis is often difficult and late. BDNF is a neuropeptide whose trophic function helps protect retinal ganglion cells. Low levels of BDNF have been associated with glaucoma in several studies. In the search for elucidation of the pathophysiology of glaucoma, in this work, we described the frequency of a genetic variant, val66met (rs6265), in a population of glaucoma patients and associated the presence of this variant with the different phenotypes of the disease. To this end, a total of 200 patients were recruited at the Oftalmodiagnose clinic. Patients are followed up in this clinic by the Clinical Protocol and Therapeutic Guidelines for Glaucoma, in which patients receive regular monitoring of the disease and eye drops for its treatment. The diagnosis of primary open-angle glaucoma is made with intraocular pressure above 21 mmHg, papillary cupping above 0.5, and/or visual field defect. 8 ml of venous blood was obtained from each patient, plasma was separated for BDNF measurement via Luminex and the buffy coat was used to extract genomic DNA. Genotyping was performed through real-time PCR using Taqman technology in QuantStudio 12K equipment. The population had a mean age of .65.43 (10.42) years. 46.8% / 38.1% of patients had advanced / severe disease in OD / OS respectively and 53.2% / 61.9% were classified as having an early / moderate disease. We found a low genotypic frequency (7.8%) of the variant allele (T) in relation to the most common one (C). We found no significant differences between glaucoma severity and allele frequencies. We tested BDNF plasma levels among cases and controls. We have recruited ten disease-free controls so far and their levels have also been measured. Mean values were 17.01 (SD 3.92) pg/ml for cases and 365.46 (SD 111.59) pg/ml for controls. This difference was suggestive of statistical significance (p<0.01), despite the small number of samples already examined. Our study suggests that BDNF may be a biomarker for the diagnosis of glaucoma

Teses
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  • CAMILA SOUZA COSTA
  • AVALIAÇÃO DE SUBPOPULAÇÕES DE LINFÓCITOS B EM PORTADORES DE HEPATITE C CRÔNICA

  • Orientador : MARIA LUIZA BRITO DE SOUSA ATTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • AUGUSTO MARCELINO PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUANA LEANDRO GOIS
  • LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
  • MARIA LUIZA BRITO DE SOUSA ATTA
  • Data: 25/02/2022

  • Mostrar Resumo
  • A hepatite C crônica (HCC) é uma das principais causas de doença hepática em todo o mundo e a persistência do vírus da hepatite C, pode causar cirrose, insuficiência hepática e carcinoma hepatocelular, além de manifestações extra-hepáticas. Há poucos trabalhos publicados sobre a caracterização das subpopulações de linfócitos B (LB) na HCC, como também não tem sido ainda bem definido um papel patogênico claro na progressão da doença hepática e na resposta terapêutica, especialmente em relação às drogas de ação direta. Objetivos: Determinar as subpopulações de LB em indivíduos com HCC e correlacionar com carga viral. Relacionar o perfil dos LB dos participantes com linfócitos T e NK. Estabelecer relações entre as subpopulações de linfócitos B e marcadores de lesão hepática, de autoimunidade e marcador tumoral. Metodologia: Nove pacientes com HCC e nove indivíduos saudáveis participaram desse estudo. A caracterização imunofenotípica das subpopulações de LB e outras subpopulações linfocíticas do sangue periférico foram determinadas por citometria de fluxo e os parâmetros bioquímicos pelo método cinético-UV, a crioglobulina sérica por crioprecipitação, autoanticorpos foram detectados por imunofluorescência indireta e a dosagem de fator reumatóide e alfa-fetoproteína foram realizadas através do método de microaglutinação automatizada. Resultados: Observamos uma frequência mais elevada de linfócitos B CD19+CD27+ IgM+ e de linfócitos B CD19+CD24hiCD38hi, que estavam inversamente correlacionadas com a carga viral nos pacientes. Quanto aos marcadores de autoimunidade, não encontramos diferenças estatística entre a presença ou ausência de crioglobulinemia e demais autoanticorpos. Conclusão: Esses dados sugerem uma maior participação dos LB na imunorregulação da HCC.



  • Mostrar Abstract
  • Chronic hepatitis C (HCC) is one of the main causes of liver disease worldwide and the persistence of the hepatitis C virus can cause cirrhosis, liver failure and hepatocellular carcinoma, in addition to extrahepatic manifestations. There are few published studies on the characterization of B lymphocyte (BL) subpopulations in HCC, and a clear pathogenic role in liver disease progression and therapeutic response, especially in relation to direct-acting drugs, has not yet been well defined. Objectives: To determine BL subpopulations in individuals with HCC and correlate with viral load. To relate the profile of the BL of the participants with T and NK lymphocytes. To establish relationships between subpopulations of B lymphocytes and liver injury, autoimmunity and tumor markers. Methodology: Nine patients with HCC and nine healthy subjects participated in this study. The immunophenotypic characterization of BL subpopulations and other peripheral blood lymphocytic subpopulations were determined by flow cytometry and biochemical parameters by the kinetic-UV method, serum cryoglobulin by cryoprecipitation, autoantibodies were detected by indirect immunofluorescence and the dosage of rheumatoid factor and alpha-fetoprotein were performed using the automated microagglutination method. Results: We observed a higher frequency of CD19+CD27+IgM+ B lymphocytes and CD19+CD24hiCD38hi B lymphocytes, which were inversely correlated with viral load in patients. As for autoimmunity markers, we did not find statistical differences between the presence or absence of cryoglobulinemia and other autoantibodies. Conclusion: These data suggest a greater participation of BL in the immunoregulation of HCC.

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  • ANA PAULA CASTRO MELO
  • ESTUDO DE MARCADORES IMUNOGENÉTICOS ASSOCIADOS À OBESIDADE EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA ATRAVÉS DE SCREENING GENÔMICO DE AMPLA VARREDURA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • CINTIA RODRIGUES MARQUES
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • RITA DE CASSIA RIBEIRO SILVA
  • THIAGO MAGALHÃES DA SILVA
  • Data: 25/03/2022

  • Mostrar Resumo
  • A obesidade é uma doença complexa e inflamatória associada com morbidades e mortalidade. A inflamação sistêmica está presente em crianças e adultos com obesidade, esta inicia-se no tecido adiposo visceral (TAV) e parece ser central para o desenvolvimento da resistência à insulina levando a hiperglicemia e posteriormente ao DM2, além disso, pode ser importante na patogênese de outras doenças. Objetivo: Identificar variantes associadas ao sobrepeso em crianças brasileiras por meio de estudos de ampla associação genômica (GWAS) e dois estudos de gene candidato. Metodologia. O GWAS foi realizado em 1.004 crianças (5-11 anos) de uma coorte em Salvador, Brasil. Cerca de 15,6% (157) apresentavam sobrepeso. A genotipagem foi realizada com Illumina 2.5 Human Omni Bead Chip. Para os estudos de genes candidatos, foram realizadas regressões logísticas, ajustadas por sexo, idade e marcadores de ancestralidade para os genes IL10, IL1RL1, IL1B, IRF4, TNF, IL6, IL33 e PPAR-γ no software PLINK 1.09. Resultados: Crianças com sobrepeso, obesas e gravemente obesas foram consideradas sobrepeso. Para a análise de GWAS, foram encontradas oito variantes mais significativas em todo o genoma. O primeiro sinal mais forte foi para o rs57281665 (OR: 1,39) que está localizado em IL1R1, seguido pelo rs9294705 (OR: 1,54), na região LOC105377841 entre os genes ADH5P4 e EYS; rs9294707 (OR: 1,54), rs11964751 (OR: 1,54), seguindo do rs941292819 (OR: 1,63) localizado em ST18; rs941292819 (OR: 1,48) localizado em KNTC1; rs368540054 (OR: 1,59) localizado em RAPTOR; rs74497385 (OR: 1,40) localizado no DISCAM. Para o estudo de variantes em genes inflamatórios, 16 SNVs foram associados ao sobrepeso. Dez variantes no gene IL1RL1, duas no gene IL1B e uma no IRF4 aumentaram o risco de sobrepeso. No estudo de gene candidato com o PPARγ, foram encontradas vinte e uma, cinco no modelo aditivo, associadas ao risco de obesidade, três tinham uma razão de chances maior que dois rs4135268 (alelo de risco C), rs13083375 (alelo de risco G) e rs13064760 (alelo de risco C). No modelo dominante, foram encontradas dezoito variantes para o risco de obesidade, três tinham uma razão de chances maior do que três rs2028759 (alelo de risco G), rs1175542 (alelo de risco A) e rs709150 (alelo de risco C) indicando risco três vezes maior para obesidade. No modelo recessivo, das três variantes associadas ao mesmo resultado, as três também tinham um odds ratio maior que dois rs4135268 (alelo de risco C), rs13083375 (alelo de risco G) e 6 rs13064760 (alelo de risco C), indicando o dobro do risco para o sobrepeso. Conclusão: O locus do gene RAPTOR foi o único encontrado em outros estudos e associado à obesidade, inclusive em crianças. Os loci nos genes IL1R1, ST18, KNTC1 e DSCAM foram identificados como novos genes em vias biológicas plausíveis para o sobrepeso. A região LOC105377841 até agora era desconhecida na patogênese da obesidade. Variantes genéticas em genes pró-inflamatórios podem modular a expressão desses genes contribuindo para o sobrepeso. Alelos de risco em variantes no gene PPARγ podem contribuir com o sobrepeso. Estudos de replicação devem ser conduzidos a fim de confirmar o potencial regulatório dessas variantes genéticas e avançar na compreensão do desenvolvimento da obesidade pediátrica e a real contribuição dos polimorfismos na obesidade.



  • Mostrar Abstract
  • Obesity is a complex and inflammatory disease associated with morbidity and
    mortality. Systemic inflammation is present in children and adults with obesity, it starts in
    visceral adipose tissue (TAV) and seems to be central to the development of insulin resistance
    leading to hyperglycemia and later to DM2, in addition, it may be important in the
    pathogenesis from other diseases. Objective: To identify variants associated with overweight
    in Brazilian children through genome-wide association studies (GWAS) and two candidate gene
    studies. Methodology. The GWAS was performed on 1004 children (5-11 years old) from a
    cohort in Salvador, Brazil. About 15.6% (157) were overweight. Genotyping was performed
    with Illumina 2.5 Human Omni Bead Chip. For the candidate gene studies, logistic regressions
    were performed, adjusted for sex, age and ancestry markers for the IL10, IL1RL1, IL1B, IRF4,
    TNF, IL6, IL33 and PPAR-γ genes in the PLINK 1.09 software. Results: Overweight, obese and
    severely obese children were considered overweight. For the analysis of GWAS, eight most
    significant variants were found throughout the genome. The first strongest signal was for
    rs57281665 (OR: 1.39) which is located in IL1R1, followed by rs9294705 (OR: 1.54), in the
    LOC105377841 region between ADH5P4 and EYS genes; rs9294707 (OR: 1.54), rs11964751
    (OR: 1.54), followed by rs941292819 (OR: 1.63) located at ST18; rs941292819 (OR: 1.48)
    located in KNTC1; rs368540054 (OR: 1.59) located in RAPTOR; rs74497385 (OR: 1.40) located in
    DISCAM. For the study of variants in inflammatory genes, 16 SNVs were associated with
    overweight. Ten variants in the IL1RL1 gene, two in the IL1B gene and one in the IRF4
    increased the risk of being overweight. In the candidate gene study with PPARγ, twenty-one,
    five in the additive model were found to be associated with obesity risk, three had an odds
    ratio greater than two rs4135268 (risk allele C), rs13083375 (risk allele G) and rs13064760 (risk
    C allele). In the dominant model, eighteen variants were found for obesity risk, three had an
    odds ratio greater than three rs2028759 (risk allele G), rs1175542 (risk allele A) and rs709150
    (risk allele C) indicating risk three times higher for obesity. In the recessive model, of the three
    variants associated with the same outcome, the three also had an odds ratio greater than two
    rs4135268 (risk C allele), rs13083375 (risk G allele) and rs13064760 (risk C allele), indicating
    twice the risk for overweight. Conclusion: The RAPTOR gene locus was the only one found in
    other studies and associated with obesity, including in children. Loci in the IL1R1, ST18, KNTC1
    and DSCAM genes were identified as novel genes in plausible biological pathways for
    overweight. The region LOC105377841 was hitherto unknown in the pathogenesis of obesity.
    Genetic variants in pro-inflammatory genes may modulate the expression of these genes
    contributing to overweight. Risk alleles in variants in the PPARγ gene may contribute to
    overweight. Replication studies should be conducted in order to confirm the regulatory
    potential of these genetic variants and advance the understanding of the development of
    pediatric obesity and the real contribution of polymorphisms in obesity.

     
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  • HELENA MARIANA PITANGUEIRA TEIXEIRA
  • ESTUDO DE VARREDURA GENÔMICA PARA A RESPOSTA AO AGONISTA β2 DE CURTA AÇÃO EM PACIENTES COM ASMA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • DENIS DE MELO SOARES
  • GISELLE CALASANS DE SOUZA COSTA
  • JOICE NEVES REIS PEDREIRA
  • THIAGO MAGALHÃES DA SILVA
  • Data: 06/05/2022

  • Mostrar Resumo
  • Introdução: A asma geralmente é caracterizada pela inflamação crônica das vias aéreas, cuja obstrução pode ser reversível com o uso de broncodilatadores (BD). No entantoindivíduos com asma não respondem ao tratamento o que pode, ao menos em parte, ser explicado pela variabilidade genética. Objetivos: Identificar possíveis loci farmacogenéticos relacionados à resposta ao broncodilatador (BDR) em uma população com asma. Métodos: Realizamos um GWAS, com 716 indivíduos com asma, para identificar as variantes associadas ao BDR, através da variação percentual do FEV1 após o uso do salbutamol. As variantes foram genotipadas usando chip MEGA (Illumina) com posterior imputação com painel de referência do CAAPA (Consórcio sobre Asma entre Populações com Ancestralidade Africana). Foram realizadas análises de enriquecimento de vias através do VEGAS2 e GARFIELD. Adicionalmente, foi realizada a quantificação de citocinas no sangue periférico através da tecnologia de Luminex e células T regulatórias produtoras de IL-10 foram avaliadas através de citometria de fluxo. Resultados: Considerando o resultado do GWAS três genes foram identificados através da análise das vias de enriquecimento, PTPRC, PRKCH e WWOX, nas quais apontaram o gene PTPRC envolvido com o PRKCH e o WWOX ligados a vias de processos metabólicos e comunicação celular respectivamente. Estes genes também estão ligados a mecanismos imunológicos. Seis variantes rs12406698-A (OR:2.53, IC95%:(1.70-3.75)), rs6669241-C (OR:2.53, IC95%:(1.70-3.75)), rs3754098-T (OR:2.21, IC95%:(1.57-3.12)), rs16843698-T (OR:2.43, IC95%:(1.65-3.58)), rs80120393-T (OR:2.43, IC95%:(1.65-3.58)) e rs16843712-A (OR:2.45, IC95%:(1.65-3.62)) no gene PTPRC foram associadas com BDR e níveis mais elevados de IL-10. Três variantes rs14095-G (OR:2.15, IC95%:(1.60-2.87)), rs3813410-A (OR:2.05, IC95%:(1.52-2.76)), and rs2246609-A (OR:1.80, IC95%:(1.38-2.34)) no PRKCH foram associadas a uma melhor BDR e rs2250772-C (OR:0.53, IC95%:(0.40-0.70) associadas a uma pior BDR. Três variantes rs57459665-A (OR:0.27, IC95%:(0.16-0.45)), rs75376533-C (OR:0.23, IC95%:(0.13-0.42)) e rs7200912-C (OR:0.29, IC95%:(0.17-0.51)) no WWOX foram associadas a uma pior resposta ao broncodilatador, este último SNV foi replicado na população do GALA II (OR:0.76, IC95%:(0.60-0.97)). Além disso, a rs76893638-T (OR:4,26, IC95%:(2,43-7,47)) no gene MYLIP, relacionado à miosina, foi associado a uma melhor BDR. Conclusões: Este trabalho sugere que genes associados a mecanismos imunológicos podem influenciar a resposta ao broncodilatador em pacientes com asma. Nosso estudo expande a compreensão da farmacogenética da resposta  medicamentosa em asma, fornecendo potencialmente novos alvos moleculares associados ao BDR e avança o conhecimento para a medicina de precisão na terapia da asma em poulações miscigenadas como a brasileira. 


  • Mostrar Abstract
  • Introduction: Asthma is usually characterized by chronic inflammation of the airways, whose obstruction can be reversible with the use of bronchodilators (BD). However, individuals with asthma do not respond to treatment, which can, at least in part, be explained by genetic variability. Objectives: To identify possible pharmacogenetic loci related to bronchodilator response (BDR) in a population with asthma. Methods: We performed a GWAS, with 716 individuals with asthma, to identify the variants associated with BDR, through the percentage change in FEV1 after the use of albuterol. The variants were genotyped using a MEGA chip (Illumina) with subsequent imputation with the CAAPA (Consortium on Asthma among Populations of African Ancestry) reference panel. Pathway enrichment analyzes were performed using VEGAS2 and GARFIELD. Additionally, peripheral blood cytokine quantification was performed using Luminex technology and IL-10-producing regulatory T cells were evaluated by flow cytometry. Results: Considering the result of the GWAS, three genes were identified through the analysis of the enrichment pathways, PTPRC, PRKCH and WWOX, in which the PTPRC gene involved with PRKCH and WWOX was identified, linked to pathways of metabolic processes and cellular communication, respectively. These genes are also linked to immune mechanisms. Six variants rs12406698-A (OR:2.53, IC95%:(1.70-3.75)), rs6669241-C (OR:2.53, IC95%:(1.70-3.75)), rs3754098-T (OR:2.21, IC95%:( 1.57-3.12)), rs16843698-T (OR:2.43, IC95%:(1.65-3.58)), rs80120393-T (OR:2.43, IC95%:(1.65-3.58)) and rs16843712-A (OR:2.45, 95%CI:(1.65-3.62)) in the PTPRC gene were associated with BDR and higher levels of IL-10. Three variants rs14095-G (OR:2.15, IC95%:(1.60-2.87)), rs3813410-A (OR:2.05, IC95%:(1.52-2.76)), and rs2246609-A (OR:1.80, IC95%: (1.38-2.34)) in the PRKCH were associated with a better BDR and rs2250772-C (OR:0.53, IC95%:(0.40-0.70) associated with a worse BDR. Three variants rs57459665-A (OR:0.27, 95%CI: (0.16-0.45)), rs75376533-C (OR:0.23, IC95%:(0.13-0.42)) and rs7200912-C (OR:0.29, IC95%:(0.17-0.51)) in WWOX were associated with a worse response, this last one was replicated in GALA II population (OR:0.76, IC95%:(0.60-0.97)). In addition, rs76893638-T (OR:4.26, 95%CI:(2.43-7.47)) in the myosin-related MYLIP gene was associated with better BDR. Conclusions: This work suggests that genes associated with immunological mechanisms can influence the bronchodilator response in patients with asthma. Our study expands the understanding of the pharmacogenetics of the drug response in asthma, potentially  providing new molecular targets associated with BDR and advances the knowledge for precision medicine in the therapy of asthma in mixed populations such as Brazilian.

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  • ANA ELISA DEL'ARCO VINHAS COSTA
  • ESTUDO DOS EFEITOS MODULATÓRIOS DA ESTIMULAÇÃO MAGNÉTICA EM CÉLULAS GLIAIS DE RATO INFECTADAS IN VITRO COM Neospora caninum

  • Orientador : ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • THIAGO CAMPANHARO BAHIENSE
  • ABRAHAO FONTES BAPTISTA
  • ALEXANDRE DIAS MUNHOZ
  • ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • FRED DA SILVA JULIAO
  • Data: 25/05/2022

  • Mostrar Resumo
  • Neospora caninum, é um protozoário intracelular obrigatório, pertencente ao filo Apicomplexa, capaz de infectar vários animais, incluindo ruminantes e canídeos. A infecção de células do sistema nervoso por este parasito é bem estabelecida na literatura e tem sido objeto de estudos por causa da peculiaridade dos mecanismos imunológicos induzidos pela infecção. Neste sentido a infecção tem sido utilizada como modelo  infeccioso para aprimorar o entendimento das respostas imunológicas produzidas pelas células do sistema nervoso. Em paralelo a estes estudos, a estimulação magnética tem potencial terapêutico em várias desordens humanas. Mas os estudos com esta técnica não se aprofundaram em modelos infecciosos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o uso da terapia de estimulação magnética em culturas de glia de rato infectadas por N. caninum. Culturas primárias de células gliais foram obtidas a partir do córtex cerebral de ratos Wistar recém-nascidos (&lt;48 horas). As culturas foram infectadas com N. caninum e após 6 horas de infecção,foram tratadas com estimulação magnética com frequência de 10 Hz, a 0,62T de intensidade por 30 segundos durante 3 dias. Em paralelo, foram tratadas com estimulação magnética também células gliais estimuladas por LPS e o grupo controle (apenas glia). Após 72 horas de infeção, o experimento foi finalizado e análises de MTT, produção de óxido nítrico, GFAP, TNF e IL-10 e expressão de mRNA para NOS2, CCL2, CCL5, KAT e KMO foram realizadas. Os resultados demonstram que a estimulação magnética tem um efeito antinflamatório no modelo com estímulo por LPS e que melhora a capacidade das células gliais de responder ao processo infeccioso, aumentando a produção de TNF e modificando a morfologia celular, além de diminuir a expressão de mRNA para NOS2 e CCL2. Os dados obtidos sugerem que a estimulação magnética produz efeitos diferentes nos modelos de infecção e de estímulo inflamatório por LPS, o que pode indicar que, o estado de ativação celular pode interferir no efeito produzido por esta técnica.


  • Mostrar Abstract
  • Neospora caninum is an obligate intracelullar protozoan, belonging to the phylum Apicomplexa, capable of infecting several animals, including ruminants and canids. The infection of nervous system cells by this parasite is well established in the literature and has been the subject of studies because of the peculiarity of the immunological mechanisms induced by the infection. In this way, infection has been used as an infectious model to improve the  understanding of the immune responses produced by cells of the nervous system. In parallel with these studies, magnetic stimulation has therapeutic potential in several human disorders. But studies with this technique have not developed into infectious models. Thus, the objective of this work was to evaluate the use of magnetic stimulation therapy in cultures of rat glia infected by N. caninum. Primary culture of glial cells were obtained from the cerebral cortex of newborn Wistar rats (&lt;48 hours). The cultures were infected with N. caninum and after 6 hours of infection, they were treated with magnetic stimulation at a frequency of 10 Hz, at 0.62T intensity for 30 seconds for 3 days. In parallel, glial cells stimulated by LPS and the control group (glia only) were treated with magnetic stimulation. After 72 hours of infection, the experiment was terminated and analyzes of MTT, production of nitric oxide, GFAP, TNF and IL-10 and mRNA expression for NOS2, CCL2, CCL5, KAT and KMO were performed. The results demonstrate that magnetic stimulation has an anti-inflammatory effect in the LPS-stimulated model and that it improves the ability of glial cells to respond to the infectious process, increasing TNF production and modifying cell morphology, in addition to decreasing mRNA expression to NOS2 and CCL2. The data obtained suggest that magnetic stimulation produces different effects in infectious model and inflammatory stimulus by LPS, which may indicate that the state of cellular activation may interfere with the effect produced by this technique.


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  • THIAGO ASSIS DORIA BARRAL
  • Estudos de imunobioinformática e imunoprofilático de uma proteína de fusão contra a infecção por Corynebacterium

    pseudotuberculosis em modelo murino

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • FRANCISCO SILVESTRE BRILHANTE BEZERRA
  • LEONARDO AUGUSTO DE ALMEIDA
  • WANDERSON MARQUES DA SILVA
  • Data: 27/05/2022

  • Mostrar Resumo
  • A linfadenite caseosa (LC) é uma enfermidade que acomete principalmente pequenos ruminantes, e ainda não há vacinas que apresentem proteção significativa contra a doença tanto em caprinos quanto em ovinos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a proteína de fusão MBP:PLD:CP40 em ensaios in silico e in vivo como novo alvo imunoprofilático para a LC. Foram realizados ensaios in silico utilizando ferramentas de imunobioinformática para a construção da sequência de aminoácidos, montagem e validação da estrutura 3D, análises físico-químicas, antigenicidade, potencial alergênico, predição de epítopos específicos de linfócitos B e de peptídeos capazes de se ligarem a moléculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe I e II, e predição de ligação com o receptor Toll-Like 2 (TLR2). A expressão e purificação foi realizada in vitro em sistema heterólogo. 40 camundongos foram utilizados para a imunização, divididos em 4 grupos de 10 animais, com 2 imunizações ocorrendo num intervalo de 28 dias e 4 coletas de sangue ocorrendo num intervalo de 14 dias. Os animais foram desafiados 42 dias após a primeira imunização e observados por 30 dias. Foram feitas análises para a quantificação de anticorpos IgG total, IgG1 e IgG2a, além de cultivo de esplenócitos de 3 animais de cada grupo, com estímulo antigênico e posterior quantificação da expressão de IL-4, IL-12, IL-17, TNF e IFN-γ. As análises in silico demonstraram que a proteína de fusão apresentou antigenicidade sem alergenicidade, bem como a existência de vários epítopos para células B, e peptídeos capazes de se ligarem às moléculas de MHC I e II e ancoragem ao receptor TLR2. Através da clonagem e expressão da MBP:PLD:CP40, pode-se notar que a proteína tem estabilidade e apresenta o peso molecular de 115kDa. A proteína de fusão estimulou uma maior produção de IgG1 em relação a IgG2a, com estímulo significativo da expressão de mRNA de TNF e IL-17. A proteína de fusão foi capaz de proteger parcialmente os camundongos contra a infecção por C. 
    pseudotuberculosis (57,14%), e pode ser considerada como um potencial novo imunógeno para o desenvolvimento de vacinas para a LC.


  • Mostrar Abstract
  • Caseous lymphadenitis (CLA) is a disease that affects small ruminants, and there are no vaccines that provide significant protection against this disease in both goats and sheep. The objective of this work was to evaluate in silico and in vivo the fusion protein MBP:PLD:CP40 as a new immunoprophylactic target for CLA. In silico analysis were performed using immunobioinformatics tools for the construction of the amino acid sequence, assembly and validation of the 3D structure, physicochemical analysis, antigenicity and allergenic potential, prediction of B lymphocytes specific epitopes and those capable of binding to molecules of the complex major histocompatibility (MHC) class I and II, and the prediction of binding to the Toll-Like 2 receptor (TLR2). Expression and purification were performed in vitro in a heterologous system. 40 mice were used for immunization, divided into 4 groups of 10 animals, with 2 immunizations occurring at an interval of 28 days and 4 blood collections occurring at an interval of 14 days. The animals were challenged 42 days after the first immunization and observed for 30 days. Total IgG, IgG1 and IgG2a antibodies were quantified, and a culture of splenocytes from 3 animals from each group was made, with further antigenic stimulation and quantification of the expression of IL-4, IL-12, IL-17, TNF and IFN-γ. The in silico analysis demonstrated that the fusion protein showed antigenicity associated with no prediction of allergenicity, as well as the existence of several B cells epitopes and peptides capable of binding to MHC I and II molecules and anchoring to the TLR2 receptor. Through the cloning and expression of MBP:PLD:CP40, it can be seen that the protein has significant stability and a molecular weight of 115kDa. The fusion protein stimulated a greater production of IgG1 than IgG2a in mice, with significant expression of TNF and IL-17. The fusion protein was able to partially protect mice against C. pseudotuberculosis infection (57.14%), and can be considered as a potential new immunogen for the development of vaccines for CLA.

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  • CAYO AMARAL ABREU
  • “PARTICIPAÇÃO DAS CÉLULAS CITOTÓXICAS NA PATOGÊNESE DA LEISHMANIOSE DISSEMINADA”

  • Orientador : LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JAQUELINE FRANCA COSTA
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
  • MARIA OLIVIA AMADO RAMOS BACELLAR
  • SONGELI MENEZES FREIRE
  • Data: 15/06/2022

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  • A leishmaniose disseminada (LD) causada por L. braziliensis, é uma forma clínica emergente de leishmaniose tegumentar, caracterizada pela presença de 10-1000 lesões papulares, acneiformes e ulceradas, em mais de dois sítios anatômicos. As células TCD8+ têm papel crucial na resposta inflamatória e progressão da LD. O perfil de senescência das células T CD8+CD57+ está associado ao dano tecidual na leishmaniose cutânea (LC). A LD apresenta maior refratariedade ao tratamento, e o estabelecimento de uma referência clínica capaz de discriminar os pacientes que possivelmente terão um bom desfecho terapêutico dos demais se faz necessário. Métodos: Indivíduos com LC e LD foram recrutados, amostras de pele e sangue foram coletadas, e os dados para determinação de lesões foram obtidos através dos prontuários. Células mononucleares do sangue periférico e biópsias foram utilizadas para seleção e separação de células T CD8+ , diferenciação de monócitos em macrófagos, cultura estimuladas com antígeno solúvel de leishmania e co-culturas autológas com macrófagos infectados ou não com L. braziliensis. O perfil celular foi determinado por citometria de fluxo, e as citocinas foram dosadas no sobrenadante das culturas por ELISA. As análises estatísticas foram realizadas pra cada experimento com os testes de Mann-Whitney, e Kruskal- Wallis pós testado pelo teste de Dunn, e Correlação de Pearson. Conclusões:Aparentemente, células T CD8+CD57+ podem promover a lise de célulasinfectadas por citotoxicidade, levando a liberação de amastigotas intracelulares,contribuindo para disseminação do parasito na LD.


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  • Disseminated leishmaniasis (DL) caused by L. braziliensis is an emerging clinical form of cutaneous leishmaniasis, characterized by the presence of 10-1000 papular, acneiform and ulcerated lesions in more than two anatomical sites. CD8+T cells play a crucial role in the inflammatory response and progression of LD. The senescence profile of CD8+CD57+T cells is associated with tissue damage in cutaneous leishmaniasis (CL). DL is more refractory to treatment, and the establishment of a clinical reference capable of distinguishing patients who will possibly have a good therapeutic outcome from the others is necessary. Methods: Individuals with CL and LD were recruited, skin and blood samples were collected, and data for lesion determination were obtained from medical records. Peripheral blood mononuclear cells and biopsies were used for selection and separation of CD8+T cells, differentiation of monocytes into macrophages, culture stimulated with soluble Leishmania antigen and autologous co-cultures with macrophages infected or not with L. braziliensis. The cell profile was determined by flow cytometry, and cytokines were measured in the culture supernatant by ELISA. Statistical analyzes were performed for each experiment using the Mann-Whitney tests, and Kruskal-Wallis post-tested by Dunn's test, and Pearson's Correlation. Conclusions: Apparently, CD8+CD57+ T cells can promote the lysis of infected cells by cytotoxicity, leading to the release of intracellular amastigotes, contributing to the spread of the parasite in
    DL.

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  • Renata Freitas de Araújo Tripodi Calumby
  • VALOR PROGNÓSTICO DE MARCADORES IMUNO-HEMATOLÓGICOS PRÉ-TERAPÊUTICOS EM PACIENTES COM CARCINOMA ESCAMOCELULAR ORAL

  • Orientador : DEISE SOUZA VILAS BOAS
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUIZ PAULO KOWALSKI
  • VALÉRIA SOUZA FREITAS
  • DEISE SOUZA VILAS BOAS
  • RICARDO DAVID COUTO
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • Data: 19/08/2022

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  • O Carcinoma Escamocelular Oral (CEO) representa o principal tumor da cavidade oral e apresenta alta agressividade e metástase. Particularmente no Brasil, o CEO corresponde ao quinto tumor maligno mais comum em homens. O monitoramento de células e outros marcadores sanguíneos a partir de exames convencionais pré-terapêuticos na qualidade de coadjuvantes no manejo clínico de pacientes com tumores malignos tem recebido crescente atenção devido ao seu potencial de fornecer informações prognósticas com facilidade e baixo custo. Razões neutrófilo-linfócito (NLR), linfócito-monócito (LMR) e plaqueta-linfócito (PLR), bem como a concentração de hemoglobina (HB), têm sido sugeridas como novas ferramentas com valor prognóstico para o CEO. No entanto, os principais dados são derivados de populações asiáticas, europeias e norte-americanas. Objetivo: Este estudo teve como objetivo investigar o valor prognóstico em CEO dos valores pré- operatórios de NLR, LMR, PLR, HB, contagem de glóbulos vermelhos (RBC), volume corpuscular médio (MCV), hemoglobina corpuscular média (MCH), concentração de hemoglobina corpuscular média (CMCH) e amplitude da distribuição do tamanho dos eritrócitos (RDW) em uma coorte de pacientes brasileiros com CEO. Pacientes e Métodos: Um total de 433 pacientes com CEO tratados entre 2008 e 2017 no Hospital Aristides Maltez (Salvador, Bahia) foram incluídos e avaliados retrospectivamente. Os dados foram coletados dos prontuários médicos. Para determinar os valores de cut-off dos parâmetros investigados, curvas ROC (Receiver Operating Characteristic) foram utilizadas. Em relação às razões calculadas, os valores das células foram obtidos a partir da contagem absoluta. Sobrevida global (OS), sobrevida específica da doença (DSS), sobrevida livre de doença locorregional (LRFS) e sobrevida livre de metástase (DRFS) foram analisadas usando o método de Kaplan-Meier e o teste log-rank. Análises univariada e multivariada foram realizadas por meio da regressão de Cox para analisar o quanto os parâmetros investigados estavam associados à evolução clínica dos pacientes. Resultados: A maior parte dos pacientes foi do sexo masculino (68,8%), preto ou pardo (94,5%), menor de 65 anos (68,8%), tabagista etilista (76,2%) e com estadiamentoTNM ao diagnóstico em IVA (35,9%) ou II (19,6%). O sítio anatômico tumoral mais comum foi a língua (40,4%). Durante um período médio de acompanhamento longitudinal de aproximadamente 30 meses, o evento morte ocorreu em 52,2% (n = 226) dos casos, morte por câncer em 49% (n = 212), recidiva locorregional em 24,5% (n = 106 ) e metástase à distância em 13,9% (n = 106). A análise univariada identificou valores elevados de NLR (≥ 2,1) ou PLR (≥ 131,5), assim como valores baixos de LMR (< 4,2), HB (< 13,2) e RBC (< 4,5) associados a piores OS e DSS (p < 0,05). A análise multivariada mostrou NLR com valor prognóstico independente para OS e DSS. Além disso, pacientes de estadiamento avançado (III e IV) tratados com ressecção cirúrgica que apresentavam valores elevados de NLR não melhoraram OS e DSS, ainda que submetidos a tratamento cirúrgico. Conclusão: Valores pré-terapêuticos elevados de NLR e PLR, assim como baixos valores de LMR, HB e e RBC estão associados a um desfecho clínico ruim para pacientes com CEO. A NLR apresenta potencial prognóstico para inferir resposta terapêutica no CEO, apoiando as decisões de manejo de pacientes em estadiamento clínico avançado que se beneficiariam com a cirúrgia. 


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  • Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC) represents the major tumor of the oral cavity and presents high aggressiveness and metastasis. Particulary in Brazil, OSCC is the fifth most common cancer in males. The use of conventional pretherapeutic assessment of cells and and other blood markers as adjunvants to improve the clinical managemment of solid tumors has received increasing attention due to its potential to easily provide prognostic information, acting as low-cost biomarkers. Neutrophil-to-lymphocyte (NLR), lymphocyte-to-monocyte (LMR) and platelet-to-lymphocyte (PLR) ratios as well as hemoglobin (HB) concentration have been suggested as a new tool with prognostic value for OSCC. However, major data are derived from Asian, European and North American populations. Objective: This study aimed to investigate the prognostic value in OSCC of preoperative NLR, LMR, PLR, HB, red blood cell count (RBC), mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin (MCH), mean corpuscular hemoglobin concentration (CMCH) and red cell distribution width (RDW) in a large cohort study of OSCC in a Brazilian population. Patients and Methods: A total of 433 OSCC patients treated between 2008 and 2017 at Department of Head and Neck Surgery of Aristides Maltez Hospital (Salvador, Bahia) were enrolled and evaluated retrospectively. The data were collected from medical records. To determine the cutoff values, a receiver operating characteristic (ROC) curve was used as an indicator. In relation to ratios, cells values were obtained as absolute counts. Overall survival (OS), disease-specific survival (DSS), locoregional-free survival (LRFS) and distant recurrence-free survival (DRFS) were analyzed using Kaplan-Meier method and log-rank test. In order to analyze whether investigated parameters were associated with the clinical outcome of patients with OSCC, univariate and multivariate Cox regression analysis were calculated. Results: Most patients were males (68.8%), black or brown (94.5%), under 65 years (68.8%), smokers and alcoholics (76.2%) at IVA (35.9%) or II (19.6%) TNM stage at diagnosis. The most common tumor anatomical site was tongue (40.4%). During an average longitudinal follow-up period of circa 30 months, the death event occurred in 52.2% (n = 226) of the cases, death by cancer in 49% (n = 212), locoregional recurrence in 24.5% (n = 106) and metastasis in 13.9% (n = 106). Univariate analysis identified both high NLR (≥ 2.1) or PLR (≥ 131.5) as well as low LMR (< 4.2), HB (< 13,2) or RBC (< 4,5) significantly associated with poor OS and DSS (p<0.05). Multivariate analysis showed NLR, HB and RBC with independent prognostic value for OS and DSS. In addition, high NLR values stratified patients in advanced stage (III and IV) who would benefit from surgical treatment in relation to OS and DSS. Conclusion: High  retreatment NLR and PLR or low LMR, HB and RBC values are associated with poor clinical outcome in OSCC. NLR presents potential as prognostic factor for therapheutic response in OSCC patients and may influence clinical choices in relation to surgical interventions for patients with advanced clinical staging. 

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  • LIVIA BACELAR DE JESUS
  • Investigação dos efeitos do flavonoide rutina no sistema entérico e microbiota intestinal em modelo experimental da doença de Parkinson.

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JOSÉ CLÁUDIO FONSECA MOREIRA
  • GESSILDA DE ALCANTARA NOGUEIRA DE MELO
  • LEONARDO AUGUSTO DE ALMEIDA
  • QUIARA LOVATTI ALVES
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 30/09/2022

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  • O sistema nervoso entérico (SNE) é conhecido como “segundo cérebro” e é um importante componente da parede intestinal. Atividades como controle da motilidade intestinal, integridade da mucosa, digestão, transmissão sináptica, neuroproteção e neurogênese, além da participação na defesa da barreira intestinal, são desempenhadas pelo SNE. Descobertas recentes mostraram que as células gliais entéricas (EGCs), localizadas no gânglio mioentérico e submucoso do SNE, desempenham um papel importante em diferentes distúrbios neurodegenerativos, como na doença de Parkinson (DP) distúrbio neurodegenerativo caracterizado principalmente pela perda progressiva de neurônios dopaminérgicos na substância nigra pars compacta que gera disfunções motoras e não motoras, incluindo disfunção gastrointestinal. O SNE tem relação íntima com a microbiota intestinal e estudos recentes evidenciam a existência deum eixo cérebro-intestino. Este trabalho teve como objetivo investigar o efeito do flavonoide rutina sobre o sistema entérico e microbiota intestinal em modelo experimental da doença de Parkinson. Utilizamos modelo animal onde ratos Wistar, macho, adultos foram submetidos a injeção estereotáxica com 6-hidroxidopamina (6-OHDA) ou salina, tratados ou não com Rutina (10 mg/Kg) por 14 dias consecutivos. Para caracterização do dano, os animais foram submetidos a testes comportamentais e imunomarcação de tirosina hidroxilase dos encéfalos após eutanásia. Os segmentos intestinais (íleo e colon) foram coletados e realizada análise histológica após coloração por hematoxilina e eosina (HE) e análise imunoistoquímica para neurônios (HUc/d) e células da glia entérica (S100b) nos plexos miontéricos. Realizamos teste de contratilidade intestinal e qPCR nas fezes para verificar a composição da microbiota intestinal. Os resultados demonstraram que tratamento com rutina é capaz de melhorar o trânsito intestinal em animais parkinsonianos, além de demonstrar que o tratamento com rutina aumenta a reatividade da musculatura ileal por ativação muscarínica, reduz o relaxamento através da via de sinalização dos doadores de óxido nítrico e aumenta a contratilidade longitudinal da musculatura do cólon em animais parkinsonianos. Também foi observado que injeção estriatal de 6-OHDA afeta a parede intestinal de ratos e o tratamento com rutina reduz a quantidade de linfócitos intraepiteliais (LIEs). Embora existam relatos de modificação da microbiota intestinal em pacientes parkinsonianos, não observamos alterações nas famílias de bactérias intestinais estudadas neste trabalho. Finalmente os resultados indicam que o flavonoide rutina possui atividades modulatórias sobre o SNE com efeito protetor contra danos inflamatórios sem interferir na população celular, além de aumentar a reatividade do músculo liso ileal e aumentar a contratilidade intestinal em modelos experimentais em animais parkinsoniano.


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  • The enteric nervous system (ENS) is known as the “second brain” and is an important component of the intestinal wall. Activities such as control of intestinal motility, mucosal integrity, digestion, synaptic transmission, neuroprotection and neurogenesis, in addition to participating in the defense of the intestinal barrier, are performed by the ENS. Recent findings have shown that enteric glial cells (EGCs), located in the myenteric and submucosal ganglion of the ENS, play an important role in different neurodegenerative disorders, such as Parkinson's disease (PD), a neurodegenerative disorder characterized mainly by the progressive loss of dopaminergic neurons in the substance nigra pars compacta that generates motor and non-motor dysfunctions, including gastrointestinal dysfunction. The ENS is closely related to the gut microbiota and recent studies demonstrate an intimate relationship between the brain-gut axis. This work aimed to investigate the effect of the flavonoid rutin on the enteric system and intestinal microbiota in an experimental model of Parkinson's disease. We used an animal model in which adult male Wistar rats were subjected to stereotaxic injection with 6-hydroxydopamine (6-OHDA) or saline, treated or not with Rutin (10 mg/Kg) for 14 consecutive days. For damage characterization, the animals were submitted to behavioral tests and brain tyrosine hydroxylase immunostaining after euthanasia. Intestinal segments (ileum and colon) were collected, and histological analysis was performed by hematoxylin and eosin (HE) staining and immunohistochemistry for neurons (HUc/d) and enteric glial cells (S100b) in the myenteric plexuses. We performed intestinal contractility test and qPCR on feces to verify the composition of the intestinal microbiota. The results showed that treatment with rutin is able to improve intestinal transit in parkinsonian animals, in addition to demonstrating that treatment with rutin increases ileal muscle reactivity by muscarinic activation, reduces relaxation through the signaling pathway of nitric oxide donors and increases longitudinal contractility of colonic musculature in parkinsonian animals. It was also observed that striatal injection of 6-OHDA affects the intestinal wall of rats and rutin treatment reduces the amount of intraepithelial lymphocytes (IELs). Although there are reports of modification of the intestinal microbiota in parkinsonian patients, we did not observe changes in the families of intestinal bacteria studied in this work. Finally, the results indicate that the flavonoid rutin has modulatory activities on the ENS with a protective effect against inflammatory damage without interfering with the cell population, in addition to increasing ileal smooth muscle reactivity and increasing intestinal contractility in experimental models in parkinsonian animals.

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  • Milca de Jesus Silva
  • AVALIAÇÃO DE POLIMORFISMOS EM GENES ASSOCIADOS Á GRAVIDADE DE ASMA EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • CLAUDIO ROBERTO BEZERRA DOS SANTOS
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • Data: 02/12/2022

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  • A prevalência de doenças respiratórias vem crescendo pelo mundo, dentre estas a asma e COVID-19 se destacam por afetarem uma grande parte da população mundial, com altas taxas de mortalidade e morbidade. A asma é uma doença multifatorial e complexa onde fatores genéticos e ambientais interagem para o desenvolvimento da sua imunopatologia, fisiopatologia e sintomatologia clínica. Um dos fatores que podem estar envolvidos no desencadeamento de episódios de exacerbação em asmáticos é o contato com o SARS-CoV-2; este contato pode levar a inflamações persistentes e nos casos mais graves ao remodelamento brônquico. No remodelamento brônquico ocorre o aumento de MMP-9 e ANGPT-1 que atuam diretamente na mudança na arquitetura brônquica. Essas alterações, bem como a frequência dos episódios de exacerbações estão diretamente  associadas a gravidade da asma, existe também uma associação entre polimorfismos genéticos e gravidade da doença. Assim, nosso objetivo foi avaliar como polimorfismos genéticos associados mediadores envolvidos na patologia da asma podem influenciar na sua gravidade. Para avaliar marcadores de remodelamento brônquico, fizemos um estudo incluindo 244 indivíduos participantes do WASP (Fenótipos de Asma no Mundo). Enquanto a análise de polimorfismos associados a gravidade de COVID-19 em asmáticos foi feita em 784 indivíduos do ProAR (Programa para Controle da Asma e Rinite Alérgica da Bahia). Nossos resultados mostram que polimorfismos em ANGPT-1 podem estar associados com a concentração de células inflamatórias no esputo em participantes do WASP. Na população do PROAR, polimorfismos nos genes ABO, FYCO1 e CCR9 estão associados a marcadores de gravidade em asmáticos. Assim, polimorfismos associados a medidores presentes no remodelamento brônquico e exacerbação de asma estão relacionados a gravidade da doença. 


  • Mostrar Abstract
  • The prevalence of respiratory diseases has been growing in worldwide, among then asthma and COVID-19 needs special attention because the high rates of mortality and morbidity. Asthma is a multifactorial and complex disease where genetic and environmental factors interact for the development of its immunopathology, pathophysiology, and clinical symptomatology. The infection for SARS-CoV-2 can be a key role in triggering exacerbation episodes in asthmatics; this interaction can lead to persistent inflammation and bronchial remodeling in most severe cases. During bronchial remodeling, there is an increase of MMP- 9 and ANGPT-1, which act directly on the change in bronchial architecture. These alterations, and the frequency of exacerbation episodes, are directly associated with asthma severity, also genetic polymorphism can be a determinant factor to asthma severity. Thus, our aim it was to evaluate how genetic polymorphisms associated with mediators involved in the pathology of asthma can influence its severity. To evaluate bronchial remodeling markers, we conducted a study including 244 individuals of WASP (Worldwide Asthma Phenotypes). While the analysis of polymorphisms associated with the severity of COVID-19 in asthmatics was done in 784 individuals from ProAR (Program for Control of Asthma and Allergic Rhinitis of Bahia). Our results show that ANGPT-1 polymorphisms were associated with the concentration of inflammatory cells in sputum in WASP participants. Moreover, polymorphisms in the ABO, FYCO1 and CCR9 genes are associated with markers of severity in asthmatics individual of ProAR (Program for Control of Asthma and Allergic Rhinitis of Bahia). Thus, polymorphisms associated with inflammatory mediators in bronchial remodeling and asthma exacerbation are associated to the severity of the disease. 

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  • RAFAEL RIBEIRO MOTA SOUZA
  • IDENTIFICAÇÃO E EXPRESSÃO DE PEPTÍDEOS ÚNICOS DO ZIKA VÍRUS: AVALIAÇÃO DA ANTIGENICIDADE

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA FONSECA LOPES BRANDAO
  • DELLANE MARTINS TIGRE
  • ERIC ROBERTO GUIMARAES ROCHA AGUIAR
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • Data: 07/12/2022

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  • A propagação do vírus Zika (ZIKV) em regiões endémicas de outros flavivírus já estabelecidos, como o Vírus da Dengue (DENV), elevou a complexidade do diagnóstico dos flavivírus e a demanda por novos testes de detecção específicas para os patógenos. Os flavivírus apresentam alta similaridade proteica, e consequentemente, uma variedade de epítopos em comum que permitem a ocorrência de reações cruzadas para com anticorpos proveniente de infecções virais a diferentes flavivírus. Em concordância com a demanda por antígenos mais específicos, o presente trabalho objetivou produzir antígenos com maior especificidade para o ZIKV, de modo a subsidiar o desenvolvimento de ensaios imunodiagnósticos. Utilizando ferramentas bioinformáticas, foram identificados epítopos únicos do ZIKV, em regiões preditivamente antigênicas das proteínas E e NS1. A proteína E do ZIKV teve destaque pela região 146-182 (domínio I), e levou a proposta de produção de um antígeno recombinante baseado em repetições in tandem do fragmento 146-182 (Tan_E). Enquanto que as análises computacionais sugeriram uma maior identidade ao ZIKV na fração 220-352 de NS1, o que conduziu a proposta da produção recombinante da NS1 parcial (pNS1). Apesar das predições computacionais, demonstramos que a região 146-182, em sua apresentação in tandem não foi reativa, de forma conformacional, em ensaios de dot blot e ELISA, assim como em sua forma desnaturada em ensaios de western blot. Por sua vez, a pNS1, não desnaturada, do ZIKV, apresentou maior especificidade aos soros IgG+ de ZIKV,
    o que a destaca como possível ferramenta no diagnóstico do ZIKV por dot blot. Sendo assim, o estudo tratou de elucidar questões sobre a reatividade de regiões específicas das proteínas E e NS1 do ZIKV, como a baixa reatividade da região 146-182 da proteína E, contrariando projeções computacionais, e a reatividade da fração 220-352 da NS1, que se mostrou específica para o ZIKV por dot blot, de modo a subsidiar os estudos relacionados ao desenvolvimento de novos métodos imunodiagnósticos. 


  • Mostrar Abstract
  • The spread of the Zika virus (ZIKV) in endemic regions of other established flaviviruses, such as Dengue Virus (DENV), has increased the complexity of diagnosing flaviviruses and the demand for new detection tests specific for the pathogens. Flaviviruses have high protein similarity, and consequently, a variety of epitopes in common that allow the occurrence of cross-reactions to antibodies from viral infections to different flaviviruses. In line with the demand for more specific antigens, the present work aimed to produce antigens with greater specificity for ZIKV, in order to support the development of immunodiagnostic assays. Using bioinformatics tools, unique epitopes of ZIKV were identified in predictively antigenic regions of E and NS1 proteins. The ZIKV E protein was highlighted by the region 146-182 (domain I), and led to the proposal of producing a recombinant antigen based on in tandem repeats of the fragment 146-182 (Tan_E). While the computational analyzes suggested a greater identity to ZIKV in the 220-352 fraction of NS1, which led to the proposal of the recombinant production of partial NS1 (pNS1). Despite the computational predictions, we demonstrated that the 146-182 region, in its tandem presentation, was not conformationally reactive in dot blot and ELISA assays, as well as in its denatured form in western blot assays. In turn, the undenatured pNS1 of ZIKV showed greater specificity to IgG+ sera of ZIKV, which highlights it as a possible tool in the diagnosis of ZIKV by dot blot. Overall, the study tried to elucidate questions about the reactivity of specific regions of the E and NS1 proteins of the ZIKV, such as the low reactivity of the 146-182 region of the E protein, contrary to computational projections, and the reactivity of the 220-352 fraction of NS1, which proved to be specific for ZIKV by dot blot, in order to support studies related to the development of new immunodiagnostic methods.

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  • MARCIA OTTO BARRIENTOS
  • ESTUDO DE ASSOCIAÇÃO GENÉTICA PARA PERIODONTITE EM INDIVÍDUOS DE SALVADOR/BA

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RAQUEL MANTUANELI SCAREL CAMINAGA
  • TIAGO JOSÉ SILVA OLIVEIRA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • PAULO CIRINO DE CARVALHO FILHO
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 12/12/2022

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  • A periodontite é um processo inflamatório consequente da disbiose do biofilme bacteriano estimulado por fatores modificáveis, relacionados ao estilo de vida, ou não modificáveis, nos quais variantes genéticas se enquadram. OBJETIVO: Realizar estudo de associação genética para identificar variantes que estejam associadas com a periodontite em uma população de Salvador. METODOLOGIA: Estudo transversal (n=506) desenvolvido em participantes do Programa para Controle de Asma na Bahia, classificados com presença(n=117) ou ausência(n=389) de periodontite, de acordo com critérios de Gomes Filho et al.(2007). Genotipagem foi realizada usando Illumina Multi-Ethnic Global Array (MEGA, Illumina), que inclui mais de 1,5 milhões de variantes. Foram realizados estudos para o melhor modelo de ajuste das análises, dos indicadores de risco, de associação positiva ou negativa de genes candidatos e estudo de ampla varredura genômica para associação com a periodontite. RESULTADOS: O melhor modelo de ajuste para regressão logística inclui as variáveis idade, escolaridade, obesidade, respiração pela boca, uso do fio dental e asma. Obesidade, o não uso de fio dental e asma são indicadores de risco para desenvolvimento da periodontite. Alelo A no rs75985579 do gene IFI16 está associado positivamente e alelo G no rs76457189 do gene AIM2 está associado negativamente com periodontite. A interação entre essas variantes apresentou que a presença dos 2 alelos de risco aumenta em mais de quatro vezes as chances de ter periodontite em comparação com indivíduos que possuem 1 ou nenhum dos alelos de risco (ORajustado = 4,61; IC 95% = 1,03 - 20,59; valor de p = 0,017). No estudo de ampla varredura genômica, há associação estatisticamente significativa entre rs10496038-T do gene RTN4, rs58327429-C e rs67797971-A do gene LINC02505 e associação sugestiva de 130 variantes com a presença de periodontite em uma população de Salvador. No cromossomo 2, um haplótipo de dois loci (rs10496038-rs74410951) pertencente aos genes RTN4 e MTIF2, respectivamente, tem sido associado à periodontite. No cromossomo 3, dois haplótipos de dois loci (rs74635888-rs11706761, rs114884128-rs73162961) e um haplótipo de cinco loci (rs710479-rs710480-rs850306-rs115314220-rs9990329) foram associados à periodontite. No cromossomo 5, indivíduos que herdam conjuntamente os alelos G e C do haplótipo de dois loci (rs57620661-rs73054303) do gene CTNND2 aumentam em 2,64 vezes as chances de desenvolver periodontite. Na interação entre genes, herdabilidade de 5 alelos de risco ou mais de variantes que apresentaram alto desequilíbrio de ligação está positivamente associada a cinco vezes mais para as chances de um indivíduo desenvolver periodontite em algum momento da vida. Estes resultados são o alicerce para muitos outros estudos de confirmação de associação em outras populações, bem como de alvos terapêuticos para o tratamento e controle da periodontite.


  • Mostrar Abstract
  • Periodontitis is an inflammatory process resulting from bacterial biofilm dysbiosis stimulated by modifiable, lifestyle-related or non-modifiable factors, which include genetic variants. OBJECTIVE: To carry out a genetic association study to identify variants associated with periodontitis in a population of Salvador. METHODOLOGY: Cross-sectional study (n = 506) developed in participants of the Asthma Control Program in Bahia, who were classified as having the presence (n = 117) or absence (n = 389) of periodontitis, according to criteria by Gomes Filho et al. (2007). Genotyping was performed using Illumina Multi-Ethnic Global Array (MEGA, Illumina), which includes more than 1.5 million variants. The studies were performed for the best fit model of the analyses, risk indicators, positive or negative association of candidate genes and a large genomic scanning study for association with periodontitis. RESULTS: The best-fit model for logistic regression included the variables age, education, obesity, mouth breathing, flossing and asthma. Obesity, no flossing and asthma are risk indicators for the development of periodontitis. The A allele at rs75985579 of the IFI16 gene is positively associated and the G allele at rs76457189 of the AIM2 gene is negatively associated with periodontitis. The interaction between these variants presented that the presence of the 2 risk alleles increases the chances of having periodontitis by more than four times compared to individuals who have 1 or none of the risk alleles (ORadjusted = 4.61; 95%CI = 1 .03 - 20.59; p-value = 0.017). In the genomic wide association study, there is a statistically significant association between rs10496038-T in RTN4 gene, rs58327429-C and rs67797971-A in LINC02505 gene and suggestive of 130 variants with the presence of periodontitis in a population of Salvador. On chromosome 2, a two-locus haplotype (rs10496038-rs74410951) belonging to the RTN4 and MTIF2 genes, respectively, has been associated with periodontitis. On chromosome 3, two two-loci haplotypes (rs74635888-rs11706761, rs114884128-rs73162961) and one five-loci haplotype (rs710479-rs710480-rs850306-rs115314220-rs9990329) have been associated with periodontitis. On chromosome 5, individuals who jointly inherit the G and C alleles of the haplotype of two loci (rs57620661-rs73054303) of the CTNND2 gene increase by 2.64 times the chances of developing periodontitis. In the interaction between genes, the heritability of 5 risk alleles or more of variants that showed high linkage disequilibrium is positively associated with more than five times the chances of an individual developing periodontitis at some point in life. These results are the basis for many other studies to confirm the association in other populations, futhermore, therapeutic targets for the treatment and control of periodontitis.

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  • RAMON MENDES DOS SANTOS
  • REATIVIDADE SOROLÓGICA ÀS PROTEÍNAS RECOMBINANTES rSpaC, rPknG, rNanH e rSodC DE Corynebacterium pseudotuberculosis EM MODELOS CAPRINO, OVINO E HUMANO.

  • Orientador : SONGELI MENEZES FREIRE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JOSE TADEU RAYNAL ROCHA FILHO
  • Maurício de Souza Campos
  • ROBSON BAHIA CERQUEIRA
  • SONGELI MENEZES FREIRE
  • VASCO ARISTON DE CARVALHO AZEVEDO
  • Data: 23/12/2022

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  • Corynebacterium pseudotuberculosis é um dos agentes etiológicos causadores da linfadenite ou pneumonia em humanos, e da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos. Os atuais diagnósticos sorológicos para animais apresentam protocolos de baixa especificidade e sensibilidade, e em humanos é inexistente qualquer kit de diagnóstico desta natureza. Neste trabalho pretendeu-se avaliar o potencial antigênico de quatro proteínas recombinantes de C. pseudotuberculosis (rSodC, rPknG, rNanH e rSpaC) em soros de caprinos, ovinos e duas delas (rPknG e rSodC) em soro de humanos. No modelo animal, caprinos e ovinos foram infectados experimentalmente com inóculos das cepas CAP76, CAP21 ou VD57 (n = 16), e outro grupo desses animais não infectado (n = 12). No modelo humano foram obtidos soro de dois grupos: Grupo 1: participantes tratadores de caprinos e ovinos (n = 14), e Grupo 2: participantes que referiram não ter contato com esses animais (n = 25). As proteínas recombinantes foram produzidas em E. Coli BL21 (DE3) Star, e a antigenicidade foi avaliada com as técnicas de ELISA e/ou Western blot. Análises de homologia e predição de epítopos da rPknG e rSodC, foram realizadas in silico. Com os resultados obtidos pode-se sugerir que a rSodC é uma forte candidata como ferramenta para o diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis em caprinos e ovinos. No modelo humano, a rPknG e a rSodC reagiram indiscriminadamente, sem diferença entre os grupos avaliados. Foi observado, nas análises in silico, que a rPknG e
    a rSodC possuem alta cobertura de homologia com outras espécies do grupo Corynebacterium, Mycobacterium, Rhodococcus, Nocardia (CMRN).


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  • Corynebacterium pseudotuberculosis is one of the etiologic agents causing lymphadenitis or pneumonia in humans, and caseous lymphadenitis in goats and sheep. The current serological diagnosis for animals has a protocol of low specificity and sensitivity, and in humans there is no diagnostic kit of this nature. In this work, we intended to evaluate the antigenic potential of four recombinant proteins of C. pseudotuberculosis (rSodC, rPknG, rNanH and rSpaC) in goat and sheep sera and two of them (rPknG and rSodC) in human serum. In the animal model, goats and sheep were experimentally infected with inoculums of CAP76, CAP21 or VD57 strains (n = 16), and another group of these animals was not infected (n = 12). In the human model, serum was obtained from two groups: Group 1: participants who care for goats and sheep (n = 14), and Group 2: participants who reported not having contact with these animals (n = 25). Recombinant proteins were produced in E. Coli BL21 (DE3) Star, and antigenicity was evaluated using ELISA and/or Western blot techniques. Homology analyzes and epitope prediction of rPknG and rSodC were performed in silico. With the results obtained, it can be suggested that rSodC is a strong
    candidate as a tool for the diagnosis of infection by C. pseudotuberculosis in goats and sheep. In the human model, rPknG and rSodC reacted indiscriminately, with no difference between the evaluated groups. It was observed, in the in-silico analyses, that rPknG and rSodC have high homology coverage with other species of the Corynebacterium,
    Mycobacterium, Rhodococcus, Nocardia (CMRN) group.

2021
Dissertações
1
  • CAROLINA ORRICO MELO FERREIRA DE JESUS
  • Revisão sobre os eventos imunológicos iniciais após a penetração do Schistosoma mansoni e produção de uma elastase cercariana envolvida nesse processo.

  • Orientador : BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
  • Data: 19/01/2021

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  • Schistosoma mansoni é um parasito causador da esquistossomose, doença que, no Brasil, ocorre em uma grande área endêmica tendo cerca de sete milhões de indivíduos infectados. Esse parasito apresenta um complexo ciclo de vida e a infecção dos hospedeiros vertebrados ocorre pela penetração ativa de cercárias através da pele. O processo envolve ação vibratória da cauda da cercária e o esvaziamento das glândulas acetabulares, promovendo a secreção de proteases líticas que auxiliam na penetração da pele do hospedeiro. Estudos comprovam que a resposta imunidade à cercária é diferente em indivíduos que já foram previamente infectados e que nunca tiveram contato com os antígenos do parasita, sendo que a ativação desses mecanismos e as moléculas da cercária que participam deles ainda não foram completamente elucidados. Estudos anteriores descreveram diversas proteínas presentes na secreção de cercárias, sendo que a serino protease elastase (SmCE) é a proteína mais abundante e também a protease mais importante na penetração ativa da pele do hospedeiro. Deste modo, foi levantada a  hipótese de que as proteínas liberadas pela cercária no momento da penetração ativa na pele do hospedeiro vertebrado, em especial a proteína elastase cercariana, promovem diferentes eventos imunológicos em indivíduos que tiveram ou não contato prévio com o parasito. Em um primeiro momento, realizou-se uma revisão da literatura sobre os eventos imunológicos nos momentos iniciais da infecção por S. mansoni destacando as diferenças de uma primeira infecção em relação a casos de reinfecção. Os mecanismos e as moléculas do parasita que fazem parte do processo de penetração ainda não são completamente conhecidos, mas a proteína elastase se destaca nesse processo e, portanto, despertou o interesse para estudos mais específicos. Para tanto, realizou-se a produção heteróloga em bactéria da forma mais abundante da elastase cercariana, SmCE 1a. Além disso, foram realizados experimentos iniciais para a sua caracterização enzimática a partir de ensaios in vitro com substrato cromogênico para elastase. Como resultados, a elastase recombinante foi produzida na cepa Rosetta da bactéria E. coli. Após a purificação, a proteína foi submetida testes enzimáticos que identificaram que, dentre as condições testadas, a melhor atividade enzimática foi obtida com 20 µg de elastase, após 360 min de incubação com o substrato a 37 ºC, em pH 9,0. Mais estudos são necessários para uma melhor caracterização dessa enzima e de seu papel na infecção, mas esses resultados, em conjunto com a revisão realizadas, servem de base para futuras pesquisas e geração de saber a respeito da penetração da cercária de S. mansoni. 


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  • Schistosoma mansoni is a parasite that causes schistosomiasis in Brazil, where this disease occurs in a large endemic area and around seven million individuals are infected. This parasite has a complex life cycle and infection of vertebrate hosts occurs through cercarial active penetration through the skin. This process involves cercaria&#39;s tail vibratory action and acetabular glands contents release, which due to lytic proteases, promotes penetration of the host&#39;s skin. Previous studies demonstrate that immune response to cercariae is different in previously infected or naïve individuals, although the complete mechanisms and cercarial molecules involved in them are not fully elucidated. Previous studies also describe several proteins present in cercariae secretion, being the serine protease elastase (SmCE) the most abundant protein and also the most important protease in active penetration of host&#39;s skin. Thus, we hypothesize that proteins released by the cercariae during active penetration of vertebrate host’s skin, especially cercarial elastase, promote different immunological events in individuals who had or not have previous contact with S. mansoni. Firstly, a careful literature review on immunological initial events of S. mansoni infection was conducted, highlighting the differences among first infection and reinfection. The mechanisms and molecules of the parasite that are part of the penetration process are not fully known, but elastase data concerned more specific studies. For this purpose, heterologous bacterial production of the most abundant isoform of the cercarial elastase, SmCE 1a, was performed. Then, initial experiments using chromogenic substrate for elastase were carried out intending SmCE 1a enzymatic characterization. As a result, recombinant elastase was successfully produced in the Rosetta E. coli strain. After purification, the protein was used in enzymatic tests and, among the conditions tested, the best enzymatic activity was obtained with 20 µg of elastase, 360 min incubation with the substrate at 37 ºC and pH 9.0. Further studies are needed to better characterize this enzyme and its role in infection, but these results, together with the previous review, claim for future research and more knowledge regarding the penetration of S. mansoni cercariae. 

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  • Daniel Santos
  • CINÉTICA DA INFECÇÃO AGUDA POR Toxoplasma gondii E SEUS EFEITOS SOBRE OS COMPONENTES CELULARES E TECIDUAIS DO CÓLON DISTAL DE RATOS WISTAR

  • Orientador : MARCELO BIONDARO GOIS
  • MEMBROS DA BANCA :
  • DÉBORA DE MELLO GONÇALES SANT`ANA
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • MARCELO BIONDARO GOIS
  • Data: 28/01/2021

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  • O Toxoplasma gondii é o parasito intracelular causador da toxoplasmose, doença de distribuição mundial com cerca de 10% a 50% da população humana infectada. Oocistos de T. gondii atingem o lúmen intestinal liberando formas infectantes que transpõem a barreira mucosa provocando uma série de alterações histopatológicas. O estudo em questão visa avaliar a parede do cólon distal ratos, em um modelo experimental de infecção aguda  causada por oocistos de T. gondii, para compreender e descrever os efeitos diretos e indiretos da infecção sobre os componentes celulares e teciduais a parede do órgão. Oitenta ratos Wistar machos foram separados, aleatoriamente, em dois grupos: grupo controle (GC; n=10); e grupo infectado (n=70). Os ratos do grupo infectado receberam, oralmente, 5000 oocistos de T. gondii (cepa ME49, genótipo II) 6, 12, 24, 48 ou 72 horas, 7 ou 10 dias antes da eutanásia (n=10 para cada tempo de infecção). Os ratos do grupo controle receberam apenas água filtrada. Todos os ratos tinham 60 dias de idade no momento da eutanásia. Através de necropsia, o cólon distal, de cada rato, foi coletado, fracionado, fixado e destinado às técnicas histoquímicas, como hematoxilina e eosina (H&E) - para a análise quantitativa, histomorfométrica e histopatológica da parede do cólon distal e para a quantificação de linfócitos intraepiteliais; Periodic Acid Schiff (PAS) - para a quantificação de células caliciformes que secretam mucinas neutras e sialomucinas lábeis; Alcian-Blue (AB) pH 2,5 – para a quantificação de células caliciformes que secretam sialomucinas e sulfomucinas; AB pH 1,0 - para a quantificação de células caliciformes que secretam sulfomucinas; Azul de Toluidina – para a quantificação de mastócitos; Picro-Sirius Red – para a quantificação de fibras de colágeno tipos I e tipo III; e de Giemsa – para a mensuração dos perfis ganglionares nos plexos mioentérico e submucoso. Os resultados demonstraram que a infecção aguda causou alterações histomorfométricas, quantitativas e neuroplásticas em componentes celulares e teciduais da parede do cólon distal de ratos. Dentre os principais danos observados, as alterações histopatológicas, o aumento no número de linfócitos intraepiteliais e mastócitos e as alterações em gânglios do sistema nervoso entérico, durante os primeiros 10 dias após a infecção, chamam a atenção, pois não foram observados sinais clínicos da toxoplasmose. Apesar disso, nossos resultados sugerem que, mesmo em modelo experimental imunocompetente assim como na grande maioria da população humana soropositiva para T. gondii, a infecção aguda desencadeia uma resposta inflamatória semelhante àquela observada em doenças inflamatórias intestinais. Ainda que assintomática, em longo prazo, a toxoplasmose pode se tornar gatilho para inflamação intestinal.

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  • Toxoplasma gondii is the intracellular parasite that causes toxoplasmosis, a worldwide disease with about 10% to 50% of the infected human population. T. gondii oocysts reach the intestinal lumen, releasing infectious forms that cross the mucous barrier, causing a series of histopathological changes. The study in question aims to evaluate the distal colon wall of rats, in an experimental model of acute infection caused by T. gondii oocysts, to understand and describe the direct and indirect effects of the infection on the cell and tissue components of the organ wall. Eighty male Wistar rats were randomly separated into two groups: control group (CG; n = 10); and infected group (n=70). The rats in the infected group received 5,000 oocysts of T. gondii (strain ME49, genotype II) orally 6, 12, 24, 48 or 72 hours, 7 or 10 days before euthanasia (n=10 for each time of infection) . The control group rats received only filtered water. All rats were 60 days old at the time of euthanasia. Through necropsy, the distal colon of each rat was collected, fractionated, fixed and destined to histochemical techniques, such as hematoxylin and eosin (H&E) - for the quantitative, histomorphometric and histopathological analysis of the distal colon wall and for the quantification of intraepithelial lymphocytes; Periodic Acid Schiff (PAS) - for the quantification of goblet cells that secrete neutral mucins and labile sialomucins; Alcian-Blue (AB) pH 2.5 - for the quantification of goblet cells that secrete sialomucins and sulfomucins; AB pH 1.0 - for the quantification of goblet cells that secrete sulfomucins; Toluidine Blue - for the quantification of mast cells; Picro- Sirius Red - for the quantification of types I and type III collagen fibers; and Giemsa - for the measurement of ganglionic profiles in the myenteric and submucosal plexuses. The results showed that the acute infection caused histomorphometric, quantitative and neuroplastic changes in cellular and tissue components of the distal colon wall of rats. Among the main damages observed, histopathological changes, the increase in the number of intraepithelial lymphocytes and changes in ganglia of the enteric nervous system, during the first 10 days after infection, call attention, as no clinical signs of toxoplasmosis were observed. Despite this, our results suggest that, even in an immunocompetent experimental model as well as in the vast majority of the human population seropositive for T. gondii, acute infection triggers an inflammatory response similar to that observed in inflammatory bowel diseases. Although asymptomatic, in the long run, toxoplasmosis can become a trigger for intestinal inflammation. 
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  • LOUISE CORREIA DE LIMA
  • ESTUDO DE POLIMORFISMOS GENÉTICOS RELACIONADOS ÀS CÉLULAS LINFOIDES INATAS DO TIPO 2 E SUA ASSOCIAÇÃO COM FENÓTIPOS DE ASMA.

  • Orientador : VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • Data: 08/02/2021

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  • A asma é uma doença inflamatória crônica que causa impacto na vida de milhões de pessoas em todo o mundo. Existem vários fenótipos e endofenótipos dessa patologia, e alguns estão associados ao aumento dos eosinófilos no sangue e no escarro. Esse aumento pode causar maior gravidade da doença e estudos mostram que este aumento pode estar associado a genes relacionados às células linfoides inatas do tipo 2 (ILC2) e citocinas liberadas por estas células. A proposta deste trabalho é avaliar a associação entre polimorfismos em genes relacionados às ILC2 (TSLP, IL25, GATA3 e RORA) com asma e seus endofenótipos. Este é um estudo caso-controle não convencional composto por pacientes do Programa de Controle da Asma e Rinite Alérgica na Bahia (ProAR), com pacientes maiores de 18 anos e residentes em Salvador-BA. Sixteen SNPs nos genes estudados foram associados significativamente com variáveis de asma e atopia. Utilizamos modelos aditivos de regressão logística para todos os genes. Os SNPs do gene TSLP apresentaram associações de proteção para asma e gravidade da asma corroborando com análises de dosagem de eotaxina, que se mostrou diminuída em pacientes com alelo alternativo. Porém, SNPs no gene GATA3 demonstraram associações de risco para asma e atopia. Os SNPs no gene IL25 apresentaram associações de risco para asma e atopia, três deles demosntram associações tanto de risco quanto de proteção para falta de controle da asma e teste cutâneo para alérgenos (atopia). Além disso, seus alelos alternativos também diminuíram os níveis de eotaxina em plasma de paciente asmáticos. O gene RORA se mostrou bastante polimórfico, com resultados significativos de associações tanto de risco quanto proteção para todas as variáveis do estudo e dados significantes para dosagem de citocinas. Estes dados demonstram que variantes nos genes TSLP, IL25, GATA3 e RORA causam diferentes impactos sobre a asma e seus diferentes endofenótipos na população do ProAR, que é composta por indivíduos adultos e de descendência africana. Contudo, estudos funcionais são necessários para elucidar os mecanismos envolvidos nestes resultados.


  • Mostrar Abstract
  • Asthma is a chronic inflammatory disease that impacts the lives of millions of people worldwide. There are several phenotypes and endophenotypes of this pathology, and some are associated with an increase in eosinophils in the blood and sputum. This increase may cause greater severity of the disease and studies show that this increase may be associated with genes related to type 2 innate lymphoid cells (ILC2) and cytokines released by these cells. The purpose of this work is to evaluate the association  between polymorphisms in genes related to ILC2 (TSLP, IL25, GATA3 and RORA) with asthma and its endophenotypes. This is an unconventional case-control study composed  of patients from the Asthma and Allergic Rhinitis Control Program in Bahia (ProAR), with patients over 18 years old and living in Salvador-BA. Sixteen SNPs in the studied genes were significantly associated with asthma and atopy variables. We use additive logistic regression models for all genes. The SPs of the TSLP gene showed protective associations for asthma and asthma severity, corroborating with analyzes of eotaxin dosage, which was shown to be reduced in patients with alternative allele. However, SNPs in the GATA3 gene demonstrated risk associations for asthma and atopy. The SNPs in the IL25 gene showed risk associations for asthma and atopy, three of them showing associations of both risk and protection for lack of asthma control and skin test for allergens (atopy). In addition, its alternative alleles also decreased eotaxin levels in plasma of asthmatic patients. The RORA gene was shown to be quite polymorphic, with significant results from associations of both risk and protection for all study variables and significant data for cytokine dosage. These data demonstrate that variants in the TSLP, IL25, GATA3 and RORA genes have different impacts on asthma and its different endophenotypes in the ProAR population, which is composed of adults and individuals of African descent. However, functional studies are needed to elucidate the mechanisms involved in these results.

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  • ÍTALO SANTOS UZÊDA
  • ESTUDO DE VARIANTES NO GENE MTOR COM ASMA E CONTROLE TERAPÊUTICO EM UMA POPULAÇÃO DE SALVADOR/BA / BA. 2020.

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 22/02/2021

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  • A asma é uma doença inflamatória crônica das vias aéreas inferiores, caracterizada pela hiperreatividade, produção de muco e obstrução das vias aéreas. Diversos fatores influenciam na sua susceptibilidade e desenvolvimento, entre eles a variabilidade genética. O gene mTOR codifica o uma serina / treonina-quinase evolutivamente conservada que desempenha um papel central na integração de sinais ambientais na forma de fatores de crescimento, aminoácidos, na regulação de diversas células imunes, incluindo neutrófilos, mastócitos, células assassinas naturais, células T γδ, macrófagos, células dendríticas (DCs), células T e células B.
    Em busca de variantes no MTOR em virtude da sua importância central no metabolismo da resposta imunológica, admite-se a possível interferência de variantes de nucleotídeo único, SNPs, no qaudro asmático. O mTOR é ativado
    durante o início da asma e suprimido durante a remissão da asma e a inibição da via do mTOR em asmáticos diminui a expressão de marcadores asmáticos e restaurando o padrão das citocinas Th17 / Treg e Th1 / Th2. O objetivo deste trabalho é investigar como variantes no mTOR estão associadas com a asma, atopia e resposta terapêutica. O estudo foi realizado na população do PROAR, onde amostras de indivíduos adultos foram genotipadas utilizando o chip Illumina Infinium Multi-Ethnic AMR/AFR-8 Kit. As análises de associação foram realizadas utilizando o software Plink. As variantes rs1057079, rs7525957 e rs12122483 foram associadas com asma das vias aéreas. Enquanto que as variantes rs1057079 e rs7525957 foram associadas com o fenótipo de atopia. Além disso, oito variantes foram associadas com a produção significativa de eotaxina, para além da IL 8 com quatro variantes, IL  12 com três variantes, IL 17 e IL 5, ambas com duas. Portanto, essas variantes em único nucleotídeo podem auxiliar na melhor compreensão da asma e sua estratégia terapêutica e tem potencial para futuros estudos funcionais para melhor entender esta via.


  • Mostrar Abstract
  • Asthma is a chronic inflammatory disease of the lower airways, characterized by hyperreactivity, mucus production and airway obstruction. Several factors influence its susceptibility and development, including genetic variability. The mTOR gene encodes an evolutionarily conserved serine / threonine kinase that plays a central role in the integration of environmental signals in the form of growth factors, amino acids, in the regulation of several immune cells, including neutrophils, mast cells, natural killer cells, T cells γδ, macrophages, dendritic cells (DCs), T cells and B cells. In search of variants in MTOR due to its central importance in the metabolism of the immune response, the possible interference of single nucleotide variants, SNPs, is admitted in the qaudro asthmatic. The MTOR gene is activated during the onset of asthma and suppressed during asthma remission and inhibition of the mTOR pathway in asthmatics decreases the expression of asthmatic markers and restoring the pattern of Th17 / Treg and Th1 / Th2 cytokines. The objective of this work is to investigate how variants in mTOR are associated with asthma, atopy and therapeutic response. The study was carried out in the PROAR population, where samples from adult individuals were genotyped using the Illumina Infinium Multi-Ethnic AMR / AFR-8 Kit chip. Association analyzes were performed using the Plink software. The variants rs1057079, rs7525957 and rs12122483 were associated with airway asthma. While the rs1057079 and rs7525957 variants were associated with the atopy phenotype. In addition, eight variants were associated with significant eotaxin production, in addition to IL 8 with four variants, IL 12 with three variants, IL 17 and IL 5, both with two. Therefore, these variants in a single nucleotide can assist in better understanding of asthma and its therapeutic strategy and have the potential for future functional studies to better understand this pathway. 

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  • CRISLEIDE MACEDO ALVES SANTOS
  • AVALIAÇÃO DA PATOGENICIDADE DAS ASSEMBLAGES AII E BIV DE Giardia duodenalis SOBRE AS CÉLULAS E TECIDOS QUE COMPÕEM A PAREDE DO DUODENO E DO JEJUNO DE CAMUNDONGOS SWISS

  • Orientador : MARCELO BIONDARO GOIS
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MARCELO BIONDARO GOIS
  • Mariana Felgueira Pavanelli
  • Data: 26/02/2021

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  • Giardia duodenalis é um protozoário encontrado no intestino delgado de animais e humanos. Embora os fatores de virulência não sejam completamente elucidados,acredita-se que a patogenicidade esteja associada à assemblage. Previamente foram relatadas alterações na morfologia intestinal, bem como em células epiteliais,em neurônios e células da glia entérica após a infecção por assemblages AII e BIV de G. duodenalis. Desta forma, o objetivo do presente estudo é avaliar os efeitos da patogenicidade das assemblages AII e BIV de G. duodenalis sobre as células e tecidos que compõem a parede do duodeno e do jejuno de camundongos. Os procedimentos foram analisados e aprovados pela Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEEA; Nº. 1070/2014). Vinte e um camundongos Swiss foram distribuídos, aleatoriamente, em três grupos (n=7), dos quais dois foram inoculados com 1000 cistos das assemblages AII ou BIV de G. duodenalis e um grupo controle. Quinze dias após a inoculação, os camundongos foram submetidos à eutanásia. O duodeno e o jejuno foram coletados, fixados, embebidos em parafina e submetidos à rotina histopatológica. Cortes transversais com quatro micrometros de espessura foram corados em hematoxilina e eosina, Azul de Toluidina ou Picro- Sirius Red. As análises, realizadas em células e tecidos que compõem a parede do duodeno e jejuno de camundongos infectados, demonstraram alterações morfométricas nas áreas dos perfis de gânglios dos plexos mioentérico e submucoso; alterações histopatológicas, incluindo a presença de infiltrados inflamatórios, perda da histoarquitetura, comprometimento de criptas intestinais, duodenite e criptite; aumento no número de mitoses, mastócitos e remodelação das fibras de colágeno tipo I e III. Apesar das assemblages utilizadas neste estudo apresentarem perfis moleculares diferentes, exceto pela deposição de colágeno III no duodeno de camundongos infectados com a assemblagem BIV, os efeitos da patogenicidade foram semelhantes sobre os parâmetros avaliados. Em conjunto,
    nossos resultados fornecem evidências suficientes para sugerir que as alterações observadas intensificaram significativamente o processo fisiopatológico que ocorreu independente da assemblage de G. duodenalis. Novos estudos são necessários para avaliar o código químico dos neurônios do sistema nervoso entérico e identificar
    os mediadores envolvidos na resposta tecidual à infecção desencadeada pelas assemblages AII e BIV de G. duodenalis. 


  • Mostrar Abstract
  • Giardia duodenalis is a protozoan found in the small intestine of animals and humans. Although virulence factors are not completely elucidated, it is believed that pathogenicity is associated with assemblage. Changes in intestinal morphology, as well as in epithelial cells, neurons, and enteric glial cells were previously reported after infection by G. duodenalis AII and BIV assemblages. Thus, the objective of the present study is to evaluate the effects of the pathogenicity of the G. duodenalis assemblies AII and BIV on the cells and tissues that make up the wall of the duodenum and the jejunum of mice. The procedures were analyzed and approved by the Ethics Committee on Animal Experimentation (CEEA; Nº. 1070/2014). Twenty- one Swiss mice were randomly assigned to three groups (n = 7), two of which were inoculated with 1000 cysts from G. duodenalis AII or BIV assemblages and one control group. Fifteen days after inoculation, the mice were euthanized. The duodenum and jejunum were collected, fixed, embedded in paraffin, and submitted to histopathological routine. Cross-sections of four micrometers thick were stained in hematoxylin and eosin, Toluidine Blue, or Picro-Sirius Red. The analyzes, performed on cells and tissues that make up the wall of the duodenum and jejunum of infected mice, showed morphometric changes in the areas of the profiles of myenteric and submucosal plexus ganglia; histopathological changes, including the presence of inflammatory infiltrates, loss of histoarchitecture, impairment of intestinal crypts, duodenitis, and cryptitis; increase in the number of mitoses, mast cells, and remodeling of type I and III collagen fibers. Despite the assemblages used in this study have different molecular profiles, except for the deposition of collagen III in the duodenum of mice infected with the BIV assembly, the effects of pathogenicity were similar on the evaluated parameters. Taken together, our results provide sufficient evidence to suggest that the observed changes significantly intensified the pathophysiological process that occurred independently of the G. duodenalis assemblage. Further studies are needed to assess the chemical code of neurons in the enteric nervous system and to identify the mediators involved in the tissue response to infection triggered by the G. duodenalis assemblies AII and BIV. 

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  • JULIA RAMOS SAMPAIO
  • ASPECTOS DO DIAGNÓSTICO DA INFECÇÃO POR Leishmania infantum EM CÃES E HUMANOS UTILIZANDO ANTÍGENOS NÃO PROTEICOS


  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BLIMA FUX
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • Data: 30/04/2021

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  • A leishmaniose visceral (LV) é uma das principais doenças emergentes no mundo, afetando principalmente cães e humanos. Uma das moléculas mais prevalentes na superfície de Leishmania infantum é o lipofosfoglicano (LPG), que apresenta alto poder antigênico, é altamente estável e de fácil extração. Este trabalho teve como objetivos desenvolver um teste imunocromatográfico para cães usando LPG como antígenos, testar o uso do LPG em um ensaio de ELISA para LV humana (LVH) e avaliar o a presença de anticorpos anti-LPG como marcador de resposta ao tratamento contra a doença em cães. Para a padronização do teste rápido (TR-LPG LVC), foram utilizadas 20 amostras de soros de cães sintomáticos, 20 de assintomáticos e 30 de cães provenientes de área não endêmica para LV como controle negativo; foi testada a reatividade cruzada com soros de cães naturalmente infectados por Leishmania braziliensis (n = 10) e cães vacinados com a Leish-Tec® (n = 7). No ELISA para LVH, foram utilizadas 45 amostras de soros de pacientes sintomáticos, 45 de pacientes de área não endêmica, e amostras de soros de pacientes infectados por Trypanosoma cruzi (n = 20) e L. braziliensis (n = 20) para o teste de reatividacde cruzada. No ELISA LPG para cães em tratamento, foram utilizadas amostras de soro de 7 cães que responderam ao tratamento e 8 que não responderam, em seis diferentes tempos do tratamento e os resultados foram omparados com o ELISA usando lisado antigênico total como antígeno. O TR-LPG LVC conferiu uma sensibilidade de 70%, especificidade de 96,6%, reconheceu 81,8% dos cães assintomáticos e não apresentou reação cruzada com L. braziliensis. O ELISA para LVH conferiu uma sensibilidade de 71,1%, especificidade de 64,4% e apresentou reação cruzada com as duas espécies testadas. O reconhecimento de LPG não foi diferenciado em animais respondedores e não respondedores ao tratamento. Como conclusão, apesar do LPG mostrar ser uma molécula promissora no uso como antígeno no teste rápido, ainda são necessários mais ajustes na padronização dos métodos para melhorar a sensibilidade. Além disso, o LPG não apresentou ser um antígeno adequado no imunodiagnóstico para LVH, e o reconhecimento de LPG não é fator determinante para diferenciar cães respondedores ou não ao tratamento.



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  • Visceral leishmaniasis (VL) is one of the most important emerging diseases in the world,affecting mainly dogs and humans. One of the most prevalent molecules on the surface of Leishmania infantum is the lipophosphoglycan (LPG), which has high antigenic power, is highly stable and easy to extract. This work aimed to develop an immunochromatographic test for dogs using LPG as antigens, to test the use of LPG in an ELISA for human LV (LVH) and to evaluate the presence of anti-LPG antibodies as a marker of response to the treatment against the disease in dogs. For the standardization of the rapid test (TR-LPG LVC), 20 serum samples from symptomatic dogs, 20 from asymptomatic dogs, and 30 from dogs from a non-endemic area for VL were used; cross-reactivity was tested with sera from dogs naturally infected by Leishmania braziliensis (n = 10) and dogs vaccinated with Leish-Tec® (n = 7). In the ELISA for LVH, were used 45 serum samples from symptomatic patients, 45 samples from patients from a non-endemic area, and serum samples from patients infected with Trypanosoma cruzi (n = 20) and L. braziliensis (n = 20) were used for the cross-reactivity test. In the ELISA LPG for dogs under treatment, serum samples from 7 dogs that responded to the treatment and from 8 that did not respond, at six different times of treatment, were used and the results were compared with the ELISA using a total antigenic lysate as antigen. The TR-LPG LVC gave a sensitivity of 70%, specificity of 96.6%, recognized 81.8% of asymptomatic dogs and did not cross-react with L. braziliensis. The ELISA for LVH conferred a sensitivity of 71.1%, specificity of 64.4% and cross-reacted with the two species tested. The recognition of LPG was not differentiated in dogs that responded or not to the treatment. As a conclusion, although LPG shows to be a promising molecule for use as an antigen in the rapid test, further adjustments in the standardization of the method are still needed to improve sensitivity. In addition, LPG did not prove to be an adequate antigen in the immunodiagnosis of LVH, and recognition of LPG is not a determining factor to differentiate dogs that respond or not to the treatment.

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  • LUCIA FONSECA SANTANA
  • CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICA EM UM NOVO MODELO DE CULTURA DE CÉLULAS CEREBELARES PARA O ESTUDO DE NEUROINFLAMAÇÃO

  • Orientador : VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JULITA MARIA PEREIRA BORGES
  • LUCIANA SOUZA DE ARAGAO FRANCA
  • SILVIA LIMA COSTA
  • VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
  • Data: 04/06/2021

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  • Astrócitos e microglia são as principais células gliais da resposta imune no sistema nervoso central (SNC) e suas ativações podem fazer parte da patogênese de enfermidades neurodegenerativas. Estas células podem ser
    ativadas por diferentes indutores químicos ou físicos e assumir perfis de resposta pró-inflamatória, regulatória, neurotóxica ou neuroprotetora. Diante disso, diferentes modelos in vitro têm sido propostos para o estudo da
    neuroinflamação. Modelos clássicos de cultura de cerebelo utilizam protocolos com aparente baixo rendimento de neurônios e não caracterizam todas as células gliais durante a resposta inflamatória. Neste estudo desenvolvemos um novo protocolo de cultura primária de células do cerebelo para obtenção de maior rendimento de neurônios e para caracterizar as mudanças morfológicas em células gliais e neurônios frente a estímulo inflamatório. Para tanto, culturas primárias de cerebelo foram cultivadas com fatores de crescimento (bFGF, insulina) e meio condicionado autócrino. Posteriormente as culturas foram expostas a 1 μg/mL de lipopolissacarídeo de Escherichia coli (LPS) e feitas análises de integridade de neurônios por coloração com Fluoro Jade B (FJB) e análises imunocitoquímica para os marcadores de neurônios: proteína beta tubulina 3 do citoesqueleto neuronal (β-TUB III); de astrócitos: proteína ácida fibrilar glial-GFAP e membro da família L1 aldeído desidrogenase 1 (ALDH1 L1); de microglia: molécula adaptadora ionizada de ligação ao cálcio 1 (Iba1) e de precursores de oligodendrócitos (OPCs): fator de transcrição Olig2 (Olig2), seguidas de contagem da população neuronal e análise de morfologia glial por microscopia de fluorescência. O novo modelo de cultura apresentou uma proporção de 58% de neurônios, 27% de astrócitos, 6% de microglia e 8% de OPC. Após estímulo com LPS foi possível observar que a cultura preservou o padrão de resposta glial, apresentou neurodegeneração expressiva e mudanças morfológicas em neurônios e microglia. Este conjunto de dados ainda não havia sido descrito em estudos anteriores com modelos clássicos de cultura primária do cerebelo, por isso, sugerimos a sua aplicação como uma ferramenta valiosa para estudar mudanças morfológicas associadas à neuroinflamação e neurodegeneração. 


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  • Astrocytes and microglia are the main glial cells of the immune response in the central nervous system (CNS) and their activation may be part of the pathogenesis of neurodegenerative diseases. These cells can be activated by different chemical or physical inducers and assume pro-inflammatory, regulatory, neurotoxic or neuroprotective response profiles. Hence, different in vitro models have been proposed for the study of neuroinflammation. Classic cerebellum culture models use protocols with an apparent low yield of neurons and do not characterize all glial cells during the inflammatory response. In this study, we developed a new primary cerebellum cell culture protocol to obtain a higher yield of neurons and characterize morphological changes in glial cells and neurons under inflammatory stimulation. Therefore, primary cerebellum cultures were plated with growth factors (bFGF and insulin) and autocrine conditioned medium. Subsequently, the cultures were exposed to 1 μg/mL Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) and analyzes were performed to assess neuron degeneration by staining with Fluoro Jade B (FJB) and to immunocytochemistry for the markers of neurons: a protein of the neuronal cytoskeleton (β-TUB III); of astrocytes: a glial fibrillary acidic protein (GFAP) and a member of the L1 aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH1 L1) family; of microglia: a ionized calcium-binding adaptor molecule 1 (Iba1) and of oligodendrocyte precursors (OPCs) a Oligodendrocyte transcription factor (Olig2), followed by neuronal population counting and analysis of glial morphology by fluorescence microscopy. The new culture model showed a proportion of 58% neurons, 27% astrocytes, 6% microglia, and 8% OPC. It was observed that the culture preserved the glial response pattern, showed significant neurodegeneration and morphologic al changes in neurons and microglia after stimulation with LPS. This set of data has not previously been described with classical primary culture models of cerebellum. Thus, we suggest its application as a valuable tool to study morphological changes associated with neuroinflammation and neurodegeneration.

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  • Bernardo Mirabal Santos
  • Predição de Compostos Naturais Terapêuticos e Proposição de Proteína Multi-Epítopo com Potencial Imunogênico contra Infecções Causadas por Streptococcus equi

  • Orientador : THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RICARDO WAGNER DIAS PORTELA
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • SANDEEP TIWARI
  • THIAGO LUIZ DE PAULA CASTRO
  • Data: 09/07/2021

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  • Streptococcus equi subsp. equi e Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, causam impacto socioeconômico significativo no contexto da equideocultura. S. equi subsp. equi é o agente etiológico da adenite equina, doença de grande prevalência entre equídeos e S. equi subsp. zooepidemicus é uma bactéria oportunista que causa doença inflamatória das vias inferiores e pode infectar outros organismos, incluindo humanos. Neste trabalho, utilizamos as abordagens in silico para propor imunógenos e drogas contra as doenças associadas a estas bactérias. Para isso, selecionamos 18 linhagens de genoma completo das subespécies e selecionamos as proteínas ortólogas e a partir da localização subcelular destas proteínas, predizemos quatro associadas a virulência localizadas no citoplasma e simulamos a interação destas, a compostos naturais para selecionar os melhores  apazes de desestabilizar a célula bacteriana. Dentre as proteínas localizadas em membrana externa e secretadas pela bactéria, predizemos seis, como potenciais candidatas a vacina. Pesquisamos epítopos de alta afinidade a moléculas de MHC I, MHC II, e células B e que induzem resposta imune. A seleção dos melhores epítopos conduziu à construção de uma proteína quimérica molecularmente estável e antigênica com potencial imunogênico contra as subespécies. Predizemos sua estrutura tridimensional, simulamos sua interação ao TLR2 e predizemos sua capacidade de ser produzida em laboratório para demais testes in vitro. Como conclusão, apresentamos imunógeno e drogas com potencial emprego no combate às doenças causadas por ambas as subespécies em equídeos e estes resultados podem direcionar os esforços da experimentação in vitro e in vivo para o desenvolvimento de novos produtos
    biotecnológicos. 


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  • Streptococcus equi subsp. equi and Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, cause significant socioeconomic impact in the context of equine culture. S. equi subsp. equi is the agent of equine strangles, a disease of great prevalence among horses, and S. equi subsp. zooepidemicus is an opportunistic bacterium that causes lower tract inflammator disease and can infect other organisms, including humans. In this work, we use in silico approaches to propose immunogens and drugs against diseases associated with these bacteria. For this, we selected 18 complete genome strains from the two S. equi subspecies, predicted the orthologous proteins and the subcellular location of these proteins. We also predicted four proteins associated with virulence located in the cytoplasm and simulated their interaction with natural compounds to select the best ones capable of destabilizing the bacterial cell. Among the proteins located in the outer membrane and secreted by the bacteria, we predict six as potential vaccine candidates. We searched for high-affinity epitopes to molecules of MHC I, MHC II, and B cells that induce an immune response. The selection of the best epitopes led to the construction of a molecularly stable and antigenic chimeric protein with immunogenic potential against the subspecies. We predict its three-dimensional structure, simulate its interaction with TLR2 and predict its ability to be produced in the laboratory for further in vitro tests. In conclusion, we present immunogen and drugs with potential use in combating diseases caused by both subspecies in horses and these results can direct the efforts of in vitro and in vivo experimentation for the development of new biotechnological products. 

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  • Jéssica Francisco de Araújo
  • ESTUDO DE VARIANTES GENÉTICAS DE miRNAs QUE MODULAM A VIA β2-ADRENÉRGICA E SUA ASSOCIAÇÃO COM ASMA E CONTROLE TERAPÊUTICO.

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • CINTIA RODRIGUES MARQUES
  • JAMILLE SOUZA FERNANDES
  • Data: 29/09/2021

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  • A asma é caracterizada como uma doença obstrutiva das vias aéreas, que envolve inflamação crônica do trato respiratório. Uma das principais estratégias terapêuticas é a broncodilatação dependente da via β2-adrenérgica (ADRβ2). Nas células musculares lisas das vias aéreas, a ativação desta via resulta na elevação intracelular do cAMP devido à ativação da adenilato ciclase, levando a broncodilatação, através da fosforilação de diversas estruturas intracelulares pela PKA (proteína kinase A). MicroRNAs têm o potencial de interferir na via ADRβ2, que pode ter impacto nos níveis de expressão gênica e podem apresentar variantes genéticas que interfiram na sua atividade regulatória. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi investigar a associação de polimorfismos, em gene que codificam microRNAs, que modulam a via ADRβ2 com a gravidade e resposta terapêutica na asma. Para isso, foram incluídos indivíduos com asma leve (n = 383), asma grave (n = 366) e sem asma (n = 335) - todos adultos, residentes em Salvador e incluídos no estudo do ProAR (Programa para Controle na Bahia). Foram encontrados 10 SNPs no MIR4500 e 01 SNP no MIR4458 significativamente associados a pelo menos um dos desfechos. Indivíduos com asma possuindo ao menos um alelo de risco das variantes rs11619479, rs4540935, rs9517210, rs12021224 e rs9300492 apresentaram pelo menos 40% de chance de possuir a forma mais grave da doença. Já no gene MIR4458, indivíduos com asma e possuindo ao menos um alelo G do rs75563522, tem menor chance de apresentar uma doença mais grave. Os SNPs rs111999812 (alelo A) e rs2992106 (alelo A) se apresentaram como fator de risco, sendo que indivíduos com o rs111999812 apresentaram quase duas vezes mais chances de não responderem à terapia. A variante rs2992106 também se apresentou como fator de proteção para a falta de controle da doença, assim como o rs55854519. Com isso, podemos concluir que variantes em MIR4500 e MIR4458 podem influenciar na resposta broncodilatadora do tratamento de indivíduos asmáticos. Estudos funcionais de replicação e validação permitirão uma melhor caracterização do impacto dessas variantes, o que pode contribuir para uma resposta terapêutica mais personalizada. 


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  • Asthma is characterized as an obstructive airway disease that involves chronic inflammation of the respiratory tract. One of the main therapeutic strategies is the β2-adrenergic pathway-dependent bronchodilation (ADRβ2). In airway smooth muscle cells, activation of this pathway results in intracellular elevation of cAMP due to activation of adenylate cyclase, leading to bronchodilation through phosphorylation of various intracellular structures by PKA (protein kinase A). MicroRNAs have the potential to interfere with the ADRβ2 pathway, which may impact gene expression levels and may present genetic variants that interfere with its regulatory activity. Thus, the aim of the present study was to investigate the association of gene polymorphisms that encode microRNAs that modulate the ADRβ2 pathway with asthma severity and therapeutic response. For this purpose, individuals with mild asthma (n = 383), severe asthma (n = 366) and without asthma (n = 335) were included, all adults, living in Salvador and included in the ProAR study (Asthma Control Program of asthma in Bahia). 
    We found 10 SNPs in MIR4500 and 01 SNP in MIR4458 significantly associated with at least one of the outcomes. Individuals with asthma having at least one risk allele of the variants rs11619479, rs4540935, rs9517210, rs12021224 and rs9300492 had at least a 40% chance of having the most severe form of the disease. In the MIR4458 gene, individuals with asthma having at least one G allele of rs75563522 are less likely to have a more severe disease. SNPs rs111999812 (allele A) and rs2992106 (allele A) were a risk factor, with individuals with rs111999812 being almost twice as likely to not respond to therapy. The rs2992106 variant also presented itself as a protective factor for the lack of disease control, as well as the rs55854519. Thus, we can conclude that variants in MIR4500 and MIR4458 can influence the bronchodilator response in the treatment of asthmatic individuals. Functional, replication and validation studies will allow a better characterization of the
    impact of these variants, which may contribute to a more personalized therapeutic response. 

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  • Maria Cristina Ochoa Avilés
  • Perfis de metilação e polimorfismos no gene il10 em crianças com asma residentes na cidade de Cuenca-Equador

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • CINTHIA VILA NOVA SANTANA
  • VITOR ANTONIO FORTUNA
  • Data: 10/12/2021

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  • Não existe evidência sob a regulação genética e epigenética em IL10 entre crianças mestiças numa cidade de elevada altitude na América Latina. Objetivo: identificar polimorfismos e perfis de metilação no gene da IL-10 associados à asma em crianças de 5 a 11 anos na área urbana de Cuenca. Métodos: um estudo caso-controle foi realizado com crianças com asma e não asmáticas de 5 a 11 anos de idade em Cuenca. Dados sobre doenças alérgicas e fatores de risco foram coletados por questionário aplicados aos pais. A atopia foi medida pela reatividade do teste cutâneo (SPT) utilizando um painel de aeroalérgenos relevantes. Três polimorfismos de nucleotídeo único do gene IL10 foram avaliados em todos os participantes e as análises de metilação foi realizado em 54 participantes do estudo. As associações entre os fatores de risco, as doenças alérgicas e os fatores genéticos foram estimadas por meio de regressão logística multivariável. Resultados: os resultados dos polimorfismos demonstraram que não existem diferenças entre casos e controles ao comparar as frequências alélicas e genotípicas dos SNPs rs3024495, rs3024496, rs1800896. Na análise de metilação, não foram encontradas diferenças de metilação na região promotora do gene IL10 entre casos e controles, entretanto, a análise multivariada demonstrou uma associação dos hábitos de fumar da mãe com a metilação da região promotora do gene a qual indica a importância da exposição ambiental na modulação da expressão gênica.


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  • There is no evidence evaluating the IL10 gene epigenetic up regulation among mestizo children in a high-altitude city in Latin America. Objective: to identify polymorphisms and methylation profiles in the IL10 gene associated with asthma in children aged 5 to 11 years in the urban area of Cuenca. Methods: a case-control study was carried out with asthmatic and non-asthmatic children aged 5 to 11 years in Cuenca. Data on allergic diseases and risk factors were collected through a questionnaire applied to parents. Atopy was measured by skin test reactivity (SPT) using a panel of relevant aeroallergens. Three IL10 single nucleotide polymorphisms were evaluated in all participants and methylation analyzes were performed in 54 study participants. Associations between risk factors, allergic diseases and genetic factors were estimated using multivariate logistic regression. Results: the results of polymorphisms showed that there are no differences between cases and controls when comparing the allelic and genotypic frequencies of SNPs rs3024495, rs3024496, rs1800896. In the methylation analysis, no differences in methylation in the promoter region of the IL10 gene were found between cases and controls, however, the multivariate analysis showed an association of the mother&#39;s smoking habits with the methylation of the promoter region of the gene, which indicates the importance of environmental exposure in the modulation of gene expression.

Teses
1
  • FILLIPE MENDES DE ARAÚJO
  • Caracterização da resposta neuroinflamatória em modelo In vivo de estudo da doença de Parkinson induzido por aminocromo e avaliação do efeito neuroprotetor da rutina

  • Orientador : VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JUCIELE VALERIA RIBEIRO DE OLIVEIRA
  • VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
  • MARCELO BIONDARO GOIS
  • NATALIA PESSOA ROCHA
  • PATRICIA ALEJANDRA MUÑOZ SALVATIERRA
  • Data: 12/02/2021

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  • A doença de Parkinson é caracterizada principalmente pela perda dos neurônios do paminérgicos que contêm neuromelanina na substância nigra pars compacta. Os mecanismos responsáveis por esta neurodegeneração permanecem desconhecidos, contudo, algumas desordens celulares e moleculares são consideradas envolvidas neste processo, tais como, acúmulo de α-sinucleina, estresse oxidativo, dano mitocondrial, disfunção proteossomal, disfunção autofágica e neuroinflamação. Dentre estas, a neuroinflamação em modelo in vivo
    ainda não foi associada com os efeitos deletérios induzidos pela neurotoxina endógena, aminocromo. Essa molecula tem origem a partir da oxidação da dopamina em pH citosólico e é um precusor da neuromelanina, que em condições especificas pode se acumular em neurônios dopaminérgicos e gerar citotocixidade. Neste sentido, este trabalho tem como principal objetivo de estudo caracterizar a resposta neuroinflamatória induzida pelo aminocromo em modelo in vivo de estudo de DP com foco na ativação de células gliais e sua regulação por composto neuroprotetor. Neste sentido, esta tese inicia com um capítulo de revisão, no qual abordamos os principais aspectos da neuroinflamação na DP e marcadores moleculares que possam a ser investigados nos dois seguintes capítulos contendo dados experimentais. Assim, para o segundo e terceiro capítulo, ratos Wistar foram divididos em 5 grupos (1: Controle negativo, 2: rutina 10 mg/ kg, 3: 6-hidroxidopamina 32 nmol; 4: aminochrome 6 nmol e 5: aminochrome + rutin). Os animais receberam rutina por via oral 30 minutos antes da injeção estereotáxica de aminocromo ou 6-OHDA no corpo estriado e diariamente tratados por via oral com rutina até o 14o dia experimental. Após a eutanásia, os cérebros foram fixados em paraformaldeido 4%, cortes em micrótomo e análises imunohistoquímicas para Iba-1, CD68, GFAP, S100b e Tirosina hidroxilase (TH) foram realizadas. Além disso, foi coletado material para análise de mRNA para IL-1β, TNF-α, NRLP3, CCL5, and CCR2 por RT-qPCR. Observamos que aminocromo e 6-OHDA foram capazes de gerar aumento no número total de microglia, bem como aumentar a quantidade de microglia ativada evidenciada por células Iba-1+/CD68+ co- localizadas. Também foi observado que a ativação astrocitária é marcada por um aumento da expressão co-localizada de GFAP+/S100b+ além do aumento na densidade astrocitaria evidenciando uma astrogliose. A perda neuronal dopaminérgica (células TH+) também foi observado nos grupos tratados com aminocromo ou 6-OHDA. Por outro lado, a rutina apresentou efeito neuroprotetor por inibição do efeito do aminocromo em termos de ativação microglial, astrogliose e perda neuronal dopaminérgica e ainda, elevou níveis de fatores neurotróficos. Pode-se concluir com estes resultados que o aminocromo constitui uma boa ferramenta para estudar neuroinflamação em modelo induzido da DP e que o flavonoide rutina exerce efeito neuroprotetor neste modelo. Assim, este estudo contribui para a caracterização de um modelo mais fisiológico para se estudar a patogênese da DP e subsidiar futuros ensaios clínicos de aplicação da rutina na terapêutica de pacientes com DP.

     


  • Mostrar Abstract
  • Parkinson's disease is mainly characterized by the loss of dopaminergic neurons that contain neuromelanin in the substance nigra pars compacta. The mechanisms responsible for this neurodegeneration remain unknown, however, some cellular and molecular disorders are considered involved in this process, among them, α-synuclein accumulation, oxidative stress, mitochondrial damage, proteosomal dysfunction, autophagic dysfunction and neuroinflammation. Among these, neuroinflammation in an in vivo model has not yet been associated with the deleterious effects induced by the endogenous neurotoxin, aminochrome. This neurotoxin originates from the oxidation of dopamine at cytosolic pH and is a precursor of neuromelanin which, under specific conditions, can accumulate in dopaminergic neurons and generate cytotoxicity. In this sense, this thesis begins with a review chapter, in which we address the main aspects of neuroinflammation in PD and molecular markers that can be investigated in the following two chapters containing experimental data. So, for the second and third chapter, Wistar rats were divided into 5 groups (1: negative control, 2: 10 mg / kg rutin, 3: 6-hydroxidopamine 32 nmol; 4: aminochrome 6 nmol and 5: aminochrome + rutin). The animals received rutin orally 30 minutes before stereotactic injection of aminochrome or 6- OHDA in the striatum and daily treated with rutin orally until the 14th experimental day. After euthanasia, the brains were fixed in 4% paraformaldehyde, microtome cuts and immunohistochemical analyzes for Iba-1, CD68, GFAP, S100b and Tyrosine hydroxylase (TH) were performed. In addition, material was collected for mRNA analysis for IL-1β, TNF-α, NRLP3, CCL5, and CCR2 by RT-qPCR. We observed that aminochrome and 6-OHDA were able to generate an increase in the total number of microglia, as well as increase the amount of activated microglia evidenced by co-located Iba-1+/CD68+ cells. It was also observed that astrocyte activation is marked by an increase in the co-localized expression of GFAP+/S100b+ in addition to the increase in astrocyte density showing an astrogliosis. Dopaminergic neuronal loss (TH + cells) was also observed in the groups treated with aminochrome or 6-OHDA. On the other hand, we showed a neuroprotective effect of rutin by inhibiting the effect of aminochrome in terms of microglial activation, astrogliosis and dopaminergic neuronal loss and eleven levels of elevation of neurotrophic factors. It can be concluded with these results that aminochrome is a good tool to study neuroinflammation in an induced PD model and that the flavonoid rutin exerts a neuroprotective effect in this model. Thus, this study contributes to the characterization of a more physiological model to study a pathogenesis of PD and supports future clinical trials of the application of rutin in the therapy of patients with PD.

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  • PAULA BRAGA DALTRO
  • QUANTIFICAÇÃO DE CÉLULAS T E INIBIÇÃO DA PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS TCD4+ EMPREGANDO CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS DE PESSOAS COM DOENÇA FALCIFORME E OSTEONECROSE.

  • Orientador : VITOR ANTONIO FORTUNA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • BRUNO SOLANO DE FREITAS SOUZA
  • CYNARA GOMES BARBOSA
  • MARIA ISABEL DORIA ROSSI
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • VITOR ANTONIO FORTUNA
  • Data: 20/04/2021

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  • A doença falciforme (DF) é causada por uma mutação da β-globina, que leva à vaso-oclusão recorrente e isquemia decorrentes da perda da conformação da hemoglobina que causa deformação da hemácia. No Brasil a prevalência do alelo βS em média é de 10,9%, dependendo da região. A inflamação sistêmica é uma das características derivadas da vaso-oclusão e isquemia recorrentes na DF. Alguns autores sugerem que 50% dos adultos com homozigose da hemoblobina S (Hb SS) desenvolverão osteonecrose da cabeça femoral secundária à DF por volta dos 35 anos de idade. Trabalhos recentes demonstraram a relação importante entre maior estado inflamatório crônico e sintomas clínicos mais graves, sugerindo um papel crucial do sistema imunológico na fisiopatologia da DF. Evidências 1recentes sugerem que as anormalidades envolvendo os linfócitos T CD4 + estão associadas à fisiopatologia da osteonecrose (ON), no entanto, poucos estudos abordam as células T CD4 + na ON secundária à doença falciforme (DF / ON). Além disso, as células T que produzem várias citocinas simultaneamente estão frequentemente presentes no meio inflamatório e podem estar implicadas na resposta imune observada na DF / ON. Na primeira parte deste estudo nós caracterizamos o estado funcional das células T CD4 + na DF por meio da determinação simultânea da frequência de IFN-γ +, IL-4 + e IL-17 + CD4 + T em culturas de células sob estímulos exógenos. Para isto, nós utilizamos as células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 9 pacientes com DF em estado estacionário, 15 pacientes com DF/ON e 19 controles saudáveis para quantificar o estado funcional das células T CD4 +. Células mononucleares da medula óssea (CMMO) de 24 pacientes com DF / ON (SCD BM) e 18 pacientes com ON não relacionado à DF (non-SCD BM) também foram analisadas. Mostramos que CMSP de pessoas com DF que apresentem ou não ON tiveram frequências de células TCD4 +, TCD8 + e TCD4 + virgens significativamente reduzidas, e uma frequência aumentada de células T CD4 + circulantes capazes de produzir simultaneamente IFN-γ + / IL4 + e IL-17 + / IL4 + em comparação com controles saudáveis. Diante da estimulação policlonal, vimos um aumento na frequência de células TCD4 + que produziram IFN-γ + e T CD4 + produtoras de IL-17 + em CMMO de SCD BM em comparação com non-SCD BM. O aumento da proporção de células T CD4 + capazes de produzir um amplo espectro de citocinas pró-inflamatórias após um forte estímulo indica que o sistema imunológico em pacientes com DF / ON apresenta um expressivo pool de células parcialmente diferenciadas prontas para assumir função efetora. Possivelmente, essa subpopulação aumentada pode se estender a locais inflamatórios de órgãos-alvo e pode contribuir para a manutenção da inflamação e da fisiopatologia. Os achados descritos nos levaram à segunda parte deste estudo que foi investigar se as células estromais mesenquimais de pessoas com DF/ON apresentavam a capacidade de inibir a proliferação de células TCD4+. Com base nos achados vistos nas células TCD4+ e conhecendo a capacidade imunomodulatório das CTM, buscamos avaliar o potencial imunomodulador de CTMs derivadas de medula óssea na proliferação de células TCD4+ derivadas de células mononucleares do sangue periférico, e fatores secretados, in vitro, de voluntários com DF / ON e sem DF e ON. Encontramos uma forte inibição da proliferação de células TCD4+ quando em co-cultura com CTMs de indivíduos portadores de DF. Identificamos diferenças nas citocinas do sobrenadante de co-cultivo com CMSP C e DF/ON, onde DF/ON apresentou aumento na secreção de IL-2, e IL-10, enquanto há uma redução nas citocinas IFN-γ, IL-4 e IL-17A, o que mostra uma redução no metabolismo de células Th1, Th2 e Th17 com aumento da citocina regulatória IL-10.


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  • Sickle cell disease (SCD) is caused by a mutation of β-globin, which leads to recurrent vessel occlusion and ischemia resulting from the loss of hemoglobin conformation which leads to deformation of the red blood cell. In Brazil, the prevalence of the βS allele can be on average 10.9%, depending on the region. Systemic inflammation is one of the characteristics derived from recurrent vaso-occlusion and ischemia in DF. Some authors suggest that 50% of adults with homozygosis of hemoglobin S (Hb SS) will develop osteonecrosis of the femoral head secondary to DF at around 35 years of age. Recent studies have demonstrated the important relationship between a greater chronic inflammatory state and more severe clinical symptoms, suggesting a crucial role of the immune system in Pathophysiology of DF. Recent evidence suggests that abnormalities involving CD4 + T lymphocytes (TCD4 +) are associated with the pathophysiology of osteonecrosis (ON), however, few studies address TCD4 +cells in ON secondary to sickle cell disease (SCD / ON). In addition, T cells that produce several cytokines simultaneously are often present in the inflammatory medium and may be involved in the immune response seen in DF / ON. In the first part of this study we characterized the functional status of TCD4 + cells in SCD by simultaneously determining the frequency of IFN-γ +, IL-4 + and IL-17 + TCD4 + in cell cultures under exogenous stimuli. In the first part of this work, we used peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 9 patients with steady-state DF, 15 patients with DF / ON and 19 healthy controls to quantify the functional status of CD4 + T cells. Bone marrow mononuclear cells (BMMC) of 24 patients with DF / ON (SCD BM) and 18 patients with ON not related to DF (non SCD BM) were also analyzed. We have shown that PBMC of people with SCD who do or do not have ON had significantly reduced frequencies of TCD4 +, TCD8 + and TCD4 + cells, and an increased frequency of circulating CD4 + T cells capable of simultaneously producing IFN-γ + / IL4 + and IL- 17 + / IL4 + compared to healthy controls. Faced with polyclonal stimulation, we saw an increase in t he frequency of TCD4 + cells that Sickle cell disease (SCD) is caused by a mutation of β-globin, which leads to recurrent vessel occlusion and ischemia resulting from the loss of hemoglobin conformation which leads to deformation of the red blood cell. In Brazil, the prevalence of the βS allele can be on average 10.9%, depending on the region. Systemic inflammation is one of the characteristics derived from recurrent vaso-occlusion and ischemia in DF. Some authors suggest that 50% of adults with homozygosis of hemoglobin S (Hb SS) will develop osteonecrosis of the femoral head secondary to DF at around 35 years of age. Recent studies have demonstrated the important relationship between a greater chronic inflammatory state and more severe clinical symptoms, suggesting a crucial role of the immune system in Pathophysiology of DF. Recent evidence suggests that abnormalities involving CD4 + T lymphocytes (TCD4 +) are associated with the pathophysiology of osteonecrosis (ON), however, few studies address TCD4 + cells in ON secondary to sickle cell disease (SCD / ON). In addition, T cells that produce several cytokines simultaneously are often present in the inflammatory medium and may be involved in  the immune response seen in DF / ON. In the first part of this study we characterized the functional status of TCD4 + cells in SCD by simultaneously determining the frequency of IFN-γ +, IL-4 + and IL-17 + TCD4 + in cell cultures under exogenous stimuli. In the first part of this work, we used peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 9 patients with steady-state DF, 15 patients with DF / ON and 19 healthy controls to quantify the functional status of CD4 + T cells. Bone marrow mononuclear cells (BMMC) of 24 patients with DF / ON (SCD BM) and 18 patients with ON not related to DF (non SCD BM) were also analyzed. We have shown that PBMC of people with SCD who do or do not have ON had significantly reduced frequencies of TCD4 +, TCD8 + and TCD4 + cells, and an increased frequency of circulating CD4 + T cells capable of simultaneously producing IFN-γ + / IL4 + and IL- 17 + / IL4 + compared to healthy controls. Faced with polyclonal stimulation, we saw an increase in the frequency of TCD4 + cells that produced IFN-γ + and T CD4 + producing IL-17 + in BMMC from SCD BM compared to non-SCD BM. The increase in the proportion of CD4 + T cells capable of producing a broad spectrum of pro-inflammatory cytokines after a strong stimulus indicates that the immune system in patients with SCD / ON has an expressive pool of partially differentiated cells ready to assume an effective function. Possibly, this increased subpopulation may extend to inflammatory sites of target organs and may contribute to the maintenance of inflammation and pathophysiology. The findings described led us to the second part of this study, which was to investigate whether the MSCs of people with SCD / ON had the ability to inhibit the proliferation of TCD4 + cells. Based on the findings seen in TCD4 + cells and knowing the immunomodulatory capacity of MSCs, we seek to evaluate the immunomodulatory potential of bone marrow-derived MSCs in the proliferation of TCD4 + cells derived from peripheral blood mononuclear cells, and factors secreted, in vitro, from volunteers with DF / ON and without DF and ON. we found a strong inhibition of the proliferation of TCD4 + cells when co-cultured with MSCs from individuals with SCD. We identified differences in the cytokines of the co-culture supernatant with control PBMC and DF / ON, where DF / ON showed an increase in the secretion of IL-2, and IL-10, while there is a reduction in the cytokines IFN-γ, IL-4 and IL-17A, which shows a reduction in the metabolism of Th1, Th2 and Th17 cells with an increase in the regulatory cytokine IL-10. Produced IFN-γ + and T CD4 + producing IL-17 + in BMMC from SCD BM compared to non-SCD BM. The increase in the proportion of CD4 + T cells capable of producing a broad spectrum of pro-inflammatory cytokines after a strong stimulus indicates that the immune system in patients with SCD / ON has an expressive pool of partially differentiated cells ready to assume an effective function. Possibly, this increased subpopulation may extend to inflammatory sites of target organs and may contribute to the maintenance of inflammation and pathophysiology. The findings described led us to the second part of this study, which was to investigate whether the MSCs of people with SCD / ON had the ability to inhibit the proliferation of TCD4 + cells. Based on the findings seen in TCD4 + cells and knowing the immunomodulatory capacity of MSCs, we seek to evaluate the immunomodulatory potential of bone marrow-derived MSCs in the proliferation of TCD4 + cells derived from peripheral blood mononuclear cells, and factors secreted, in vitro, from volunteers with DF / ON and without DF and ON. we found a strong inhibition of the proliferation of TCD4 + cells when co-cultured with MSCs from individuals with SCD. We identified differences in the cytokines of the co-culture supernatant with control PBMC and DF / ON, where DF / ON showed an increase in the secretion of IL-2, and IL-10, while there is a reduction in the cytokines IFN-γ, IL-4 and IL-17A, which shows a reduction in the metabolism of Th1, Th2 and Th17 cells with an increase in the regulatory cytokine IL-10.

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  • DUMAR ALEXANDER JARAMILLO HERNÁNDEZ
  • (Vacinologia reversa em modelo murino e cães para o controle de infecção por Toxocara canis). Desenvolvimento da uma vacina para o controle de infecção por Toxocara canis em modelo murino e cães.

  • Orientador : NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • STEFAN MICHAEL GEIGER
  • RORY FORTES DE BRITO
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • MARCELO SANTOS CASTILHO
  • NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • Data: 31/05/2021

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  • A toxocaríase é uma zoonose parasitária negligenciada de importância global. Objetivo:Desenvolver vacina visando o controle da toxocaríase canina por meio de imunoprofilaxia. Metodologia: estudos pré-clínicos selecionaram duas proteínas recombinantes de T. canis (rTcVcan e rTcCad) que protegeram camundongos contra a migração larval. No presente trabalho, essas proteínas mais três adjuvantes (Alhydrogel®, PAM3CSK4® e Quil-A®) foram usados para imunizar camundongos contra a toxocaríase; três amostras de sangue foram coletadas para dosagem de IgG, IgG1, IgG2a, IgA e IgE por ELISA indireto. IL-5, TNF-α e IL-10 foram medidas no sobrenadante de esplenócitos e larvas de T. canis foram quantificadas em tecidos. O melhor par proteína + adjuvante encontrado (rTcVcan+Quial-A®) foi usado para imunizar filhotes caninos livres de T. canis (n = 18) que foram experimentalmente infectados com T. canis e filhotes infectados naturalmente (n = 6). Foram analisados imunoglobulinas, carga parasitária (ovos nas fezes), número de adultos expulsos, ovos extraídos do útero feminino e seus percentuais de fertilidade. Resultados e discussão: Em camundongos, foi observada uma redução significativa (73%) de larvas teciduais, um perfil de citocinas misto (Th1/Th2) e títulos de anticorpos anti-T. canis (IgG, IgG1, IgG2a) usando a mistura rTcVcan+Quial-A®. Em caninos, rTcVcan+Quial-A® promoveu redução de ovos nas fezes (95%) e redução dos ovos obtidos no útero de fêmeas adultas expulsas farmacologicamente (58,38%). Conclusões: este é o primeiro ensaio clínico canino de uma vacina com proteínas recombinantes de T. canis. A formulação usada demonstrou estimular de forma eficiente o sistema imune, diminuindo consistentemente a parasitose de camundongos e cães. Futuros testes devem ser desenvolvidos para avaliar a duração do efeito protetor e analisar outras vias imunológicas que podem ser estimuladas pela formulação utilizada.


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  • Toxocariasis is a neglected parasitic zoonosis of global importance. Objective: To develop a vaccine aiming to control canine toxocariasis by means of immunoprophylaxis. Methodology: preclinical studies selected two recombinant T. canis proteins (rTcVcan and rTcCad) that protected mice against larval migration. In the present work, these proteins plus three adjuvants (Alhydrogel®, PAM3CSK4® and Quil-A®) were used to immunize mice against toxocariasis; three blood samples were collected to measure IgG, IgG1, IgG2a, IgA and IgE by indirect ELISA. IL-5, TNF-α and IL-10 were measured in the supernatant of splenocytes and T. canis larvae were quantified in tissues. The best protein + adjuvant pair found (rTcVcan + Quial-A®) was used to immunize T. canis-free canine puppies (n = 18) that were experimentally infected with T. canis and naturally infected puppies (n = 6). Immunoglobulins, parasitic load (eggs in the feces), number of expelled adults and eggs in female uterus were analyzed. Results and discussion: In mice, it was observed a significant reduction (73%) of tissue larvae, a mixed cytokine profile (Th1 / Th2) and anti-T canis antibody titers (IgG, IgG1, IgG2a) were observed. using the rTcVcan + Quial-A® mixture. In canines, rTcVcan + Quial-A® reduced eggs in feces (95%) and reduced eggs obtained in the uteri of pharmacologically expelled females (58.38%). Conclusions: this is the first canine clinical trial of a vaccine with recombinant T. canis proteins. The formulation used has been shown to efficiently stimulate the immune system, consistently decreasing the parasitosis of mice and dogs. Future tests should be developed to assess the duration of the protective effect and to analyze other immunological pathways that can be stimulated by the formulation used.

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  • HELLEN FREITAS FONSECA
  • IMPACTO DA ANCESTRALIDADE BIOGEOGRÁFICA SOBRE O DESENVOLVIMENTO DE ASMA E MEDIDAS DE FUNÇÃO PULMONAR EM CRIANÇAS BRASILEIRAS: UM ESTUDO DE MAPEAMENTO POR MISCIGENAÇÃO

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • MARIA ALENITA DE OLIVEIRA
  • CINTHIA VILA NOVA SANTANA
  • CLAUDIO ROBERTO BEZERRA DOS SANTOS
  • Data: 30/06/2021

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  • A asma é uma das doenças inflamatórias crônicas de maior ocorrência, especialmente em crianças. A  revalência da asma infantil difere amplamente na América Latina e correlaciona- se a fatores genéticos e socioambientais, com aumento considerável entre populações com múltiplas etnias, principalmente entre aquelas com maior ascendência africana. O Mapeamento por miscigenação tem se mostrado uma ferramenta útil em revelar novos loci associados com asma e função pulmonar em populações miscigenadas, no entanto, tais estudos são concentrados em populações norte-americanas, e pouco é compreendido acerca da influência da ancestralidade local cromossômica sobre o desenvolvimento da asma em populações Latinas, em especial a brasileira. O presente estudo teve como objetivo identificar loci genéticos que contribuem para a suscetibilidade à asma e variações nas medidas de função pulmonar em Latino Americanos. A população investigada incluiu 1.214 crianças não aparentadas entre 4 e 11 anos de comunidades de renda baixa e média na cidade de Salvador, Nordeste do Brasil, membros da coorte Social Changes Asthma and Allergy in Latin America (SCAALA) - Salvador. A população de Salvador é predominantemente negra e parda e marcada por elevada desigualdade socioeconômica. A tese foi estruturada em dois capítulos conduzidos na população integrante do SCAALA - Salvador, em ambos foram realizados o mapeamento por Miscigenação, sendo o primeiro, desenvolvido a partir das medidas de função pulmonar e o segundo a partir do fenótipo clinico, sintomas de asma. No primeiro artigo que avaliou a associação entre a ancestralidade local cromossômica e medidas de função pulmonar, foi identificado que a ascendência africana nas regiões 17q21.31, 10q22.2 2p23.1 foi associada a medidas inferiores de função pulmonar. Em contraste, a ancestralidade europeia em 17q21.31 apresentou um efeito oposto. Além disso, cinco variantes genéticas foram replicadas na coorte de adultos na cidade de Pelotas “1982 Pelotas birth cohort”. No segundo artigo, a ancestralidade local foi associada com sintomas de asma. Foram identificados dois novos loci em 13q12 e 4p12-4p13, nos quais a ancestralidade africana em 13q12 e 4p12-4p13 foi associada negativamente com sintomas de asma, já a ancestralidade europeia no  locus 4p12-4p13 foi associada a risco para asma. Um total de sete variantes foram associadas com o fenótipo abordado. Além disso, as variantes foram correlacionadas com a concentração de citocinas IFN-γ e IL-13, produção de linfócitos e marcadores de atopia. Esses achados sugerem que regiões genômicas associadas à ancestralidade podem contribuir para arquitetura genética das medidas de função pulmonar e podem ajudar a explicar o padrão de risco genético para asma em crianças afro-americanas do Brasil. 


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  • Asthma is one of the most common chronic inflammatory diseases, especially in children. The prevalence of childhood asthma differs widely in Latin America and is correlated with genetic and socio-environmental factors, with a considerable increase among populations with multiple ethnicities, especially among those with greater African ancestry. Admixture mapping has been shown to be a useful tool in revealing new loci associated with asthma and lung function in mixed populations, however, such studies are focused on North American populations, and the influence of local chromosomal ancestry on the development of asthma in Latino populations is not entirely understood, particularly in Brazil. The present study aimed to identify genetic loci that contribute to asthma susceptibility and variations in lung function measurements in Latin Americans. The investigated population included 1,214 unrelated children aged 4 to 11 years from low- and middle-income communities in the city of Salvador, Northeastern Brazil, members of the Social Changes Asthma and Allergy in Latin America (SCAALA) cohort - Salvador. The population of Salvador is predominantly black and brown and marked by high socioeconomic inequality. The thesis was structured in two chapters conducted in the population belonging to SCAALA - Salvador, the Admixture Mapping was carried out for both, the first being developed based on lung function measurements and the second based on the clinical phenotype, asthma symptoms. In the first article we evaluated the association between local chromosomal ancestry and measures of lung function, it was identified that African ancestry in regions 17q21.31, 10q22.2 and 2p23.1 was associated with lower measures of lung function. In contrast, European ancestry at 17q21.31 had an opposite effect. In addition, five genetic variants were replicated in the adult cohort in the city of Pelotas “1982 Pelotas birth cohort”. In the second article, local ancestry was associated with asthma symptoms. Two new loci at 13q12 and 4p12-4p13 were identified, in which African ancestry at 13q12 and 4p12-4p13 was negatively associated with asthma symptoms, whereas European ancestry at locus 4p12-4p13 was associated with risk for asthma. A to tal of seven variants were associated with the addressed phenotype. Furthermore, the variants were correlated with the concentration of IFN-γ and IL-13 cytokines, lymphocyte production and atopy markers. These findings suggest that genomic regions associated with ancestry may contribute to the genetic architecture of lung function measurements and may help to explain the pattern of genetic risk for asthma in African- American children in Brazil.

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  • LUíS EDUARDO VIANA SILVA RIBEIRO
  • ASSOCIAÇÃO ENTRE AS SUBPOPULAÇÕES DE MACRÓFAGOS COM A GRAVIDADE DA ASMA E O EFEITO DOS ANTÍGENOS DE Schistosoma mansoni NA MODULAÇÃO in vitro DESSAS CÉLULAS

  • Orientador : LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • MARIA REGINA D'IMPERIO LIMA
  • MOMTCHILO RUSSO
  • AMELIA MARIA RIBEIRO DE JESUS
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • THIAGO MARCONI DE SOUZA CARDOSO
  • Data: 19/10/2021

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  • Estima-se que aproximadamente 358 milhões de pessoas no mundo são acometidas pela asma, afetando até 1 a 18% da população em diferentes países do globo. Na imunopatogenia da asma, os macrófagos são células efetoras essenciais e estão presentes em grande quantidade no pulmão, tendo participação na manutenção da homeostase pulmonar, mas contribuindo significativamente para o desenvolvimento da asma por meio de sua heterogeneidade e plasticidade funcional. Estudos demonstraram evidências de que infecções por helmintos, principalmente Schistosoma spp. ou produtos desse parasito, é capaz de modular a resposta inflamatória na asma. O objetivo desse trabalho foi investigar a participação de diferentes fenótipos de macrófagos derivados de monócitos in vitro na patogenia da asma e o potencial dos antígenos recombinantes do Schistosoma mansoni, Sm29 e SmKI-1, na modulação dessas células.  Metodologia: Monócitos foram isolados de CMSP de oito indivíduos com asma leve a moderada (ALM) e oito com asma grave (AG), além de quatro controles sadios e cultivados por 7 dias com M-CSF para diferenciação em macrófagos. No terceiro dia de cultura foi feita a adição de IFN-γ+LPS, IL-4+IL-13 e IL-10, para polarização em macrófagos M1, M2a e M2c, respectivamente. As frequências das diferentes moléculas e das citocinas intracelulares foram realizadas utilizando a técnica de citometria de fluxo. Os níveis de IL-10 e MMP-9 foram avaliados nos sobrenadantes das culturas por ELISA sanduíche. Na primeira parte do estudo, foi realizada uma correlação entre a frequência dos macrófagos e a função pulmonar avaliada pela medida do volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF-1) e da capacidade vital forçada (CVF), ambos pré e pós uso do broncodilatador (BD). Assim como a frequência de macrófagos correlacionada com a frequência e número absoluto de eosinófilos e neutrófilos do sangue periférico dos pacientes asmáticos. Para avaliação do efeito dos antígenos na regulação dos macrófagos, as culturas foram estimuladas no sexto dia da diferenciação das populações de macrófagos, com os antígenos recombinantes Sm29 e SmKI-1 por 20h e então avaliadas pelos métodos supracitados. Resultados: Foi observada uma correlação inversa entre a frequência dos macrófagos M1 e M2a tanto com o VEF1 quanto com o CVF, pré e pós BD. Interessantemente, a frequência de macrófagos M2a foi positivamente correlacionada com o número e frequência de neutrófilos do sangue periférico. Em relação a expressão intracelular de TNF observou-se uma maior frequência de macrófagos M1 TNF+ no grupo de pacientes com AG em comparação com pacientes com ALM. Observou-se elevados níveis de MMP-9 nos sobrenadante das culturas de macrófagos M1 e M2a no grupo de indivíduos com AG em relação aos controles sem asma. Em relação ao efeito da adição dos antígenos do Schistosoma mansoni às culturas de macrófagos, observamos que a adição de Sm29 levou a uma redução na frequência da população M1 no grupo com ALM e com AG, e a adição de SmKI-1 reduziu esta população no grupo com AG. Além disso, os antígenos foram capazes de reduzir a frequência da população M1 expressando a citocina pró-inflamatória IL-1β, tanto na ALM estimulada com Sm29 quanto na AG após o estímulo com Sm29 e com SmKI-1. No grupo de AG o SmKI-1 induziu o aumento da frequência de macrófagos M2c expressando TGF-β+. Apesar de não ter sido observado aumento da frequência de macrófagos M1 ou M2a expressando IL-10 quando estimulados com os antígenos Sm29 ou SmKI-1, quando se avaliou o sobrenadante destas culturas, foi observado um aumento na produção desta citocina pelo estímulo com Sm29. Conclusão: A populações de macrófagos M1 e M2a estão associadas a patogenia da asma e os antígenos Sm29 e SmKI-1 do S. mansoni possuem potencial para modificar o perfil fenotípico dessas células e, desse modo controlar o processo inflamatório exacerbado responsável pela patogenia da asma.


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  • It is estimated that approximately 358 million people worldwide are affected by asthma, affecting up to 1 to 18% of the population in different countries around the world. In the immunopathogenesis of asthma, macrophages are essential effector cells and are present in large quantities in the lung, participating in the maintenance of pulmonary homeostasis, but significantly contributing to the development of asthma through their heterogeneity and functional plasticity. Studies have shown that helminth infections, especially Schistosoma spp. or their products, are able to modulate the inflammatory response in asthma. The objective of this work was to investigate the participation of different phenotypes of monocyte-derived macrophages in vitro in the pathogenesis of asthma and the potential of Schistosoma mansoni recombinant antigens, Sm29 and SmKI-1, in modulating these cells. Methodology: Monocytes were isolated from PBMC from eight individuals with mild to moderate asthma (MMA) and eight with severe asthma (SA), in addition to four controls without asthma (CWA) and cultured for 7 days with M-CSF for differentiation into macrophages. On the third day of culture, IFN-γ+LPS, IL-4+IL-13 and IL-10 were added for polarization in macrophages M1, M2a and M2c, respectively. The frequencies of different molecules and intracellular cytokines were performed using the flow cytometry technique. IL-10 and MMP-9 levels were evaluated in the culture supernatants by sandwich ELISA. In the first part of the study, a correlation was performed between macrophage frequency and lung function, assessed by measuring forced expiratory volume in the first minute (FEV-1) and forced vital capacity (FVC), both before and after bronchodilator (BD) use. As well as the frequency of macrophages correlated with the frequency and absolute number of eosinophils and neutrophils in the peripheral blood of asthmatic patients. To evaluate the effect of antigens on macrophage regulation, cultures were stimulated on the sixth day of macrophage population differentiation, with the recombinant antigens Sm29 and SmKI-1 for 24h and then evaluated by the methods mentioned above. Results: An inverse correlation was observed between the frequency of macrophages M1 and M2a with both FEV1 and FVC, pre and post BD. Interestingly, the frequency of M2a macrophages was positively correlated with the number and frequency of peripheral blood neutrophils. Regarding the intracellular expression of TNF, a higher frequency of M1 TNF+ macrophages was observed in the group of patients with SA compared to patients with MMA. High levels of MMP-9 were observed in supernatants from cultures of macrophages M1 and M2a in the group of individuals with SA compared to controls without asthma. Regarding the effect of S. mansoni antigens in the macrophage cultures, we observed that the addition of Sm29 led to a reduction in the frequency of the M1 population in the MMA and SA groups, and the addition of SmKI-1 reduced this population in the group with SA. Furthermore, the antigens were able to reduce the frequency of the M1 population expressing the pro-inflammatory cytokine IL-1β, both in MMA stimulated with Sm29 and in SA after stimulation with Sm29 and with SmKI-1. In the SA group, SmKI-1 induced an increase in the frequency of M2c macrophages expressing TGF-β+. Although an increase in the frequency of M1 or M2a macrophages expressing IL-10 when stimulated with Sm29 or SmKI-1 antigens was not observed, when the supernatant of these cultures was evaluated, an increase in the production of this cytokine by stimulation with Sm29 was observed. Conclusion: M1 and M2a macrophage populations are associated with the pathogenesis of asthma and S. mansoni antigens Sm29 and SmKI-1 have the potential to modify the phenotypic profile of these cells and thus control the exacerbated inflammatory process responsible for the pathogenesis of asthma.

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  • CÁSSIA CRISTINA LEAL BORGES
  • DETERMINAÇÃO DE PERFIS DE RESPOSTAS IMUNES EM PACIENTES COINFECTADOS PELOS HIV-1 E HTLV-1

  • Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • ANDREA SANTOS MAGALHAES
  • ANDRÉIA DE SOUSA ROCHA BARRETO
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • Data: 12/11/2021

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  • A coinfecção pelos vírus da Imunodeficiência Adquirida (HIV) e o vírus Linfotrópico da célula T Humana (HTLV), representa um problema de saúde em todo o mundo. Um estudo demonstrou que Salvador-Ba, apresentou uma prevalecia de 16,3% de coinfecção pelo HIV-1/HTLV-1. Indivíduos coinfectados tem um maior risco em desenvolver as patologias associadas a ambos os vírus, fazendo-se necessário compreender como os linfócitos T e monócitos se comportam durante a coinfecção HIV-1/HTLV-1, visando esclarecer o mecanismo imune e seus efeitos para que estas células possam ser usadas como estratégias terapêuticas para tratamento das patologias associadas a ambos os vírus. Diante disso foram avaliados os perfis da expressão de linfócitos T e monócitos na influência da coinfecção HIV-1/HTLV-1. Participaram do estudo, 15 indivíduos monoinfectados pelo HIV-1, 14 indivíduos monoinfectados pelo HTLV-1, 15 indivíduos coinfectados HIV-1/HTLV-1 e 20 indivíduos hígidos. A expressão dos linfócitos T e monócitos foram obtidas por citometria de fluxo e analisadas estatisticamente. De acordo com os achados do primeiro trabalho podemos sugerir que a coinfecção pode favorecer a progressão das patologias, principalmente, as associadas ao HTLV-1, foi observado entre os indivíduos coinfectados uma diminuição na expressão células TCD4+ naive. A expressão de linfócitos TCD4+ também estava diminuída nos indivíduos coinfectados em comparação aos monoinfectados por ambos os vírus, o que pode estar relacionado a disputa do sistema imunológico na contenção dos vírus. Foi demonstrado ainda uma diminuição dos linfócitos TCD4+ ativados em indivíduos que apresentavam  manifestações clinicas como HAM/TSP (Mielopatia/Paraparesia Espástica Tropical Associada ao HTLV-1), que pode sugerir um aumento da ativação viral nestes indivíduos. Nossos dados sugerem ainda que, o uso da terapia antirretroviral (TARV) pode favorecer o aumento de algumas subpopulações de linfócitos T. Sobre os achados do segundo trabalho existem diferenças entre as subpopulações de monócitos circulantes entre coinfectados HIV-1/HTLV-1 em relação a indivíduos monoinfectados pelo HIV-1 e HTLV-1. Nosso estudo demonstrou uma menor expressão de monócitos clássicos em indivíduos monoinfectados pelo HIV-1 em comparação ao monoinfectados pelo HTLV-1, bem como, em indivíduos que apresentavam manifestações clinicas, especialmente, as associadas ao HTLV-1, o que pode ser resultado do uso de terapia antirretroviral (TARV), uma vez que, essa subpopulação de monócitos responde a diferentes tipos de TARV, e ainda por esses monócitos serem mais abundantes em indivíduos hígidos. Por outro lado, o aumento da expressão dos monócitos não clássicos observados em indivíduos coinfectados em comparação aos monoinfectados pelo HIV-1 pode sugerir influência do vírus HTLV-1, por estes estimularem a proliferação dessa subpopulação de monócitos.


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  • Co-infection by the Acquired Immunodeficiency Virus (HIV) and the Human T-cell Lymphotropic Virus (HTLV) represents a worldwide health problem. A study showed that Salvador-Ba had a prevalence of 16.3% of HIV-1/HTLV-1 coinfection. Coinfected individuals have a higher risk of developing pathologies associated with
    both viruses, making it necessary to understand how T lymphocytes and monocytes behave during HIV-1/HTLV-1 coinfection, aiming to clarify the immune mechanism and its effects so that these cells can be used as therapeutic strategies for treating the pathologies associated with both viruses. Therefore, the profiles of T lymphocyte and monocyte expression in the influence of HIV-1/HTLV-1 coinfection were evaluated. The study included 15 HIV-1 monoinfected individuals, 14 HTLV-1 monoinfected individuals, 15 HIV-1/HTLV-1 coinfected individuals and 20 healthy individuals. The expression of T lymphocytes and monocytes were obtained by flow cytometry and statistically analyzed. According to the findings of the first study, we can suggest that co-infection may favor the progression of pathologies, especially those associated with HTLV-1. A decrease in the expression of naive CD4+ T cells was observed among co- infected individuals. The expression of TCD4+ lymphocytes was also reduced in co- infected individuals compared to those monoinfected by both viruses, which may be related to the dispute of the immune system in containing the virus. It was also demonstrated a decrease in activated CD4+ T lymphocytes in individuals who presented clinical manifestations such as HAM/TSP (HTLV-1-Associated Tropical Myelopathy/Paraparesis), which may suggest an increase in viral activation in these individuals. Our data also suggest that the use of antiretroviral therapy (ART) may favor the increase of some T lymphocyte subpopulations. Regarding the findings of the second study, there are differences between the subpopulations of circulating monocytes among HIV-1/HTLV-1 coinfected individuals in relation to individuals monoinfected by HIV-1 and HTLV-1. Our study demonstrated a lower expression of classical monocytes in HIV-1 monoinfected individuals compared to HTLV-1 monoinfected individuals, as well as in individuals who had clinical manifestations, especially those associated with HTLV-1, which may be a result of use of antiretroviral therapy (ART), since this subpopulation of monocytes responds to different types of ART, and also because these monocytes are more abundant in healthy individuals. On the other hand, the increased expression of non-classical monocytes observed in co-infected individuals compared to HIV-1 monoinfected individuals may suggest the influence of the HTLV-1 virus, as they stimulate the proliferation of this subpopulation of monocytes. 

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  • IGOR FARIAS TAVARES
  • CARACTERIZAÇÃO IN VITRO DA MATRIZ EXTRACELULAR POLIMÉRICA DE UMA CEPA DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS PRODUTORA DE BIOFILME

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • LILIA FERREIRA DE MOURA COSTA
  • ADRIANO COSTA DE ALCÂNTARA
  • MARCOS DA COSTA SILVA
  • PAULO CIRINO DE CARVALHO FILHO
  • Data: 24/11/2021

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  • Corynebacterium pseudotuberculosis(C.p) é um agente infeccioso de grande interesse na produção de pequenos ruminantes. É uma bactéria que apresenta sua toxicidade através de genes de virulência, assim como pela produção de biofilme, que protege a bactéria de ambientes hostis. Dessa forma é importante compreender a biologia e o reconhecimento do potencial de virulência de cepas de C.pseudotuberculosis produtoras e não produtoras de biofilme e o mecanismo de patogenicidade desta bactéria no hospedeiro e sua forma de defesa no sistema imune do animal. Além disso, buscar subsídios que possa contribuir para o aprimoramento de vacinas e diagnóstico contra a linfadenite caseosa. Nesse sentido, o presente trabalho verificou a capacidade de formação e estruturação do biofilme bacteriano in vitro e também acompanhou a progressão da resposta imune ao longo de 180 dias de infecção por C. pseudotuberculosis em caprinos, utilizando para tanto duas linhagens virulentas de cepas produtoras e não produtoras de biofilme. Para o estudo in vitro realizou-se a extração e a caracterização da matriz extracelular polimérica da cepa produtora de biofilme para avaliar a reatividade de proteínas presentes na matriz, verificando também a composição bioquímica produzida por esta cepa. Para a extração da matriz foi utilizado o cloreto de sódio (Nacl) a 1M e para verificar a composição bioquímica foi utilizado enzimas como: proteinase K, DNase I e metaperiodato de sódio. No estudo in vivo foram utilizados dezoito caprinos da raça Canindé onde estes foram divididos em três grupos, sendo um controle, um grupo infectado com a cepa produtora de biofilme e outro grupo infectado com a cepa não produtora de biofilme. A inoculação dos animais foi realizada contendo 2x106 UFC bacteriana. As amostras de sangue total de cada caprino foram colhidas nos tempos 0,7,14, 28,45,60, 90,120,150 e 180 dias. A cinética da resposta imune humoral foi acompanhada pela detecção de anticorpos IgG através do teste ELISA indireto sensibilizado com o antígeno BHI. A cinética da reatividade celular foi avaliada pela dosagem in vitro de interferon gamma, através do kit Bovigam, a partir de cultura de células de sangue periférico. Em relação ao estudo da extração da matriz extracelular observou-se uma reatividade do soro de caprinos infectados e não infectados por C.pseudotuberculosis que foram analisados por westen blotting. Também verificou-se o perfil da concentração de glicose total da matriz extracelular da cepa CAPJ4 (76) foi maior do que da cepa CAP3w (21). Sugerindo que a cepa CAPJ4 (76) produz um biofilme de polissacarídeo. Além disso, pode-se encontrar no biofilme dessa cepa o DNA extracelular (eDNA). No experimento in vivo, após a infecção dos animais foi possível observar que a cepa produtora de biofilme tem maior resistência causando danos aos animais. Na análise sorológica, a soroconversão com produção de igG ocorreu a partir de 14 dias após a infecção, atingindo um pico de produção aos 180 dias. Uma maior produção de INF- γ foi observada nos caprinos infectados com a bactéria produtora de biofilm. Essas informações são importantes para fututos testes diagnósticos e aprimoramento de vacinas contra a Linfadenite Caseosa.


  • Mostrar Abstract
  • The consumption of goat and sheep forming products is very common and it has been increasing global economic monetary values, so its is necessary to produce with quality on a large scale to serve the population. However, several factors in raising these animals still need to improve, esecially in the health área in which many disease affect the herd, including caseous lymphadenitis, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, a bacterium that presentes its toxicity through virulence genes as well as the production of biofilm, which protects the bactéria from hostile environments. Thus, it is importante to understand the biology and recognition of the virulence potential of C.pseudotuberculosis strains the produce and not produce biofilm and the pathogenicity mechanism of this bacterium in the host and its form of defense in the animal’s immune system. In this sense, the presente study aims to monitor the progression of the immune response over 180 days of infection by Corynebacterium pseudotuberculosis in goats, using two virulent strains of this bacterium one Strong biofilm former CAPJ4 (76) and the other nonresponsive for CAP3W biofilm formation (21), in addition, to verify the formation capacity and structuring of bacterial biofilm in vitro Eighteen Canindé goats with na approximate age of six months were used to carry out the study. They were divided into three groups; a control group without infection, a group infected with a biofilm producing C. pseudotuberculosis strain. The inoculation of animals was carried out containing 2x106 CFU of C.pseudotuberculosis. Whole blood samples from each goat were collected at times 0,7,14,28,45,60,90,120,150 and 180 days. The kinetics of the humoral immune response as followed by detection of IgG antibody trough the ELISA test sensitized with the BHI antigen. Cellular reactivity kinetcs was evaluated by in vitro peripheral blood cultures. After this study, extraction and characterization of the polimeric extracelular matrix of the biofilm- producing strain was carried out in order to assess the reactivity of proteins presente in the extracelular matrix and also to verify the biochemical composition produced by this strain. For matrix extraction, Sodium Chloride (Nacl) at 1M was used and to verify the biochemical composition produces by this strain, degrading enzymes were used- Proteinase K, DNase I and Sodium metaperiodate. In the in vivo experimente, after the animals were infected, it was possile to observe that the biofilm-producing strain is more resistant, causing greater damage to the animals. In the serological analysis, experimentally infected goats responded to primary exposure, which contributed to the increase in IgG immunoglobulin. The production of INF-γ was also observed. Regarding the study of extracelular matrix extraction, it was observed a reactivity of the serum of goats infected and not infected by C. pseudotuberculosis that were analyzed by westen blotting and it was found that that band profile of the CAPJ4 strain (76) treated with goat serum it remained with the same band profile similar to the poliacrilamide gel. The profile of the concentration of total sugar extracted from the extracelular matrix determined by the phenol sulfuric acid method was also analysed in this study. It was observed that the profile of the total sugar concentration extracted from the MEP of the CAPJ4 (76) Strong biofilm producing strain. Suggesting that the CAPJ4 strain (76) produces a polysaccharide biofilm. In addition, extracelular DNA (eDNA) can be found in the biofilm of this strain. Both have a structural role in the formation of the biofilm of this strain. These results provide importante information for the production of diagnostic tests and improvement of vacines against Caseous Lymphadenitis.

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  • TATIANE ALMEIDA VIANA LOPES
  • RESPOSTA IMUNOLÓGICA E METABOLISMO MITOCONDRIAL DE FRANGOS DE CORTE QUE RECEBERAM DIETA SUPLEMENTADA COM ZINCO

  • Orientador : ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ERIC MÁRCIO BALBINO
  • ALEXANDRE MORAES PINHEIRO
  • ANA LÚCIA ALMEIDA SANTANA
  • MATHEUS RAMALHO DE LIMA
  • TALITA PINHEIRO BONAPARTE
  • Data: 15/12/2021

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  • O zinco (Zn 2+ ) é um oligoelemento que está envolvido em várias funções biológicas devido ao fato de ser um cofator de um grande número de enzimas. Esse micromineral possui efeito antioxidante e é fundamental para o desenvolvimento do sistema imunológico. Em frangos de corte, a resposta imune pode ser influenciada pelos níveis nutricionais ou ingredientes da dieta. O objetivo foi avaliar o efeito da dieta suplementada com diferentes fontes de zinco sobre as respostas celular e humoral e sobre o metabolismo mitocondrial destes animais. Foram utilizados oitocentos e trinta e dois frangos machos de um dia de idade, da linhagem Cobb-500 em um delineamento inteiramente casualisado com 4 tratamentos contendo diferentes fontes e níveis de zinco, (1-Controle (dieta basal sem suplementação de zinco); 2- ZnO-100 (dieta basal + 100mg de Zn/kg de ração); 3 - Gl-Zn-25 (dieta basal + 25mg de glicinato de zinco/kg de ração) e 4- Gl-Zn-100 (dieta basal + 100mg de glicinato de zinco/ kg de ração) em 8 repetições com 26 aves por parcela. Aos 12 dias do experimento foi realizada uma cultura de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) para verificação da produção de óxido nítrico e proliferação celular. A resposta imune humoral foi avaliada através dos títulos de anticorpos em resposta a inoculação de suspensão de hemácias de carneiro a 10%. As inoculações foram realizadas em 32 aves (8 aves / tratamento) com 0,25 mL de suspensão de SRBC a 10% na veia braquial nos 7º e 21º dias experimentais. Amostras de sangue foram coletadas uma semana após a última inoculação para obtenção de soro e realização de teste de inibição de hemaglutinação. A imunidade mediada por células foi avaliada pela medição da atividade de basófilos cutâneos (CBH) ao teste intradérmico de fitohemaglutinina-P aos 28 dias experimentais. Além disso, a população de leucócitos e a proporção de heterófilos/linfócitos foi avaliada em esfregaços sanguíneos no 37º dia experimental. Também foi realizada a avaliação do peso dos órgãos linfoides, a análise histomorfométrica de segmentos intestinais, a avaliação do consumo de oxigênio de mitocôndrias isoladas do fígado e avaliação de características de desempenho como consumo de ração, ganho de peso e conversão alimentar em todas as fases de criação. No grupo de aves que recebeu 25mg de glicinato de Zn/kg de ração, foi observado aumento de proliferação celular e uma menor produção de óxido nítrico na cultura de PBMC (p &lt;0,05), além de um aumento na profundidade de criptas intestinais. Não houve diferença significativa na resposta dos basófilos cutâneos à fitohemaglutinina-P, nem nos títulos de anticorpos anti-SRBC 10%, bem como na proporção entre heterófilos e linfócitos. Houve diminuição do peso relativo da bolsa cloacal nas aves que receberam 100mg de glicinato de Zn/kg de ração (p&lt;0,05). Foi possível observar diferença (p&lt;0,05) entre as médias dos tratamentos com relação ao consumo de oxigênio, nos estágios 2 e 4 da respiração com o tratamento ZnO-100 comparando-se com os demais tratamentos. Os resultados apresentados sugerem o glicinato de zinco na concentração de 25 mg/kg de ração proporcionou melhor resposta imune nas aves o que se refletiu em maior proliferação celular e menor produção de óxido nítrico no PBMC, além de maior profundidade de criptas intestinais e um maior ganho de peso corporal considerando o período total de estudo.


  • Mostrar Abstract
  • Zinc (Zn 2+ ) is a trace element involved in numerous biological functions due to its capacity to bind to large number of enzymes. Has an antioxidant effect and is essential for the development of the immune system. In broilers, the immune response can be influenced by nutritional levels or dietary ingredients. The aim of this study was to evaluate the effect of the zinc supplemented diet on the cellular and humoral responses and on the mitochondrial metabolism of these birds. Eight hundred and thirty-two one-day-old 1-day-old male Cobb 500 broiler chickens were used in a randomized design with 4 treatments containing different sources and levels of zinc, (1-Control (basal diet without zinc supplementation); 2- ZnO-100 (diet basal diet+ 100mg of ZnO/of kg feed); 3-Gl-Zn-25 (basal diet + 25mg of zinc glycinate/of kg feed) and 4- Gl-Zn-100 (basal diet+100mg of zinc glycinate/of kg feed) in 8 replicates with 26 birds per pen. A culture of peripheral blood mononuclear cells was performed at 12 days of age to verify the production of nitric oxide and MTT test. A 10% suspension of SRBC was used for evaluation of humoral immune response in 32 birds (8 birds/treatment) which were inoculated with 0.25 mL of 10% SRBC suspension in the brachial vein on days 7 and 21. Blood samples were collected on day 7 after the last inoculation. Subsequently, serum microhemagglutination activity and titers of serum were estimated and antibodies were evaluated. Cell-mediated immunity was assessed by measuring the activity of cutaneous basophils (CBH) to phytohemagglutinin-P at 28 days of age. The population of leukocytes in blood smears and the ratio of heterophils/lymphocytes were also evaluated. In addition, evaluation of the weight of lymphoid organs, histomorphometric analysis of intestinal segments, evaluation of oxygen consumption of isolated mitochondria from the liver and performance characteristics such as feed intake, weight gain and feed conversion were performed. A higher production of nitric oxide, at 6.77 pg/μg of protein, was observed with the level of inorganic zinc (ZnO) in the supplementation of 100mg/Kg (p&lt;0.05). In addition to an increase in cell proliferation with the organic source of zinc (25mg/kg) (p&lt;0.05). There was no significant difference in the cutaneous basophil response to phytohemagglutinin-P, nor in the anti-SRBC antibody titers, as well as in the ratio between heterophils and lymphocytes. An increase in the relative weight of the cloacal pouch was observed with the supplementation of the organic form of zinc (p&lt;0.05). There was no significant difference (p&lt;0.05) in the villi nature of the intestinal segments, nor in the villus/crypt ratio or in the absorption surface. However, there was an increase in the depth of intestinal crypts in the group that received the lowest concentration of organic zinc in the supplementation. It was possible to observe a difference (p&lt;0.05) between the treatment means regarding oxygen consumption, in stages 2 and 4 of respiration with the ZnO-100 treatment compared to the other treatments. Supplementation of the diet with organic zinc resulted in better performance indices compared to the control group, which was reflected in the greater weight gain of the birds during the entire period of the experiment. The results presented suggest that, regardless of the source used, zinc provided better performance indices. In addition, increased cloacal pouch weight and increased cell proliferation suggest that supplementing the broiler diet with zinc may be beneficial to the immune system. 

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  • AMANDA CATARINY DE OLIVEIRA SILVA
  • EFEITO  IMUNOMODULADOR  DO  ALFATOCOFEROL  SOBRE A RESPOSTA IMUNOLÓGICA DURANTE  A INFECÇÃO  PELO Trypanosoma  cruzi

  • Orientador : FABIOLA CARDILLO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CLAUDIO ROMERO FARIAS MARINHO
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • FABIOLA CARDILLO
  • MARCOS LÁZARO DA SILVA GUERREIRO
  • RICARDO RICCIO OLIVEIRA
  • Data: 16/12/2021

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  • Introdução: O envolvimento da resposta imunológica no desenvolvimento e na manutenção das formas clínicas da infecção do T.cruzi. Diante disso, buscamos um reagente que pudesse ser utilizado como tratamento adjuvante e que mobilizasse populações celulares. O alfa-tocoferol pode estar envolvido no aumento de uma resposta celular efetora em outros modelos experimentais. Material e Métodos: A parasitemia e mortalidade foram avaliadas ao longo do período de estudo. Foram realizados os seguintes experimentos: dosagem de IgG anti-T.cruzi, fenotipagem de células do baço e músculo pela citometria de fluxo e o estudo histopatológico do coração e músculo. Resultados: Há redução da parasitemia e aumento da sobrevida nos grupos alfa+agsTc ou alfatocoferol. Os animais imunizados com alfa+agsTc e não infectados, após 90 dias da imunização aumentam os títulos de IgG anti-T.cruzi. Na fase aguda o uso do alfatocoferol promoveu aumento da produção de IFN-γ, células T produtoras IL-10 no baço e músculo esquelético, maior número de células T efetoras no baço, menor expressão de PD1 por células T. Na fase crônica, o uso do alfatocoferol promove o  aumento de TCD8+IL-10+ baço e TCD4+IL-10+ TCD8+IL-10+  no músculo, redução do número de células TCD8+ IFN-γ +, redução de células NK+Perforina+ e NKT+Perforina+, e de células TCD4+PD-1+, CD3+PD-L1+ e CD11b+PD-L1+ todas as análises no baço. A utilização do alfatocoferol e/ou alfa+agsTc também está associado a melhora da imunopatogênese característica da infecção pelo T.cruzi constatado com a redução do infiltrado inflamatório e fibrose nos tecidos, nas fases aguda e crônica. Conclusão: Os resultados apresentados no trabalho demonstra que o alfatocoferol promove no modelo de infecção pelo T.cruzi, uma resposta modulada , com aumento de citocinas e células capazes de controlar a infecção, sem promover aumento no dano tecidual característico da infecção pelo T.cruzi. 


  • Mostrar Abstract
  • ntroduction: The involvement of the immune response in the development and maintenance of clinical forms of T.cruzi infection has been demonstrated. Therefore, we looked for a reagent that could be used as an adjuvant treatment and mobilized cell populations. Alpha-tocopherol may enhance an effector cell response in other experimental models. Material and Methods: Parasitemia and mortality were evaluated throughout the study period. The following experiments were carried out: evaluation anti-T.cruzi IgG, spleen, and muscle cell phenotyping by flow cytometry and histopathological study of the heart and muscle. Results: Reduction in parasitemia and increase in survival in the alpha+agsTc or alpha-tocopherol groups. Animals immunized with alpha+agsTc and not infected, after 90 days of immunization, increase the anti-T.cruzi IgG titers. In the acute phase, the use of alpha-tocopherol promoted an increase in the production of IFN-γ, IL-10 producing T cells in the spleen and muscle, more significant number of effector T cells in the spleen, and lower expression of PD1 by T cells. In chronic animals, the use of alpha-tocopherol promoted the increase in TCD8+IL-10+ and reduced NK+Perforin+ and NKT+Perforin+, TCD4+PD-1+, CD3+PD-L1+, and CD11b+PD-L1+ splenic cells. Also, TCD4+IL-10+, TCD8+IL-10+ cells were found in muscles. Furthermore, the successful use of alpha-tocopherol is associated with an improvement in the immunopathogenesis characteristic of T.cruzi infection, seen with a reduction in the inflammatory infiltrate and fibrosis in tissues in the acute and chronic phases. Conclusion: The results presented in the present work demonstrate that alpha-tocopherol promotes a modulated response during T.cruzi experimental infection, with an increase in cytokines and cells capable of controlling the infection, without promoting an increase in tissue damage characteristic of T.cruzi infection 
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  • GERSON DE ALMEIDA QUEIROZ
  • IMPACTO FUNCIONAL DE POLIMORFISMOS NA ROTA IL33/ST2/NLRP3/CASP1 NA ASMA E ATOPIA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANA LUCIA MORENO AMOR
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • EDUARDO SANTOS DA SILVA
  • GUSTAVO NUNES DE OLIVEIRA COSTA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • Data: 21/12/2021

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  • Asma atópica é uma doença inflamatória crônica complexa e multifatorial, determinada por fatores ambientais e genéticos, que acomete as vias aéreas inferiores com redução do fluxo aéreo e hiperresponsividade; aumento da produção de muco e citocinas pró-inflamatórias como IL-4, IL-5 e IL-13. IL-33, uma citocina da família da IL-1, liberada após dano ou morte de células epiteliais tem a capacidade de polarizar a resposta Th2 por meio do aumento da liberação de citocinas Th2 após ativação do seu receptor ST2 em várias células como células linfoides inatas (ILCs), células dendríticas, mastócitos, basófilos, eosinófilos, linfócitos T e B, intensificando a inflamação das vias aéreas na asma. Por outro lado, o inflamassoma NLRP3, também presente nas células epiteliais, quando ativado resulta na liberação de caspase-1, que atua inibindo a IL-33 e atenuando a inflamação causada por esta citocina. Estudos de ampla associação do genoma (GWAS) têm buscado compreender melhor quais componentes genéticos podem estar relacionados a asma e atopia. Variantes genéticas nos genes da rota IL33/ST2/NLRP3/CASP1 são peças chaves para determinação de fenótipos específicos na asma e atopia e podem determinar diferenças na susceptibilidade ou proteção para asma e atopia. Neste contexto, esta pesquisa teve como objetivo avaliar o impacto de polimorfismos em genes na rota IL33/ST2/NLRP3/CASP1 na asma e atopia. O estudo de associação dos polimorfismos presentes em IL33, IL1RL1NLRP3 e CASP1 foi desenvolvido em dois trabalhos com duas populações distintas. No estudo com crianças da coorte do SCAALA, um dos nossos resultados mais importantes foi a associação da variante rs7925706 do gene CASP1 que teve seu alelo T associado positivamente com asma (OR: 1.47, IC 95% 1.11–1.96, p=0.008) e com maiores níveis de eosinófilos em indivíduos asmáticos (p<0.001). Já na população de asmáticos adultos do ProAR, dentre os que se destacaram o rs4988956 (ST2) teve o seu alelo G associado com asma grave (OR 1.33, 95% CI 1.05-1.70, P=0.021) e SPT para ácaros (OR 1.34, 95% CI 1.08-1.65, P=0.012). Além disso, esse mesmo alelo foi associado com maiores níveis de eotaxina em indivíduos asmáticos (p<0.05). O alelo G da variante rs10754558 (NLRP3) foi associado com proteção para asma grave (OR 0.76, 95% CI 0.60–0.96, P=0.025). Além disso, indivíduos com esse alelo G expressaram mais NLRP3 (p<0.05) e a expressão de NLRP3 foi maior no grupo de asmáticos graves (p<0.05). Estes dados mostram que polimorfismos na IL33/ST2/NLRP3/CASP1 possuem impacto para susceptibilidade ou proteção da asma e atopia em nossa população.


  • Mostrar Abstract
  • Atopic asthma is a complex and multifactorial chronic inflammatory disease, determined by environmental and genetic factors, which affects the lower airways with reduced airflow and hyperresponsiveness; increased production of mucus and pro-inflammatory cytokines such as IL-4, IL-5 and IL-13. IL-33, a cytokine of the IL-1 family, released after damage or death to epithelial cells which has the ability to polarize the Th2 response by increasing the release of Th2 cytokines after activating its ST2 receptor in various cells such as lymphoid cells innate cells (ILCs), dendritic cells, mast cells, basophils, eosinophils, T and B lymphocytes, intensifying airway inflammation in asthma. On the other hand, the NLRP3 inflammasome, also present in epithelial cells, when activated results in the release of caspase-1, which acts by inhibiting IL-33 and attenuating the inflammation caused by this cytokine. Genome-wide association studies (GWAS) have sought to better understand which genetic components may be related to asthma and atopy. Genetic variants in the IL33/ST2/NLRP3/CASP1 pathway genes are key to determining specific phenotypes in asthma and atopy and may determine differences in susceptibility or protection to asthma and atopy. In this context, this research aimed to evaluate the impact of polymorphisms in genes in the IL33/ST2/NLRP3/CASP1 route in asthma and atopy. The study of the association of polymorphisms in IL33, IL1RL1, NLRP3 and CASP1 was conducted in two different cohorts. In the SCAALA pediatric cohort, one of our most important results was the association of the rs7925706 variant of the CASP1 gene that had its T allele positively associated with asthma (OR: 1.47, 95% CI 1.11–1.96, p=0.008) and with higher eosinophil levels in asthmatic individuals (p<0.001). In the adult severe asthma cohort of ProAR, the G allele rs4988956 (ST2) had its G allele associated with severe asthma (OR 1.33, 95% CI 1.05-1.70, P=0.021) and SPT for mites (OR 1.34, 95% CI 1.08-1.65, P=0.012). Furthermore, this same allele was associated with higher eotaxin levels in asthmatic subjects (p<0.05). The G allele of the rs10754558 (NLRP3) variant was associated with protection from severe asthma (OR 0.76, 95% CI 0.60–0.96, P=0.025). In addition, individuals with this G allele expressed more NLRP3 (p<0.05) and NLRP3 expression was greater in the group of severe asthmatics (p<0.05). These data show that polymorphisms in IL33/ST2/NLRP3/CASP1 have an impact on the susceptibility or protection of asthma and atopy in our population.

2020
Dissertações
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  • ANDRESSA SOUZA MARQUES
  • EPÍTOPOS DE C. pseudotuberculosis OBTIDOS ATRAVÉS DA BIOINFORMÁTICA RECONHECIDOS POR IgG DE CAPRINOS E OVINOS.

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • LILIA FERREIRA DE MOURA COSTA
  • MIRIAM FLORES REBOUCAS
  • Data: 23/01/2020

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  • Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, intracelular facultativa, imóvel, bacilo não esporulado com capacidade de causar uma doença crônica em pequenos ruminantes, como caprinos e ovinos. A linfadenite caseosa acarreta grandes a caprino e ovinocultura. A doença é diagnosticada a partir dos sinais clínicos que são aumentos significativos dos linfonodos superficiais, entretanto, pode acometer órgãos e vísceras, que neste caso torna-se difícil o diagnóstico e tratamento desses animais. O tratamento atual se dá a partir da remoção do granuloma que contém o material caseoso e antibióticos, toda via, esse tipo de tratamento não é tão eficaz pois as bactérias continuam viáveis dentro de macrófagos, pois muitos desses antibióticos não conseguem atravessar a parede celular. A elaboração de métodos de diagnóstico que consigam detectar a presença da LC de forma prévia nesses animais, principalmente quando não possuem sinais clínicos visíveis, é de estrema importância. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar in silico os epítopos ligantes de anticorpos em proteínas de Corynebacterium pseudotuberculosis e validar sua antigenicidade in vitro. A etapa de in silico foi realizada usando o proteoma da cepa de Corynebacterium pseudotuberculosis C231, esse proteoma é composto por 2090 proteínas, usando softwares públicos foi possível identificar possíveis proteínas patogênicas e a disposição real das mesmas dentro do proteoma. Desta forma, foram selecionadas proteínas extracelulares e alinhadas a mais de um software para a confirmação da localização e chegando ao total de 111 proteínas e dessas, 76 proteínas possuíam epítopos de 10 aminoácidos eram epítopos lineares de células B, esta etapa foi realizada utilizando os algoritmos Bepipred, LBtope, Método Chou & Fasman Beta, Método Emini Surface Accessibility, Método Karplus & Schulz Flexibility e Método Parker. Essas 76 proteínas e seus respectivos epítopos foram comparados com 75 proteomas de Corynebacterium pseudotuberculosis existentes na base de dados do UNIPROT, e como resultado temos a conservação de 9 proteínas com uma ou mais regiões conservadas, ou até mesmo epítopos de doze a 16 aminoácidos conservados. Foram selecionados 4 epítopos para serem sintetizados quimicamente, o critério utilizado para esta seleção foi o grau de conservação dessas regiões que possuíam variações de 97,1 a 98,6% dentro dos proteomas. Os testes in vitro foram realizados testando as concentrações de 0,5μl, 1μl, 2μl e 4μl de cada peptídeo para as diluições séricas de caprinos e ovinos de animais positivos e negativos para a linfadenite caseosa. O reconhecimento antigênico para ambas as espécies foi bastante satisfatório. Sugerindo que peptídeos são capazes de reconhecer anticorpos presentes no soro de animais infectados.


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  • Corynebacterium pseudotuberculosis is a facultative, immobile, gram-positive, non-sporulated bacillus with the ability to cause chronic disease in small ruminants such as goats and sheep. Caseous lymphadenitis causes large goat and sheep culture. The disease is diagnosed from clinical signs that are significant enlargements of superficial lymph nodes, however, can affect organs and viscera, which in this case becomes difficult to diagnose and treat these animals. The current treatment is based on the removal of granuloma containing the caseous material and antibiotics, however, this type of treatment is not as effective because the bacteria remain viable inside macrophages, because many of these antibiotics cannot cross the cell wall. The development of diagnostic methods that can detect the presence of CL in these animals, especially when they have no visible clinical signs, is of utmost importance. Thus, the objective of this work was to evaluate in silico the antibody binding epitopes on Corynebacterium pseudotuberculosis proteins and to validate their antigenicity in vitro. The in silico step was performed using the Corynebacterium pseudotuberculosis C231 strain proteome. This proteome is composed of 2090 proteins, using public software it was possible to identify possible pathogenic proteins and their actual arrangement within the proteome. Thus, extracellular proteins were selected and aligned to more than one software to confirm the localization and reaching a total of 111 proteins and of these, 76 proteins had 10 amino acid epitopes were linear B cell epitopes, this step was performed using the algorithms. Bepipred, LBtope, Chou & Fasman Beta Method, Emini Surface Accessibility Method, Karplus & Schulz Flexibility Method and Parker Method. These 76 proteins and their respective epitopes were compared with 75 Corynebacterium pseudotuberculosis proteomes in the UNIPROT database, and as a result we have the conservation of 9 proteins with one or more conserved regions, or even 12 to 16 conserved amino acid epitopes. Four epitopes were selected to be chemically synthesized, the criterion used for this selection was the degree of conservation of these regions that had variations of 97.1 to 98.6% within the proteomes. In vitro tests were performed by testing the concentrations of 0.5μl, 1μl, 2μl and 4μl of each peptide for serum goat and sheep dilutions of positive and negative animals for caseous lymphadenitis. Antigen recognition for both species was quite satisfactory. Suggesting that peptides are able to recognize antibodies present in the serum of infected animals.

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  • DEIVISON SILVA ARGOLO
  • ASPECTOS DA PRESERVAÇÃO DE CÉLULAS GLIAIS INFECTADAS POR N caninum: PAPEL DO CATABOLISMO DO TRIPTOFANO

  • Orientador : MARIA DE FATIMA DIAS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • MARIA DE FATIMA DIAS COSTA
  • SONGELI MENEZES FREIRE
  • Data: 23/01/2020

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  • sistema nervoso central (SNC) é constituído por diversos tipos celulares, destacando-se as células gliais, importante para a função dos neurônios, células estas altamente especializadas. A glia é representada pelos astrócitos que contribuem para a homeostasia no ambiente cerebral e para a regulação da resposta imune além da micróglia, célula com características imune - efetoras no cérebro. O Neospora caninum é um protozoário intracelular obrigatório que infecta diferentes tipos de células, tendo predileção por encistar-se no sistema nervoso onde recentemente se observou um papel imuno modulador da glia com ativação do catabolismo do triptófano. Neste estudo objetivou-se caracterizar o papel desse catabolismo em culturas primárias de células gliais obtidas do cérebro de ratos neonatos infectados por N. caninum, pelo período de 24 horas. A infecção por esse coccídio resultou em alterações morfofuncionais pelo aumento da expressão de GFAP e liberação dos mediadores inflamatórios TNFα, IL-6 IL1β e IL–10 e da arginase, observados pela expressão de mRNA por qPCR sugerindo que a glia age na tentativa restabelecer a homeostase do sistema, uma vez que a resposta inflamatória excessiva pode causar danos irreversíveis ao SNC. O orquestramento das funções celulares conseqüente à infecção possibilitou observar o aumento da expressão de mRNA para CCL5 e CCL2, moléculas que participam da resposta quimiotáxica no SNC. A infecção da glia pelo Neospora caninum envolve o catabolismo do triptofano com desvio para a ativação da cinurenina 2,3 monooxigenase (KMO) e aumento produção de ácido quinolinico (QUIN) este avaliado por CLAE, sugerindo mecanismo alternativo a atividade antiparasitária dessas células. Por outro lado, co-culturas glia - neurônio em meio condicionado pela infecção de células gliais por N.caninum, também apresentaram ativação do catabolismo do triptofano com aumento da expressão de KMO, além de alterações morfológicas compatíveis com preservação tecidual. O conjunto desses achados confirma que a infecção acarreta gliose e comprova atividade quimiotáxica dos componentes neuro imunes do tecido nervoso, com a ativação do catabolismo do triptofano e produção de ácido quinolinico


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  • The central nervous system (CNS) consists of several cell types, especially glial cells, important for the function of neurons, highly specialized cells. Glia is represented by astrocytes that contribute to homeostasis in the brain environment and to regulate the immune response beyond the microglia, a cell with immune - effector characteristics in the brain. Neospora caninum is an obligate intracellular protozoan that infects different cell types, having a predilection for encysting in the nervous system where a glia-modulating immune role with activation of tryptophan pathway has recently been observed. This study aimed to characterize the role of this catabolism in primary cultures of glial cells obtained from the brain of N. caninum infected neonatal rats for 24 hours. Infection with this coccidium resulted in morphofunctional changes due to increased GFAP expression and release of inflammatory mediators TNFα, IL-6 IL1β and IL-10 and arginase, observed by qPCR mRNA expression suggesting that glia acts in an attempt to restore system homeostasis, since excessive inflammatory response can cause irreversible CNS damage. The orchestration of cellular functions following infection made it possible to observe increased expression of mRNA for CCL5 and CCL2, molecules that participate in the CNS chemotaxic response. Neospora caninum infection of glia involves tryptophan pathway with shifting to activation of cinnurenine 2,3 monooxygenase (KMO) and increased production of quinolinic acid (QUIN) evaluated by HPLC, suggesting an alternative mechanism to the antiparasitic activity of these cells. On the other hand, glia - neuron co-cultures in medium conditioned by N.caninum glial cell infection also showed activation of tryptophan pathway with increased KMO expression, besides morphological alterations compatible with tissue preservation. These findings confirm that the infection causes gliosis and proves chemotaxic activity of neuroimmune components of nervous tissue, with activation of tryptophan catabolism and quinolinic acid production.

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  • Bianca Sampaio Dotto Fiuza
  •  ESTUDO DE ASSOCIAÇÃO DE POLIMORFISMOS NO GENE DENND1B COM FENÓTIPOS DE ASMA E ATOPIA EM ADULTOS BRASILEIROS ACOMPANHADOS PELO PROAR

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • GUSTAVO NUNES DE OLIVEIRA COSTA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • Data: 27/01/2020

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  • A asma é uma doença complexa e heterogênea caracterizada pela hiper-responsividade
    brônquica, obstrução e inflamação crônica das vias aéreas. A sua heterogeneidade está associada à
    fatores ambientais e variabilidades individuais e, por isso, o interesse no estudo da genética da asma
    tem crescido ao longo dos anos. Variantes no gene DENND1B foram descritas aumentando a
    susceptibilidade à asma e estão relacionadas com a modulação negativa do receptor de células T
    (TCR), através do controle da sua internalização nas células T; mutações ou diminuição na expressão
    do DENND1B estão associadas com o aumento de resposta Th2 e asma. O objetivo deste trabalho foi
    investigar a associação de polimorfismos no DENND1B, bem como seus respectivos impactos
    funcionais, com atopia e os diferentes fenótipos de asma, em indivíduos adultos acompanhados pelo
    Programa para o Controle da Asma na Bahia (ProAR). A genotipagem foi realizada utilizando um
    painel comercial da Illumina (MEGA) em 1.177 participantes do ProAR. As associações entre
    polimorfismos do gene e asma e marcadores de atopia foram analisadas por meio de regressão
    logística, empregando as covariáveis sexo, idade e marcadores de ancestralidade como
    confundidoras. Treze polimorfismos no DENND1B foram associados a diferentes fenótipos, tais
    como asma, asma grave e marcadores de atopia. A comparação dos níveis de citocinas e contagem
    de células de acordo com o genótipo foram efetuadas com o emprego do teste T (paramétrico) ou
    Mann-Whitney (não-paramétrico). Apenas um SNP apresentou resultado significante para produção
    de IL-33 e dois SNPs para a produção de eosinófilos, células epiteliais e neutrófilos. A expressão
    gênica foi analisada utilizando o método CT comparativo (método 2–ΔΔCT) e não houve resultado
    estaticamente significante. Em conclusão, polimorfismos no DENND1B foram significantemente
    associados a asma e atopia e estes polimorfismos podem influenciar na expressão deste gene.


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  • Asthma is a complex and heterogeneous disease characterized by bronchial
    hyperresponsiveness, obstruction, and chronic airway inflammation. Its heterogeneity is associated
    with environmental factors and individual variability and, therefore, interest in the study of asthma
    genetics has grown over the years. Variants of the DENND1B gene have been reported to increase
    susceptibility to asthma and are related to negative T cell receptor (TCR) modulation by controlling
    its internalization in T cells; Mutations or decreased expression of DENND1B are associated with
    increased Th2 response and asthma. The aim of this study was to investigate the association of
    polymorphisms in DENND1B, as well as their respective functional impacts, with atopy and the
    different asthma phenotypes, in adult individuals followed by the Bahia Asthma Control Program
    (ProAR). Genotyping was performed using an Illumina commercial panel (MEGA) on 1,177 ProAR
    participants. The associations between gene and asthma polymorphisms and atopy markers were
    analyzed by logistic regression, using the covariates gender, age and ancestry markers as
    confounding. Thirteen DENND1B polymorphisms were associated with different phenotypes such as
    asthma, severe asthma and atopy markers. Comparison of cytokine levels and cell count according to
    genotype was performed using the T-test (parametric) or Mann-Whitney (non-parametric). Only one
    SNP showed significant results for IL-33 production and one SNP for eosinophils and epithelial cells
    and another one for neutrophils production. Gene expression was analysed using the comparative CT
    method (method 2 – ΔΔCT) and there was no statistically significant result. In conclusion, DENND1B
    polymorphisms were significantly associated with asthma and atopy and these polymorphisms may
    influence the expression of this gene.

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  • LAIANE DA CRUZ PENA
  • EXPRESSÃO DE GPC3 EM RELAÇÃO AO INFILTRADO DE MACRÓFAGOS M2 EM PACIENTES COM CARCINOMA ESCAMOCELULAR DE BOCA

  • Orientador : DEISE SOUZA VILAS BOAS
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BARBARA DE CASTRO PIMENTEL FIGUEIREDO
  • DEISE SOUZA VILAS BOAS
  • SILVIA LIMA COSTA
  • IGUARACYRA BARRETO DE OLIVEIRA ARAUJO
  • Data: 30/01/2020

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  • O carcinoma escamocelular de boca (CEB) apresenta altas taxas de agressividade e metástase. A proteína oncofetal glipicana-3 (GPC3) é expressa em diversos tumores malignos, porém pouco se sabe sobre o GPC3 no câncer oral. A imunomarcação de GPC3 na membrana de células tumorais do carcinoma hepatocelular foi associada ao recrutamento de macrófagos, componentes imunológicos com papéis paradoxais no microambiente tumoral. Neste estudo, objetivamos investigar no CEB o padrão de expressão tumoral de GPC3 em relação à infiltração de macrófagos M2. A expressão de GPC3 (citoplasmática e membranar) e a infiltração de macrófagos CD68+ e CD206+ foram avaliadas por IHQ. Realizando qRT-PCR em 20 amostras frescas de CEB, 14 Tecidos Não-Tumorais Adjacentes (NAT) e 05 Tecidos Normais Distantes, nosso grupo encontrou expressão desregulada de GPC3 em 70% dos CEB avaliados (elevada em 20% e diminuída em 50% dos casos). Os níveis de expressão de mRNA do GPC3 foram significativamente diminuídos no CEB em comparação ao NAT (P = 0,009). A imunolocalização em 30 CEBs demonstrou distribuição heterogênea de macrófagos CD206+ nos compartimentos intratumoral (IT), periparenquimatoso (PP) e intraparenquimatoso (IP). Os macrófagos CD206+ foram distribuídos principalmente nas regiões de TI e PP, apresentando escassa infiltração no compartimento IP. Aproximadamente 60% dos casos de CEB analisados apresentaram marcação fortemente positiva para GPC3, sendo que 45% do total, foram consideradas fortemente positiva, sem marcação membranar. Nossos estudos demonstraram ausência de correlação entre os níveis de transcritos do mRNA e expressão de IHQ de GPC3. Aparentemente, existe uma relação entre a marcação forte de GPC3, especialmente a membranar, e a infiltração parenquimatosa de macrófagos M2. Notamos também, uma aparente ausência de correlação entre a expressão geral de GPC3 e a infiltração numérica de macrófagos em CEB. A diminuição nos níveis de RNAm de GPC3 na maior parte das amostras de CEB globalmente em relação aos tecidos adjacentes não-neoplásicos correspondentes sugere que o papel molecular da GPC3 neste tumor pode estar relacionado com eventos precoces da tumorigênese oral. No entanto, a ausência de relação entre o padrão de expressão gênica e proteica de GPC3 sugere a participação de mecanismos reguladores pós-transcricionais.Nossos resultados sugerem que GPC3 atua preferencialmente no CEB como um gene supressor de tumor e em estágios não precoces da carcinogênese oral. Além disso, corroboram com estudos prévios que atribuem aos macrófagos CD206+ funções pró-tumorais desempenhadas na região peritumoral.


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  • Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high rates of aggressiveness and metastasis. The oncofetal protein glypican-3 (GPC3) is expressed in diverse malignancies, however little is known about GPC3 in oral cancer. GPC3-positive staining in tumor cell membrane of hepatocellular carcinoma was associated with recruitment of macrophages, immune components with paradoxal roles in tumor microenvironment. In this study, we aimed to investigate in OSCC the expression pattern of miRNAS considered as GPC3 regulators in relation to its tumoral (mRNA levels and protein) expression and M2 macrophages infiltration. The miR-219a-5p, miR-520c-3p, miR-1271a and miR-4510 expression was analyzed in 40 paraffin embedded OSCC. In addition, GPC3 expression (cytoplasm and membrane) as well as CD68+ and CD206+ macrophages infiltration was semiquantitatively evaluated by IHQ. Performing qRT-PCR in 20 fresh OSCC samples, 14 Adjacent Non-Tumor Tissues (NAT) and 05 Distant Normal Tissues, our group previously found deregulated expression of GPC3 in 70% of the evaluated OSCC (upregulated in 20% and downregulated in 50% of cases). The GPC3 mRNA expression levels was significantly decreased in OSCC in comparison to NAT (P = 0.009). Immunostaining in 30 OSCC demonstrated heterogeneous distribution of CD206+ macrophages in intratumoral (IT), periparenchymal (PP) and intraparenchymal (IP) compartments. The CD206+ macrophages were mainly distributed in both IT and PP regions, presenting scarce infiltrating in IP compartment. Our partial results suggests that GPC3 acts in OSCC preferentially as a tumor suppressor gene in late stages of oral carcinogenesis. In addition, corroborate with previous studies that attribute to CD206+ macrophages protumoral functions in peritumoral region.

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  • ELIANE DOS SANTOS DA CONCEIÇÃO
  • “ANÁLISE DO EFEITO DO EXTRATO BRUTO DE ZINGIBER OFFICINALE ROSCOE (GENGIBRE) SOBRE A PRODUÇÃO DE CITOCINAS DE MACRÓFAGOS DERIVADOS DE THP-1 ”

  • Orientador : ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • JOSE TADEU RAYNAL ROCHA FILHO
  • MARCOS DA COSTA SILVA
  • MARIA DA CONCEIÇÃO AQUINO DE SÁ
  • Data: 28/02/2020

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  • O Zingiber officinale Roscoe, gengibre, é uma planta bastante utilizada na medicinal tradicional. Estudos prévios demonstram os efeitos dos componentes do gengibre sobre a função de macrófagos, contudo a ação do seu fitocomplexo ainda é pouco explorada. Neste estudo, buscamos avaliar o efeito do extrato bruto de gengibre sobre a produção de citocinas de macrófagos derivados de THP-1. Para isto, células TPH-1 diferenciadas em macrófagos foram estimuladas com 50 e 100 µg/mL de extrato. A caracterização fitoquímica do extrato compreendeu a quantificação de compostos fenólicos,flavonoides e capacidade antioxidante total. O teor de endotoxinas do extrato foi mensurado pelo método LAL. O ensaio de anexina V-PE e 7-AAD foi usado para verificar a indução de apoptose. Os níveis de IL-2, IL-4, IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-17 e IL-10 foram mensurados no sobrenadante das culturas por CBA. Utilizou-se os testes ANOVA e Games-Howell para analisar a diferença entre os estímulos, com nível de significância de p&lt;0,05. Os resultados mostraram que o teor de compostos fenólicos do extrato foi 44,34 mg EAG/g, flavonoides 63,87 mg EQ/g e a capacidade antioxidante 86,5%. A quantidade de endotoxina foi baixa, 4,68 UE/mL. As células permaneceram viáveis nas concentrações de 50 e 100 µg/mL de extrato, 88,76 e 87,40%, respectivamente. Além disso, verificou-se que o extrato reduziu de forma significativa a produção de IL-6, TNF e IL-10, p &lt;0,05. O extrato bruto de gengibre tem potencial para modular a secreção de citocinas por macrófagos. Mais estudos para investigar os efeitos e os mecanismos do fitocomplexo do gengibre sobre macrófagos e outras células imunes devem ser realizados, a fim de favorecer possíveis aplicações clínicas.


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  • The Zingiber officinale Roscoe, ginger, is a plant widely used in traditional medicine. Previous studies demonstrate the effects of ginger components on the function of macrophages, however the action of its phytocomplex is still poorly explored. In this study, we sought to evaluate the effect of crude ginger extract on the production of THP-1 derived macrophage cytokines. For this, TPH-1 cells differentiated into macrophages were stimulated with 50 and 100 µg / mL of extract. The phytochemical characterization of the extract included the quantification of phenolic compounds, flavonoids and total antioxidant capacity. The endotoxin content of the extract was measured by the LAL method. The annexin V-PE and 7-AAD assay was used to verify induction of apoptosis. The levels of IL-2, IL-4, IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-17 and IL-10 were measured in the culture supernatant by CBA. ANOVA and Games-Howell tests were used to analyze the difference between stimuli, with a significance level of p&lt;0.05. The results showed that the content of phenolic compounds in the extract was 44.34 mg EAG / g, flavonoids 63.87 mg EQ / g and the antioxidant capacity 86.5%. The amount of endotoxin was low, 4.68 EU / ml. The cells remained viable at concentrations of 50 and 100 µg / mL of extract, 88.76 and 87.40%, respectively. In addition, it was found that the extract significantly reduced the production of IL-6, TNF and IL-10, p&lt;0.05. Crude ginger extract has the potential to modulate cytokine secretion by macrophages. Further studies to investigate the effects and mechanisms of the ginger phytocomplex on macrophages and other immune cells should be performed in order to favor possible clinical applications.

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  • MARIANE MELO DOS SANTOS
  • CARACTERIZAÇÃO IMUNOFENOTÍPICA  DE LEUCEMIAS AGUDAS DESENVOLVIDAS NA POPULAÇÃO DO ESTADO DA BAHIA

  • Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • SILVANA BEUTINGER MARCHIORO
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MARINHO MARQUES DA SILVA NETO
  • Data: 21/08/2020

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  • Leucemia Aguda (LA) é uma neoplasia hematológica caracterizada por expansão clonal proliferativa de células hematopoiéticas, com falha na diferenciação que resulta no excesso de células imaturas em detrimento das células maduras funcionais, ocasionando falência da medula óssea. A LA pode ser classificada em dois grupos principais: a leucemia mielóide aguda (LMA) ou a leucemia linfoblastica aguda (LLA). O objetivo principal desse trabalho é caracterizar o perfil imunofenotípico e epidemiológico das Leucemias Agudas do estado da Bahia. Trata-se de estudo descritivo, retrospectivo de dados obtidos em um serviço de referência diagnóstico. No total, 796 pacientes foram avaliados em um período de 5 anos. Foram incluídos no estudo todos os indivíduos que obtiveram diagnóstico de Leucemia Linfoide ou Leucemia Mieloide. As variáveis demográficas como idade e gênero foram coletadas. Para melhor definição da leucemia, foi utilizado um amplo painel de anticorpos. 57,29% dos casos foram diagnosticados como LMA e 42,71% como LLA. A Leucemia
    Promielocítica Aguda (LPA) correspondeu a 17,5% dos casos de LMA. Comparando os fenótipos das LMA não LPA e LPA, além do HLA-DR e CD34 encontramos diferenças significativas nos marcadores CD13, MPO, CD15, CD64, CD2 e CD7. Das LLA, 277 (81,47%) foram de origem B e 63 (18,53%) foram de origem T. Com relação aos marcadores aberrantes, nas LMA não LPA observa-se com mais frequência a presença do CD7 e em seguida o CD56. Já nas LLA B foi o CD66c, seguido pelo CD13 e o CD33. Esse estudo documentou o perfil imunofenotípico de 796 casos de leucemias aguda da população baiana. Os marcadores CD13, MPO, CD15, CD64, CD2 e CD7 possuem grande  contribuição na diferenciação da LPA das outras LMA. CD2 e CD5 são menos expressos no grupo de LLA T que possui leucometria ao diagnóstico &lt;10.000. Foram encontradas diferenças significativas em diversos antígenos avaliados quando comparado o grupo de adultos e crianças.


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  • Acute Leukemia (LA) is a hematological neoplasm characterized by proliferative clonal expansion of hematopoietic cells, with a failure in differentiation that results in excess of immature cells in detriment of functional mature cells, causing bone marrow failure. LA can be classified into two main groups: acute myeloid leukemia (AML) or acute lymphoblastic leukemia (ALL). The main objective of this work is to characterize the immunophenotype and epidemiological profile of acute leukemias in the state of Bahia. This is a descriptive, retrospective study of data obtained from a diagnostic reference service. In total, 796 patients were evaluated over 5 years. The study included all individuals who were diagnosed with Lymphoid Leukemia or Myeloid Leukemia. Demographic variables such as age and gender were collected. For a better definition of leukemia, a wide panel of antibodies was used. 57.29% of the cases were diagnosed as AML and 42.71% as ALL. Acute Promyelocytic Leukemia (APL) accounted for 17.5% of AML cases. Comparing non-APL and APL phenotypes, in addition to HLA-DR and CD34, we found significant differences in the CD13, MPO, CD15, CD64, CD2 and CD7 markers. Of the ALL, 277 (81.47%) were of B cell origin and 63 (18.53%) were of T cell origin. Regarding aberrant markers, in non- APL AML, the presence of CD7 is more frequently observed, followed by CD56. In the LLA B, CD66c was followed by CD13 and CD33. This study documented the immunophenotypic profile of 796 cases of acute leukemia in the Bahia’s population. The CD13, MPO, CD15, CD64, CD2 and CD7 markers have a great contribution in differentiating LPA from other AML. CD2 and CD5 are less expressed in the T ALL group that has a leukometry at diagnosis &lt;10,000. Significant differences were found in several antigens evaluated when comparing the group of adults and children. 

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  • DYJAENE DE OLIVEIRA BARBOSA
  • EXPRESSÃO DE CÉLULAS T REGULATÓRIAS NA COINFECÇÃO PELOS VÍRUS HIV-1/HTLV-1

  • Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • ANA LUIZA DIAS ANGELO
  • MARCOS BORGES RIBEIRO
  • Data: 28/08/2020

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  • A coinfecção pelos vírus da Imunodeficiência Adquirida (HIV) e o vírus Linfotrópico da célula T Humana (HTLV), representa um problema de saúde em todo o mundo. Um estudo demonstrou que Salvador-Ba, apresenta uma prevalecia de 16,3% de coinfecção pelo HIV-1/HTLV-1. Indivíduos coinfectados tem um maior risco em desenvolver as patologias associadas a ambos os vírus. As células T regulatórias (TReg) executam uma função fundamental na manutenção da tolerância imunológica, evitando respostas autoimunes. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a expressão de células TReg na coinfecção HIV-1/HTLV-1. Participaram do estudo, 15 pacientes monoinfectados pelo HIV-1, 14 pacientes monoinfectados pelo HTLV-1, 15 pacientes coinfectados HIV-1/HTLV-1 e 5 indivíduos hígidos. A expressão das células TReg foram obtidas por Citometria de fluxo e analisadas estatisticamente. No presente estudo, observou-se que, pacientes coinfectados apresentam uma menor expressão de células CD4+CD25+Foxp3+, CD4+CD25+CTLA-4 e células CD4+CD25+HLA-DR+ em comparação aos pacientes monoinfectados pelo HIV-1 e HTLV-1 (p= 0.00). Observou-se ainda entre os pacientes coinfectados e os pacientes HTLV-1 positivos que apresentam manifestação clínicas associadas ao HTLV-1 um aumento significante da expressão de células CD4+CD25+Foxp3+ (p= 0.029 e p= 0.03, respectivamente), sugerindo que o aumento da supressão imunológica pode favorecer a replicação viral e progressão das doenças.


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  • Co-infection by the Acquired Immunodeficiency Virus (HIV) and the Human T-cell Lymphotropic Virus (HTLV), represents a health problem worldwide. A study showed that Salvador-Ba, had a prevalence of 16.3% of co-infection with HIV-1 / HTLV-1. Co- infected individuals are at a greater risk of developing pathologies associated with both viruses. Regulatory T cells (TReg) play a fundamental role in maintaining immune tolerance, preventing autoimmune responses. Therefore, the objective of this study was to evaluate the expression of TReg cells in HIV-1 / HTLV-1 co- infection. The study included 15 HIV-1 monoinfected patients, 14 HTLV-1 monoinfected patients, 15 HIV-1 / HTLV-1 coinfected patients and 5 healthy individuals. The expression of TReg cells was obtained by flow cytometry and analyzed statistically. In the present study, it was observed that coinfected patients have a lower expression of CD4 + CD25 + Foxp3 + cells, CD4 + CD25 + CTLA-4 and CD4 + CD25 + HLA-DR + cells compared to patients monoinfected by HIV-1 and HTLV -1 (p = 0.00). Among the coinfected patients and the HTLV-1 positive patients who have clinical manifestations associated with HTLV-1, a significant increase in the expression of CD4 + CD25 + Foxp3 + cells (p = 0.029 and p = 0.03, respectively) was observed, suggesting that the increased immune suppression may favor viral replication and disease progression.

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  • JULIANA HELENA CASTRO E SILVA
  • EFEITOS DO FLAVONOIDE AGATHISFLAVONA NA MODULAÇÃO DA GLIOSE REACIONAL E NEUROGÊNESE IN VIVO. POSSÍVEIS APLICAÇÕES DE FLAVONOIDES PARA DOENÇAS CEREBRAIS DE ETIOLOGIA TRAUMÁTICA E VIRAL.

  • Orientador : SILVIA LIMA COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • BRUNO SOLANO DE FREITAS SOUZA
  • DENIS DE MELO SOARES
  • SILVIA LIMA COSTA
  • Data: 15/12/2020

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  • Agathisflavona é um biflavonoide formado pela ligação entre duas moléculas do flavonoide apigenina. Este flavonoide possui diversas atividades biológicas descritas na literatura, como as atividades antiparasitária, antitumoral, hepatoprotetora, antiinflamatória e, destacadamente, atividades antivirais e neuroprotetora demonstradass em diversos modelos de estudo do sistema nervoso central (SNC). Embora seja um sistema privilegiado, diversas condições neuroinflamatórias podem afetar o SNC, como, por exemplo, infecções, doenças neurodegenerativas e trauma. Considerando os diversos efeitos protetores de agathisflavona e o contexto atual de emergência de viroses que atingem o SNC, um primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial deste biflavonoide em modular populações neurogênicas da Zona Zubventricular (SVZ) e modular a gliose reacional in vivo. Para tanto, camundongos transgênicos C57/BL6 hGFAP-EGFP com genes promotores específicos para identificar astrócitos com idade de 8 a 11 dias (P8-P11) foram submetidos a duas injeções  intracerebroventriculares por dia de agathisflavona (100 µM em 2 µL PBS/injeção) ou PBS + DMSO (veículo) (2 µL/injeção) por um período de 3 dias. No 4º dia, os animais foram sacrificados e tecido cerebral analizado por imunohistoquímica para caracterização de neurônios jovens migratórios (DCX) associada a células em proliferação (Ki67) na SVZ e para caracterizar reatividade de astrócitos (GFAP) e microglia (Iba-1) na região cortical lesionada e não-lesionada. Os resultados mostraram em animais submetidos ao tratamento com agathisflavona houve um aumento no número de astrócitos hGFAP-EGFP nas regiões da SVZ (dorsal, lateral e corno) sem, no entanto, induzir mudança significativa no número de neurônios migratórios em proliferação nestas regiões. Adicionalmente, a injeção de agathisflavona induziu redução da expressão da proteína GFAP na região cortical da lesão provocada pelas injeções do flavonoide ou PBS+DMSO apenas (controle), um marcador de reatividade astrocitária. Nesta região, assim como no sítio nãolesionado, o tratamento com agathisflavona também induziu redução no número de microglias e com fenótipo reativo. O segundo objetivo do presente trabalho foi realizar uma prospecção tecnológica a fim de investigar o potencial farmacológico deste e outros flavonoides frente a doenças de etiologia viral que podem afetar o SNC. Para cumprir este objetivo, foi realizada uma prospecção tecnológica utilizando a base de dados Pubmed e investigando-se os operadores ‘flavonoid AND antiviral’ de 2011-2020. Nossa pesquisa resultou em 149 artigos com flavonoides purificados, extratos de flavonoides com atividades antivirais in silico, in vitro e in vivo, com o máximo de número de publicações sendo no ano de 2019, com diferentes flavonoides com ações diversas frente a vários vírus, principalmente vírus Influenza e Hepatite C. Também, com esta abordagem, foi constatado que estudos desenvolvidos usando modelos in silico, in vitro ou ambos, que agathisflavona possui atividades antivirais. O conjunto dos resultados apresntados neste trabalho sobre efeito modulador da gliose reacional e gliogenese no SNC in vivo e reafirmam o potencial neuroprotetor do flavonoide agathisflavona e sua potencial aplicação como terapia adjuvante no combate das doenças do SNC, inclusive aquelas de etiologia viral.


  • Mostrar Abstract
  • Agathisflavone is a biflavonoid formed by two molecules of the flavonoid apigenin. This flavonoid has several biological activities described in the literature, such as antiparasitic, antitumor, hepatoprotective, anti-inflammatory activities and antiviral and neuroprotective activities in different models of study of the central nervous system (CNS). Although it is a privileged system, several neuroinflammatory conditions can affect the CNS, such as infections, neurodegenerative diseases and trauma. Considering the protective effects of agathisflavone and the current context of emergence of viruses that affect the CNS, the first objective of this work was to evaluate the potential of this biflavonoid in modulating neurogenic populations in the Subventricular Zone (SVZ) and modulating the reactive gliosis in vivo. For this purpose, C57 / BL6 hGFAP-EGFP transgenic mice with specific promoter genes to identify astrocytes aged 8 to 11 days (P8-P11) were subjected to two intracerebroventricular injections per day with agathisflavone (100 µM in 2 µL PBS / injection) or PBS + 0.1% DMSO (vehicle) (2 µL / injection) for 3 days. On the 4th day, the animals were sacrificed and brain tissue analyzed by immunohistochemistry to characterize young migratory neurons (DCX) associated with proliferating cells (Ki67) in SVZ, and to characterize reactivity of astrocytes (GFAP) and microglia (Iba-1) in injured and uninjured cortical region. The results showed that in animals treated with agathisflavone there was an increase in the number of hGFAP-EGFP astrocytes in the SVZ domains (dorsal, lateral and horn) without, however, inducing a significant change in the number of proliferating migrating neurons. Additionally, the injection of agathisflavone induced a reduction in the expression of the GFAP protein in the cortical region of the lesion caused by injections of the flavonoid or PBS + DMSO only (control), a marker of astrocytic reactivity. In this region, as well as the non-lesioned site, treatment with agathisflavone also induced a reduction in the number of microglia and with a reactive phenotype. The second objective of the present work was to carry out technological research in order to investigate the pharmacological potential of this and other flavonoids in the face of diseases of viral etiology that can affect the CNS. In order to fulfill this objective, a technological prospecting was carried out using the Pubmed database and investigating the 2011-2020 ‘flavonoid AND antiviral’ operators. Our research resulted in 149 articles with purified flavonoids and extracts of flavonoids with antiviral activities in silico, in vitro and in vivo, with the maximum number of publications being in the year 2019, with different flavonoids with different actions against various viruses, mainly viruses Influenza and Hepatitis C. Also, we have found out in studies developed using in silico, in vitro models or both, that agathisflavone has antiviral activities. The set of results presented in this work on the modulatory effect of reactive gliosis and gliogenesis in the CNS in vivo, confirm the neuroprotective potential of flavonoid agathisflavone and its potential as an adjuvant therapy against CNS diseases, including those of viral etiology

Teses
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  • THAÍS BRITO DE OLIVEIRA MOURA
  • EFEITO IMUNOMODULADOR DO EXTRATO DAS FOLHAS DE Lippia origanoides Kunth E Lippia insignis Moldenke NA PERIODONTITE E SUA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

  • Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ANGELICA MARIA LUCCHESE
  • MARIANA BORGES BOTURA
  • PAULO JOSE LIMA JUIZ
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • VERA LUCIA COSTA VALE
  • Data: 11/02/2020

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  • O uso de produtos naturais para o tratamento de doenças está relacionado a moléculas bioativas que possuem atividade antimicrobiana, analgésica, antifúngica e potencialmente imunomoduladora. As espécies do gênero Lippia (Verbenaceae) constituem uma importante fonte de compostos químicos que apresentam propriedades medicinais, como terpenos (timol, carvacol, linalol, limoneno e óxido de piperitenona), podendo ter efeitos positivos em doenças como asma brônquica, helmintíase, distúrbios gastrointestinais e periodontite. A periodontite é uma doença crônica que acomete os tecidos periodontais, causada pela disbiose no microambiente subgengival, que gera um processo inflamatório e imunológico nos tecidos do hospedeiro em resposta a microrganismos. O seu tratamento consiste na remoção mecânica e o uso de agentes químicos para o controle do biofilme subgengival. Entretanto, os agentes químicos apresentam diversos efeitos deletérios, como alterações nas papilas gustativas, resistência microbiana e danos ao meio ambiente. Diante do exposto, o presente estudo buscou avaliar o efeito imunomodulador e antimicrobiano dos extratos metanólicos das folhas de Lippia origanoides Kunth e Lippia insignis Moldenke. A produção das citocinas INF-γ, IL-6, IL-13, IL-17, IL-10 e IL1-β por células do sangue periférico humanas cultivadas com os extratos em presença ou não do patógeno-chave periodontal Porphyromonas gingivalis foi mensurada pelo método de absorbância imunoenzimático. A citotoxicidade foi medida em Artemia salinas Leach pela taxa de letalidade dos náuplios e em células mononucleares humanas, por meio do teste colorimétrico de conversão de brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) em formazan. A atividade antimicrobiana foi analisada com teste de difusão em disco e concentração mínima inibitória (MIC), utilizando as bactérias Bacillus subtilisEscherichia coli, Micrococus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e Salmonella choleraesuis, e os fungos Candida albicans e Candida glabrata. Os extratos metanólicos das folhas de L. origanoides Kunth e L. insignis Moldenke foram capazes de modular, in vitro, a produção das citocinas INF-γ, IL-6, IL-13, IL-17, IL-10 e IL1-β, frente ao entímulo de P. gingivalis. Além disso, os extratos apresentaram baixa citotoxicidade e foram considerados bacteriostáticos para todas as espécies bacterianas testadas, fungistáticos para o fungo C. albicans e fungicidas para C. glabrata. Logo, os extratos das folhas possuem efeitos imunomodulador, antibacteriano e antifúngico que os tornam promissores no tratamento da periodontite e de outras doenças infecciosas causadas pelos microrganismos testados.


  • Mostrar Abstract
  • The use of natural products for disease treatment is related to bioactive molecules that have antimicrobial, analgesic, antifungal and potentially immunomodulatory activity. Species of the genus Lippia sp (Verbenaceae) are an important source of chemical compounds that have medicinal properties, such as terpenes, timol, carvacol, linalol, limonene and piperitenone oxide, and may have positive effects on diseases such as bronchial asthma, helminthiasis, gastrointestinal disorders. and periodontitis. Periodontitis is a chronic disease that affects periodontal tissues, caused by dysbiosis in the subgingival microenvironment, which generates an inflammatory and immune process in the host tissues in response to microorganisms. Its treatment consists of mechanical removal and the use of chemical agents to control the subgingival biofilm. However, chemical agents have several deleterious effects, such as changes in taste buds, microbial resistance and environmental damage. Given the above, the present study aimed to evaluate the immunomodulatory and antimicrobial effect of the methanolic extracts of the leaves of Lippia origanoides Kunth and Lippia insignis Moldenke. The production of INF-γ, IL-6, IL-13, IL-17, IL-10 and IL1-β cytokines by human peripheral blood cells cultured with or without the presence of the periodontal key pathogen Porphyromonas gingivalis was measured. by the immunoenzymatic absorbance method. Cytotoxicity was measured in Artemia salinas Leach by the lethality rate of nauplii and in human mononuclear cells using the [3- (4,5-dimethylthiazol-2yl) -2,5-diphenyltetrazolium (MTT) bromide conversion test) in formazan. Antimicrobial activity was analyzed by disk diffusion test and minimum inhibitory concentration (MIC) using Bacillus subtilis, Escherichia coli, Micrococus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Salmonella choleraesuis bacteria, and Candida albicans and Candida glabrata fungi. The methanolic extracts of L. origanoides Kunth and L. insignis Moldenke leaves were able to modulate, in vitro, the production of INF-γ, IL-6, IL-13, IL-17, IL-10 and IL1-β cytokines, in front of P. gingivalis stimulus. In addition, the extracts showed low cytotoxicity and were considered bacteriostatic for all bacterial species tested, fungistatic for C. albicans fungus and C. glabrata fungicides. Thus, leaf extracts have immunomodulatory, antibacterial and antifungal effects that make them promise in the treatment of periodontitis and other infectious diseases caused by the tested microorganisms.

     
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  • ALANA ALCÂNTARA GALVÃO
  • ESTUDO IMUNOGENÉTICO SOBRE A ASSOCIAÇÃO DE VITAMINA D COM ATOPIA E ASMA EM ADOLESCENTES DO MUNICÍPIO DE SALVADOR, BAHIA.

  • Orientador : NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CARINA DA SILVA PINHEIRO
  • GYSELLE CHRYSTINA BACCAN
  • JOZELIO FREIRE DE CARVALHO
  • MARIA BETANIA PEREIRA TORALLES
  • NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • Data: 27/02/2020

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  • Introdução: A vitamina D é um hormônio pleiotrópico,  sendo 90% dele formado na pele por ação dos raios UVB da exposição solar, e 10% éproveniente da alimentação. Esta vitamina está associada com regulação gênica de diversas células do organismo, afetando a função de diversos sistemas. No sistema imunológico a vitamina D parece desempenhar um papel importante na imunidade inata e resposta regulatória, auxiliando a redução dos processos inflamatórios, configurando um fator de proteção para doenças autoimunes e alérgicas. Objetivo: Investigar a associação entre vitamina D, atopia e asma, e avaliar parâmetros genéticos dos genes da via metabólica da vitamina D. Metodologia: Trata-se de um estudo de corte transversal aninhado a um estudo de coorte, que avaliou um total 942 indíviduos com idade entre 11-19,  participantes do Programa SCAALA (Social Change, AsthmaandAllergy in LatinAmerica). Para diagnóstico de asma e gravidade de asma foi empregado o questionário ISAAC fase III. IgE específica para aeroalergnos (Blomiatropicalis, Dermatophagoydespteronissynus, Blatelagermanica e Periplaneta americana) foram detectadas utilizando o ensaio Immunocap (Phadia). Os níveis séricos de 25(OH)D foram mensurados por ELISA (IDS). A genotipagem foi realizada utilizando o HumanOmniBiochip da Ilumina.  Regressão logística multivariada foi realizada para investigar as associações de interesse; as análises genéticas foram realizadas nos programas Plink 1.07 assim como no SPSS. Resultados: da população estudada somente 38,8% possuia níveis suficientes de 25(OH)D. Deficiência de vitamin D (<20 ng/mL) foi associada com maior risco para atopia na população geral(OR 1.45; IC 95% 1.05 – 2.00).Insuficiência de vitamina D foi associado com maior risco de asma apenas em mulheres (OR 1.74; IC 95% 1.12 - 2.71). Vitamina D se correlacionou  negativamente com produção de IgE especifica para D.pteronyssinus (r = -0.11; p = 0.019). O alelo C do SNV (Variação de Único Núcleotideo) rs9279 no VDR, foi negativamente associado com asma (OR = 0.66; 95% CI 0.45-0.97) e com insuficiência de vitamina D (OR = 0.78; 95% CI 0.70-0.96). Duas variantes em VDR foram associadas com asma grave; alelo A of rs2189480 (OR = 0.34; 95% CI 0.13-0.89) e o alelo G of rs4328262 (OR = 3.18; 95% CI 1.09-9.28). A combinação das variantes localizadas nos genes CYP2R1 e CYP24A1 (GAC, para o rs10500804, rs12794714 e rs3886163, respectivamente) foram negativamente associadas com a produção de vitamin D [(β = -1.24; 95% CI (-2.42 - -0.06)]. Quando as três variantes estavam presentes, a associação aumentou [(β = -3.29; 95% (CI -6.19 - -0.39)].Conclusão: A insuficiência de vitamina D é elevada em adolescentes do munícipio de Salvador;níveis sanguíneos deficientes de vitamin D aumentam o risco de atopia. O sexo é um efeito modificador da associação de vitamin D com asma, e essa associação acontece unicamente no sexo feminino. Variantes genéticas em genes da via da vitamina D estão associadas com maior risco de asma e atopia, assim como afetam os níveis de vitamina D.


  • Mostrar Abstract
  • Introduction: vitamin D is a pleiotropic hormone, 90% of which is formed on the skin by the action of UVB rays exposure, and 10% from food. This vitamin is associated with gene regulation of several cells in the body, affecting the function of different systems. In the immune system, vitamin D seems to play an important role in innate immunity and regulatory response, helping to reduce inflammatory processes, configuring a protective factor for autoimmune and allergic diseases. Objective: To investigate the association between vitamin D, atopy and asthma, evaluating genetic parameters of the genes of the vitamin D metabolic pathway. Methodology: This is a cross-sectional study nested in a cohort, which evaluated a total of 942 individuals aged between 11-19 participants of the SCAALA Program (Social Change, Asthma and Allergy in Latin America). For the diagnosis of asthma and asthma severity, the ISAAC phase III questionnaire was used. IgE specific for aeroallergnos (Blomiatropicalis, Dermatophagoydespteronissynus, Blatelagermanicaand Periplanetaamericana) were identified using Immunocap (Phadia). Serum levels of 25 (OH) D were measured by ELISA (IDS). Genotyping was performed using Ilumina'sHumanOmni Biochip. Multivariate logistic regression was performed to investigate associations of interest, genetic analyses were performed on Plink 1.07, as well as on SPSS. Results: Of the studied population, only 38.8% had sufficient levels of 25 (OH) D. Vitamin D deficiency (<20 ng / mL) was associated with a higher risk of atopy in the general population, (OR 1.45; 95% CI 1.05 - 2.00). Vitamin D insufficiency was associated with an increased risk of asthma only in women [(OR 1.74; 95% CI (1.12 - 2.71)]. Vitamin D was negatively correlated with production of IgE specific for D. pteronyssinus (r = -0.11 p = 0.019). The C allele of SNV (Single Nucleotide Variation) rs9279 in VDR, was negatively associated with asthma [(OR = 0.66; 95% CI (0.45-0.97)] and with vitamin D insufficiency [(OR = 0.78; 95% CI (0.70-0.96)]. Two variants in VDR were associated with severe asthma; the A allele of rs2189480 [(OR = 0.34; 95% (CI 0.13-0.89) and the G allele of rs4328262 [(OR = 3.18; 95% CI (1.09-9.28)]. The combination of variants located in the CYP2R1 and CYP24A1 genes (GAC, for rs10500804, rs12794714 and rs3886163, respectively) was negatively associated with vitamin D production [(β =1.24; 95% CI (2.42;0.06)]. When the three varianteswere present, the association  increased[(β = 3.29; 95% CI (-6.19 - -0.39)]. Conclusion: Vitamin D insufficiency is high in adolescents in the city of Salvador. Deficient levels of vitamin D increase the risk of atopy. Sex is a modifying effect of the association of vitamin D with asthma, and this association occurs only in females. Genetic variants in genes in the vitamin D pathway are associated with increased risk of asthma and atopy, and affect vitamin D levels.

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  • LUCIANA REBOREDO DE OLIVEIRA DA SILVA
  • SÍNDROME CONGÊNITA DO ZIKA VÍRUS: AVALIAÇÃO DO EXOMA E ASPECTOS IMUNOLÓGICOS.

  • Orientador : VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CINTHIA VILA NOVA SANTANA
  • LEA CRISTINA DE CARVALHO CASTELLUCCI
  • RAFAEL VALENTE VEIGA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • Data: 27/02/2020

  • Mostrar Resumo
  • A infecção pelo zika vírus (ZIKV) surgiu recentemente como uma grande
    preocupação mundial devido à sua forte associação com complicações
    neurológicas associadas à esta infecção, denominada Síndrome Congênita do
    Zika vírus (SCZV). Biomarcadores imunológicos e genéticos, podem fornecer
    informações prognósticas que permitam fazer previsões sobre a progressão e
    severidade de uma determinada enfermidade. Neste contexto, o presente
    trabalho caracterizou os aspectos imunológicos e genéticos de crianças
    portadoras da Síndrome Congênita do Zika Vírus, a fim de identificar possíveis
    biomarcadores envolvidos nesse desfecho. Após realização do
    sequenciamento total do exoma da família de gêmeos discordantes para o
    desfecho (SCZ) e aplicação de filtros para priorização de genes candidatos, foi
    identificado um SNP diferente entre o indivíduo portador da SCZ e o não
    afetado. Esta mutação está localizada no gene MTOR e sua MAF na população
    mundial é relativamente frequente com de cerca de 20%. A via mTOR, uma via
    de sinalização celular que está envolvida na neurogênese, estando muito ativa
    durante o desenvolvimento embrionário. Vírus como o Zika podem bloquear
    essa cascata de sinalização e isso pode estar associado a malformações do
    sistema nervoso central. O perfil de citocinas revelou a presença de uma
    resposta inflamatória exacerbada, nas crianças com quadro mais grave da
    síndrome, apresentando níveis elevados para IL-2, IL-6 e IL15. Esses
    resultados ajudarão a compreender um pouco mais os mecanismos
    moleculares da interação entre o vírus Zika e a resposta imunológica do
    hospedeiro humano que resultam em complicações neurológicas da infecção.
    Porém, muitos outros estudos são necessários para demonstrar quais os
    mecanismos envolvidos no desenvolvimento da SCZV, sendo esse um passo
    inicial no sentido de também identificar possíveis genes envolvidos na
    ocorrência desta condição.


  • Mostrar Abstract
  • Zika virus (ZIKV) infection has recently emerged as a major worldwide concern
    due to its strong association with neurological complications associated with this
    infection, called Congenital Zika Virus Syndrome (SCZV). Immunological and
    genetic biomarkers can provide prognostic information to make predictions
    about the progression and severity of a given disease. In this context, the
    present work characterized the immunological and genetic aspects of children
    with Congenital Zika Virus Syndrome in order to identify possible biomarkers
    involved in this outcome. After complete sequencing of the exome of the
    discordant twin family for outcome (SCZ) and application of filters to prioritize
    candidate genes, a different SNP was identified between the individual with and
    without the affected SCZ. This mutation is located in the MTOR gene and its
    MAF in the world population is relatively frequent at about 20%. The mTOR
    pathway, a cellular signaling pathway that is involved in neurogenesis, is very
    active during embryonic development. Viruses like Zika can block this signaling
    cascade and this may be associated with malformations of the central nervous
    system. The cytokine profile revealed the presence of an exacerbated
    inflammatory response in children with more severe symptoms of the syndrome,
    presenting elevated levels for IL-2, IL-6 and IL15. These results will help to
    further understand the molecular mechanisms of interaction between Zika virus
    and the human host immune response that result in neurological complications
    of the infection. However, many more studies are needed to demonstrate the
    mechanisms involved in the development of SCZV, which is an initial step
    towards also identifying possible genes involved in the occurrence of this
    condition.

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  • EMILIA MARIA MEDEIROS DE ANDRADE BELITARDO
  • INVESTIGAÇÃO SOBRE POSSÍVEIS MARCADORES IMUNOLÓGICOS E MOLECULARES DE DIFERENTES FENÓTIPOS DE ASMA: UM ESTUDO CASO-CONTROLE.   

  • Orientador : NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ADELMIR DE SOUZA MACHADO
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • LUIS GUSTAVO CARVALHO PACHECO
  • NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • RODRIGO MOLINI LEAO
  • Data: 06/04/2020

  • Mostrar Resumo
  • A asma é uma doença inflamatória crônica, heterogênea, multifatorial e com inúmeros fenótipos. Dentre os fenótipos de asma grave, existe o subtipo 'asma resistente ao tratamento, onde o controle da asma não é alcançado, mesmo usando o tratamento de manutenção máxima. O objetivo deste estudo foi o investigar biomarcadores imunológicos e moleculares de fenótipos de asma grave em um estudo caso-controle, em indivíduos da coorte ProAr, em Salvador, Bahia, Brasil. Foram avaliados 67 indivíduos, divididos em três subgrupos de asma [17 com asma grave resistente ao tratamento (AGR), 22 com asma grave controlada com tratamento (AGC) 19 com asma leve a moderada (ALM)] e um grupo controle sem asma (AS) com 9 sujeitos. Para análises imunológicas, as citocinas foram medidas através de um kit multiplex pela tecnologia Luminex (Merck, Alemanha) e a contagem diferencial de células no esputo foi realizada por hemocentrifugação. O transcriptoma de RNA (AGR =2; ALM = 2) foi realizado na plataforma Ion Torrent S5, utilizando um chip Ion 540 (Thermo Fisher Scientific, CA, EUA). O proteoma (três amostras para os grupos AGR e ALM) foi realizado por tripsinização, e os peptídeos foram analisados por espectrometria de massa acoplada à cromatografia líquida (LC-MS / MS). Os resultados sugerem a presença de um fenótipo de asma resistente ao tratamento, caracterizado pela produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-6 e TNF), perfil celular misto, independentes da resposta Th2. Os estudos ômicos mostraram regulação positiva de vias inflamatórias (do TLRs e da via JAK-STAT) e baixa representação da via Hippo e perfil de microRNAs que modulam importantes mecanismos inflamatórios e associados à regulação negativa da via Hippo.   


  • Mostrar Abstract
  • Asthma is a chronic inflammatory, complex and multifactorial disease with several phenotypes. Among the severe asthma phenotypes, there is the subtype 'asthma resistant to treatment, where asthma control is not achieved, even using the maximum maintenance treatment. The aim of this study was to investigate immunological and molecular biomarkers of severe asthma phenotypes in a case-control study, in individuals from the ProAr cohort, in Salvador, Bahia, Brazil. 67 subjects were assessed, divided into three asthma subgroups [17 with severe treatment-resistant asthma (SAR), 22 with treatment-controlled severe asthma (SAC) 19 with mild to moderate asthma (MMA)] and a no asthma (NA) control group including 9 subjects. For immunological analysis, cytokines were measured using a multiplex kit using Luminex technology (Merck, Germany) and the differential sputum cell count was performed by cytospin preparations. The total RNA transcriptome (SAR = 2; MMA = 2) was performed on the Ion Torrent S5 platform, using an Ion 540 chip (Thermo Fisher Scientific, CA, USA). The proteome (three samples for the SAR and MMA groups) was carried out by trypsinization and the peptides were analyzed by mass spectrometry coupled to liquid chromatography (LC-MS / MS). The results suggest the presence of a treatment-resistant asthma phenotype characterized by the production of proinflammatory cytokines (IL-6 and TNF), mixed cell profile, independent of the Th2 response. Omic studies have shown positive regulation of inflammatory pathways (TLRs and the JAK-STAT pathways) and under representation of the Hippo pathway and microRNA profile that modulate important inflammatory mechanisms associated with negative regulation of the Hippo pathway.   

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  • MICHELLE MIRANDA LOPES FALCÃO
  • "AVALIAÇÃO DE MARCADORES IMUNOLÓGICOS E MICROBIOLÓGICOS RELACIONADOS À PERIODONTITE NA REAÇÃO HANSÊNICA"

  • Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • PAULO ROBERTO LIMA MACHADO
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • HERMES PEDREIRA DA SILVA FILHO
  • RICARDO GUIMARÃES FISCHER
  • Data: 08/06/2020

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  • Reação hansênica é uma manifestação inflamatória aguda ou subaguda cuja etiologia está associada a alterações do sistema imunológico, possivelmente, frente a quadros infecciosos concomitantes a hanseníase. É um fenômeno imunológico pouco compreendido, porém, acredita-se que o seu surgimento possa estar relacionado a gestação, infecções concorrentes, uso de drogas, estresse físico ou psicológico. O objetivo desse estudo foi investigar a associação entre os marcadores microbiológicos e imunológicos relacionados à periodontite e a ocorrência de reações hansênicas. Trata-se de um estudo epidemiológico observacional, analítico, do tipo caso controle realizado com 202 indivíduos diagnosticados com hanseníase que apresentaram ou não reações hansênicas. Foi realizada a padronização de um por imunoensaio enzimático (ELISA) indireto para a verificação de subclasses de IgG séricas específicas para antígenos de Porphyromonas gingivalis: extrato bruto, HmuY e Kgp12 (anti-P. gingivalis, anti-HmuY e anti-Kgp12). Os níveis salivares de IgA específica para os mesmos antígenos também foram testados por ELISA indireto. O fluxo e o pH salivar também foram mensurados. Além disso, foi realizado o sequenciamento do DNA para estimar a população microbiana presente no biofilme subgengival de uma subamostra de indivíduos do estudo. Os resultados da padronização do ELISA para IgG indicaram a concentração de 5g/mL do extrato bruto de P. gingivalis, HmuY e Kgp12 para todas as subclasses, com exceção da IgG2, cujo valor foi de 10g/mL. Houve associação significativa entre os níveis salivares de IgA anti-P. gingivalis (p=0,03) e anti-Kgp12 (p=0,01) e a reação hansênica. Não houve diferença estatisticamente significante entre caso e controle na média do fluxo e pH salivar. Entre as amostras com reação e periodontite, Streptococcus oralis foi a espécie mais abundante, seguida de Porphyromonas gingivalis na reação tipo 1 e Fusobacterium canifelinum no tipo 2. Concluindo, a padronização do teste ELISA para subclasses de IgG em soro permitiu diferenciar a ausência e presença de periodontite em indivíduos com e sem reação hansênica com o uso do extrato de Porphyromonas gingivalis, o que auxiliará estudos futuros sobre a relação entre as duas condições. Foi demonstrada a associação entre os níveis salivares de IgA anti-P. gingivalis e a reação hansênica. A abundância de microrganismos relacionados à periodontite foi relativamente maior nos indivíduos com reação hansênica.


  • Mostrar Abstract
  • Leprosy reaction is an acute or subacute inflammatory event whose etiology is associated with immune system alterations, possibly due to infectious conditions concomitant to leprosy. This reaction is an immunological phenomenon that is not well-understood, but it is believed to be related to pregnancy, concurrent infections, drug use, physical or psychological stress. Periodontitis is an inflammatory disease of infectious etiology that is characterized by the production of inflammatory and immunological mediators, that can be associated with the development of leprosy reaction. The aim of this study was to investigate the association between microbiological and immunological markers of chronic periodontitis and the occurrence of leprosy reactions. This is an observational, analytical, case-control study conducted with 202 individuals diagnosed with leprosy who developed a leprosy reaction or not. One standardization was carried out by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the verification of specific serum IgG subclasses for Porphyromonas gingivalis antigens: crude extract, HmuY and Kgp12 (anti-P. gingivalis, anti-HmuY and anti-Kgp12). Salivary levels of specific IgA for the same antigens were also tested by indirect ELISA. Salivary flow and pH were also measured. In addition, DNA sequencing was performed to estimate the microbial population present in the subgingival biofilm of a subsample of the study subjects. The results of the standardization of the ELISA for IgG indicated the concentration of 5g/mL of the crude extract of P. gingivalis, HmuY and Kgp12 for all subclasses, except for IgG2, whose value was 10g/mL. There was a significant association between salivary levels of IgA anti-P. gingivalis (p = 0.03) and anti-Kgp12 (p = 0.01) and the leprosy reaction. There was no statistically significant difference between case and control in mean flow and salivary pH. Among the samples with reaction and periodontal disease, Streptococcus oralis was the most abundant species, followed by Porphyromonas gingivalis in type 1 reaction and Fusobacterium
    canifelinum in type 2. In conclusion, the standardization of the ELISA test for IgG subclasses in serum allowed to differentiate the absence and presence of periodontitis in individuals with and without leprosy reaction with the use of Porphyromonas gingivalis extract, which will help future studies on the relationship between the two conditions. The association between IgA levels salivary anti-P. gingivalis and the leprosy
    reaction has been demonstrated. The abundance of microorganisms related to periodontitis was relatively higher in individuals with leprosy reaction. 

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  • JOÃO PAULO COTRIM GAMA DA SILVA
  • ANTICORPOS IgE PARA ANTÍGENOS RECOMBINANTES DO CORE E DE PROTEÍNAS NÃO-ESTRUTURAIS NS3, NS4

    E NS5 DO VÍRUS DA HEPATITE C

  • Orientador : AJAX MERCES ATTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ROBERTO JOSE MEYER NASCIMENTO
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • AJAX MERCES ATTA
  • MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
  • LUIS JESUINO DE OLIVEIRA ANDRADE
  • Data: 30/07/2020

  • Mostrar Resumo
  • Na hepatite C, a persistência viral do HCV pode causar cirrose, insuficiência hepática e carcinoma hepatocelular. Novos biomarcadores e o desenvolvimento de testes de triagem eficientes ainda são necessários para diagnosticar pacientes soronegativos anti-HCV IgG. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar a resposta imune adaptativa de anticorpos IgE anti-HCV em pacientes cronicamente infectados e testar seu uso como biomarcador do tratamento antiviral. Metodologia e Resultados: Vinte pacientes, antes e após 12 semanas de tratamento antiviral com interferon-α / ribavirina participaram deste estudo. ELISA indiretos amplificados testaram a presença de anticorpos IgE anti-Core e para as proteínas não estruturais NS3, NS4A/B e NS5B em soros adsorvidos para a retirada de IgG. Ensaios imunocitométricos determinaram os níveis séricos de citocinas (TNF-α. IFN-γ, IL-4, IL6 e IL-10). Anticorpos IgE para os antígenos recombinantes do HCV foram detectados nos pacientes com hepatite C. Exceto para anticorpos IgE anti-NS5B, houve uma queda significativa nos níveis de IgE anti-Core, anti-NS4A/B e principalmente anti-NS3 após 12 semanas de terapia antiviral, independente da presença de uma resposta virológica sustentada precoce. Conclusões: Os resultados sugeriram que anticorpos IgE para o Core e proteínas não estruturais participam ativamente da resposta imune adaptativa contra a infecção pelo HCV. Adicionalmente, anticorpos IgE anti-NS3 devem ser investigados como biomarcadores para monitorar a terapia antiviral e excluir a hepatite C nos pacientes soronegativos para IgG anti-HCV. 


  • Mostrar Abstract
  • In hepatitis C, HCV persistence may cause cirrhosis, liver failure and hepatocellular carcinoma. New biomarkers and the development of efficient screening tests are still necessary to diagnose seronegative anti-HCV IgG patients. Aim: The aim of this study was to investigate the adaptive immune response of anti-HCV IgE antibodies in patients chronically infected with HCV, and to test its use as a biomarker of antiviral treatment. Methods and Results: Twenty patients before and after 12 weeks of antiviral treatment with interferon-α / ribavirin took part of this study. Amplified indirect ELISAs tested IgE antibodies to recombinant antigens from core and from nonstructural proteins NS3, NS4A/B and NS5B with IgG-depleted sera. Immunocytometric assays determined serum levels of cytokines (TNF-α. IFN-γ, IL-4, IL-6 and IL-10). IgE antibodies to the HCV-recombinant antigens were detected in the hepatitis C patients. Except for NS5B IgE antibodies, there was a significant drop in the levels of IgE to Core, NS4A/B and mainly NS3 after 12 weeks of antiviral therapy regardless of the presence of an early sustained virologic response. Conclusions: These results suggest that IgE antibodies to core and non-structural proteins actively participate in the adaptive immune response to HCV infection and that anti-NS3 IgE should be investigated as a biomarker to monitor antiviral therapy and to exclude hepatitis C in anti-HCV IgG seronegative patients.  

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  • RAIMON RIOS DA SILVA
  • POLIMORFISMOS GENÉTICOS ASSOCIADOS COM A OCORRÊNCIA DE ECZEMA EM UMA POPULAÇÃO BRASILEIRA COM ALTA ANCESTRALIDADE AFRICANA

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • CAMILA INDIANI DE OLIVEIRA
  • KARINA CARLA DE PAULA MEDEIROS
  • CLAUDIO ROBERTO BEZERRA DOS SANTOS
  • Data: 14/08/2020

  • Mostrar Resumo
  • Eczema é uma doença multicausal que inclui fatores imunológicos e genéticos, dentre outros. Neste estudo, avaliamos a associação entre polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) e eczema em uma população brasileira com alta ancestralidade africana através de dois estudos: um de ampla varredura genômica (GWAS) e outro com o gene Filagrina (FLG). Para isso, participantes do estudo SCAALA, Salvador, foram genotipados e classificados como casos ou controles. Então, testamos a associação através de regressão logística. Nós investigamos as características funcionais dos SNPs associados e o impacto deles sobre expressão gênica. Ademais, realizamos uma análise de genes e vias metabólicas com base em nossos dados do GWAS e também verificamos se a associação em FLG variou de acordo com a quantidade de ancestralidade africana. No GWAS identificamos dois SNPs ligados à suscetibilidade para eczema (rs6783507 e rs79142431), localizados nas regiões 3q21 e 7p21, respectivamente. A via do receptor da IL-1 e os genes IL1RAP e SEMA7A, localizados nas regiões 3q28 e 15q24, respectivamente, foram os mais importantes em nossos dados GWAS. Em nosso estudo com FLG, mostramos que o alelo T do rs6587666 pode estar relacionado à proteção contra eczema em nossa população. Interessantemente, a quantidade de ancestralidade africana na estrutura genética dos indivíduos foi capaz de modificar a associação observada. Esse foi o primeiro estudo de associação genética para eczema numa população brasileira miscigenada. Nós mostramos novos loci com papel relevante na fisiopatogenia dessa doença em nossa população e fornecemos novos alvos para pesquisas posteriores em eczema. 


  • Mostrar Abstract
  • Eczema is a multicausal disease that includes immunological and genetic factors, among others. In this study, we evaluated the association between single nucleotide polymorphisms (SNPs) and eczema in a Brazilian population with high African ancestry through two studies: a Genome Wide Association Study (GWAS) and other with the Filagrina (FLG). For this, participants in the SCAALA project, Salvador, were genotyped and classified in cases or controls. Then, we tested the association through logistic regression and investigated the functional characteristics of the associated SNPs and their impacts on gene expression levels. Furthermore, we performed analysis based on genes and pathways within our GWAS data and also verified whether the association in FLG varied according to the amount of African ancestry. In GWAS, we identified two SNPs associated to susceptibility to eczema (rs6783507 and rs79142431), located in the 3q21 and 7p21 regions, respectively. The pathway of the IL-1 receptor and IL1RAP and SEMA7A, located in the 3q28 and 15q24 regions, respectively, were the most important on our GWAS data. In our study with FLG, we showed that the T allele of rs6587666 may be related to protection against eczema in our population. Interestingly, the amount of African ancestry in the genetic structure of the participants was able to modify the observed association. Herein, we realized the first genetic association study for eczema in a admixed Brazilian population. We showed new loci with relevant role in the pathophysiology of this disease in our population  and provide new targets for further research in eczema.

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  • TARCÍSIO VILA VERDE SANTANA DE ALMEIDA
  • PARTICIPAÇÃO DOS MONÓCITOS NA PATOGÊNESE DA FIBROSE PERIPORTAL SECUNDÁRIA A

    ESQUISTOSSOMOSE 

  • Orientador : LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • AMELIA MARIA RIBEIRO DE JESUS
  • ANDRE CASTRO LYRA
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
  • RICARDO RICCIO OLIVEIRA
  • Data: 21/08/2020

  • Mostrar Resumo
  • A patogênese da esquistossomose crônica está associada à inflamação granulomatosa em resposta aos antígenos do ovo, que pode culminar na fibrose periportal. A ultrassonografia tem sido a ferramenta diagnóstica para determinação da morbidade da doença. Evidências na literatura apontam para o envolvimento dos monócitos e macrófagos derivados de monócitos na imunopatogênese da fibrose hepática através da produção de citocinas e outras moléculas associadas ao dano e ao remodelamento tecidual. Os objetivos deste estudo foram aplicar o protocolo de Niamey para avaliação ultrassonográfica da fibrose periportal e avaliar a expressão de moléculas associadas ao remodelamento tecidual nos monócitos de indivíduos com diferentes graus de fibrose periportal secundária à esquistossomose. Participaram da avaliação ultrassonográfica 122 indivíduos e destes, 71% dos foram classificados como sem fibrose ou com fibrose incipiente não excluída, enquanto 29% apresentaram algum grau de fibrose e 3% apresentaram fibrose avançada com ou sem hipertensão portal .Monócitos foram obtidos através de células mononucleares do sangue periférico de 26 destes pacientes e avaliados após estímulo com o antígeno solúvel do ovo (SEA) por citometria de fluxo. De maneira geral, os monócitos dos indivíduos com fibrose periportal apresentaram maior expressão de CCR5, MARCO, MMP2, MMP9 e maior produção de espécies reativas de oxigênio quando comparados ao grupo sem fibrose ou com fibrose incipiente não excluída. Os monócitos de pacientes com fibrose periportal avançada expressaram menos MMP-2 e MMP-9 que os monócitos do grupo com fibrose periportal. Os resultados obtidos podem indicar que os monócitos podem apresentar um papel dual na fibrose periportal, uma vez que podem expressar moléculas associadas ao dano tecidual e à fibrogênese, ao mesmo tempo que podem ser importantes para o catabolismo de componentes da matriz extracelular e consequentemente ajudar a evitar a progressão da cicatriz fibrótica através do parênquima hepático.


  • Mostrar Abstract
  • The pathogenesis of schistosomiasis is caused by granulomatous inflammation in response to egg antigens, that can results in liver fibrosis of the host. Ultrasound has been used to investigate the morbidity related to schistosomiasis. Evidences have emphasized the role of monocytes in the immunopathogenesis of fibrosis, sice these cells can express cytokines and other markers associated to inflammation and tissue remodeling. The aim of this study was to evaluate the periportal fibrosis in S. mansoni endemic area patients by ultrasound as proposed by WHO and to evaluate the expression of tissue remodeling markers in monocytes from individuals with different degrees of periportal fibrosis. Of the 122 participants examined with ultrasound, 71% had no periportal fibrosis or had incipient fibrosis not excluded, 29% had some level of fibrosis and 3% had advanced periportal fibrosis. Monocytes from 26 individuals were obtained from peripheral blood mononuclear cells and stimulated with soluble egg antigen (SEA). Monocytes were classified in: classical, intermediate and non-classical and evaluated by flow citometry. In general, the expression of MARCO, CCR5, MMP-2 and MMP-9 were higher in monocytes of periportal fibrosis group compared to individuals without fibrosis or with incipient fibrosis not excluded. Expression of MMP-2 and MMP-9 in monocytes of individuals with advanced fibrosis was lower compared individuals with periportal fibrosis. Taken together, these results may indicate that monocytes have a dual role in periportal fibrosis, since they can express markers associated with tissue damage and fibrogenesis, at the same time that they may be important for the catabolism of the extracellular matrix componentes and consequently help to prevent the progression of fibrotic scarring through the liver parenchyma.

9
  • MARIELE GUERRA LEMOS DA SILVA
  • INVESTIGAÇÃO DE MECANISMOS ENVOLVIDOS NA IMUNOPATOGÊNESE DA MIELOPATIA ASSOCIADA À

    INFECÇÃO PELO HTLV-1

  • Orientador : LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • ANSELMO DE SANTANA SOUZA
  • AUGUSTO MARCELINO PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • NATALIA BARBOSA CARVALHO
  • Data: 08/09/2020

  • Mostrar Resumo
  • Pacientes com HAM/TSP apresentam alta carga viral, altas produções de citocinas pró-inflamatórias além de uma linfoperoliferação quando comparados com controles saudáveis, assintomáticos e pacientes com BH-HTLV-1. Além disso, a HAM/TSP é caracterizada por uma neurodegerenação do SNC. O objetivo do nosso trabalho foi de avaliar o papel das MMP, TIMP e S100B na patogênese da infecção pelo HTLV-1. As metalopeoteinases (MMP-3 e MMP- 9), os inibidores de metaloproteinases (TIMP-1, TIMP-3 e TIMP-4) e S100B foram determinados pela técnica de ELISA, no soro, sobrenadante e líquor dos diferentes grupos de indivíduos infectados pelo HTLV-1 (portador assintomático, indivíduos com bexiga hiperativa e HAM/TSP). A frequência de linfócitos e monócitos que foram quimioatraidos pela técnica de Transwell foi analisada por citometria de fluxo. Pacientes com HAM/TSP apresentaram maior concentração de MMP-9, no soro e no sobrenadante, quando comparado com os demais grupos estudados grupos (p<0,05) bem como maior razão entre MMP-9/TIMP-1, no soro, quando comparado com os demais grupos estudados grupos (p<0,05). A S100B em HAM/TSP não houve diferença estatística com os grupos estudados, tanto no soro quanto no sobrenadante (p>0,05), embora no líquor houvesse uma menor concentração quando comparado com BH- HTLV-1 (p<0,05). Embora não houvesse diferença estatística monócitos e linfócitos de pacientes com HAM/TSP apresentaram uma maior migração em modelo de quimiotaxia, porém sem diferença estatística. Esses achados confirmam a participação da MMP-9 na destruição da BHE, facilitando a entrada de células infectadas para dentro do SNC.


  • Mostrar Abstract
  • Patients with HAM/TSP exhibit high viral load, high production of proinflammatory cytokines and high lympoperoliferation when compared with healthly controls, HTLV-1 carriers and patients with BH-HTLV-1. In addition, a HAM/TSP is characterized by CNS neurodegeneration. The aim of our work was to evaluate the role of MMP, TIMP and S100B, the pathogenesis of HTLV- 1 infection. The metallopeoteinases (MMP-3 and MMP-9), the metalloproteinase inhibitors (TIMP-1, TIMP-3 and TIMP-4) and S100B were submitted to the ELISA technique, in the serum, supernatant and cerebrospinal fluid (CSF) of groups of individuals infected by HTLV-1 (HTLV-1 carriers, patients with BH-HTLV-1 and HAM/TSP). The frequency fymphocytes and monocytes that were chemoattracted by the Transwell technique was analyzed by flow cytometry. Patients with HAM/TSP had a higher concentration of MMP- 9, in the serum and supernatant, when compared to the other groups studied (p<0.05), as well as a higher ratio between MMP-9/TIMP-1, in the serum, when compared with the other groups studied (p<0.05). The S100B in the HAM/TSP did not show statistical difference with the studied groups, both in serum and in supernatant (p>0.05), although in the CSF there was less concentration when compared to BH-HTLV-1 (p<0.05) Although there is no statistical difference in monocytes and lymphocytes from patients with HAM/TSP showed reater migration in a chemotaxis model, but without statistical difference. These findings confirm the participation of MMP-9 in the destruction of the BBB, facilitating the entry of cells infected by the CNS.

2019
Dissertações
1
  • MARINA BORGES RABÊLO DE SANTANA
  • Avaliação dos efeitos imunomodulatórios de proteínas
    recombinantes de Trichuris trichiura (rTtMIF e rTtFBPA) e
    Toxocara canis (rTcCis) em modelo experimental de alergia

    respiratória

  • Orientador : NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • DENIS DE MELO SOARES
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • DANIELA LUZ AMBROSIO BREISCH
  • Data: 23/01/2019

  • Mostrar Resumo
  • A prevalência das doenças alérgicas vem crescendo progressivamente
    em todo o mundo, entre estas a asma se destaca por afetar uma grande parte
    da população mundial. A “hipótese da higiene”, sugere que a redução da
    exposição a infecções como por patógenos, incluindo os helmintos durante a
    infância gera um desequilíbrio no sistema imunológico, resultando no
    desenvolvimento mais frequente de doenças alérgicas e autoimunes. Portanto,
    as infecções parasitárias podem atuar como um fator de proteção contra estas
    perturbações. O uso de infecções helmínticas em imunoterapia não é viável,
    porém os produtos destes parasitos biologicamente ativos podem se tornar uma
    alternativa promissora, utilizando sua atividade imunomodulatória. Neste estudo,
    nós investigamos os efeitos imunomodulatórios das proteínas recombinantes
    rTtMIF e rTtFBPA do Trichuris Trichiura e a rTCys do Toxocara canis, em um
    modelo murino de asma experimental induzida por extrato de Blomia tropicalis
    (BtE). Nestes experimentos, camundongos AJ foram sensibilizados com 100 μg
    de BtE/animal, via sub-cutânea (s.c) e desafiados com 10μg de BtE/ animal via
    intra-nasal (i.n). A seguir estes camundongos foram tratados ou não com rTtMIF,
    rTtFBPA ou rTcCys (25 μg/ animal, s.c) ou Dexametasona (3 mg/kg). O
    tratamento com rTtMIF levou a uma redução da peroxidade de eosinófilos (EPO)
    no pulmão e os três antígenos foram capazes de diminuir a EPO no líquido da
    lavagem brônquio-alveolar (BAL) e os níveis de IgE anti-Bt no soro. O tratamento
    com rTtMIF, rTtFBPA ou rTcCys levou ainda a uma redução das citocinas Th2:
    IL-4 e IL-5 no macerado dos pulmões e no BAL. Não foi observado alteração na
    produção de IFN-ɣ e não houve aumento significante na produção de IL-10 no
    macerado dos pulmões ou no BAL. Estes resultados sugerem que o tratamento
    alternativo com rTtMIF, rTtFBPA ou rTcCys pode ser promissor para a asma
    através de um mecanismo não dependente de IL-10.


  • Mostrar Abstract
  • The prevalence of allergic diseases has been growing steadily all over the world,
    among them asthma is notable for affecting a large part of the world population.
    The "hygiene hypothesis" suggests that reducing exposure to infections such as
    pathogens, including helminths during childhood, generates an imbalance in the
    immune system, resulting in more frequent development of allergic and
    autoimmune diseases. Therefore, parasitic infections may act as a protective
    factor against these disorders. The use of helminth infections in immunotherapy
    is not feasible, but the products of these biologically active parasites may become
    a promising alternative, using its immunomodulatory activity. In this study, we
    investigated the immunomodulatory effects of the recombinant rTtMIF and
    rTtFBPA proteins of Trichuris Trichiura and the rTCys of Toxocara canis, in a
    murine model of experimental asthma induced by Blomia tropicalis extract (BtE).
    In these experiments, AJ mice were sensitized with 100 μg BtE / animal,
    subcutaneous (s.c) and challenged with 10 μg BtE / animal intra-nasal (i.n).
    These mice were then treated with rTtMIF, rTtFBPA or rTcCys (25 μg / animal,
    s.c) or Dexamethasone (3 mg / kg). Treatment with rTtMIF led to a reduction of
    eosinophil peroxidation (EPO) in the lung and the three antigens were able to
    decrease EPO in bronchial alveolar lavage fluid (BAL) and serum anti-Bt IgE
    levels. Treatment with rTtMIF, rTtFBPA or rTcCys further led to a reduction of
    Th2: IL-4 and IL-5 cytokines in the lungs and BAL. No change in IFN-γ production
    was observed and there was no significant increase in IL-10 production in the
    macerate of the lungs or in the BAL. These results suggest that alternative
    treatment with rTtMIF, rTtFBPA or rTcCys may be promising for asthma through
    a non-IL-10 dependent mechanism.

2
  • TARCIANO NASCIMENTO PEREIRA
  • EFEITO DOS ANTÍGENOS RECOMBINANTES Sm29 E SmKI.1 DO Schistosoma mansoni IN VITRO NA REGULAÇÃO DOS LINFÓCITOS E MONÓCITOS DE PACIENTES COM ASMA

  • Orientador : LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • REGIS DE ALBUQUERQUE CAMPOS
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • Data: 23/01/2019

  • Mostrar Resumo
  • Introdução: A asma é uma doença crônica caracterizada por inflamação das vias
    aéreas, obstrução e hiperresponsividade. Evidências vem sendo acumuladas de que
    a infecção crônica por helmintos, particularmente pelo Schistosoma sp ou produtos do
    parasito, são capazes de modular a resposta inflamatória nas doenças de bases
    alérgicas. Objetivo: Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da adição in vitro
    dos antígenos recombinantes Sm29 e SmKI.1 do Schistosoma mansoni na produção
    de IL-10 e frequência dos linfócitos T e B regulatórios e monócitos de pacientes com
    asma. Metodologia: Foram avaliados 32 indivíduos, sendo 12 com asma leve a
    moderada (ALM), 12 com asma grave (AG) e 8 como controle sadio sem asma (CSA).
    Os linfócitos e monócitos foram obtidos através das CMSP, e posteriormente
    estimulados com os antígenos Sm29 e SmKI.1. A técnica de citometria foi empregada
    para avaliar a frequência dos linfócitos T (CD3+CD4+

    ), T regulatórios

    (CD3+CD4+CD25hi), linfócitos B (CD19+

    ), linfócitos B regulatórios

    (CD19+Cd24hiCD38hi), monócitos totais (CD14+

    ) e as subpopulações de monócitos:

    clássicos(CD14+CD16

    neg), intermediários (CD14+CD16+

    ) e não clássicos

    (CD14dimCD16+

    ), além da expressão intracelular de moléculas regulatórias, IL-10
    FoxP3 e TGF-β. Resultados: Os monócitos foram a fonte produtora de IL-10 entre as
    população e os linfócitos T e B após estimulo pelo Sm29 nos grupos com ALM e AG.
    As frequências de linfócitos T CD4+CD25hi no grupo com AG aumentou nas culturas
    estimuladas com Sm29 em comparação com as culturas sem estímulo. Nos grupos
    com ALM e AG, a frequência dos linfócitos T CD4+CD25hiFoxP3+ aumentaram na
    presença do antígeno recombinante Sm29 do S. mansoni. Nos indivíduos com ALM,
    a expressão de TGF-β nos linfócitos B CD19+CD24hiCD38hi foram mais altas nas
    culturas estimuladas pelo Sm29 em comparação às sem estímulo. O antígeno Sm29
    foi ainda capaz de reduzir as frequências dos monócitos clássicos e totais nos grupos
    com ALM e CSA. Nos grupos com e sem asma a adição do antígeno Sm29 levou a
    um aumento na expressão de IL -10 tanto pelos monócitos totais, como pelos
    monócitos clássicos e intermediários. O antígeno SmKI.1 não alterou a expressão de
    IL-10 nas populações celulares avaliadas nos grupos ALM, AG ou CSA. Conclusão:
    O antígeno Sm29 foi capaz de induzir a expressão de IL-10, CD25hi e FoxP3,
    importantes moléculas associadas a regulação da resposta inflamatória exacerbada
    na asma.


  • Mostrar Abstract
  • Introduction: Asthma is a chronic disease characterized by airway inflammation,
    obstruction and hyperresponsiveness. Evidence has been accumulated that chronic
    helminth infection, particularly Schistosoma sp or parasite products, are able to
    modulate the inflammatory response in allergic diseases. Aim: This study aimed to
    evaluate the in vitro effect of the addition of recombinant Sm29 and SmKI.1 antigens
    of Schistosoma mansoni in IL-10 production and the frequency of regulatory T and B
    lymphocytes and monocytes from patients with asthma. Methodology: A total of 32
    subjects were evaluated to date: 12 with mild to moderate asthma (ALM), 12 with
    severe asthma (AG) and 8 as healthy control without asthma (CSA). Lymphocytes and
    monocytes were obtained from PBMC, and then stimulated with SmKI.1 and Sm29
    antigens. The flow cytometer technique was used to assess the frequency of T lymphocytes (CD3+CD4+

    ), T regulatory lymphocytes (CD3+CD4+CD25hi), B lymphocytes (CD19+), B regulatory lymphocytes (CD19+CD24hiCD38hi), totalmonocytes (CD14+) and the monocytes subpopulations: Classic (CD14+CD16neg), intermediate (CD14+CD16+) and non-classical (CD14dimCD16+). The intracellular expression of regulatory molecules (IL-10 and TGF-β FoxP3) were also evaluated.

    Results: Monocytes were the main source of IL-10 production in relation to T and B
    lymphocytes after stimulation of PBMC cultures with Sm29 in groups with ALM and
    AG. The frequencies of CD4+CD25hi T cells in the AG group increased in cultures
    stimulated with Sm29 compared to the unstimulated cultures. In ALM and AG groups
    the frequency of CD4+ CD25hiFoxP3+ T lymphocytes increased in the presence of the
    recombinant antigen Sm29 from Schistosoma mansoni. In individuals with ALM the
    expression of TGF-β by CD19+CD24hiCD38hi B lymphocytes were higher in cultures
    stimulated with Sm29 compared to unstimulated ones. The Sm29 antigen was still able
    to reduce the frequency of classical and total monocytes in groups with ALM and CSA.
    In the cultures of asthmatics were Sm29 was added there was an increase in the
    expression of IL -10 in both total monocytes, classic and intermediate monocytes. The
    SmKI.1 antigen did not affect the IL-10 expression in all cell populations evaluated in
    the groups with ALM, AG or CSA. Conclusion: The Sm29 antigen was able to induce
    IL-10, FoxP3 and Cd25hi expression. These molecules are associated with regulation
    of inflammatory exacebated response in asthma.

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  • Giselle Rocha Pinto
  • PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA NA DOENÇA DO ENXERTO CONTRA O HOSPEDEIRO CRÔNICA ORAL

  • Orientador : SORAYA CASTRO TRINDADE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • PAULO HENRIQUE COUTO SOUZA
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • Data: 11/03/2019

  • Mostrar Resumo
  • Dentre as complicações após o transplante alogênico de células tronco hematopoiéticas, a doença do enxerto contra hospedeiro (DECH) é o problema clínico mais significativo, grave e freqüente, além de ser uma das principais causas de mortalidade pós-transplante. A cavidade oral se destaca, pois pode ser o principal ou o único local de DECH crônica e pode ter lesões persistentes após a resolução em outras áreas. O dano tecidual resulta da regulação positiva de mediadores inflamatórios, como citocinas, quimiocinas e proteínas de choque térmico (HSP), que desempenham um papel crítico na imunopatogênese da doença. O presente estudo objetivou analisar o perfil de expressão gênica na DECH oral. Para isso, a expressão de mRNA diferencial das citocinas IFN, TNF, IL-1, IL-2; IL-12, IL-4, IL-5, IL-13, IL-6, IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-23A, IL-18, IL-33, IL-10 e TGF1, dos fatores de transcrição RORt, FOXP3, GATA3, NFB1 e NFBIL1, das quimiocinas CCL2 e CCL5 e de HSP 60 (HSPD1), HSP70 (HSPA4) e HSP90 (HSP90B1) em células mononucleares do sangue periférico de indivíduos com DECH oral foram quantificadas. Foram selecionados 8 indivíduos que haviam feito transplante de células progenitoras hematopoiéticas, dos quais 6 haviam desenvolvido DECH crônica oral (DECHo) e 2 de referência que não tiveram DECH. As células foram cultivadas in vitro sem estimulação antigênica, e o arranjo de PCR em tempo real customizado foi utilizado para avaliar a expressão de mRNA dos genes estudados. A expressão relativa dos genes avaliados foi regulada para cima no grupo de pacientes com DECH oral, com exceção apenas de IL-12, que foi igual entre os grupos e IL-17A que se apresentou regulada para baixo. Destaca-se a diferença da expressão de IFN, TNF, IL1CCL2, HSP60 e HSP90 entre os grupos. Estes resultados sugerem a participação de moléculas inflamatórias (citocinas, quimiocinas e proteínas de choque térmico) na patogênese da DECH oral. A análise de transcriptômica empregada permitiu a observação na perspectiva de assinatura de expressão gênica, com destaque para os perfis Th1 e Th17 na DECH oral.


  • Mostrar Abstract
  • Among the complications after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, graft-versus-host disease (GVHD) is the most significant, serious and frequent clinical problem, in addition to be a major cause of post-transplant mortality. The oral cavity stands out because it may be the main or only site of chronic GVHD and may have persistent lesions after resolution in other areas. Tissue damage results in the positive regulation of inflammatory mediators, such as cytokines, chemokines and heat shock proteins (HSP), which play a critical role in the immunopathogenesis of the disease. The present study aimed to analyze the gene expression profile in oral GVHD. For this, the mRNA expression of the cytokines IFN, TNF, IL-1, IL-2; IL-17, IL-17F, IL-21, IL-23A, IL-18, IL-33, IL-10 and TGF 1, the transcription factors RORt, FOXP3, GATA3, NFB1 and NFBIL1, CCL2 and CCL5 chemokines and HSPs 60 (HSPD1), 70 (HSPA4) and 90 (HSP90B1) in peripheral blood mononuclear cells of patients with oral GVHD were quantified. Eight individuals post-transplantation of hematopoietic progenitor cells were selected, of whom 6 had developed chronic oral GVHD (GVHD) and 2 controls that did not have GVHD. Cells were cultured in vitro without antigen stimulation, and the custom real-time PCR array was used to evaluate the mRNA expression of the genes studied. The relative expression of the evaluated genes was up-regulated in the group of patients with oral GVHD, except for IL-12, which was equal between the groups and IL-17A which was down-regulated. The difference in expression of IFN, TNF, IL1, CCL2, HSP60 and HSP90 between the groups is highlighted. These results suggest the participation of inflammatory molecules (cytokines, chemokines and heat shock proteins) in the pathogenesis of oral GVHD. The transcriptomic analysis used herein allowed the observation from the perspective of gene expression signature, with emphasis on the Th1 and Th17 profiles in the oral GVHD.

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  • RENATA DE OLIVEIRA GOMES
  • AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTI-INFLAMATÓRIA DE NOVOS INIBIDORES DA PROSTAGLANDINA E SINTASE MICROSSOMAL-1 EM NOVO MODELO EXPERIMENTAL DE ARTRITE INDUZIDA POR ZYMOSAN EM CAMUNDONGOS

  • Orientador : DENIS DE MELO SOARES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • AJAX MERCES ATTA
  • DAVID DO CARMO MALVAR
  • DENIS DE MELO SOARES
  • Data: 22/03/2019

  • Mostrar Resumo
  • A Artrite é sinal clínico importante presente em diversas doenças, possui característica inflamatória crônica, podendo ser desencadeada por distúrbios autoimunes como a Artrite Reumatoide (AR). O tratamento atual para condições inflamatórias, como a inflamação articular envolve medicamentos que atuam na modulação de substâncias importantes para o desencadeamento e manutenção da inflamação, os glicocorticoides; os anti-inflamatórios não esteroidais (AINES) e as drogas antirreumáticas modificadoras da doença (DARMD) são as principais classes farmacológicas prescritas. Entretanto, sua baixa adesão afeta a eficácia da terapêutica, tanto no sentido da baixa eficiência, quanto pelos conhecidos eventos adversos graves. Nessa perspectiva a busca por novos tratamentos principalmente na ótica de drogas anti-inflamatórias e analgésicas ainda é bastante promissor. Os modelos animais contribuem para o progresso de novos medicamentos. Nesse sentido, existem diversas estratégias para modelos de artrite, como a artrite induzida por zymozan (AIZ), modelo agudo que utiliza a injeção intra-articular, para a aplicação desse método a anestesia animal se faz necessária, porém, anestésicos como isoflurano, podem modular a inflamação e limitá-la. Outra questão importante para busca de fármacos com melhor adesão é a seletividade do alvo terapêutico. No contexto da inflamação, a inibição da síntese de prostaglandinas pode facilitar o desencadeamento de eventos adversos, a mPGES-1, enzima terminal da prostaglandina E2 (PGE2) em processos inflamatórios por exemplo, destaca-se como um alvo promissor. Nessa perspectiva, esse estudo inicialmente, buscou na literatura, de forma sistemática, como a (PGE2) atua na ativação das células TH17 e neutrófilos na patogênese da AR. Logo após, padronizou um modelo de AIZ sem anestesia e este novo modelo foi utilizado para avaliar a atividade anti-inflamatória de novos inibidores da mPGES-1. Observou-se que a PGE2 atua nas células sinoviais promovendo a diferenciação das células TH17 que produzem a IL-17, citocina que atua também nessas células sinoviais, facilitando a migração de neutrófilos. A padronização da contenção animal é uma estratégia experimental que facilita a aplicação da técnica sem a utilização da anestesia animal, que contribui para a modulação do modelo, com a redução do edema articular. Duas moléculas obtidas por triagem virtual (inibidoras da mPGES-1), que possuem atividade antipirética observada em estudo anterior (8 e 9), apresentaram atividade anti-inflamatória, sem característica dose-dependente. A molécula 8 não foi capaz de reduzir a migração leucocitária. Estudos posteriores nos possibilitarão a afirmar o tipo de inibição gerada pelas moléculas.


  • Mostrar Abstract
  • Arthritis is an important clinical sign in several diseases, it has a chronic inflammatory characteristic, and can be triggered by autoimmune disorders such as Rheumatoid Arthritis (RA). Current treatment for inflammatory conditions, such as joint inflammation, involves medications the modulation of substances responsible for the triggering and maintenance of inflammation, glucocorticoids; non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAID) and disease-modifying antirheumatic drugs (DMARD) are the mostly prescribed pharmacological classes. However, its low adherence affects the efficacy of the therapy, both towards the low efficiency, as well as the known serious adverse events. In this perspective, the search for new treatments mainly in the perspective of anti-inflammatory and analgesic drugs is still quite promising. Animal models contribute to the progress of new drugs. In this sense, there are several strategies for arthritis models, such as zymosan-induced arthritis (ZIA), an acute model that uses intra-articular injection, for the application of this method animal anesthesia is necessary, however, anesthetics such as isoflurane may modulate the inflammation and limit it. Another important issue for the search for drugs with better adhesion is the selectivity of the therapeutic target. In the context of inflammation, inhibition of prostaglandin synthesis may facilitate the triggering of adverse events, mPGES-1, terminal enzyme of prostaglandin E2 (PGE2) in inflammatory processes for example, stands out as a promising target. In this perspective, this study initially sought in the literature, in a systematic way, how PGE2 acts in the activation of TH17 cells and neutrophils in the pathogenesis of RA. Soon after, standardized a ZIA model without anesthesia and this new model was used to evaluate the anti-inflammatory activity of new inhibitors of mPGES-1. It has been observed that PGE2 acts on synovial cells promoting the differentiation of TH17 cells that produce IL-17, a cytokine that also acts on these synovial cells, facilitating the migration of neutrophils. The standardization of animal restraint is an experimental strategy that facilitates the application of the technique without the use of animal anesthesia, which contributes to the modulation of the model, with the reduction of joint edema. Two molecules (inhibitors of mPGES-1), which have antipyretic activity observed in a previous study (8 and 9), showed anti-inflammatory activity, without a dose-dependent characteristic. The molecule 8 was not able to reduce leukocyte migration. Further studies will make possible to affirm the type of inhibition generated by the molecules.

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  • RAPHAEL CHAGAS SILVA
  • Caracterização quantitativa de ILC2 nos diferentes endofenótipos de asma e análise de variantes genéticas em receptores envolvidos em sua ativação sobre atopia e asma

  • Orientador : NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LEA CRISTINA DE CARVALHO CASTELLUCCI
  • NEUZA MARIA ALCANTARA NEVES
  • VALDIRENE LEAO CARNEIRO
  • Data: 07/06/2019

  • Mostrar Resumo
  • Atopia e asma vêm aumentando de incidência mundialmente ao longo dos anos. Os fatores envolvidos no desenvolvimento de doenças alérgicas são: mudanças climáticas, infecção por microrganismos e helmintos, contato com alérgenos e predisposição genética. A principal resposta imune aos alérgenos é a resposta Th2
    clássica com participação de citocinas IL-4, IL-5 e IL-13, que culmina com a reação de hipersensibilidade tipo I e a inflamação eosinofílica envolvidas na asma e em doenças atópicas. As células linfóides inatas do tipo 2 (ILC2s) também respondem aos  alérgenos liberando as mesmas citocinas produzidas por células Th2 e que recrutam
    neutrófilos, eosinófilos, produzem IgE e causam degranulação de mastócitos. Variantes genéticas em genes dos receptores CD127, IL17RB e CRTH2 podem alterar a ativação e função das ILC2s influenciando a susceptibilidade para o desenvolvimento da asma e doenças atópicas. Os objetivos deste trabalho foram quantificar a produção de ILC2s entre os endofenótipos de asma e avaliar a influência de polimorfismo nos genes CD127, IL17RB e CRTH2 em atopia e asma em indivíduos acompanhados no Programa de Controle da Asma e Rinite da Bahia (ProAR). Foram quantificadas ILC2s em células mononucleares de sangue periférico de 30 indivíduos (10 asmáticos grave, 10 asmáticos leve e 10 não asmáticos) por meio da técnica da citometria de fluxo. Em adição, foram quantificadas a interleucina TSLP (ligante de CD127) e o receptor solúvel ST2 (ligante de IL-33) em soro desses participantes. Os polimorfismos foram genotipados através de um painel comercial da Illumina. As frequências de ILC2s não foram significativas entre os diferentes grupos estudados. A frequência de ILC2s foi maior em asmáticos grave e atópicos do que em asmáticos grave e não atópicos, além de apresentarem frequência maior de ILC2s em indivíduos asmáticos e atópicos a B. tropicalis. As dosagens séricas de ST2 e TSLP não foram estatisticamente diferentes ente os grupos. Alguns SNPs em CD127 foram associados com asma, gravidade de asma, atopia, obstrução, marcadores de atopia e aumento de neutrófilos no esputo.
    SNPs em IL17RB foram associados com asma, gravidade de asma, obstrução e marcadores de atopia, além da diminuição significativa de ILC2s em células do sangue periférico. CRTH2 SNPs foram associados com atopia e marcadores de atopia. Como conclusão, nenhuma associação foi encontrada entre frequências de ILC2 e endofenótipos de asma, sugerindo que o uso de corticóide pode influenciar na ativação de ILC2, assim como na produção de TSLP. Houve um aumento do número de ILC2 em indivíduos atópicos a B. tropicalis. Os SNPs em genes dos receptores de ILC2s demonstraram ser um fator de proteção ou um fator de risco para a susceptibilidade à asma e atopia o que sugere que SNPs em CD127, IL17RB e CRTH2 são importantes determinantes para o desenvolvimento destas condições ou não. Nesta condição, novos estudos são requeridos para um maior entendimento sobre a participação de ILC2s nos mecanismos imunológicos envolvidos em atopia e asma.


  • Mostrar Abstract
  • Atopia e asma vêm aumentando de incidência mundialmente ao longo dos anos. Os fatores envolvidos no desenvolvimento de doenças alérgicas são: mudanças climáticas, infecção por microrganismos e helmintos, contato com alérgenos e predisposição genética. A principal resposta imune aos alérgenos é a resposta Th2 clássica com participação de citocinas   IL-4, IL-5 e IL-13, que culmina com a reação de hipersensibilidade tipo I e a inflamação eosinofílica envolvidas na asma e em doenças atópicas. As células linfóides inatas do tipo 2 (ILC2s) também respondem aos alérgenos liberando as mesmas citocinas produzidas por células Th2 e que recrutam neutrófilos, eosinófilos, produzem IgE e causam degranulação de mastócitos. Variantes genéticas em genes dos receptores CD127, IL17RB e CRTH2 podem alterar a ativação e função das ILC2s influenciando a susceptibilidade para o desenvolvimento da asma e doenças atópicas. Os objetivos deste trabalho foram quantificar a produção de ILC2s entre os endofenótipos de asma e avaliar a influência de polimorfismo nos genes CD127, IL17RB e CRTH2 em atopia e asma em indivíduos acompanhados no Programa de Controle da Asma e Rinite da Bahia (ProAR). Foram quantificadas ILC2s em células mononucleares de sangue periférico de 30 indivíduos (10 asmáticos grave, 10 asmáticos leve e 10 não asmáticos) por meio da técnica da citometria de fluxo. Em adição, foram quantificadas a interleucina TSLP (ligante de CD127) e o receptor solúvel ST2 (ligante de IL-33) em soro desses participantes. Os polimorfismos foram genotipados através de um painel comercial da Illumina. As frequências de ILC2s não foram significativas entre os diferentes grupos estudados. A frequência de ILC2s foi maior em asmáticos grave e atópicos do que em asmáticos grave e não atópicos, além de apresentarem frequência maior de ILC2s em indivíduos asmáticos e atópicos a B. tropicalis. As dosagens séricas de ST2 e TSLP não foram estatisticamente diferentes ente os grupos. Alguns SNPs em CD127 foram associados com asma, gravidade de asma, atopia, obstrução, marcadores de atopia e aumento de neutrófilos no esputo.  SNPs em IL17RB foram associados com asma, gravidade de asma, obstrução e marcadores de atopia, além da diminuição significativa de ILC2s em células do sangue periférico. CRTH2 SNPs foram associados com atopia e marcadores de atopia. Como conclusão, nenhuma associação foi encontrada entre frequências de ILC2 e endofenótipos de asma, sugerindo que o uso de corticóide pode influenciar na ativação de ILC2, assim como na produção de TSLP. Houve um aumento do número de ILC2 em indivíduos atópicos a B. tropicalis. Os SNPs em genes dos receptores de ILC2s demonstraram ser um fator de proteção ou um fator de risco para a susceptibilidade à asma e atopia o que sugere que SNPs em CD127, IL17RB e CRTH2 são importantes determinantes para o desenvolvimento destas condições ou não. Nesta condição, novos estudos são requeridos para um maior entendimento sobre a participação de ILC2s nos mecanismos imunológicos envolvidos em atopia e asma.

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  • Pedro Augusto Silva dos Santos Rodrigues
  • VARIANTES DO GENE ADRB2 ESTÃO ASSOCIADAS COM GRAVIDADE DA ASMA E RESPOSTA BRONCODILATADORA.

  • Orientador : RYAN DOS SANTOS COSTA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • RYAN DOS SANTOS COSTA
  • SORAYA CASTRO TRINDADE
  • DOMINGOS LÁZARO SOUZA RIOS
  • Data: 19/06/2019

  • Mostrar Resumo
  • A asma é uma doença caracterizada pela inflamação das vias aéreas inferioresmediantehiper-reatividade, produção de muco e obstrução das vias aéreas.O gene ADRB2, que codifica os receptoresβ2 adrenérgicos, importantes alvos farmacológicos nessa patologia, apresenta polimorfismos associados a alterações na açãobroncodilatadora de agonistas endógenos e exógenos desses receptores, porémhá poucas informações do papel dessas variantessobre a asma na população brasileira. Este trabalho objetivou avaliar a associação de variantes no ADRB2com asma, gravidade da doença, resposta aguda a broncodilatadores (reversibilidade), controle da asma e status da atopia em 1177 indivíduos recrutados pelo Programa para o Controle de Asma na Bahia (PRoAR). Os polimorfismos no ADRB2 foram genotipados usando o kit IlluminaInfiniumMulti-Ethnic AMR / AFR-8 cujos dados passaram por uma análise de associação mediante uso do software Plink 1.9.  Como resultados identificou-se que a variante rs1042713 (Gly16Arg) foi associada à gravidade da asma, marcadores de atopia, à falta de reversibilidade nos pacientes asmáticos, especialmente aqueles comasmaleve ou moderada, mas não em pacientes com asma grave. A presença da combinação (haplótipo) Arg16Gly16-Gln27Glu27 foi associada à gravidade da asma. Em análise incluindo todos os pacientes asmáticos ou apenas aqueles com asma leve/moderada, os que apresentaram a combinação Arg16Arg16–Glu27Glu27 tiveram menor resposta aguda ao broncodilatador. Por outro lado, o haplótipoGly16Gly16-Gln27Glu27 foi associado à falta de reversibilidade na análise considerando apenaspacientes com asma grave em dois modelos de comparação. Em conclusão, evidencia-se que variantes no ADRB2 podem influenciar a gravidade da asma, o desenvolvimento de atopia e comprometer a resposta ao broncodilatador agonista adrenérgico, representando uma vertente potencialmente importante para a medicina personalizada e paramelhor compreensão da asma e atopia


  • Mostrar Abstract
  • Asthma is a disease characterized by inflammation of the lower airways through hyperreactivity, mucus production and airway obstruction. The ADRB2 gene encoding β2 adrenergic receptors, important pharmacological targets in this pathology, presents polymorphisms associated with changes in the bronchodilator action of endogenous and exogenous agonists of these receptors, but there is little information on the role of these variants on asthma in the Brazilian population. This study aimed to evaluate the association of ADRB2 variants with asthma, disease severity, acute response to bronchodilators (reversibility), asthma control and atopy status in 1177 individuals recruited by the Program for the Control of Asthma in Bahia (PRoAR). The polymorphisms in ADRB2 were genotyped using the Illumina Infinium Multi-Ethnic AMR / AFR-8 kit whose data underwent an association analysis using Plink 1.9 software. As a result, the variant rs1042713 (Gly16Arg) was associated with asthma severity, markers of atopy, lack of reversibility in asthmatic patients, especially those with mild or moderate asthma, but not in patients with severe asthma. The presence of the combination (haplotype) Arg16Gly16-Gln27Glu27 was associated with the severity of asthma. In the analysis including all asthmatic patients or only those with mild / moderate asthma, those who presented the Arg16Arg16-Glu27Glu27 combination had a lower acute bronchodilator response. On the other hand, the haplotype Gly16Gly16-Gln27Glu27 was associated with a lack of reversibility in the analysis considering only patients with severe asthma in two comparison models. In conclusion, it is evident that variants in ADRB2 can influence the severity of asthma, the development of atopy and compromise the response to the bronchodilator adrenergic agonist, representing a potentially important aspect for personalized medicine and for a better understanding of asthma and atopy.

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  • ICANAÃ SOLON LIMA FREITAS BRANDÃO
  • O papel de variantes no gene ADAM33 com asma e função pulmonar: interação gene x ambiente com a exposição ao tabaco.

  • Orientador : CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • MEMBROS DA BANCA :
  • CAMILA ALEXANDRINA VIANA DE FIGUEIREDO FONTANA
  • PABLO RAFAEL SILVEIRA OLIVEIRA
  • RAFAEL VALENTE VEIGA
  • Data: 24/07/2019

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  • O gene ADAM33 está localizado no cromossomo 20p13 e codifica uma proteína membro da família Disintegrina e Metalloprotease (ADAM). Está proteína transmembrana é expressa principalmente em células mesenquimais, em células de músculo liso e em fibroblastos. Este gene está envolvido no derramamento do domínio extracelular, na adesão de células, e na sinalização, bem como na neurogênese, desenvolvimento do músculo, entre outros processos biológicos. Estudos em diversas populações mostraram que o ADAM33 está ligado à suscetibilidade à asma por hiperresponsividade brônquica e remodelamento das vias aéreas. Além disso, variantes em ADAM33 podem afetar o nível de expressão da proteína, aumentando assim o risco para asma grave. Este estudo analisou a associação entre variantes de um único nucleotídeo (SNVs) no gene ADAM33 com fenótipos de asma, atopia, bem como, investigou a interação gene-ambiente (cotinina) em uma população brasileira. A enotipagem foi realizada em amostras de DNA de 1.308 participantes por meio de um painel comercial 2.0 Illumina’s Multi-Ethnic Global Array (MEGA) (www.illumina.com) nos indivíduos do ProAr e 1.246 participantes do SCAALA usando Human Omni 2.5-8v1 Kit Bead Chip (Illumina, San Diego, CA).Como estratégia estatística, foram realizadas análises de regressão logística, realizada utilizando os três modelos genéticos (aditivo, dominante e recessivo) ajustados por sexo, idade e marcadores de ascenstralidade. Análises de funções regulatórias e expressão gênica foram realizadas através de plataformas in silico. As análises demonstram que o alelo G do SNVs rs573416 esta associado com uma maior susceptibilidade para o desenvolvimento de asma e que o alelo G do rs183430480 esta associado com proteção pra gravidade de asma no gene ADAM33. A exposição ao tabaco modificou a associação entre o rs573416 com asma, sendo esta associação mantida apenas nos indivíduos não expostos. Nos indivíduos do SCAALA, as variantes no gene ADAM33 foram associadas tanto com proteção quanto susceptibilidade para o desenvolvimento de asma e atopia. Dessa forma, as variantes no gene ADAM33 desempenham um papel importante na asma e na atopia na população brasileira. Novos estudos são necessários para descobrir potenciais SNVs funcionais, bem como o papel de fatores genéticos/epigenéticos e ambientais que podem levar a sintomas de asma e atopia.


  • Mostrar Abstract
  •  

    The ADAM33 gene is located on chromosome 20p13 and encodes a family member protein A Disintegrin and Metalloprotease (ADAM). This transmembrane protein is mainly expressed in mesenchyma cells, smooth muscle cells and fibroblasts. This gene is involved in extracellular domain shedding, cell adhesion and signaling, as well as in neurogenesis, muscular development, among other biological processes. Studies in several populations have shown that ADAM33 is associated with asthma susceptibility due to bronchial hyperresponsiveness and airway remodeling. In addition, variants in ADAM33 may affect the level of protein expression, thus increasing the risk of severe asthma.This study analyzed the association between single nucleotide variants (SNVs) in the ADAM33 gene with asthma phenotypes, atopy, and investigated the gene-environment interaction (cotinine) in a Brazilian population.Genotyping was performed in DNA samples from 1,308 participants by means of a commercial panel ethnic global Array (MEGA) of 2.0 illuminates (www.illumina.com) in the individuals of ProAr and 1,246 participants of SCAALA using the human Omni bead Chip Kit 2.5-8V1 (Illumina, San Diego, CA).As a statistical strategy, logistic regression analyses were performed using the three genetic models (additive, dominant and recessive) adjusted by gender, age and markers of ascenstrality. The analysis of the regulatory functions and gene expression was performed on in silico platforms. The analyses show that the G allele of the rs573416 SNVs is associated with greater susceptibility to the development of asthma and that the rs183430480 G allele is associated with the protection of asthma severity in the ADAM33 gene in the ProAR case-control study. Tobacco exposure changed the association between rs573416 and asthma, and this association was maintained only in individuals who were not exposed. In SCAALA individuals, variations in the ADAM33 gene have been associated with protection and susceptibility to the development of asthma and atopy. In this way, the variants of the ADAM33 gene play an important role in asthma and atopy in the Brazilian population. New studies are needed to uncover potential functional SNVs, as well as the role of genetic/epigenetic and environmental factors that can lead to symptoms of asthma and atopy.

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  • SAMANTA QUEIROZ DOS SANTOS
  • EFEITO DA SUPLEMENTAÇÃO ORAL COM GLUTAMINA SOBRE A IMUNIDADE CELULAR DE INDIVÍDUOS SAUDÁVEIS

  • Orientador : SONGELI MENEZES FREIRE
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JORGE CLARENCIO SOUZA ANDRADE
  • MARIA HELENA LIMA GUSMAO
  • SONGELI MENEZES FREIRE
  • Data: 09/08/2019

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  • A imunonutrição baseia-se em modelos para modular/melhorar as funções biológico-fisiológicas de pacientes.  O uso de nutrientes específicos é cada vez mais freqüente e a glutamina por desempenhar diferentes papéis no metabolismo e função celular tem tido grande uso. Não esta disponível o mecanismo dos efeitos desta sobre os componentes de processos imunoinflamatorios. O objetivo do trabalho foi avaliar aspectos/parâmetros bioquímicos e imunológicos na suplementação oral com glutamina de indivíduos saudáveis.  Aprovado pelo CEP Prof. Dr. Celso Fiqueirôa, Hospital Santa Izabel - Salvador, CAAE: 93716618.0.0000.5520. Métodos: Indivíduos voluntários (n=27), sem queixas clínicas, de ambos os sexos, com idade entre 19 e 57 anos, não obeso, utilizaram 20g/dia de glutamina por via oral durante 10 dias. Amostras de sangue foram coletadas em cinco momentos (T0, T24h, T72h, T7d e T10d) para leucometria, imunofenotipagem, dosagem de citocinas (Perfil TH1, TH2 e TH17) e marcadores bioquímicos (ALT, AST, GGT, FA, PCR, Globulina e Albumina). A antropometria foi realizada em T0 e T10d. Resultados: Pela leucometria a celularidade não foi alterada. Foi observado aumento de Média de Intesindade de Fluorencencia de Linfócitos T helper e Linfócitos T citotoxico (CD3,CD4/CD8) em 24  horas (p<0,05) e uma tendência de aumento de citocinas perfil Th1 (IFN-γ) ao longo do tempo. Não houve alteração ALT, AST, GGT, FA e PCR (p>0,05). Observou-se maior produção de globulina ao longo do uso da gln (p<0,05). Conclusão: Não se observa danos hepáticos quando utilizada em período curto em dosagens de 20g/dia por 10 dias. Parece regular positivamente a produção de IFN-γ e a expressão de moléculas funcionais (CD3/CD4/CD8) de LTh e LTc nas 24hs, com  retorno da manutenção/adaptação após esse tempo.


  • Mostrar Abstract
  • With immunonutrition, it is sought to modulate / improve the biological-physiological functions of patients. The use of specific nutrients is increasingly frequent and glutamine by playing different roles in cellular metabolism and function has been widely used. The effects on the components of immunoinflammatory processes are not known. The objective of this study was to evaluate biochemical and immunological aspects / parameters in oral supplementation with glutamine from healthy subjects. Approved by CEP Prof. Dr. Celso Fiqueirôa, Santa Izabel Hospital - Salvador, CAAE: 93716618.0.0000.5520. Methods: Voluntary subjects (27), without clinical complaints, of both sexes, aged between 19 and 57 years, used 20g / day of glutamine orally for 10 days. Blood samples were collected at five times (T0, T24h, T72h, T7d and T10d) for leukometry, immunophenotyping, cytokine dosing (TH1 profile, TH2 and TH17) and biochemical markers (ALT, AST, GGT, Globulin and Albumin). It was performed in T0 and T4 anthropometry. Results: The cellularity was not altered by leucometry. Increased MIF of LTh and LTc (CD3, CD4 / CD8) within 24 hours (p <0.05) and a tendency to increase Th1 profile cytokines (TNF, IFN-γ) over time. There was no change in ALT, AST, GGT, FA and PCR (p> 0.05). Greater globulin production was observed throughout the use of gln (p <0.05). Conclusion: No hepatic impairment is observed when used in a short period at dosages of 20g / day. It seems to positively regulate the production of IFN-γand TNF and the expression of lymphocyte markers LTh and LTc in 24hs, with maintenance / adaptation after that time.

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  • EVELIN KEILA DOS SANTOS BOMFIM
  • Caracterização epidemiológica e imunofenotípica da leucemia/linfoma de células T do adulto em um centro de referência de Salvador, Bahia

     

  • Orientador : ALEX JOSE LEITE TORRES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • ALEX JOSE LEITE TORRES
  • ANDRE MAURICIO COSTA RAMOS
  • MARINHO MARQUES DA SILVA NETO
  • Data: 09/08/2019

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  • A Bahia é o segundo estado brasileiro que apresenta maior prevalência de infecção pelo Vírus Linfotrópico Humano Tipo 1 e Salvador possui cerca de 1,8% da população soropositiva ao vírus. Este vírus está associado a diversas patologias, dentre elas a leucemia/linfoma de células T do adulto (ATLL), de característica agressiva com alta incidência de óbito e sem tratamento efetivo, na qual é responsável por 30% dos casos de neoplasias de células T no país. Assim, o objetivo deste trabalho é caracterizar o perfil epidemiológico e imunofenotípico de pacientes diagnosticados com ATLL, atendidos em um centro de referência oncohematológico em Salvador-BA, no período entre 2010-2018. A metodologia foi constituída por estudo de série temporal retrospectivo descritivo, na qual os casos de ATLL foram coletados de laudos pertencentes ao centro de referência e de protuários médicos disponíveis pelo Com-HUPES. Estes dados foram tratados e analisados estatisticamente, sendo observado que a maioria dos casos era do sexo feminino e que grande parte destas, possuía a forma clínica mais agressiva. Embora a literatura relate que os quadros de ATLL sejam sempre considerados como graves, neste estudo pôde-se observar que pacientes podem atingir longa sobrevida em boas condições clínicas, conforme tratamento administrado. Diante dos resultados disponíveis é possível concluir ampla distinção das formas clínicas e molecular, podendo ser um importante indicador de evolução da ATLL.


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  • Bahia is the second Brazilian state with the highest prevalence of human lymphotropic virus type 1 infection and Salvador has about 1.8% of the population seropositive to the virus. This virus is associated with several pathologies, among them adult T-cell leukemia / lymphoma (ATLL), which is aggressive with a high incidence of death and without effective treatment, in which it accounts for 30% of cases of T-cell neoplasms in the country. Thus, the objective of this study is to characterize the epidemiological and immunophenotypic profile of patients diagnosed with ATLL, attended at an oncohematological reference center in Salvador, Bahia, in the period between 2010-2018. The methodology consisted of a descriptive, retrospective of time series study, which cases of ATLL were collected from reports belonging a reference center and of medical reports available from Com-HUPES. These data were treated and analyzed statistically, being observed that the majority of cases were female and that a large part have the most aggressive clinical condition Although the literature reports that ATLL clinical condition are always considered as severe, in this study it was observed that patients can achieve long survival in good clinical conditions, according to the treatment administered. In view of the available results, it is possible to conclude that exist a broad distinction between  the clinical and molecular forms, being may be an important indicator of the evolution of ATLL.

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  • SÉRGIO RICARDO TEIXEIRA DALTRO
  • AVALIAÇÃO DO POTENCIAL IMUNOMODULADOR DO EXTRATO ETANÓLICO DE Physalis angulata

  • Orientador : MILENA BOTELHO PEREIRA SOARES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • LUCAS PEDREIRA DE CARVALHO
  • LUCIANA SANTOS CARDOSO
  • MILENA BOTELHO PEREIRA SOARES
  • Data: 15/08/2019

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  • Produtos naturais representam uma fonte promissora para a descoberta de medicamentos. Um grande número de produtos naturais é reconhecido por modular a resposta imune e contribuir para o tratamento de várias doenças. O uso prolongado de uma variedade de drogas imunomoduladoras está associado a efeitos colaterais e há certas condições inflamatórias ainda sem opções terapêuticas de eficácia. Sendo assim, a descoberta de novos agentes torna-se necessário. O presente trabalho tem por objetivo investigar o efeito imunomodulador de um extrato etanólico concentrado de Physalis angulata (EEPA) em modelos experimentais in vitro e in vivo. Inicialmente foi determinada a citotoxicidade do EEPA em macrófagos peritoneais através do método do Alamarblue®. Em seguida, em concentrações não tóxicas, foi avaliado o efeito do extrato sobre a produção de citocinas e óxido nítrico (NO) em cultura de macrófagos estimulados com LPS + IFN-γ. As citocinas forammensuradas pelo método de ELISA e o NO foi quantificado pela reação de Griess. O efeito do EEPA sobre a proliferação de linfócitos também foi avaliado utilizando cultura de esplenócitos estimuladas com concanavalina A, pelo método de incorporação de 3H-timidina. Através do método de ELISA, também foi avaliado o efeito do EEPA sobre a produção de citocinas. O efeito do EEPA sobre o ciclo celular e na morte celular delinfócitos foi avaliado através da marcação com iodeto de propídio e anexina Veanálise por citometria de fluxo. In vivo, realizamos testes toxicológicos e examinamos o efeito do EEPA em modelo experimental de peritonite e em modelo de hipersensibilidade do tipo tardia. Foi observada uma potente atividade imunomoduladora do EEPA sobre macrófagos e linfócitos. O tratamento de macrófagos com o EPPA diminuiu significativamente (P < 0.05) a produção de TNF-α, IL-6, IL-12 e NO, quando comparado com células apenas estimuladas com LPS+ IFN-γ. Em adição, o EEPA inibiu a linfoproliferação e a secreção de IL-2, IL-6 e IFN-γ, enquanto aumentou a secreção de IL-4 por esplenócitos ativados. A análise de citometria de fluxo em culturas de linfócitos mostrou que o tratamento com EEPA induz a parada do ciclo celular nas fases S e G2/M, seguido de morte celular por apoptose. Além disso, o EEPA a 100 ou 200 mg/Kg não mostrou sinais de toxicidade e alterações nos componentes séricos. Por último, observamos que o EEPA a 50 ou 100 mg/Kg reduziu a migração de neutrófilos (88,5% e 72,3%, respectivamente) e reduziu significativamente o edema da pata no modelo de DTH induzido por BSA na dose de 100 mg/Kg. Nossos resultados demonstram um forte potencial do extrato etanólico de Physalis angulata como alternativa para o tratamento de doenças imunoinflamatórias.


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  • Natural products represent a promising source for drug discovery. A large number of natural products are recognized for modulating the immune response and contributing to the treatment of various diseases. Prolonged use of a variety of immunomodulatory drugs is associated with side effects and certain inflammatory conditions without therapeutic efficacy options. Thus, the discovery of new agents becomes necessary. The present work aimed to investigate the immunomodulatory effect of a concentrated ethanolic extract of Physalis angulata (EEPA) in in vitro and in vivo experimental models. Initially, the cytotoxicity of EEPA was evaluatedin peritoneal macrophages by the Alamarblue® method. Then, we evaluated in non-toxic concentrations, the effect of the extract on the production of cytokines and nitric oxide (NO) in culture of macrophages stimulated with LPS + IFN-γ. Cytokine production was measured by the ELISA method and NO was quantified by the Griess reaction. The effect of EEPA on lymphocyte proliferation was also evaluated using culture of splenocytes stimulated with concanavalin A by the 3H-thymidine incorporation method. Through the ELISA method, we also evaluated the effect of EEPA on cytokine production. Subsequently, the effect of EEPA on the cell cycle and on lymphocyte cell death was observed through propidium iodide and Annexin V and flow cytometric analysis. Finally, we performed toxicological tests and examined the effect of the EEPA on an experimental model of peritonitis and a model of delayed type hypersensitivity. A potent immunomodulatory activity of the EEPA on macrophages and lymphocytes was observed. Treatment of macrophages with EPPA significantly (P <0.05) decreased the production of TNF-α, IL-6, IL-12 and NO when compared to cells only stimulated with LPS + IFN-γ. In addition, the EEPA inhibited lymphoproliferation and secretion of IL-2, IL-6 and IFN-γ, while increasing IL-4 secretion by activated splenocytes. Flow cytometry analysis in lymphocyte cultures showed cell cycle arrest in the S and G2/M phases, followed by cell death by apoptosis, in EEPA-treated cells. In addition, EEPA-treated mice at 100 or 200 mg/kg did not show signs of toxicity and changes in serum components. Finally, EEPA at 50 or 100 mg/kg reduced neutrophil migration (88.5% and 72.3% respectively) and significantly reduced paw edema in the BSA-induced DTH model at the dose of 100 mg/Kg. Our results demonstrate a strong potential of the ethanolic extract of Physalis angulata as an alternative for the treatment of immunoinflammatory diseases.

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  • MARIANA COSTA CALHEIRA
  • DETECÇÃO DE IMUNOGLOBULINA A ESPECÍFICA PARA ANTÍGENOS DE Porphyromonasgingivalis NA SALIVA DE INDIVÍDUOS COM E SEM REAÇÃO HANSÊNICA

  • Orientador : JOHELLE DE SANTANA PASSOS SOARES
  • MEMBROS DA BANCA :
  • JOHELLE DE SANTANA PASSOS SOARES
  • PAULO CIRINO DE CARVALHO FILHO
  • PAULO ROBERTO LIMA MACHADO
  • Data: 11/10/2019

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  • A reação hansênica é uma manifestação inflamatória cuja etiologia está associada a alterações do sistema imunológico podendo ser desencadeada por quadros infecciosos concomitantes à hanseníase, a exemplo da periodontite. A periodontite é uma doença inflamatória multifatorial que promove destruição dos tecidos de suporte do dente e tem Porphyromonasgingivalis (Pg) como patógeno chave para o seu estabelecimento. O estudo de moléculas do sistema imunitário, como as imunoglobulinas (IgA), pode auxiliar na compreensão da plausibilidade biológica entre a periodontite e as reações hansênicas. Objetivo: Esta pesquisa teve como objetivo padronizar e avaliar o papel da resposta imune humoral específica para IgA  frente aos antígenos de Pg(extrato, proteína recombinante HmuY e peptídeo Kgp12)na saliva de indíviduos com e sem reação hansênica. Método:Foram realizados dois estudos relacionados à temática. No primeiro, foi feita uma padronização através do método ELISA Indireto (checkerboard) para determinar a concentração ideal de IgA salivar. O segundo foi um estudo do tipo estudo caso-controle realizado com 150 indivíduos. O grupo caso foi composto por indivíduos diagnosticados com reação hansênica, o grupo controle por indivíduos sem reação hansênica. Os níveis de anticorpos IgA específicos para antígenos de Pgforam mensurados na saliva dos participantes por meio de ensaio imunoenzimátitco pelo método indireto. Resultados:Os coeficientes obtidos pela padronização através do ELISA indireto (checkerboard)sinalizaram uma diferenciação entre os indivíduos com periodontite baseada na resposta mediada por IgA salivar. Com relação a produção de IgA frente aos antígenos de Pg, foram observadas diferenças estatisticamente significantes nos níveis salivares de IgA entre os grupos com reação hansênica e sem reação, com a utilização do extrato da bactéria como antígeno (p=0,04). Entretanto, não houve significância estatística com a utilização da proteína recombinante HmuY e o peptídeo Kgp12. Quando os grupos foram divididos quanto à presença de periodontite e reação hansênica não houve diferença estatisticamente significante nos nívei