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Dissertações |
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WÉSLEI ALMEIDA COSTA ARAÚJO
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Avaliação diagnóstica da infecção por Strongyloides stercoralis em indivíduos asmáticos utilizando antígenos recombinantes
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Orientador : NECI MATOS SOARES
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MEMBROS DA BANCA :
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ALVARO AUGUSTO SOUZA DA CRUZ FILHO
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CARINA CARVALHO DOS SANTOS
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NECI MATOS SOARES
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Data: 20/02/2024
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Strongyloides stercoralis é o principal agente etiológico da estrongiloidíase humana, doença negligenciada e de ampla distribuição mundial. A infecção, geralmente, é crônica e assintomática. No entanto, em indivíduos imunocomprometidos, em uso de glicocorticoides sistêmicos como indivíduos com asma grave a infecção pelo S. stercoralis pode evoluir para as formas graves, hiperinfecção e/ou disseminação, com baixa resposta terapêutica e um elevado índice de letalidade. Atualmente, o diagnóstico definitivo da infecção por S. stercoralis é feito através da pesquisa das larvas nas fezes. Contudo, este parasito libera poucas larvas e de forma intermitente, o que torna necessário o exame de várias amostras fecais em dias alternados. O objetivo deste estudo é analisar a frequência da infecção por S. stercoralis em indivíduos asmáticos atendidos no Programa de Controle da Asma e da Rinite Alérgica (ProAR) na Bahia/Brasil, através do diagnóstico parasitológico e imunológico, utilizando antígenos bruto e recombinantes. Foram incluídos no estudo 500 asmáticos atendidos no ProAR. O diagnóstico da estrongiloidíase foi feito através de três métodos parasitológicos: sedimentação espontânea (SE), Baermann-Moraes (BM) e Cultura em Placa de Ágar (CPA), e o diagnóstico sorológico, através da determinação dos níveis de IgG4 e IgE anti-S. stercoralis através do ELISA(s), utilizando antígeno bruto de membrana. As amostras dos indivíduos com diagnóstico positivo pelos métodos parasitológicos e imunológicos (n=66) foram reavaliadas através dos ELISA(s) utilizando antígenos recombinantes (NIE e SsIR). Dos indivíduos estudados 21,2 (106/500) e 78,8% (394/500) são do sexo masculino e feminino, respectivamente. Cerca de 42 (210/500) e 58% (290/500) dos indivíduos apresentavam asma leve/moderada ou grave, respectivamente, sendo que 43,6% (218/500) foram diagnosticados na infância. Foi encontrada uma frequência de enteroparasitos igual a 8,6% (43/500). O parasito patogênico mais prevalente foi o S. stercoralis, 2,2% (11/500). As sensibilidades dos ELISA(s) para detecção de anticorpos IgG4 e IgE anti-S. stercoralis, utilizando antígeno membrana foram de 91,7% e 91,2%, respectivamente, e as especificidades de 95,7% 95,4%, respectivamente. A detecção de anticorpos IgG4 anti-S. stercoralis nos indivíduos asmáticos foi de 8,2% (41/500) e para anticorpos IgE anti-S. stercoralis de 9,8% (49/500). Os soros dos indivíduos positivos para S. stercoralis, diagnosticados neste estudo, pelo encontro de larvas nas fezes e/ou detecção de anticorpos IgG e IgE anti-S. stercoralis (n=66) foram reavaliados através do IgG-ELISA, utilizando os antígenos recombinantes, NIE e SsIR, demonstrando sensibilidades e especificidades de 91,2, 85,3% e 95,4 e 90,9%, respectivamente. O imunobloting confirmou uma positividade de 39,4 % (26/66) das amostras positivas com revelação de bandas imunorreativas de 30 a 90 KDa. Quanto ao uso de corticoides, 36,2% (181/500) referiram ter feito um ou mais ciclos de corticoides oral por 3 ou mais dias em 1 ano e 8,4% (42/500) um ou mais ciclos de corticoides injetável em 6 meses. Dentre os 66 indivíduos que foram positivos (detecção de larvas nas fezes de anticorpos anti-S. stercoralis) 63,6% (42/66) fizeram uso de corticoides, sendo 60,6% (40/66) por via inalatória, 30,3% (20/66) por via oral e 9,1% (6/66) por via injetável, não sendo observadas associação estatisticamente significativas entre a corticoterapia e a estrongiloidíase (p = 0,768, 0,798, 0,351 e 1,0, respectivamente). O presente estudo demonstra que a concordância entre os métodos utilizados foi fraca, portando a necessidade de estudos para desenvolvimento de um teste eficaz e reprodutível, para o diagnóstico da estrongiloidíase. Além do mais, o estudo não demonstrou correlação entre a infecção por S. stercoralis e o uso de glicocorticoides.
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Strongyloides stercoralis is the main etiological agent of human strongyloidiasis, a neglected disease with wide worldwide distribution. The infection is generally chronic and asymptomatic. However, in immunocompromised individuals using systemic glucocorticoids, such as individuals with severe asthma, S. stercoralis infection can progress to severe forms, hyperinfection and/or dissemination, with a low therapeutic response and a high lethality rate. Currently, the definitive diagnosis of S. stercoralis infection is made by searching for larvae in feces. However, this parasite releases few larvae and intermittently, which makes it necessary to examine several fecal samples. The objective of this study is to analyze the frequency of S. stercoralis infection in asthmatic individuals treated in the Asthma and Allergic Rhinitis Control Program (ProAR) in Bahia/Brazil, through parasitological and immunological diagnosis, using crude and recombinant antigens. A total of 500 asthmatics treated at ProAR were included in the study. The diagnosis of strongyloidiasis was made using three parasitological methods: spontaneous sedimentation (SE), Baermann-Moraes (BM) and, Agar Plate Culture (CPA). Serological diagnosis was preformed by IgG4 and IgE –ELISA using crude membrane antigen. Samples from individuals diagnosed positively by parasitological and /or immunological methods (n=66) were reevaluated through ELISA(s) using recombinant antigens (NIE and SsIR). Of the individuals studied, 21.2 (106/500) and 78.8% (394/500) were male and female, respectively. Around 42 (210/500) and 58% (290/500) of the individuals had mild/moderate or severe asthma, respectively, with 43.6% (218/500) being diagnosed in childhood. A frequency of enteroparasites was 8.6% (43/500) The most prevalent pathogenic parasite was S. stercoralis, 2.2% (11/500). The sensitivities of ELISA(s) for detection of IgG4 and IgE anti-S. stercoralis, using membrane antigen were 91.7% and 91.2%, respectively, and the specificities were 95.7% and 95.4%, respectively. Sera from individuals positive for S. stercoralis, diagnosed in this study, by finding larvae in feces and/or detection of IgG and IgE anti-S. stercoralis (n=66) were reevaluated through IgG-ELISA, using the recombinant antigens, NIE and SsIR, demonstrating sensitivities and specificities of 91.2, 85.3% and 95.4 and 90.9%, respectively. Immunoblotting confirmed the positivity of 39.4% (26/66) of reevaluated samples, revealing immunoreactivity bands of 30 to 90 KDa. Regarding the use of corticosteroids, 36.2% (181/500) reported having taken one or more cycles of oral corticosteroids for 3 or more days in 1 year and 8.4% (42/500) one or more cycles of injectable corticosteroids in 6 months. Among the 66 individuals who were positive (detection of larvae in feces for anti-S. stercoralis antibodies), 63.6% (42/66) used corticosteroids. The most, 60.6% (40/66) via inhalation, 30 .3% (20/66) via orally and 9.1% (6/66) via injection. The association observed between corticosteroid therapy and strongyloidiasis was not statistically significant (p = 0.768, 0.798, 0.351 and 1.0, respectively). The present study demonstrates that the agreement between the methods used was poor, encouraging new studies to develop an effective and reproducible test for the diagnosis of S. stercoralis infection. Furthermore, the study did not demonstrate a correlation between S. stercoralis infection and the use of glucocorticoids.
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Ariane Ferreira de Melo
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EFEITO SINÉRGICO DE DERIVADOS DE ÁCIDO FENAZINA-1-CARBOXÍLICO COM AgNO3 SOBRE A PRODUÇÃO DE PIOCIANINA OU COMO LIGANTES DE PhzS FRENTE PSEUDOMONAS AERUGINOSA
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Orientador : MARCELO SANTOS CASTILHO
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCELO SANTOS CASTILHO
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TANIA FRAGA BARROS
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REGINA LUCIA BALDINI
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Data: 04/07/2024
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A resistência bacteriana aos antibióticos é uma ameaça grave à saúde pública global. Com a redução dos investimentos no desenvolvimento de novos antibacterianos clássicos, estratégias focadas na criação de compostos anti-virulência surgem como alternativas promissoras. Nesse contexto, enzimas responsáveis pela biossíntese de piocianina (PYO) — um pigmento fenazínico produzido por 90-95% dos isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa — são alvos potenciais para o desenvolvimento de novos fármacos. Este trabalho visa avaliar se derivados de ácido fenazínico (PCA) se ligam à enzima PhzS e/ou inibem a produção de PYO. Nos ensaios fenotípicos, foi identificado um derivado de PCA (HD09) contendo indol em sua estrutura química, que reduz a produção de piocianina em cerca de 30%, sem afetar o crescimento celular. No entanto, este composto demonstrou estimular a produção de biofilme em P. aeruginosa. Apesar de não afetarem a produção fenotípica de PYO, derivados de PCA da classe SQXA foram identificados como ligantes de PhzS pelo ensaio de termoestabilidade (TSA), destacando-se o SQXA14, que exibiu afinidade em escala micromolar pela enzima, ligando-se a ela através de um mecanismo de competição com o PCA (substrato de PhzS). Adicionalmente, foi avaliado o efeito deste composto combinado com nitrato de prata. De acordo com o ensaio Checkerboard, existe um efeito sinérgico na inibição da produção de PYO em P. aeruginosa. Portanto, o presente trabalho sugere que derivados de PCA devem ser combinados com outros agentes bactericidas e/ou bacteriostáticos para reduzir significativamente a produção de PYO.
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Bacterial resistance to antibiotics is a serious threat to global public health. With the reduction in investments aimed at developing new classical antibacterials, strategies focused on creating anti-virulence compounds have emerged as promising alternatives. In this context, enzymes responsible for the biosynthesis of pyocyanin (PYO) — a phenazine pigment produced by 90-95% of clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa — are potential targets for the development of new drugs. This study aims to evaluate whether phenazine carboxylic acid (PCA) derivatives bind to the PhzS enzyme and/or inhibit PYO production. In phenotypic assays, a PCA derivative (HD09) containing indole in its chemical structure was identified, which reduces pyocyanin production by approximately 30% without affecting cell growth. However, this compound demonstrated stimulation of biofilm production in P. aeruginosa. Despite not affecting the phenotypic production of PYO, PCA derivatives of the SQXA class were identified as PhzS ligands by the thermostability assay (TSA), with SQXA14 showing micromolar affinity for the enzyme, binding through a competitive mechanism with PCA (PhzS substrate). Additionally, the effect of this compound combined with silver nitrate was evaluated. According to the Checkerboard assay, there is a synergistic effect on the inhibition of PYO production in P. aeruginosa. Therefore, this study suggests that PCA derivatives should be combined with other bactericidal and/or bacteriostatic agents to significantly reduce PYO production.
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TAINÁ SANTOS SOUZA
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NANOTECNOLOGIA APLICADA AO DECOQUINATO PARA OBTENÇÃO DE NOVAS TERAPIAS ANTIMALÁRICAS
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Orientador : HENRIQUE RODRIGUES MARCELINO
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MEMBROS DA BANCA :
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HENRIQUE RODRIGUES MARCELINO
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ARNOBIO ANTONIO DA SILVA JUNIOR
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SILVIA STANISCUASKI GUTERRES
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Data: 11/07/2024
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O Decoquinato (DQ) é um fármaco que tem sido estudado pela sua promissora ação antiplasmodial, contra as fases eritrocitária e hepática do parasita, na busca de um tratamento eficaz para a malaria, nas diferentes etapas de desenvolvimento do Plasmodium. No entanto, o DQ possui alta lipofilicidade, o que impede a sua utilização por humanos. O objetivo deste trabalho foi realizar um apanhado sobre a literatura a cerca do DQ, a validação de uma metodologia analítica para sua quantificação e ensaio de solubilidade em lipídeos, bem como desenvolver sistemas do tipo microemulsão (ME) e/ou nanoemulsão (NE) para a viabilização do seu uso por humanos. Os experimentos de validação foram realizados em HPLC/DAD, usando fase movél em gradiente e uma coluna de fase reversa (C18) como fase estacionária. As soluções-mãe de DQ foram preparadas em metanol. A metodologia desenvolvida foi utilizada para o ensaio de solubilidade em lipídeos, onde quantididades conhecidas de DQ foram adicionadas a diferentes fases oleosas e agitadas através da sonicação, mesmo método, posteriormente, utilizado para desenvolvimento do diagrama pseudoternário e sistemas emulsionados. A partir deste diagrama, baseado nos resultados de ensaio de solubilidade, uma formulação foi reproduzida, denominada ME-BCO, sendo a FO adicionada de fosfatidilcolina para ser caracterizada por microscopia eletrônica de transmissão, espalhamento dinâmico da luz (DLS), índice de polidispersão (PdI) e potencial zeta (PZ). ME-BCO foi observada durante um período de 90 dias, avaliando-se parâmetros macroscópicos e físico-químicos. Como resultados, ficou evidenciada a melhora da solubilidade com a adição do fosfolipídio nas fases oleosas testadas. Em seguida, Observa-se que DQ é quantificável por um método seletivo e preciso, além de que a metodologia analítica desenvolvida apresentou linearidade (r2 = 0,9989), e limites de detecção e de quantificação de 3,33 e 11,09 μg/mL, respectivamente. A repetibilidade obtida indica baixa variabilidade. ME- BCO se manteve estável. Logo, espera-se que um sistema emulsionado obtido pelo diagrama possa solubilizar e contornar a ineficiência terapêutica do DQ como uma nova alternativa terapêutica para a malária.
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Decoquinate (DQ) is a drug that has been investigated for its promising antiplasmodial activity against the erythrocytic and hepatic phases of the parasite in the search for an effective treatment for malaria in the various developmental stages of Plasmodium. However, DQ has a high lipophilicity that prevents its use in humans. The aim of this work was to review the literature on DQ, validate an analytical method for its quantification and solubility testing in the lipids and develop microemulsion (ME) and nanoemulsion systems (NE) to enable its use in humans. Validation experiments were performed by HPLC/DAD using a gradient mobile phase and a reversed phase column (C18) as stationary phase. The DQ stock solutions were prepared in methanol. The developed methodology was used for the solubility test in FO, where known amounts of DQ were added to different oil phases and stirred by sonication, the same method that was later used to develop the pseudoternary diagram and emulsified systems. From this diagram, based on the results of the solubility test, a formulation was reproduced, called ME-BCO, with the FO added with phosphatidylcholine to be described by transmission electron microscopy, dynamic light scattering (DLS), polydispersity index ( PdI) and zeta potential (PZ). ME-BCO was observed over a period of 90 days, evaluating macroscopic and physicochemical parameters. As a result, the improvement in solubility with the addition of the phospholipid in the tested oil phases was evident. Next, it is observed that DQ is quantifiable by a selective and precise method, in addition to the fact that the analytical methodology developed showed linearity (r2 = 0.9989), and detection and quantification limits of 3.33 and 11.09 μg /mL, respectively. The repeatability obtained indicates low variability. ME- BCO remained stable. Therefore, it is expected that an emulsified system obtained by the diagram can solubilize and overcome the therapeutic inefficiency of DQ as a new therapeutic alternative for malaria.
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Carla Gabriela Boulhossa
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Associação de diclofenaco sódico e inibidores de síntese de estafiloxantina em Staphylococcus aureus
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Orientador : MARCELO SANTOS CASTILHO
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCELO SANTOS CASTILHO
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JOICE NEVES REIS PEDREIRA
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ELIANE DE OLIVEIRA SILVA
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Data: 17/07/2024
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A pressão evolutiva causada pelo uso de antibióticos tem sido um problema quando se fala em desenvolvimento de novos fármacos, principalmente diante do cenário de resistência bacteriana. Estratégia anti-virulência, ou tratamento que visam a virulência sem toxicidade direta ao patógeno, surgem como uma alternativa promissora, já que causam menos pressão evolutiva. Dessa forma, a estafiloxantina (STX), um pigmento carotenoide produzido por Staphylococcus aureus, por ser produzido por mais de 90% dos isolados clínicos dessa bacteria se tornou um alvo promissor no desenvolvimento de fármacos para o tratamento de infecções por S. aureus. Este estudo tem como objetivo avaliar o sinergismo estre inibidores de estafiloxantina e diclofenaco sódico. Para isso, foram realizados ensaios fenotípicos de dose única com 73 moléculas com distintos núcleos. Os resultados experimentais demonstraram 10 moléculas derivadas de furopidina, indazol, quinazolina e fenil- benzotiazol como potenciais inibidores de STX. Dentre esses, o composto mais potente foi o derivado de benzotiazol QHM 782 (IC50 11,67µM). Em avaliação da combinação com diclofenaco sódico resultou em um efeito sinérgico sobre a viabilidade celular (FICI = 5), sendo um resultado promissor para o desenvolvimento de novas terapias em combinação contra S. aureus.
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The evolutionary pressure caused by the use of antibiotics has been a significant issue in the development of new drugs, especially in the context of bacterial resistance. Anti-virulence strategies, or treatments that target virulence without directly causing toxicity to the pathogen, have emerged as a promising alternative since they exert less evolutionary pressure. Consequently, staphyloxanthin (STX), a carotenoid pigment produced by Staphylococcus aureus, has become a promising target in drug development for treating S. aureus infections, given that it is produced by over 90% of clinical isolates of this bacterium. This study aims to evaluate the synergism between staphyloxanthin inhibitors and diclofenac sodium. To this end, phenotypic single-dose assays were conducted with 73 molecules with distinct scaffolds. The experimental results demonstrated that 10 molecules derived from furocoumarin, indazole, quinazoline, and phenyl-benzothiazole are potential STX inhibitors. Among these, the most potent compound was the benzothiazole derivative QHM 782 (IC50 11.67µM). Evaluating the combination with diclofenac sodium resulted in a synergistic effect on cell viability (FICI = 5), presenting a promising result for developing new combination therapies against S. aureus.
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Nadime Barbosa Oliveira
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AVALIAÇÃO DA VARIABILIDADE QUÍMICA DOS ALCALOIDES DE Erythrina velutina Willd E OTIMIZAÇÃO DO MÉTODO EXTRATIVO POR DELINEAMENTO EXPERIMENTAL
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Orientador : RENATA BIEGELMEYER DA SILVA RAMBO
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MEMBROS DA BANCA :
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LIZ OLIVEIRA DOS SANTOS
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RENATA BIEGELMEYER DA SILVA RAMBO
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YGOR JESSE RAMOS DOS SANTOS
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Data: 29/07/2024
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O gênero Erythrina, pertencente à família Fabaceae (Leguminosae), compreende cerca de 130 espécies distribuídas em diversos países. São majoritariamente empregadas na recuperação de áreas devastadas, e de forma notável, seu uso tradicional envolve controle de infecções, tratamentos hepáticos, além da ampla utilização como agente ansiolítico/tranquilizante. Nessa conjuntura, encontra-se a espécie Erythrina velutina Willd. (mulungu), na qual possui dentre os metabólitos produzidos, os alcaloides tetracíclicos (eritrínicos) de forma abrangente, que através da estrutura policíclica, se destacam no âmbito de pesquisa por intermédio das atividades biológicas identificadas essencialmente no sistema nervoso central (SNC). É notável a ampla variabilidade química presente em todo gênero, contudo verifica-se ausência de registros oficiais, o que condiciona a comercialização de espécies diferentes com a mesma nomenclatura. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a variabilidade química de E. velutina em diferentes locais de coleta e farmacógenos, efetuando a otimização do método extrativo através do delineamento experimental. Para desenvolvimento do estudo, foram coletadas amostras em três localidades distintas da Chapada Diamantina: município de Boninal, e distritos de Mulungu e Barriguda. O material vegetal foi extraído, e o método foi desenvolvido por meio da cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de diodos (CLAE/DAD) empregando fase móvel A composta de água:trietilamina (99,9:0,1) ajustada em pH 3,0 com ácido trifluoracético, e acetonitrila:trietilamina (99,9:0,1) como fase B em modo gradiente de eluição. O perfil analítico exibiu determinada congruência nos picos identificados em amostras de flores nas árvores de estudo com intensidade elevada, exceto para a árvore de Mulungu. Contudo, as amostras de cascas de caule demonstraram resultados promissores em termos de intensidade e similaridade. Em seguida, a caracterização química por meio de GC-EM revelou dados acerca dos marcadores químicos presentes nos diferentes locais de coleta, nos quais, foram identificados erisodina, eritrinina, erisotrina/isômero dienóide, eritralina, erisotina, e especialmente erisovina que foi detectada em todos os farmacógenos analisados. Por fim, o processo extrativo foi otimizado através da estratégia Box-Behnken e o ponto ótimo gerado foi definido com 3,63 horas, 0,59mm de granulometria e 126,06 proporção planta:solvente. Em suma, as metodologias empregadas foram eficazes para identificar o perfil químico dos alcaloides de E. velutina coletada no estado da Bahia, reafirmando os dados etnobotânicos de utilização de cascas de caule na maioria dos tratamentos, como resultante do elevado quantitativo dos componentes investigados e variabilidade química.
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The genus Erythrina, belonging to the family Fabaceae (Leguminosae), comprises about 130 species distributed in several countries. In short, theyare mostly employed in the recovery of
devastated areas, and notably, their traditional use involves infection control, liver treatments, in addition to its wide use as an anxiolytic/tranquilizing agent. At this juncture, the species Erythrina velutina willd. (mulungu) is found, in which it has among the metabolites produced, the tetracyclic alkaloids (erythrin) in a comprehensive way, which through the polycyclic structure stand out in the field of research through the biological activities identified essentially in the central nervous system (CNS). The wide chemical variability present in the entire genus are remarkable, but there is a lack of official records, which conditions the commercialization of different species with the same nomenclature. In this context, the present work aimed to evaluate the chemical variability in E. velutina in different collection sites and pharmacogens, optimizing the extractive method through the experimental design. For the development of the study, samples were collected in three different localities of Chapada Diamantina: municipalities of Boninal, Mulungu and the district of Barriguda. The plant material was extracted, and the method was developed by high-performance liquid chromatography coupled with a diode detector (HPLC/DAD). The mobile phase was composed as water:triethylamine (99.9:0.1) adjusted at pH 3.0 with trifluoroacetic acid (phase A), and acetonitrile:triethylamine (99.9:0.1) as phase B in gradient elution mode. The analytical profile exhibited a certain congruence in the peaks identified in flower samples in the study trees with high intensity, except for the Mulungu tree. However, the stem bark samples showed promising results in the terms of intensity and similarity. Then, the chemical characterization by GC-MS revealed data about the chemical markers present in the different collection sites, in which erysodine, erythrinin, erysothrin/dienoid isomer, erythralin, erysotine, and especially eysovine were identified, which was detected in all the pharmacogens analyzed. Finally, the extractive process was optimized through the Box-Behnken strategy, and the optimal point generated was defined with 3.63 hours, 0,59mm of particle size and 126.06 plant:solvent ratio. In summary, the methodologies employed were effective to identify the chemical profile of the E. velutina alkaloids collected in the state of Bahia, reaffirming the ethnobotanical data of the use of stem bark in most treatments, as a result of the high quantify of the investigated components and chemical variability.
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RAÍSSA RAYANE SANTOS LAURINDO CALDAS
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ANÁLISE QUÍMICO-FARMACÊUTICA E ESTUDOS DE ESTABILIDADE DA CICLOFOSFAMIDA
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Orientador : EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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MEMBROS DA BANCA :
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ANA CAROLINA KOGAWA
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EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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SILVIA STANISCUASKI GUTERRES
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Data: 23/09/2024
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A ciclofosfamida (CFM) é um antineoplásico pertencente à classe dos agentes alquilantes, derivadas das mostardas nitrogenadas, com aplicações clinicas para doenças mieloproliferativas e linfoproliferativas, neoplasias malignas, além de doenças do sistema imune. Por seu amplo escopo clínico é disponibilizada pelo Sistema Único de Saúde (SUS) pertencendo à Relação Nacional de Medicamentos Essenciais (RENAME), como parte do Componente Especializado da Assistência Farmacêutica. Contudo, apesar de sua relevância, a Farmacopeia Brasileira 6ª edição (2019) não apresenta monografia destinada a este fármaco ou ao seu produto acabado (comprimido revestido). Ademais, literatura disponível sobre sua identificação e quantificação, em matrizes farmacêuticas, é limitada, dispendiosa, com longos tempos de análises e não amparados pela química verde (QV). O presente trabalho visou a análise, desenvolvimento e validação de método analítico seguindo a premissa da QV para os comprimidos revestidos de CFM 50 mg, realizando em complemento análises qualitativas através de métodos gerais para caracterização do produto acabado e uso das técnicas espectrofotometria na região do UV e cromatografia líquida de alta eficiência. Além disso, foi realizado o estudo de degradação forçada para o produto acabado em condições de estresse, para a definição do perfil de degradação forçada da ciclofosfamida e comparado os resultados da predição do software Zeneth, e quando comparado a um método analítico existente, através da AGREE – Analytical Greenness Calculator apresentou nível de verde superior. O método analítico verde por cromatografia em fase líquida de alta eficiência desenvolvido validado, detectou o pico principal no comprimento de onda de 195 nm, fluxo de 0,6 mL/min, utilizando detector de arranjo de diodos, coluna analítica C18, fase móvel constituída por água e etanol (80:20, v/v), com temperatura do forno de coluna à 35 ºC, atingindo ao proposto neste estudo.
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Cyclophosphamide (CFM) is an antineoplastic belonging to the class of alkylating agents, derived from nitrogen mustards, with clinical applications for myeloproliferative and lymphoproliferative diseases, malignant neoplasms, in addition to immune system diseases. Due to its broad clinical scope, it is made available by the Unified Health System (SUS), belonging to the National List of Essential Medicines (RENAME), as part of the Specialized Component of Pharmaceutical Assistance. However, despite its relevance, the Brazilian Pharmacopoeia 6th edition (2019) does not present a monograph aimed at this drug or its finished product (tablet). Furthermore, available literature on its identification and quantification, in pharmaceutical matrices, is limited, expensive, with long analysis times and not supported by green chemistry (QV). The present work aimed at the analysis, development and validation of an analytical method following the premise of QV for CFM 50 mg coated tablets, additionally carrying out qualitative analyzes through general methods to characterize the finished product and use of spectrophotometry techniques in the UV region. and high-performance liquid chromatography. Furthermore, a forced degradation study was carried out for the finished product under stress conditions, to define the forced degradation profile of cyclophosphamide and compared the prediction results of the Zeneth software, and when compared to an existing analytical method, through AGREE – Analytical Greenness Calculator showed a higher green level. The green analytical method by high-performance liquid chromatography developed validated, detected the main peak at a wavelength of 195 nm, flow rate of 0.6 mL/min, using a diode array detector, C18 analytical column, mobile phase constituted by water and ethanol (80:20, v/v), with a column oven temperature of 35 ºC, reaching the proposed in this study.
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BRUNA DE SANTA BARBARA BARBOSA
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IDENTIFICAÇÃO DE INIBIDORES DE ESTAFILOXANTINA EM Staphylococcus aureus E SUA INTERAÇÃO COM CARVACROL
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Orientador : MARCELO SANTOS CASTILHO
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCELO SANTOS CASTILHO
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PAULA CARVALHAL LAGE VON BUETTNER RISTOW
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RENATA BIEGELMEYER DA SILVA RAMBO
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Data: 04/10/2024
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Introdução: A resistência bacteriana aos antimicrobianos representa uma séria ameaça à saúde pública global, exigindo urgentemente novas alternativas terapêuticas. Uma abordagem promissora é a modulação dos fatores de virulência bacteriana, que não afetam a viabilidade celular, pois apresentam menor pressão evolutiva e podem ser utilizados em associação com medicamentos cuja eficácia está comprometida. Staphylococcus aureus, uma bactéria grampositiva com alto grau de resistência, produz diversos fatores de virulência, entre os quais se destacam a estafiloxantina (STX) e o biofilme. Objetivo: Identificar inibidores da produção de STX em S. aureus que apresentem efeito sinérgico ou aditivo com carvacrol, sem afetar a viabilidade celular deste patógeno. Metodologia: Ensaios celulares foram realizados para triagem de 35 substâncias de diferentes classes químicas quanto à sua atividade sobre a viabilidade celular. Os compostos que não afetaram a viabilidade celular na concentração de 100 µM tiveram seu efeito sobre a produção de STX avaliado por espectrometria Raman. Os compostos mais promissores tiveram seu EC50 determinado e, posteriormente, foram avaliados quanto ao efeito sobre o biofilme, a sobrevivência de S. aureus na presença de H²O² e em associação com carvacrol (método checkerboard). Resultados: Foram identificadas 10 substâncias contendo o núcleo imidazopiridina ou fatlimidina que inibem significativamente a produção de STX na concentração de 100 µM. O composto mais potente (QHM 827) apresentou EC50 de 14,7 ± 0,93 µM e reduziu significativamente (p < 0,05) a sobrevivência de S. aureus na presença de H²O² mas não afetou (p > 0,05) a formação de biofilme na concentração de 100 µM. A combinação de QHM 827 com carvacrol demonstrou um efeito sinérgico significativo (FICI ≤ 5) nas concentrações de 1,56-12,5 µM para QHM 827 e 2,5-1,25 µM para carvacrol. Conclusão: Derivados de imidazopiridina são inibidores promissores da produção de STX em S. aureus, que, em associação com carvacrol, reduzem a viabilidade celular deste patógeno por mecanismos ainda não completamente estabelecidos.
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Introduction: Bacterial resistance to antimicrobials represents a serious threat to global public health, urgently requiring new therapeutic alternatives. A promising approach is the modulation of bacterial virulence factors, which do not affect cell viability, as they exert less evolutionary pressure and can be used in combination with drugs whose efficacy is compromised. Staphylococcus aureus, a Gram-positive bacterium with a high degree of resistance, produces several virulence factors, among which staphyloxanthin (STX) and biofilm stand out. Objective: To identify inhibitors of STX production in S. aureus that exhibit a synergistic or additive effect with carvacrol, without affecting the cell viability of this pathogen. Methodology: Cell assays were performed to screen 35 substances from different chemical classes for their activity on cell viability. Compounds that did not affect cell viability at a concentration of 100 µM were evaluated for their effect on STX production using Raman spectroscopy. The most promising compounds had their EC50 determined and were subsequently evaluated for their effect on biofilm formation, S. aureus survival in the presence of H²O², and in combination with carvacrol (checkerboard method). Results: Ten substances containing the imidazopyridine or fatlimidine scaffold were identified as significantly inhibiting STX production at a concentration of 100 µM. The most potent compound (QHM 827) presented an EC50 of 14.7 ± 0.93 µM and significantly reduced (p < 0.05) the survival of S. aureus in the presence of H²O² but did not affect (p > 0.05) biofilm formation at a concentration of 100 µM. The combination of QHM 827 with carvacrol demonstrated a significant synergistic effect (FICI ≤ 5) at concentrations of 1.56-12.5 µM for QHM 827 and 2.5-1.25 µM for carvacrol. Conclusion: Imidazopyridine derivatives are promising inhibitors of STX production in S. aureus, which, in combination with carvacrol, reduce the cell viability of this pathogen through mechanisms not yet fully established.
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EMILY CONCEIÇÃO LIMA
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SOROPOSITIVIDADE DE INFECÇÕES CAUSADAS PELO Toxoplasma gondii, VÍRUS DA HEPATITE B E RUBÉOLA EM GESTANTES REAGENTES PARA SÍFILIS DE UMA MATERNIDADE DE REFERÊNCIA EM SALVADOR-BA.
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Orientador : MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
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MEMBROS DA BANCA :
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MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
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JUNIA RAQUEL DUTRA FERREIRA
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RICARDO RICCIO OLIVEIRA
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Data: 04/10/2024
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As infecções transmitidas verticalmente representam um importante problema de saúde pública mundial. Diferentes micro-organismos podem cruzar a barreira transplacentária e afetar o feto, podendo gerar problemas que se manifestam antes e após o nascimento. Assim, o rastreio de infecções durante a gravidez é de extrema importância para garantir que medidas adequadas sejam tomadas para proteger a saúde da gestante e do concepto e/ou recém-nascido. O objetivo deste trabalho foi avaliar frequência de infecções, como, a toxoplasmose, rubéola e hepatite B, e fatores de risco associados, em gestantes de uma maternidade de Salvador, Bahia. Foi realizado um estudo de corte transversal, entre dezembro/2022 e dezembro/2023, com gestantes com sorologia reagente para sífilis admitidas no centro obstétrico da Maternidade Maria da Conceição de Jesus (Salvador, Bahia). Para as gestantes e puérperas que aceitaram a participar do estudo, foram coletados dados sociodemográficos, informações clínicas e sobre o pré-natal, e testes sorológicos para marcadores relacionados a essas infecções foram realizados. Essas análises incluíram: anticorpos IgG e IgM anti-Toxoplasma gondii; para hepatite B, anticorpos anti-HBs, anti-HBc total e antígeno HBs (AgHBs); além de anticorpos IgG contra rubéola. Aproximadamente 182 gestantes aceitaram a participar do estudo, as quais tinham, em média, 25,80 ± 6,11 anos de idade. A maioria das gestantes se autodeclarou preta ou parda, apresentava o nível de escolaridade até o ensino médio (incompleto ou completo) e renda familiar ≤ 1 salário mínimo. Os resultados dos testes sorológicos mostraram que 52,2% apresentavam anticorpos IgG reagentes para T. gondii, enquanto 1,64% foram IgM reagentes. No caso da hepatite B, foi encontrado que 72,8% das gestantes foram reagentes para anti-HBs e não reagentes para anti-HBc total, indicando que pelo menos essa parcela foi vacinada. Cerca 2,74% das gestantes foram reagentes para o marcador anti-HBc total e 2,19% para o AgHBs. Em relação à rubéola, 81,33% foram reagentes para anticorpos IgG. A análise estatística revelou que participantes com 26 anos ou mais tinham uma maior frequência de anticorpos IgG anti-rubéola e 1,88 vezes mais chances de serem soropositivas para anticorpos IgG anti- T. gondii em comparação com as gestantes mais jovens. Os resultados deste estudo ressaltam a importância da vigilância epidemiológica durante a gestação e podem orientar intervenções e estratégias de prevenção para proteger a saúde materno-infantil.
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Vertically transmitted infections represent a major global public health problem. Different microorganisms can cross the transplacental barrier and affect the fetus, potentially causing problems that manifest before and after birth. Therefore, screening for infections during pregnancy is extremely important to ensure that appropriate measures are taken to protect the health of the pregnant woman and the fetus and/or newborn. The objective of this study was to evaluate the frequency of infections, such as toxoplasmosis, rubella, and hepatitis B, and associated risk factors, in pregnant women at a maternity hospital in Salvador, Bahia. A cross-sectional study was carried out between December 2022 and December 2023 with pregnant women with reactive serology for syphilis admitted to the obstetric center of the Maria da Conceição de Jesus Maternity Hospital (Salvador, Bahia). For pregnant and postpartum women who agreed to participate in the study, sociodemographic data, clinical information, and prenatal information were collected, and serological tests for markers related to these infections were performed. These analyses included: IgG and IgM antibodies against Toxoplasma gondii; for hepatitis B, anti-HBs, total anti-HBc, and HBs antigen (HBsAg); and IgG antibodies against rubella. Approximately 182 pregnant women agreed to participate in the study, who were, on average, 25.80 ± 6.11 years old. Most of the pregnant women declared themselves black or brown, had an education level up to high school (incomplete or complete), and family income ≤ 1 minimum wage. The results of the serological tests showed that 52.2% had reactive IgG antibodies for T. gondii, while 1.64% were reactive IgM. In the case of hepatitis B, it was found that 72.8% of pregnant women were reactive for anti-HBs and non-reactive for total anti-HBc, indicating that at least this portion was vaccinated. Approximately 2.74% of pregnant women were reactive for the total anti-HBc marker and 2.19% for AgHBs. Regarding rubella, 81.33% were reactive for IgG antibodies. Statistical analysis revealed that participants aged 26 years or older had a higher frequency of anti-rubella IgG antibodies and were 1.88 times more likely to be seropositive for anti-T. gondii IgG antibodies compared to younger pregnant women. The results of this study highlight the importance of epidemiological surveillance during pregnancy and can guide interventions and prevention strategies to protect maternal and child health.
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BIANCA LEMOS SANTOS
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DESENVOLVIMENTO DE COSMÉTICOS DERIVADOS DE Passiflora edulis
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Orientador : EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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MEMBROS DA BANCA :
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BRUNO NICOLAU PAULINO
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EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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NEILA DE PAULA PEREIRA
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Data: 29/10/2024
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A indústria de cosméticos é considerada como segmento de destaque na economia mundial. O primeiro semestre de 2023 fechou com um crescimento de 18,5% no setor em relação ao mesmo período de 2022, sendo os cosméticos capilares a categoria com o segundo maior crescimento. Após a pandemia, os consumidores mostraram-se mais preocupados em dispensar ingredientes “ruins” da rotina, optando por marcas que se preocupam com a preservação do meio ambiente, fazendo-se necessária, assim, a busca por novas tecnologias e processos para tal finalidade. Este trabalho objetiva desenvolver cosméticos capilares sólidos, inovadores, derivados da Passiflora edulis (maracujá amarelo), utilizando suas cascas e sementes, almejando, igualmente, dar destino sustentável a esses resíduos. A partir das cascas do fruto do maracujá foi obtida a pectina, por meio de extração ácida. Para possibilitar de maneira sistematizada a otimização do número de ensaios e contribuir para redução da insumos, foi realizado um planejamento experimental por DCCR (Delineamento Composto Central Rotacional) para 4 variáveis: concentração do resíduo, temperatura, pH e velocidade de rotação, totalizando 28 ensaios. A partir do modelo obtido e da análise de superfície de resposta, observou-se que a variável mais significativa do processo é o pH, podendo obter rendimentos elevados em meio mais ácido. Foi possível aumentar o rendimento da pectina em 50%, obtendo-se 10-15% de pectina extraída, o que valida a otimização. Formulações foram desenvolvidas contendo a pectina extraída da casca do maracujá em comparação com uma formulação de referência (F0), contendo amido de milho e a formulação contendo pectina industrial (F1). Testes de estabilidade, análise de textura (dureza, coesividade e fraturabilidade), e porcentagem de conteúdo líquido foram realizados. Os resultados mostraram que as formulações contendo pectina de Passiflora edulis apresentaram boa estabilidade, pH adequado e textura esperada.
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The cosmetics industry is recognized as an important segment in the global economy. In the first half of 2023, the sector experienced an 18.5% growth compared to the same period in 2022, with hair care products being the second fastest-growing category. Post-pandemic, consumers have demonstrated an increased inclination toward eliminating “undesirable” ingredients from their personal care routines, favoring brands that prioritize environmental sustainability. Consequently, there is a growing demand for novel technologies and methodologies aimed at minimizing environmental impact. This study aims to develop innovative solid hair care formulations derived from Passiflora edulis (yellow passion fruit), with a focus on valorizing the byproducts of its peel and seeds. Pectin was extracted from the passion fruit peel using an acid-based extraction process. To systematically optimize the number of trials and minimize material usage, a Central Composite Rotational Design (CCRD) was employed, targeting four independent variables: residue concentration, temperature, pH, and rotation speed, resulting in 28 experimental trials. Response surface analysis revealed that pH was the most significant variable, with higher pectin yields observed in more acidic conditions. The process optimization yielded a 50% increase in pectin recovery, achieving extraction efficiencies of 10-15%, validating the model. Formulations incorporating pectin derived from Passiflora edulis were compared with a control formulation (F0) containing cornstarch and a formulation with industrial pectin (F1). Evaluations of stability, texture profile (hardness, cohesiveness, and fracturability), and liquid content were conducted. The results indicated that the formulations containing Passiflora edulis pectin exhibited favorable stability, optimal pH, and desirable textural properties, demonstrating the potential of this sustainable ingredient for the cosmetic industry.
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VALDINÉA SANTOS DIAS
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DESENVOLVIMENTO E AVALIAÇÃO DA QUALIDADE DE FORMAS FARMACÊUTICAS LÍQUIDAS ORAIS CONTENDO HIDROXIUREIA
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Orientador : EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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MEMBROS DA BANCA :
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MAGALI BENJAMIM DE ARAÚJO
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EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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RENATA BIEGELMEYER DA SILVA RAMBO
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Data: 30/10/2024
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A doença falciforme (DF) é uma síndrome que faz parte do grupo de hemoglobinopatias mais prevalentes no mundo, sendo de grande relevância para a saúde pública no Brasil, especialmente na Bahia. Essa patologia é caracterizada principalmente pela deformação das hemácias em formato de foice, decorrente de alterações genéticas causadas pelo predomínio da hemoglobina S (HbS). Trata-se de uma doença hereditária que afeta majoritariamente a população negra (pretos e pardos). Diversos protocolos terapêuticos são adotados para seu tratamento, com destaque para a abordagem farmacológica. Nesse contexto, a hidroxiureia (HU), um agente quimioterápico, é indicada por ser o único medicamento capaz de atenuar os sintomas clínicos e melhorar a qualidade de vida dos pacientes falcêmicos. Entretanto, apesar de sua relevância no tratamento da DF e de outras desordens mieloproliferativas, a HU não possui um método analítico indicativo de estabilidade (MAIE) para o insumo farmacêutico ativo nem para formas farmacêuticas descrito na 6ª edição da Farmacopeia Brasileira ou em outros compêndios oficiais. Diante disso, este trabalho teve como objetivo desenvolver e validar um MAIE, além de realizar estudos de estabilidade da molécula de HU. Adicionalmente, foram avaliadas formulações líquidas orais contendo HU, manipuladas em três farmácias de Salvador, Bahia. A HU foi submetida a estudos de degradação forçada em condições ácida, básica, neutra, oxidativa e térmica. O método desenvolvido utilizou Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) em fase reversa, com detector de arranjo de fotodiodo (DAD). A separação foi realizada em uma coluna Phenomenex® C8 (250 x 4,6 mm, 5 µm), mantida a 25 ºC. A otimização do método incluiu a utilização de uma fase móvel composta por água e etanol (97:03, v/v), em modo isocrático, com vazão de 0,5 mL/min, volume de injeção de 20 µL e comprimento de onda de 214 nm. Seguindo as diretrizes de degradação, observou-se que a HU se degradou significativamente em todas as condições testadas. Um produto de degradação (PD), identificado como hidroxilamina (HA), apresentou tempo de retenção de aproximadamente 5,16 minutos e resolução superior a 2 em relação ao pico principal, que demonstrou pureza espectral. Os resultados comprovaram que o método proposto é indicativo de estabilidade. A avaliação das formulações manipuladas indicou grande risco sanitário para os pacientes que utilizam a HU.
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Sickle cell disease (SCD) is a syndrome belonging to the hemoglobinopathies group that is among the most prevalent worldwide. It has significant relevance for public health in Brazil, especially in Bahia. This condition is mainly characterized by the deformation of red blood cells into a sickle shape, resulting from genetic alterations caused by the predominance of hemoglobin S (HbS). It is an inherited disease that predominantly affects the black population (both black and brown individuals). Several therapeutic protocols have been adopted for its treatment, focusing on the pharmacological approach. In this context, hydroxyurea (HU), a chemotherapeutic agent, is recommended as the only drug capable of alleviating clinical symptoms and improving the quality of life of patients with SCD. However, despite its relevance for SCD treatment and other myeloproliferative disorders, HU lacks a stability-indicating analytical method (SIAM) for the active pharmaceutical ingredient or pharmaceutical forms described in the 6th edition of the Brazilian Pharmacopoeia or other official compendia. Given this gap, the objective of this work was to develop and validatea SIAM, as well as to conduct stability studies on the HU molecule. Additionally, oral liquid formulations containing HU prepared in three pharmacies in Salvador, Bahia, were evaluated. HU was subjected to forced degradation studies under acidic, basic, neutral, oxidative, and thermal conditions. The developed method employed reversed-phase High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) with a photodiode array detector (PDA). Separation was performed using a Phenomenex® C8 column (250 x 4.6 mm, 5 µm), maintained at 25 °C. The method optimization included a mobile phase composed of water and ethanol (97:03, v/v) in isocratic mode, with a flow rate of 0.5 mL/min, injection volume of 20 µL, and detection wavelength of 214 nm. Following degradation guidelines, HU degraded significantly under all tested conditions. A degradation product (DP), identified as hydroxylamine (HA), exhibited a retention time of approximately 5.16 minutes and a resolution greater than 2 compared to the main peak, demonstrating spectral purity. The results confirmed that the proposed method is stability-indicating. The evaluation of the manipulated formulations revealed a high sanitary risk for patients using HU.
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MONIQUE DE JESUS SANTANA DOS SANTOS
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BIOMARCADORES DE LESÃO RENAL, VARIANTES GÊNICAS DA APOL1 E RETINOPATIA EM PESSOAS COM DOENÇA FALCIFORME: DISTINÇÃO ENTRE OS GENÓTIPOS SS E SC
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Orientador : CYNARA GOMES BARBOSA
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MEMBROS DA BANCA :
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CYNARA GOMES BARBOSA
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JOSE PEREIRA DE MOURA NETO
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RICARDO DAVID COUTO
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Data: 16/12/2024
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Introdução: A doença falciforme (DF) é uma condição genética autossômica recessiva de elevada prevalência em diversos países do mundo causada por uma mutação no gene da cadeia beta da hemoglobina, que leva à formação de eritrócitos falcizados. Sua fisiopatologia é complexa, com manifestações clínicas heterogêneas que afetam vários órgãos e sistemas. Entre as complicações, destaca-se a nefropatia falciforme, associada a eventos vasoclusivos nos capilares renais, agravados por variantes gênicas da APOL1, e a retinopatia falciforme, que pode causar hemorragias e neovascularização ocular. Biomarcadores hematológicos, bioquímicos e moleculares são usados no acompanhamento clínico para avaliar a gravidade variável da doença. Objetivo: Investigar a associação entre os biomarcadores de lesão renal, as variantes gênicas da APOL1 e os eventos de retinopatia em pacientes com os genótipos HbSS e HbSC. Material e Métodos: Foi realizado estudo de corte transversal cujas determinações hematológicas e bioquímicas foram conduzidas por meio de processo automatizado (Mindray e Labmax 560 – Labtest, respectivamente). Os dados clínicos foram obtidos por consulta ao prontuário médico e aplicação de questionário aos pacientes. O sequenciamento gênico foi realizado para identificação das variantes da APOL1, conforme método de Sanger. As análises estatísticas foram realizadas nos softwares Graph Pad Prism 3.0 e SPSS versão 10, considerando significância de p<0,05. Resultados: Foram recrutados 139 pacientes com DF, destes 52 (37,4%) se autodeclararam pretos ou pardos; 74 (53,2%) como sendo do sexo feminino; em relação ao genótipo da DF, 84 (60,4%) possuem HbSS e 50 (36%) HbSC. Acerca do perfil hematológico e associação com os genótipos HbSS e HbSC, foi possível identificar diferenças estatisticamente significativas na contagem de hemácias, concentração de hemoglobina, hematócrito, VCM, HCM e RDW com p<0,000 para todas as variáveis citadas, o mesmo ocorreu em relação à contagem de leucócitos (p=0,000). Em relação ao perfil renal, os níveis de microalbuminúria foram mais elevados no grupo HbSS (101x25) comparado ao grupo com HbSC com p=0,014. Acerca dos eventos clínicos, o grupo HbSC apresentou ocorrência mais frequente de retinopatia (p=0,001). Ao relacionar a retinopatia com o perfil laboratorial, foi identificado que este evento cursa com VCM mais elevado, anemia mais acentuada e contagem de eosinófilos mais elevada. Neste mesmo grupo com retinopatia, em relação ao perfil lipídico, foram observados níveis de triglicérides mais elevados (119) em comparação ao grupo sem retinopatia (66) com p=0,012. Acerca das variantes gênicas da APOL1, foi encontrada frequência de 36% para os genótipos associados com risco de nefropatia (G0/G1, G0/G2, G1/G2). A variante de risco G1 foi associada com níveis mais elevados de ureia, VLDLc e com contagem maior de plaquetas. Conclusões: O estudo demonstra que existem diferenças clínicas e laboratoriais entre portadores dos genótipos HbSS e HbSC com DF. Os genótipos variantes da APOL1 foram mais frequentes na população do que aquele descrito em outros estudos. Foi identificada associação entre as variantes gênicas da APOL1 e biomarcadores de gravidade da DF (plaquetas, VLDLc e ureia). Entretanto são necessários outros estudos com uma população maior a fim de confirmar esses achados.
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Introduction: Sickle cell disease (SCD) is a genetically inherited autosomal recessive condition with high prevalence in various countries worldwide, caused by a mutation in the beta-globin gene, leading to the formation of sickle-shaped erythrocytes. Its pathophysiology is complex, featuring heterogeneous clinical manifestations affecting multiple organs and systems. Among the complications, sickle cell nephropathy stands out, linked to vaso-occlusive events in the renal capillaries, exacerbated by APOL1 gene variants, and sickle cell retinopathy, which can cause hemorrhages and ocular neovascularization. Hematological, biochemical, and molecular biomarkers are used in clinical monitoring to assess the variable severity of the disease. Objective: To investigate the association between kidney injury biomarkers, APOL1 gene variants, and retinopathy events in patients with HbSS and HbSC genotypes. Materials and Methods: A cross-sectional study was conducted, with hematological and biochemical determinations carried out through automated processes (Mindray and Labmax 560 – Labtest, respectively). Clinical data were obtained by consulting medical records and applying questionnaires to patients. Gene sequencing was performed to identify APOL1 variants using the Sanger method. Statistical analyses were conducted using Graph Pad Prism 3.0 and SPSS version 10 software, with significance set at p<0.05. Results: A total of 139 patients with sickle cell disease (SCD) were recruited, of which 52 (37.4%) self-identified as Black or Brown; 74 (53.2%) identified as female. Regarding the genotype of SCD, 84 (60.4%) had HbSS and 50 (36%) had HbSC. Concerning the hematological profile and its association with the HbSS and HbSC genotypes, statistically significant differences were identified in red blood cell count, hemoglobin concentration, hematocrit, mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin (MCH), and red cell distribution width (RDW), with p<0.000 for all mentioned variables; a similar finding was observed concerning white blood cell count (p=0.000). In terms of renal profile, microalbuminuria levels were significantly higher in the HbSS group (101x25) compared to the HbSC group with p=0.014. Regarding clinical events, the HbSC group exhibited a more frequent occurrence of retinopathy (p=0.001). When correlating retinopathy with laboratory profiles, it was identified that this event presented with higher MCV, more pronounced anemia, and elevated eosinophil counts. In the same group with retinopathy, concerning the lipid profile, elevated triglyceride levels (119) were observed compared to the group without retinopathy (66) with p=0.012. Regarding the genetic variants of APOL1, a frequency of 36% was found for genotypes associated with the risk of nephropathy (G0/G1, G0/G2, G1/G2). The G1 risk variant was associated with higher levels of urea, very-low-density lipoprotein cholesterol (VLDLc), and an increased platelet count. Conclusions: The study demonstrates that there are clinical and laboratory differences between individuals with HbSS and HbSC genotypes in the context of SCD. The variant genotypes of APOL1 were found to be more frequent in this population than reported in other studies. An association was identified between the genetic variants of APOL1 and biomarkers of disease severity (platelets, VLDLc, and urea). However, further studies with a larger population are necessary to confirm these findings.
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MARCEL VICTOR MOTA QUEIROZ
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ESTRATÉGIA DE ENFRENTAMENTO AO ESTRESSE EM AGENTES DE TRÂNSITO DE SALVADOR-BAHIA: AVALIAÇÃO DE BIOMARCADORES, PARÂMETROS HEMODINÂMICOS E PSICOFISIOLÓGICOS
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Orientador : CYNARA GOMES BARBOSA
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MEMBROS DA BANCA :
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CYNARA GOMES BARBOSA
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JUNIA RAQUEL DUTRA FERREIRA
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RENATA MEIRA VERAS
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Data: 17/12/2024
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Introdução: Os agentes de trânsito são profissionais bastante afetados pelo estresse, frequentemente presente na rotina de trabalho e associado a sintomas físicos e psicológicos, com risco ao desenvolvimento de doenças multifatoriais ligadas à saúde mental. Diferentes marcadores, como parâmetros psicométricos, hemodinâmicos e biomarcadores são comprovadamente eficazes, quando utilizados em conjunto, para mensurar intervenções institucionais de promoção à saúde mental. Uma dessas intervenções, o Programa SKY de Resiliência, utiliza a técnica de respiração “Sudarshan Kryia” (ou SKY) e vem sendo aplicado mundialmente em profissionais da linha de frente. Objetivo: Investigar os impactos fisiológicos individuais da intervenção baseada na técnica SKY em agentes de trânsito, por meio da avaliação dos níveis de biomarcadores e de parâmetros hemodinâmicos e psicométricos antes e após a intervenção. Material e Métodos: Trata-se de estudo com abordagem quantitativa de intervenção antes e depois, que teve como participantes agentes de transito do sexo masculino, com idade entre 25 e 73 anos, provenientes de unidades operacionais de Salvador, BA. Foi realizada análise de cortisol sérico e outros biomarcadores por meio de técnicas automatizadas (Mindray, Labmax 560 e Roche E411), além da aplicação de questionários psicométricos validados e coleta de dados hemodinâmicos e antropométricos. As análises estatísticas foram realizadas nos softwares Graph pad Prism 3.0 e SPSS versão 10, de acordo com o tipo de variável, considerando p<0,05 como significante. Resultados: Na avaliação antes da intervenção, foi encontrada correlação positiva entre cortisol e níveis de triglicerídeos (p=0,02). As escalas de resiliência foram negativamente correlacionadas com a escala de estresse percebido (p<0,001) e com a pressão arterial máxima e mínima. Os parâmetros de frequência cardíaca média correlacionaram negativamente com a pressão arterial. Em relação à avaliação de biomarcadores e de parâmetros antropométricos e hemodinâmicos antes e após intervenção, foi encontrada redução significativa dos níveis de cortisol sérico e glicose após a intervenção (p=0,05 e p=0,02 respectivamente) . Do mesmo modo, foi encontrada redução significativa do estresse e aumento dos valores de resiliência dos agentes (p=0,04 e p=0,03 respectivamente), sugerindo impacto positivo da técnica de respiração SKY. Conclusão: Apesar das limitações oriundas da dinâmica do trabalho dos agentes de trânsito, observou-se impacto positivo da intervenção sobre os aspectos psicométricos e fisiológicos.
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Introduction: Traffic agents are professionals who are highly affected by stress, which is often present in their work routine and associated with physical and psychological symptoms, with a risk of developing multifactorial diseases related to mental health. Different markers, such as psychometric, hemodynamic and biomarker parameters, have proven effective, when used together, to measure institutional interventions to promote mental health. One of these interventions, the SKY Resilience Program, uses the “Sudarshan Kryia” (or SKY) breathing technique and has been applied worldwide to first responders professionals. Objective: To investigate the individual physiological impacts of the intervention based on the SKY technique in traffic agents, by assessing the levels of biomarkers and hemodynamic and psychometric parameters before and after the intervention. Material and Methods: This is a quantitative study of before and after intervention, with male traffic agents, aged between 25 and 73 years, from operational units in Salvador, BA. Serum cortisol and other biomarkers were analyzed using automated techniques (Mindray, Labmax 560 and Roche E411), in addition to the application of validated psychometric questionnaires and the collection of hemodynamic and anthropometric data. Statistical analyses were performed using Graph Pad Prism 3.0 and SPSS version 10 software, according to the type of variable, considering p<0.05 as significant. Results: In the evaluation before the intervention, a positive correlation was found between cortisol and triglyceride levels (p=0.02). The resilience scales were negatively correlated with the perceived stress scale (p<0.001) and with maximum and minimum blood pressure. The mean heart rate parameters were negatively correlated with blood pressure. Regarding the evaluation of biomarkers and anthropometric and hemodynamic parameters before and after the intervention, a significant reduction in serum cortisol and glucose levels was found after the intervention (p=0.05 and p=0.02 respectively). Likewise, a significant reduction in stress and an increase in the agents' resilience values were found (p=0.04 and p=0.03 respectively), suggesting a positive impact of the SKY breathing technique. Conclusion: Despite the limitations arising from the work dynamics of traffic officers, there was a positive impact of the intervention on psychometric and physiological aspects.
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MARIA RITA DE MELO SAMPAIO
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Avaliação de antígenos recombinantes no imunodiagnóstico da infecção por Strongyloides stercoralis em área endêmica para enteroparasitoses
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Orientador : NECI MATOS SOARES
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MEMBROS DA BANCA :
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CARINA CARVALHO DOS SANTOS
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NECI MATOS SOARES
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RYAN DOS SANTOS COSTA
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Data: 18/12/2024
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Introdução: Strongyloides stercoralis é o principal agente etiológico da estrongiloidíase humana, afetando aproximadamente 614 milhões de indivíduos em todo o mundo. Esta infecção é mais prevalente em países em desenvolvimento, onde as condições sanitárias e socioeconômicas são precárias. No Brasil, a infecção apresenta ampla distribuição geográfica, com uma prevalência média de 5,5%, sendo considerada uma região hiperendêmica. As infecções geralmente são crônicas e assintomáticas, podendo persistir por décadas sem diagnóstico. Atualmente, o diagnóstico definitivo da infecção por S. stercoralis é realizado pela pesquisa de larvas nas fezes. Contudo, este parasito libera poucas larvas e de forma intermitente, tornando necessário o exame de várias amostras em dias alternados. Métodos sorológicos poderiam ser uma alternativa, mas são limitados pela dificuldade na produção de antígenos, sejam homólogos ou heterólogos, e pela presença de reações cruzadas. Visando melhorar a eficácia do diagnóstico, recentemente os antígenos recombinantes (rSs-NIE 1 e rSs-IR) foram utilizados para o imunodiagnóstico da infecção por S. stercoralis. Objetivo: Avaliar a sensibilidade e a especificidade dos antígenos recombinantes (NIE e SsIR) para o imunodiagnóstico da infecção por S. stercoralis em uma população residente em uma área rural, Assentamento Zumbi dos Palmares, (AZP), Camamu, Bahia. Foram incluídos no estudo 84,8% (212/250) da população residente no assentamento. Metodologia: O diagnóstico parasitológico foi realizado por meio de três métodos: Sedimentação Espontânea (SE), Baermann-Moraes (BM) e Cultura em Placa de Agar (CPA). O imunodiagnóstico foi realizado através da determinação de IgG anti-S. stercoralis, pelos ELISAs utilizando antígeno bruto solúvel (AgS) e antígenos recombinantes (NIE e SsIR). Resultado: A população residente no AZP é composta por 50,5% (107/212) de indivíduos do sexo feminino, vivendo em precárias condições socioeconômicas e sanitárias, sem acesso à rede de esgoto e água tratada. A prevalência de infecção por parasitos intestinais foi de 72,2% (153/212). Dentre os indivíduos parasitados, 48,4% (93/212) estavam poliparasitados, enquanto 28,3% (60/212) estavam monoparasitados. O parasito patogênico mais prevalente foi Trichuris trichiura, encontrado em 24,5% (52/212) dos indivíduos. Os ensaios com antígenos recombinantes, NIE-ELISA e SsIR-ELISA, e antígeno bruto AgS-ELISA apresentaram sensibilidades de 88,7%, 85,2% e 85,4%, respectivamente, e especificidades de 77,8%, 75,6% e 84,4%, respectivamente, sem diferenças estatisticamente significativas entre os ensaios. Os valores de acurácia variaram de 84,3% a 87,8%, evidenciando o bom desempenho de todos os antígenos no diagnóstico da infecção por S. stercoralis. A concordância entre os resultados dos ELISAs mostrou um nível moderado, com valor de Kappa (K) = 0,517, 0,492 e 0,497. O SsIR-ELISA apresentou o maior número de reações cruzadas, tanto em indivíduos monoparasitados quanto poliparasitados, com 23% (26/115), sem diferença significativa. O AgS-ELISA apresentou maior similaridade com amostras positivas no exame parasitológico, alcançando 84,4% (38/45). Conclusão: Os antígenos recombinantes (NIE e SsIR) e bruto (AgS) demonstraram desempenhos semelhantes no imunodiagnóstico da infecção por Strongyloides stercoralis, em uma população de área endêmica, sem diferenças estatisticamente significativas. Contudo, elevadas taxas de reações cruzadas foram observadas, especialmente em indivíduos poliparasitados. Esses achados reforçam a importância de desenvolver e validar métodos diagnósticos, permitindo maior precisão em cenários de alta endemicidade e diversidade parasitária.
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Introduction: Strongyloides stercoralis is the primary etiological agent of human strongyloidiasis, affecting approximately 614 million individuals worldwide. This infection is more prevalent in developing countries, where sanitation and socioeconomic conditions are poor. In Brazil, the infection exhibits a wide geographical distribution, with an average prevalence of 5.5%, being considered a hyperendemic region. Infections are typically chronic and asymptomatic, potentially persisting for decades without diagnosis. The gold standard for diagnosing S. stercoralis infection involves the detection of larvae in stool samples. However, due to the often very low parasite burden and intermittent larval excretion, multiple samples must be examined on alternate days to improve diagnostic yield. Serological methods represent a promising alternative, but their utility is limited by the challenges associated with producing homologous and/or heterologous antigens and by the occurrence of cross-reactions. To enhance diagnostic efficacy, recombinant antigens (rSs-NIE-1 and rSs-IR) have recently been employed for the immunodiagnosis of S. stercoralis infection. Aim: This study evaluated the sensitivity and specificity of recombinant antigens (NIE and SsIR) for the immunodiagnosis of S. stercoralis infection in a population residing in a rural area, Zumbi dos Palmares Settlement (AZP), Camamu, Bahia. Materials and methods. Material and methods: Stool tests (Spontaneous Sedimentation, Baermann-Moraes, and Agar Plate Culture) and ELISA for the detection of anti-S. stercoralis IgG, with crude antigen (AgS) and recombinant antigens (NIE and SsIR). Results: The AZP population consists of 50.5% (107/212) females, living in precarious socioeconomic and sanitary conditions without access to sewage systems or treated water. The prevalence of intestinal parasitic infections was 72.2% (153/212). Among infected individuals, 48.4% (93/212) were polyparasitized, while 28.3% (60/212) were monoparasitized. The most prevalent pathogenic parasite was Trichuris trichiura, found in 24.5% (52/212) of individuals. The assays using recombinant antigens, NIE-ELISA and SsIR-ELISA, and crude antigen AgS-ELISA demonstrated sensitivity values of 88.7%, 85.2%, and 85.4%, respectively, and specificity values of 77.8%, 75.6%, and 84.4%, respectively, with no significant differences between the assays. Accuracy values ranged from 84.3% to 87.8%, highlighting the effective performance of all antigens in diagnosing S. stercoralis infection. Agreement among ELISA results indicated moderate concordance, with Kappa (k) values of 0.517, 0.492, and 0.497. The SsIR-ELISA exhibited the highest number of cross-reactions overall, particularly among monoparasitized and polyparasitized individuals, with 23% (26/115), especially in sera from individuals infected with T. trichiura. Conversely, the AgS-ELISA demonstrated the greatest similarity to parasitological results, showing 84.4% (38/45) concordance in samples positive for S. stercoralis. Conclusion: The recombinant antigens (NIE and SsIR) and the crude antigen (AgS) demonstrated comparable performance in the immunodiagnosis of S. stercoralis infection, with no significant differences observed. However, high rates of cross-reactions, particularly in polyparasitized individuals, were noted. These findings underscore the importance of developing and validating diagnostic methods to achieve greater accuracy in settings characterized by high endemicity and parasitic diversity.
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ANA PAULA TOJAL NICANOR
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DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE MÉTODO ANALÍTICO PARA DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE CIPROFLOXACINO EM ÁGUAS SUPERFICIAIS
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Orientador : EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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MEMBROS DA BANCA :
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EDITH CRISTINA LAIGNIER CAZEDEY
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JOSE ANTONIO MENEZES FILHO
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PAULO ROBERTO RIBEIRO DE MESQUITA
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Data: 20/12/2024
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A contaminação das águas e efluentes por medicamentos é um assunto que tem mobilizado toda a comunidade científica nas últimas décadas. A presença de diversos compostos nas águas superficiais, principalmente de antibióticos, como o ciprofloxacino, sinaliza sobre o risco de exposição contínua a níveis traço desse composto, estando relacionado ao desenvolvimento de resistência bacteriana. O ciprofloxacino é um dos antimicrobianos mais utilizados pela população brasileira, e está caracterizado como contaminante emergente de diversos compartimentos ambientais. No entanto, os estudos realizados, no país, sobre a presença desses fármacos no meio ambiente ainda são escassos. Nesse contexto, esse estudo desenvolveu metodologia de extração (SPE) e cromatográfica (HPLC-DAD), para determinação desse agente nas águas superficiais do Rio Joanes, manancial responsável por parte do abastecimento de Salvador e região metropolitana. Foram utilizadas ferramentas quimiométricas para montagem do método de extração em fase sólida (SPE) que aplica cartucho HLB e utiliza etanol como solvente extrator. Para a etapa analítica foram avaliados diversos fatores a fim de aprimorar a determinação do ciprofloxacino por HPLC-PDA Waters®, com coluna C18. A corrida realizada em modo gradiente, utiliza o etanol como modificador orgânico da fase móvel. O uso de etanol gerou resposta similar a acetonitrila e essa modificação favoreceu a adequação da metodologia aos princípios da Química Verde. O método apresenta limite de detecção (LD) de 0,05 μg L-1 e limite de quantificação (LQ) de 0,2 μg L-1. Com curva analítica construída de 0,2 μg L-1 a 10 μg L-1 as recuperações dos padrões preparados na matriz amostral foram de 90% a 102% indicando boa adequação do método. Para aplicação do método, foram coletadas 18 amostras ao longo do Rio Joanes no período de agosto a outubro de 2024. Dos pontos coletados 03 detectaram a presença do CIP, condição que confere a essas localidades um potencial de risco ecológico para resistência bacteriana e efeitos ecotoxicológicos. O desenvolvimento desse estudo sugeri a aplicação da cromatografia com detector de fotodiodos para mapeamento da contaminação de rios por contaminantes emergentes, como o ciprofloxacino, para assim nortear ações de controle e monitoramento. De modo geral o estudo sobre a presença de fármacos como contaminantes emergentes auxiliam na avaliação dos impactos que os fármacos podem gerar ao meio ambiente, contribuindo para a conscientização e melhoria da qualidade hídrica.
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Water and effluent contamination by medications is a subject that has mobilized the entire scientific community in recent decades. The presence of several compounds in surface water, especially antibiotics such as ciprofloxacin, indicates the risk of continuous exposure to trace levels of this compound, which is related to the development of bacterial resistance. Ciprofloxacin is one of the most widely used antimicrobials by the Brazilian population and is characterized as an emerging contaminant in several environmental compartments. However, studies conducted in the country on the presence of these drugs in the environment are still scarce. In this context, this study developed an extraction (SPE) and chromatographic (HPLC-DAD) methodology to determine this agent in the surface waters of the Joanes River, a water source responsible for part of the water supply of Salvador and the metropolitan region. Chemometric tools were used to assemble the solid phase extraction (SPE) method that applies an HLB cartridge and uses ethanol as an extracting solvent. For the analytical stage, several factors were evaluated in order to improve the determination of ciprofloxacin by HPLC-PDA Waters®, with C18 column. The run performed in gradient mode, uses ethanol as an organic modifier of the mobile phase. The use of ethanol generated a response similar to acetonitrile and this modification favored the adaptation of the methodology to the principles of Green Chemistry. The method has a detection limit (LD) of 0.05 μg L-1 and a quantification limit (LQ) of 0.2 μg L-1. With an analytical curve constructed from 0.2 μg L-1 to 10 μg L-1, the recoveries of the standards prepared in the sample matrix were 90% to 102%, indicating good suitability of the method. To apply the method, 18 samples were collected along the Joanes River from August to October 2024. Of the points collected, 3 detected the presence of CIP, a condition that gives these locations a potential ecological risk for bacterial resistance and ecotoxicological effects. The development of this study suggested the application of chromatography with a photodiode detector to map the contamination of rivers by emerging contaminants, such as ciprofloxacin, to guide control and monitoring actions. In general, the study on the presence of drugs as emerging contaminants helps in the assessment of the impacts that drugs can generate on the environment, contributing to awareness and improvement of water quality.
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Carolina do Rosário Esteves Guimarães
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AVALIAÇÃO DE MOLÉCULAS COM EFEITO ANTIBIOFILME PARA Candida albicans
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Orientador : TANIA FRAGA BARROS
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MEMBROS DA BANCA :
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ANA PAULA DE OLIVEIRA MENEZES
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ANIBAL DE FREITAS SANTOS JUNIOR
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MARCELO SANTOS CASTILHO
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TANIA FRAGA BARROS
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YGOR JESSE RAMOS DOS SANTOS
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Data: 05/02/2024
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Biofilmes são comunidades de microrganismos altamente organizadas que apresentam menor suscetibilidade aos antimicrobianos do que as células planctônicas. O seu desenvolvimento compreende um dos principais fatores de virulência de Candida albicans, uma das espécies mais isoladas e estudadas em infecções causadas por Candida sp. Quando associadas a biofilmes, o tratamento dessas infecções torna-se mais complicada devido a necessidade de concentrações de antifúngicos mais elevadas que aquelas requeridas em infecções causadas por células planctônicas. Assim, as escolhas terapêuticas, que são limitadas, exigem novas alternativas, das quais a inibição e erradicação do biofilme parecem estratégias promissoras. Moléculas com atividade antibiofilme têm sido estudadas, mas sem cuidados quanto à utilização de critérios importantes como concentração de inibição da formação do biofilme inferior à concentração antifúngica e concentrações iguais ou inferiores a 300 µM. Nesse sentido, o objetivo do nosso estudo foi avaliar moléculas com efeito antibiofilme para C. albicans, através de uma revisão de moléculas descritas na literatura, do período de 2011-2021, e da análise experimental de dois conjuntos de moléculas, um de tiossemicarbazonas e análogos e o outro de derivados de produtos naturais. Na revisão bibliográfica discutimos 21 artigos, que descreveram 42 moléculas. A maioria das moléculas se mostrou promissora para a inibição da formação de biofilme e com mecanismos de ação que englobavam alterações no processo de adesão, na transição levedura-hifa, no alongamento das hifas, na hidrofobicidade da superfície celular e na produção de componentes sensíveis ao quorum sensing. Esses resultados nortearam a parte experimental do trabalho, bem como a escolha de algumas moléculas testadas. Para o conjunto de tiossemicarbazonas e análogos, inovadoras perante a revisão, a molécula 28 destacou-se pela maior potência na inibição da formação do biofilme em 50% (CIB50 = 31,55 ± 1,18 µM), enquanto, para os derivados de produtos naturais, com grupos químicos semelhantes aos descritos na revisão, a molécula 6, identificada como jatrofona, destacou-se por apresentar maior potência de inibição (CIB50 = 64,36 ± 1,05 µM) e capacidade de erradicar biofilmes (CEB50 = 215,90 ± 1,07 µM). Os estudos de microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostraram que ambas as moléculas reduziram o número de células aderidas, hifas e pseudohifas formadas após exposição da CIB50, enquanto a jatrofona diminuiu a formação de hifas de biofilmes pré-formados na presença da CEB50. Assim, conseguimos determinar a família das tiossemicarbazonas e análogos, além da jatrofona, como modelos para futuros estudos que permitirão elucidar mais profundamente o mecanismo de ação dessas moléculas sobre o biofilme e otimizarão sua estrutura para aumentar a potência e seletividade.
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Biofilms are highly organized communities of microorganisms that are less susceptible to antimicrobials than planktonic cells. Their development comprises one of the main virulence factors of Candida albicans, one of the most isolated and studied species in infections caused by Candida sp. When associated with biofilms, the treatment of these infections becomes more complicated due to the need for higher concentrations of antifungals than those required in infections caused by planktonic cells. Thus, therapeutic choices, which are limited, require new alternatives, of which biofilm inhibition and eradication appear to be promising strategies. Molecules with antibiofilm activity have been studied, but without taking care to use important criteria such as inhibition concentration of biofilm formation lower than the antifungal concentration and concentrations equal to or lower than 300 µM. In this sense, the aim of our study was to evaluate molecules with an antibiofilm effect on C. albicans, through a review of molecules described in the literature from 2011-2021 and the experimental analysis of two sets of molecules, one of thiosemicarbazones and analogues and the other of derivatives of natural products. In the literature review we discussed 21 articles, which described 42 molecules. Most of the molecules showed promise for inhibiting biofilm formation and had mechanisms of action that included changes in the adhesion process, yeast-hyphae transition, hyphae elongation, cell surface hydrophobicity and the production of quorum sensing components. These results guided the experimental part of the work, as well as the choice of some of the molecules tested. For the set of thiosemicarbazones and analogues innovated in the review, molecule 28 stood out for its greater potency in inhibiting biofilm formation by 50% (BIC50 = 31.55 ± 1.18 µM). For derivatives of natural products with chemical groups similar to those described in the review, molecule 6, identified as jatrophone, stood out for its greater inhibition power (BIC50 = 64.36 ± 1.05 µM) and ability to eradicate biofilms (BEC50 = 215.90 ± 1.07 µM). Scanning electron microscopy (SEM) studies showed that both molecules reduced the number of adhered cells, hyphae and pseudohyphae formed after exposure to BIC50, while jatrophone reduced the formation of hyphae in preformed biofilm in the presence of BEC50. Thus, we were able to determine the family of thiosemicarbazones and analogues, as well as jatrophone, as models for future studies that will allow us to further elucidate the mechanism of action of these molecules on the biofilm and optimise their structure to increase potency and selectivity.
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Luíza Carolina França Opretzka
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Investigação do potencial terapêutico e análise patentária de linhagens de células-tronco mesenquimais e suas vesículas extracelulares para a dor neuropática
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Orientador : CRISTIANE FLORA VILLARREAL
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MEMBROS DA BANCA :
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CARLOS AMILCAR PARADA
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CRISTIANE FLORA VILLARREAL
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LUIZ FERNANDO FERRARI
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SIMONE GARCIA MACAMBIRA
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VICTOR DIOGENES AMARAL DA SILVA
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Data: 29/02/2024
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INTRODUÇÃO: A dor neuropática é uma síndrome de dor crônica que afeta uma significativa parcela da população e tem efeitos devastadores na qualidade de vida e atividade laboral dos pacientes. Apesar de existirem opções terapêuticas, grande parte dos pacientes se beneficia pouco ou não responde ao tratamento. Nesse sentido, o uso de terapias regenerativas com células-tronco mesenquimais e seus derivados pode vir a suprir essa lacuna terapêutica. OBJETIVOS: Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial terapêutico de uma linhagem de célula-tronco mesenquimal humana (MSC), uma linhagem derivada de MSC superexpressando o fator inibidor de leucemia (MSC-LIF), e suas vesículas extracelulares (VE-MSC e VE-LIF) na dor neuropática experimental, explorar os mecanismos associados aos efeitos antinociceptivos de MSC e VE-MSC, e realizar uma análise das patentes publicadas protegendo derivados de células-tronco. MÉTODOS: MSC obtidas de um biobanco foram modificadas geneticamente para superexpressar LIF e caracterizadas por citometria de fluxo e ensaios de diferenciação celular in vitro. As vesículas extracelulares foram isoladas por ultracentrifugação e caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão, análise de rastreamento de nanopartículas e Dotblot. As citocinas liberadas por macrófagos estimulados in vitro e tratados com MSC, VE-MSC, MSC-LIF ou VE-LIF foram quantificadas por ELISA. Utilizando-se do modelo de dor neuropática induzida por ligadura parcial do nervo ciático em camundongos C57Bl/6, o efeito antinociceptivo de todos os tratamentos foi avaliado pelos testes de Hargreaves e filamentos de von Frey. A função da marcha foi avaliada em esteira ergométrica. Camundongos knockout para interleucina-10 (IL-10 KO) e ensaios de antagonismo farmacológico com um antagonista seletivo de CXCR2 (SB225002; 1 mg/kg, i.p.) foram utilizados para investigar os mecanismos de ação das MSC e VE-MSC. Secções de medula espinal (L4-L5) e soro dos animais foram coletados para análise de citocinas e quimiocina por ELISA. Adicionalmente, a prospecção patentária sobre produtos de terapia cell-free derivados de MSC foi realizada usando o DWPI como base de dados. RESULTADOS: Os macrófagos tratados com MSC, VE-MSC, MSC-LIF ou VE-LIF apresentaram níveis de TNF-α reduzidos, enquanto a produção de IL-10 foi elevada, indicando a possível aplicação na neuropatia sensorial. Uma única injeção de MSC (1x106), VE-MSC (7,45x109 ± 2,25 x108 partículas/mL), MSC-LIF (1x106) e VE-LIF (2,47 x109 ± 7,13 x107 partículas/mL) proporcionou o alívio completo e duradouro da hipernocicepção térmica e a melhora de parâmetros funcionais de marcha. O tratamento com MSC e VE-MSC também aliviou completamente a hipernocicepção mecânica associada à neuropatia, por outro lado o tratamento com MSC-LIF e VE-LIF reduziu transitória e parcialmente os comportamentos nociceptivos mecânicos de camundongos neuropáticos. A participação de IL-10 no efeito terapêutico das MSC e das VE-MSC foi demonstrado levando em consideração que em camundongos IL-10 KO o efeito antinociceptivo foi apenas parcial em comparação com animais selvagens. Adicionalmente, os níveis de IL-10 estavam elevados na medula dos animais 14 dias após o tratamento com MSC e VE-MSC, mas não ao final do período experimental. Ainda, o tratamento agudo com SB225002, reverteu parcialmente o efeito antinociceptivo térmico das MSC e VE-MSC, enquanto a antinocicepção mecânica foi completamente revertida por esse antagonista. Entretanto, os níveis séricos de CXCL1, ligante de CXCR2, não apresentaram diferença entre os grupos experimentais 14 dias após o tratamento com MSC ou VE-MSC e estavam elevados apenas em animais neuropáticos ao final do tratamento. Em relação à busca de patentes, foram encontradas 150 famílias de patentes protegendo derivados de células-tronco mesenquimais, sendo a maior parte destas dedicada à proteção de vesículas extracelulares e exossomos. Houve um aumento exponencial destas patentes a partir de 2015. A China foi o país com o maior número de patentes aprovadas, seguida pelos Estados Unidos. CONCLUSÃO: O perfil de efeito das células-tronco e vesículas extracelulares foi bastante similar, evidenciando que vesículas extracelulares são capazes de mediar o efeito das células-tronco mesenquimais, mesmo as oriundas de células geneticamente modificadas. Ainda, a melhora tanto de parâmetros nociceptivos, como funcionais, pelo tratamento com MSC e a VE-MSC reforça a proposta de aplicação futura destas terapias para o tratamento da dor neuropática. Apesar da modificação genética de MSC via superexpressão de LIF ter sido deletéria para o efeito antinociceptivo de MSC, este trabalho avançou na compreensão do mecanismo de ação das MSC na dor neuropática, que parece envolver o aumento da produção da citocina anti-inflamatória IL-10 e ser mantida pela ativação de receptores CXCR2. Por fim, a análise de patentes também indicou um interesse crescente na pesquisa e desenvolvimento de produtos de terapia cell-free. Desta forma, este trabalho corrobora o potencial da terapia livre de células com vesículas extracelulares de MSC e sua aplicação na dor neuropática.
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INTRODUCTION: Neuropathic pain is a chronic pain syndrome that affects a significant proportion of the population and has devastating effects on patients' quality of life and work activity. Although there are therapeutic options, most patients benefit little or do not respond to treatment. Therefore, regenerative therapies with mesenchymal stem cells and their derivatives may help to fill this therapeutic gap. OBJECTIVES: This study aimed to evaluate the therapeutic potential of a human mesenchymal stem cell line (MSC), an MSC-derived line overexpressing the leukemia inhibitory factor (MSC-LIF) and their extracellular vesicles ( VE-MSC and VE-LIF) in a model of neuropathic pain. It also aimed to explore the mechanisms underlying MSC’s and VE-MSC’s antinociceptive effects. Additionally, we aimed to perform a patent mapping focusing on MSC’s derivatives. METHODS: MSCs obtained from a biobank were genetically modified to overexpress LIF and characterized by flow cytometry and in vitro cell differentiation assays. The extracellular vesicles were isolated by ultracentrifugation and characterized by transmission electron microscopy, nanoparticle tracking analysis, and Dotblot. Cytokines released by macrophages stimulated in vitro and treated with MSC, EV-MSC, MSC-LIF, or EV-LIF were quantified by ELISA. Using the model of neuropathic pain induced by partial ligation of the sciatic nerve in C57Bl/6 mice, the antinociceptive effect of all treatments was evaluated by Hargreaves and von Frey filaments tests. Gait function was assessed on a treadmill. Knockout mice for interleukin-10 (IL-10 KO) and pharmacological antagonism assays with a selective CXCR2 antagonist (SB225002; 1 mg/kg, i.p.) were used to investigate the mechanisms of action of MSC and EV-MSC. Sections of spinal cord (L4-L5) and serum from mice were collected for cytokine and chemokine analysis by ELISA. Additionally, DWPI data base was used to retrieved the patentes. RESULTS: Macrophages treated with MSC, EV-MSC, MSC-LIF, or EV-LIF showed reduced levels of TNFα, while IL-10 production was increased, indicating the possible application in sensory neuropathy. A single injection of MSC (1x106), EV-MSC (7.45x109 ± 2.25 x108 particles/mL), MSC-LIF (1x106) and EV-LIF (2.47 x109 ± 7.13 x107 particles/mL) provided complete and long-lasting relief of thermal hypernociception and improvement of gait functional parameters. Treatment with MSC and VE-MSC also completely relieved the mechanical hypernociception associated with neuropathy. Conversely, treatment with MSC-LIF and EV-LIF transiently and partially reduced the mechanical nociceptive behaviors of neuropathic mice. The participation of IL-10 in the therapeutical effect of MSC and EV-MSC was demonstrated since their antinociceptive effect was only partial in IL-10 KO mice compared to wild animals. In addition, IL-10 levels were elevated in the spinal cords of mice 14 days after treatment with MSC and EV-MSC but not at the end of the experimental period. In addition, acute treatment with SB225002 partially reversed the thermal antinociceptive effect of MSC and EV-MSC, while this antagonist completely reversed mechanical antinociception. However, serum levels of CXCL1, a CXCR2 ligand, did not differ between the experimental groups 14 days after treatment with MSC or EV-MSC and were elevated only in neuropathic animals at the end of treatment. Regarding the patent search, 150 families of patents protecting mesenchymal stem cell’s derivatives were found, most of which were dedicated to the protection of extracellular vesicles and exosomes. There was an exponential increase in these patents from 2015 onwards. China was the country with the highest number of approved patents, followed by the United States. CONCLUSION: The effect profile of stem cells and extracellular vesicles was quite similar, showing that extracellular vesicles can mediate the effect of mesenchymal stem cells, even those from genetically modified cells. In addition, the improvement of both nociceptive and functional parameters by treatment with MSC and EV-MSC reinforces the proposal for future application of these therapies for the treatment of neuropathic pain. Although the genetic modification of MSC via overexpression of LIF has been deleterious to the antinociceptive effect of MSC, this work has advanced the understanding of MSC’s mechanism of action in neuropathic pain, which seems to involve increased production of the anti-inflammatory cytokine IL-10 and to be maintained by the activation of CXCR2 receptors. Finally, patent analysis also indicated a growing interest of research and development of cell-free therapy products. Thus, this work corroborates the potential of cell-free therapy with MSC extracellular vesicles and its application in neuropathic pain.
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Larissa Santana de Jesus
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PLASMA RICO EM PLAQUETAS PARA O TRATAMENTO DA DOR NEUROPÁTICA: UMA REVISÃO SISTEMÁTICA
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Orientador : CRISTIANE FLORA VILLARREAL
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MEMBROS DA BANCA :
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CRISTIANE FLORA VILLARREAL
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FRANCINE JOHANSSON AZEREDO
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NEILA DE PAULA PEREIRA
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MARIANA NOUGALLI ROSELINO
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PAULO JOSE LIMA JUIZ
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Data: 23/05/2024
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A dor neuropática representa um desafio significativo para a saúde pública atual. Os tratamentos tradicionais envolvem principalmente medicamentos, mas essas abordagens frequentemente levam a resultados insatisfatórios, destacando a necessidade de explorar terapias alternativas. Entre estas, o plasma rico em plaquetas (PRP), um derivado autólogo do plasma enriquecido com plaquetas, vem sendo considerado muito promissor. Este artigo tem como objetivo revisar sistematicamente a literatura e fornecer uma avaliação atualizada da eficácia e segurança do tratamento com PRP no contexto das síndromes de dor neuropática. Seguindo as diretrizes do Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA), os estudos foram buscados nas bases de dados Web of Science, Embase, PubMed, Scopus e Cochrane Library. A elegibilidade dos estudos foi determinada com base nos critérios de população, intervenção, comparação, resultado e desenho do estudo. O risco de viés foi avaliado utilizando a ferramenta Cochrane Risk of Bias 2 (RoB2). Entre 1230 estudos identificados, 12 ensaios randomizados que atendiam aos critérios de elegibilidade foram incluídos. Dos estudos clínicos incluídos, 4 foram conduzidos com duplo cegamento, 6 com cegamento simples e 2 sem cegamento. O número total de participantes randomizados foi de 779, em sua maioria do sexo feminino, com média de idade de 50 anos. Cerca de 66% dos estudos investigaram o uso de PRP na condição dolorosa da síndrome do túnel do carpo. Todos os estudos utilizaram a escala visual analógica (VAS) para avaliar a intensidade da dor ao longo de períodos variáveis, entre 1 semana a 1 ano. O tratamento com PRP mostrou reduções significativas na escala de dor na maioria dos estudos, destacando-se em relação a outros tratamentos conservadores. Efeitos positivos do PRP foram observados em parâmetros associados à síndrome do túnel do carpo, como BCTQs, BCTQf, LPS, VCNS e AST do nervo mediano. Portanto, a maioria dos estudos indica que o PRP é eficaz no alívio da dor neuropática, sem relatos de complicações graves ou efeitos adversos significativos associados ao tratamento. Embora promissor em eficácia e segurança, conclusões definitivas aguardam novos estudos, dada a heterogeneidade metodológica e inconsistência encontrada.
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Neuropathic pain represents a significant challenge for current public health. Traditional treatments mainly involve medications, but these approaches often lead to unsatisfactory outcomes, highlighting the need to explore alternative therapies. Among the investigated therapeutic approaches, platelet-rich plasma (PRP), an autologous derivative of plasma enriched with platelets, has been considered highly promising. This article aims to systematically review the literature and provide an updated assessment of the efficacy and safety of PRP treatment in the context of neuropathic pain syndromes. Following the Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA) guidelines, studies were searched in the Web of Science, Embase, PubMed, Scopus, and Cochrane Library databases. Study eligibility was determined based on population, intervention, comparison, outcome, and study design criteria. Bias risk was assessed using the Cochrane Risk of Bias 2 (RoB2) tool. Among 1230 identified studies, 12 randomized trials meeting eligibility criteria were included. Of the included clinical studies, 4 were conducted with double-blinding, 6 with single-blinding, and 2 without blinding. The total number of randomized participants was 779, predominantly female, with a mean age of 50 years. Approximately 66% of studies investigated the use of PRP in the painful condition of carpal tunnel syndrome. All studies utilized the VAS scale to assess pain intensity over variable periods, ranging from 1 week to 1 year. PRP treatment showed significant reductions in pain scale in most studies, outperforming other conservative treatments. Positive effects of PRP were observed in parameters associated with carpal tunnel syndrome, such as BCTQs, BCTQf, LPS, VCNS, and AST of the median nerve. Therefore, most studies indicate that PRP is effective in relieving neuropathic pain, with no reports of serious complications or significant adverse effects associated with treatment. Although promising in efficacy and safety, definitive conclusions await further studies, given the methodological heterogeneity and inconsistency found.
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RAFAEL LEONNE CRUZ DE JESUS
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FORMULAÇÃO MICROEMULSIONADA CONTENDO MENTOL: UMA TERAPIA TÓPICA INOVADORA PARA DISFUNÇÃO ERÉTIL
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Orientador : DARIZY FLAVIA SILVA AMORIM DE VASCONCELOS
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MEMBROS DA BANCA :
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BRUNA APARECIDA SOUZA MACHADO
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CRISTIANE FLORA VILLARREAL
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DARIZY FLAVIA SILVA AMORIM DE VASCONCELOS
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LUCIANA LYRA CASAIS E SILVA
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SILVIA STANISCUASKI GUTERRES
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Data: 31/05/2024
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Introdução: Atualmente, a disfunção erétil é associada a doenças cardiovasculares, e alguns pacientes hipertensos não respondem bem à terapia convencional. A ativação do TRPM8 demonstrou relaxamento da artéria pudenda interna em ratos, sugerindo um potencial tratamento para a disfunção erétil relacionada à hipertensão. O mentol, um agonista do TRPM8, apresenta desafios de uso devido à sua solubilidade e volatilidade. O estudo buscou desenvolver e avaliar a eficácia de uma microemulsão contendo mentol para tratamento tópico da disfunção erétil em pacientes hipertensos, com foco nos tecidos eréteis. Metodos: Primeiramente, um diagrama pseudo-ternário foi criado para selecionar uma mistura específica de óleo, surfactante, co-surfactante e água. Essa mistura foi enriquecida com mentol e estudada detalhadamente. A microemulsão resultante foi modificada com a adição de goma xantana e sua influência foi investigada junto com o mentol. Análises por TEM, espalhamento dinâmico de luz e SAXS revelaram gotículas de diâmetro médio inferior e ensaios de estabilidade foram realizadas para avaliação da vida de prateleira do sistema microemulsionado durante 90 dias. Estudos em ratos SHR e Wistar de 10 semanas mostraram aplicação tópica diária de microemulsão contendo mentol por 21 dias na região peniana, com resultados analisados em tecidos do corpo cavernoso (CC), artéria pudenda (IPA) e artéria mesentérica superior (MES). Resultados: O diagrama pseudo-ternário foi usado para selecionar uma mistura de óleo, surfactante, co-surfactante e água. Essa mistura foi enriquecida com mentol e estudada detalhadamente. A microemulsão resultante foi modificada com a adição de XG. Análises por microscopia eletrônica de transmissão (TEM) mostraram gotículas com diâmetro médio inferior a 120 nm, confirmado por espalhamento dinâmico de luz e espalhamento de raios-X de pequeno ângulo (SAXS). A conformação da mistura foi de gotículas, conforme observado por SAXS e TEM. O tratamento tópico com mentol em ratos SHR com DE reduziu significativamente a pressão arterial, mas não afetou o desenvolvimento corporal. Diminuiu a responsividade a vasoconstritores no corpo cavernoso e aumentou a resposta a vasodilatadores. Também alterou a responsividade da artéria pudenda interna, mas não afetou a reatividade de artérias mais profundas, como a artéria mesentérica superior. Conclusão: Nossos dados indicam que a microemulsão tem potencial no tratamento da disfunção erétil associada à hipertensão. O tratamento tópico com mentol reduziu a pressão arterial e melhorou a responsividade das artérias, além de aumentar a eficácia do sildenafil. Estamos desenvolvendo uma terapia inovadora à base de mentol com grande promessa para intervenções futuras.
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Introduction: Currently, erectile dysfunction is associated with cardiovascular diseases, and some hypertensive patients do not respond well to conventional therapy. Activation of TRPM8 has shown relaxation of the internal pudendal artery in rats, suggesting a potential treatment for hypertension-related erectile dysfunction. Menthol, a TRPM8 agonist, poses challenges in use due to its solubility and volatility. This study aimed to develop and evaluate the efficacy of a menthol-containing microemulsion for topical treatment of erectile dysfunction in hypertensive patients, focusing on erectile tissues. Methods: Firstly, a pseudo-ternary diagram was created to select a specific mixture of oil, surfactant, co-surfactant, and water. This mixture was enriched with menthol and thoroughly studied. The resulting microemulsion was modified with the addition of xanthan gum, and its influence was investigated alongside menthol. Transmission electron microscopy (TEM), dynamic light scattering, and small-angle X-ray scattering (SAXS) analyses revealed droplets with a smaller average diameter. Stability assays were conducted to assess the shelf life of the microemulsion system for 90 days. Studies on 10-week-old SHR and Wistar rats involved daily topical application of menthol-containing microemulsion for 21 days on the penile region, with results analyzed in tissues from the corpus cavernosum (CC), internal pudendal artery (IPA), and superior mesenteric artery (SMA).
Results: The pseudo-ternary diagram was used to select a mixture of oil, surfactant, co- surfactant, and water. This mixture was enriched with menthol and thoroughly studied. The
resulting microemulsion was modified with the addition of XG. Transmission electron microscopy (TEM) analyses showed droplets with an average diameter smaller than 120 nm, confirmed by dynamic light scattering and small-angle X-ray scattering (SAXS). The mixture conformation was droplet-like, as observed by SAXS and TEM. Topical treatment with menthol in SHR rats with ED significantly reduced blood pressure but did not affect body development. It decreased responsiveness to vasoconstrictors in the corpus cavernosum and increased response to vasodilators. It also altered responsiveness of the internal pudendal artery but did not affect deeper arteries like the superior mesenteric artery. Conclusion: Our data suggest that the microemulsion holds potential in treating erectile dysfunction associated with hypertension. Topical menthol treatment reduced blood pressure and improved artery responsiveness, as well as enhancing sildenafil effectiveness. We are developing an innovative menthol-based therapy with promising prospects for future interventions.
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LILIANE BARRETO DA SILVA
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Efeitos dependentes e independentes de canais TRPV1 induzidos por capsaicina em um modelo pré-clínico de disfunção erétil associado a hipertensão.
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Orientador : DARIZY FLAVIA SILVA AMORIM DE VASCONCELOS
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MEMBROS DA BANCA :
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DARIZY FLAVIA SILVA AMORIM DE VASCONCELOS
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DENIS DE MELO SOARES
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QUIARA LOVATTI ALVES
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SAMIRA ITANA DE SOUZA
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ROSIMEIRE FERREIRA DOS SANTOS
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Data: 26/07/2024
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Introdução: No passado, a disfunção erétil era considerada, na maioria dos casos, um distúrbio psicogênico, mas evidências atuais sugerem que mais de 80% dos casos têm etiologia orgânica. Independente do evento precursor à doença, a disfunção erétil traz efeitos negativos nas relações interpessoais e na qualidade de vida. É importante ressaltar que a disfunção erétil é um indicador de disfunção endotelial sistêmica e do ponto de vista clínico, muitas vezes precede eventos de disfunção cardiovascular. Recentemente, estudos mostraram uma importante correlação entre a expressão dos canais TRPV1 e a fisiopatologia da hipertensão arterial e de doenças cardiovasculares. O objetivo desse estudo foi investigar o papel funcional dos canais TRPV1 em artérias pudendas e tecido cavernoso de animais com disfunção erétil (SHR) e seus respectivos controles normotensos (Wistar). Material e Métodos: Para investigar a expressão do canal TRPV1 e de proteínas que estão alteradas na corpora cavernosa de ratos espontaneamente hipertensos foram realizados ensaios de Western Blotting. Em outro conjunto de experimentos, foram realizados ensaios de reatividade na corpora cavernosa (CC) isoladas de ratos SHR e Wistar para investigar os mecanismos de ação envolvidos na ativação destes canais. Todos os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Uso Animal - ICS / UFBA (130/2017). Resultados: Os canais TRPV1 estão expressos na corpora cavernosa de ratos Wistar e SHR. Além disso, a expressão das proteínas p-38 MAPK e AKT foi maior nos ratos hipertensos quando comparado aos seus controles normotensos. Adicionalmente, mudanças na temperatura do banho, de 37 °C para uma temperatura que ativa os canais TRPV1 (41° °C), induziram uma redução significativa no tônus contraído em ratos normotensos e hipertensos. Além disso, a co-administração cumulativa de capsaicina em combinação com a temperatura de ativação dos canais TRPV1(41° C) aumentou a resposta relaxante em comparação com curva controle. A administração cumulativa de capsaicina (0.001 ρM a 300 µM) em tiras de corpus cavernosos pré-contraídos com fenilefrina, 10 μM, induziu relaxamento nos corpos cavernosos de ratos Wistar e SHR, e a presença do antagonista competitivo dos canais TRPV1 atenuou o efeito induzido por capsaicina em ratos espontaneamente hipertensos. Além disso, a presença do inibidor da oxido nítrico sintase (L- NAME; 100 µM), guanilato ciclase solúvel, ODQ (10 µM) e proteína cinase A (KT570 1µM), reduziu o efeito relaxante induzido por capsaicina em ratos hipertensos. No entanto, KT5823 (inibidor seletivo da PKG; 1 μM) não atenuou o efeito relaxante induzido por capsaicina em ratos Wistar e SHR em comparação com a curva controle. Além disso, a capsaicina atenuou o influxo de Ca2+ de maneira concentração-dependente, nos corpos cavernosos de ratos Wistar e SHR. A resposta adrenérgica foi alterada na presença de capsaicina nos corpos cavernosos. Além disso, a administração cumulativa de capsaicina (0,1 ρM a 300µM) em anéis de artéria pudenda pré-contraídos com fenilefrina (1μM), induziu vasorrelaxamento independente do endotélio. Conclusão: Os canais TRPV1 estão expressos na corpora cavernosa de ratos Wistar e SHR, e sua ativação térmica e química é capaz de relaxar esses tecidos. Além disso, foi observada maior sensibilidade dos canais TRPV1 na corpora cavernosa de ratos hipertensos em comparação com ratos normotensos. O efeito relaxante induzido por capsaicina envolve a ativação da oxido nítrico sintase, guanilato ciclase solúvel e PKA. Curiosamente, foi observada maior sensibilidade dos canais TRPV1 corpora cavernosa de ratos hipertensos em comparação com ratos normotensos, sugerindo que a ativação destes canais pode ser uma estratégia promissora para o tratamento da DE associada à hipertensão.
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Introduction: In the past, erectile dysfunction was considered, in most cases, a psychogenic disorder, but current evidence suggests that more than 80% of cases have an organic etiology. Regardless of the precursor event to the disease, erectile dysfunction has negative effects on interpersonal relationships and quality of life. It is important to highlight that erectile dysfunction is an indicator of systemic endothelial dysfunction and from a clinical point of view, it often precedes a cardiovascular event. Recently, studies have shown an important correlation between the expression of TRPV1 channels and the pathophysiology of arterial hypertension and cardiovascular diseases. The aim of this study was to investigate the functional role of TRPV1 channels in pudendal arteries and cavernous tissue of animals with erectile dysfunction (SHR) and their respective normotensive controls (Wistar). Material and Methods: To investigate the expression of the TRPV1 channel and proteins that are altered in the corpora cavernosa of spontaneously hypertensive rats, Western Blotting assays were performed. In another set of experiments, reactivity assays were performed on the corpora cavernosa (CC) isolated from SHR and Wistar rats to investigate the mechanisms of action involved in the activation of these channels. All experimental protocols were approved by the Animal Use Ethics Committee - ICS / UFBA (130/2017). Results: TRPV1 channels are expressed in the corpora cavernosa of Wistar and SHR rats. Furthermore, the expression of p-38 MAPK and AKT proteins was higher in hypertensive rats when compared to their normotensive controls. Additionally, changes in bath temperature, from 37°C to a temperature that activates TRPV1 channels (41°°C), induced a significant reduction in contractile tone in normotensive and hypertensive rats. Furthermore, the cumulative co-administration of capsaicin in combination with the TRPV1 channel activation temperature (41° C) increased the relaxing response compared to the control curve. The cumulative administration of capsaicin (0.001 ρM to 300 µM) in corpus cavernosum strips pre-contracted with phenylephrine, 10 µM, induced relaxation in the corpora cavernosa of Wistar and SHR rats, and the presence of the competitive TRPV1 channel antagonist attenuated the induced effect by capsaicin in spontaneously hypertensive rats. Furthermore, the presence of nitric oxide synthase inhibitor (L-NAME; 100 µM), soluble guanylate cyclase, ODQ (10 µM), and protein kinase A (KT570 1µM), reduced the relaxing effect induced by capsaicin in hypertensive rats. However, KT5823 (selective PKG inhibitor; 1 μM) did not attenuate the relaxing effect induced by capsaicin in Wistar and SHR rats compared to the control curve. Moreover, capsaicin attenuated Ca2+ influx in a concentration-dependent manner, in corpora cavernosa from Wistar and SHR rats. The adrenergic response was changed in the presence of capsaicin in the corpora cavernosa. In addition, cumulative administration of capsaicin (0.1 ρM to 300µM) in pre-contracted pudendal artery rings with phenylephrine (1μM), induced endothelium-independent vasorelaxation Conclusion: TRPV1 channels are expressed in the corpora cavernosa of Wistar and SHR rats, and their thermal and chemical activation is capable of relaxing these tissues. Furthermore, greater sensitivity of TRPV1 channels was observed in the corpora cavernosa of hypertensive rats compared to normotensive rats. The relaxing effect induced by capsaicin involves the activation of nitric oxide synthase, soluble guanylate cyclase, and PKA. Interestingly, greater sensitivity of TRPV1 corpora cavernosa channels was observed in hypertensive rats compared to normotensive rats, suggesting that activation of these channels may be a promising strategy for treating ED associated with hypertension.
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Valdeene Vieira Santos
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MODELAGEM FARMACOCINÉTICA/ FARMACODINÂMICA DA ASSOCIAÇÃO ARTESUNATO E MEFLOQUINA
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Orientador : FRANCINE JOHANSSON AZEREDO
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MEMBROS DA BANCA :
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ANDREA DINIZ
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BIBIANA VERLINDO DE ARAUJO
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FRANCINE JOHANSSON AZEREDO
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HENRIQUE RODRIGUES MARCELINO
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LUCIANA SANTOS CARDOSO
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Data: 30/07/2024
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A malária é uma doença infecciosa causada por protozoários do gênero Plasmodium, e apesar ser tratada e evitada, ainda ocasiona um alto índice de mortalidade no mundo. A utilização de fármacos antimaláricos seguros e eficazes é essencial para a redução da mortalidade, principalmente considerando que a estratégia atual de controle está baseada no diagnóstico precoce e no tratamento adequado dos casos. A terapia combinada artesunato-mefloquina (AR-MQ) é uma terapia padrão para o tratamento da malária não complicada por P. falciparum, com eficácia terapêutica e ação frente a forma recorrente do Plasmodium. Apesar disso, ainda é necessário o entendimento dos parâmetros norteadores da posologia a serem utilizados e da eficácia quando os fármacos são avaliados em associação. Com isso, o objetivo deste trabalho foi estabelecer um modelo farmacocinético/farmacodinâmico (PK/PD) populacional relacionando a parasitemia a concentração plasmática total da terapia combinada AR- MQ. Para alcançar esse objetivo, camundongos Swiss infectados com P. berghei foram divididos aleatoriamente em grupo controle e tratado, que receberam 100 mg/kg de AR + 55 mg/kg de MQ por via oral, dose única, coletado amostras de plasma para análise farmacocinética e avaliados a % de parasitemia. Com os dados de sobrevivência obtidos foi realizada a análise Time-to-event (TTE). A análise PK/PD foi conduzido usando MonolixSuite™ versão 2024R1 por meio do método mixed-effects models. O perfil de concentração versus tempo do AR e MQ foram descritos por um modelo de 1 compartimento, constante de absorção (ka) para o AR e absorção de ordem zero para a MQ, com eliminação linear. Um modelo turnover de inibição descreveu a curva de efeito no tempo adequadamente, com estimativa das constantes kprol e kdeath de 26,36 e 0,024 h -1 , respectivamente, IC50 42,34 µg/mL e Imax 333,34 para o AR e IC50 de 0,086 µg/mL e Imax 1,42 para MQ. A análise TTE, análise para avaliar a influência do tratamento na sobrevivência, também foi realizada no MonolixSuite™. A curva de sobrevivência dos dados foi melhor descrita pelo modelo Weibull. A análise subsequente identificou que o AR-MQ teve influência significativa no Te_pop, estimado em 13,66 dias, no p_pop em 4,39 dias e no beta Te_ARMQ em 0,77 dias. A probabilidade de sobrevivência 7, 15 e 30 dias após o tratamento com AR-MQ foi de 94,4%, 88,9% e 14,9%, respectivamente. Como conclusão, este estudo desenvolveu um modelo PK/PD para a descrição da curva de efeito-tempo após administração única da associação AR-MQ em camundongos infectados por P. berghei, tendo potencial de aplicação para futuras investigações pré-clínicas e além de descrever a maior sobrevivência dos animais quando administrado a associação.
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Malaria is an infectious disease caused by protozoa of the genus Plasmodium, and Despite being treated and avoided, it still causes a high mortality rate worldwide. The use of safe and effective antimalarial drugs is essential for reducing mortality, especially considering that the current control strategy is based on early diagnosis and adequate treatment of cases. Artesunate-mefloquine combination (AR-MQ) is a standard therapy for treating malaria uncomplicated by P. falciparum, with therapeutic efficacy and action against a recurrent form of Plasmodium. Despite this, it is still necessary to understand the parameters guiding the dosage and effectiveness when drugs are evaluated in combination. Therefore, this work aimed to establish a population pharmacokinetic/pharmacodynamic (PK/PD) model relating parasitemia to the total plasma concentration of AR- combined therapy MQ. To achieve this objective, Swiss mice infected with P. berghei were randomly divided into control and treated groups, which received 100 mg/kg of AR + 55 mg/kg of MQ orally, single dose, plasma samples collected for analysis pharmacokinetics and evaluated the % of parasitemia. A time-to-event (TTE) analysis was performed using the survival data obtained. A PK/PD modeling was conducted using MonolixSuite™ version 2024R1 using the mixed-effects models method. The profile of concentration versus time of AR and MQ was described by a 1-compartment absorption constant (ka) for AR and zero-order absorption for MQ, with linear elimination. A turnover inhibition model described the effect over time appropriately, with an estimate of the kprol and kdeath constants of 26.36 and 0.024 h -1, respectively, IC50 42.34 µg/mL and Imax 333.34 for AR and IC50 of 0.086 µg/mL and Imax 1.42 for MQ. TTE analysis, analysis to evaluate the influence of survival treatment, was also performed in MonolixSuite™. The Weibull model best described the curve of Data survival. The analysis subsequently identified that AR-MQ significantly influenced Te_pop, estimated at 13.66 days, in p_pop in 4.39 days, and in beta Te_ARMQ in 0.77 days. The probability of survival 7, 15, and 30 days after treatment with AR-MQ was 94.4%, 88.9%, and 14.9%, respectively. In conclusion, this study developed a PK/PD model for describing the effect-time curve after a single administration of AR-MQ association in mice infected by P. berghei, which has the potential to be applied for future preclinical investigations and in addition to describing the most significant animal survival when administered the association.
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NATHÁLIA RIBEIRO DOS SANTOS
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Exposição pré e pós-natal a agrotóxicos e seu impacto no desenvolvimento neuroendócrino em crianças aos 12 meses de idade: Um estudo de coorte no Recôncavo Baiano.
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Orientador : JOSE ANTONIO MENEZES FILHO
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MEMBROS DA BANCA :
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CARMEN ILDES RODRIGUES FRÓES ASMUS
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LEANDRO MIRANDA ALVES
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Carlos José Sousa Passos
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JOSE ANTONIO MENEZES FILHO
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LIZ OLIVEIRA DOS SANTOS
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Data: 22/11/2024
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Os agrotóxicos têm sido globalmente utilizados, gerando crescente preocupação quanto aos seus efeitos na saúde ambiental e humana, especialmente em populações vulneráveis como gestantes e crianças. Muitos desses compostos são conhecidos disruptores endócrinos com potencial prejudicial ao neurodesenvolvimeto (ND) infantil. O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição pré e pós-natal a agrotóxicos e seus efeitos endócrinos e no ND de crianças em uma região do Recôncavo Baiano, Brasil. Inicialmente, realizamos uma revisão sistemática sobre a exposição ao glifosato (GLI), um dos herbicidas mais utilizados na região, e seu impacto no neurodesenvolvimento infantil e em animais. Revisamos catorze artigos originais, sendo doze experimentais e dois epidemiológicos. Os estudos epidemiológicos não determinaram concentração de GLI, apenas realizaram estimativa matemática da exposição, e nenhum deles foi realizado no Brasil. Apesar de os estudos em animais demonstrarem déficit no desenvolvimento neurológico, ainda há necessidade de mais pesquisas para compreender plenamente o impacto do GLI no ND infantil, principalmente em estudos epidemiológicos. Posteriormente avaliamos o panorama de exposição aos resíduos de agrotóxicos nas gestantes e seus infantes, medindo as moléculas mães em amostras de soro por HPLC-MS/MS. Foram destacados aqueles com importância na saúde endócrina e neurocognitiva, e avaliamos a frequência alimentar na gestação como forma de estimar a exposição a determinados agentes tomando como base valores reportados em avaliação da ANVISA. Detectamos agrotóxicos em 4,7% das gestantes e em 27,6% dos infantes. Lufenuron foi o agrotóxico mais frequente detectado nas crianças. Hipotetizamos que esta exposição seja por via dérmica devido ao contato com animais de estimação tratado para ectoparasitas. No que tange às gestantes, monocrotofos, tebuconazol, triciclazol e vamidotiona foram detectados em menores proporções. Finalmente, exploramos as associações entre as concentrações de hormônios tireoidianos e o ND infantil. Os níveis séricos de hormônio tireoestimulante (TSH), tiroxina livre (T4L) e triiodotironina total (TT3) foram analisados nas gestantes e crianças em média aos 19 meses. A Escala Bayley de Desenvolvimento Infantil e Juvenil, 3ª edição (BSID-III) foi aplicada para avaliação do ND. Hormônios tireoidianos encontraram-se dentro dos valores de normalidade, apesar de algumas alterações terem sido observadas. Níveis elevados de T4L em crianças foram associados a melhorias nas habilidades motoras, particurlamente entre os meninos. As concentrações de TT3 em gestantes correlacionaram-se positivamente com desempenho na linguagem, enquanto níveis de TSH foram inversamente correlacionados com o desenvolvimento linguístico. Por fim, observamos também uma associação não-linear entre os níveis de TSH em crianças e o desenvolvimento motor. Em conjunto, este trabalho proporciona uma avaliação das associações entre a exposição a agrotóxicos, a função tireoidiana materno-infantil, e o ND. Os resultados destacam a importância da saúde tireoidiana materna durante a gravidez, considerando sua influência no ND infantil. A detecção de pesticidas com propriedades disruptivas endócrinas e efeitos deletérios no ND sublinha a necessidade urgente de intervenções direcionadas, monitoramento contínuo e novas pesquisas para proteger as populações mais vulneráveis e aprofundar o entendimento dessas interações complexas.
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Pesticides have been used globally, generating growing concern about their effects on environmental and human health, especially on vulnerable populations such as pregnant women and children. Many of these compounds are known endocrine disruptors with potential harm to children's neurodevelopment (ND). The objective of this study was to evaluate pre- and postnatal exposure to pesticides and their endocrine and ND effects in children in a region of Recôncavo Baiano, Brazil. Initially, we carried out a systematic review on exposure to glyphosate (GLY), one of the most used herbicides in the region, and its impact on child and animal ND. We reviewed fourteen original articles, twelve of which were experimental and two were epidemiological. Epidemiological studies did not determine GLY concentration, they only performed a mathematical estimate of exposure, and none of them were carried out in Brazil. Although animal studies demonstrate deficits in neurological development, there is still a need for more research to fully understand the impact of GLY on childhood ND, especially in epidemiological studies. Subsequently, we evaluated the panorama of exposure to pesticide residues in pregnant women and their infants, measuring the mother molecules in serum samples by LC-MS/MS. Those with importance in endocrine and neurocognitive health were highlighted, and we evaluated food frequency during pregnancy as a way of estimating exposure to certain agents based on values reported in an ANVISA evaluation. We detected pesticides in 4.7% of pregnant women and 27.6% of infants. Lufenuron was the most common pesticide detected in children. We hypothesize that this exposure is dermal due to contact with pets treated for ectoparasites. Regarding pregnant women, monocrotophos, tebuconazole, tricyclazole and vamidothione were detected in smaller proportions. Finally, we explored associations between thyroid hormone concentrations in mothers and their children and childhood ND. Serum levels of thyroid-stimulating hormone (TSH), free thyroxine (FT4) and total triiodothyronine (TT3) were analyzed in pregnant women and children at an average of 19 months. The Bayley Scale of Infant Development, 3rd edition (BSID-III) was applied to assess ND. Thyroid hormones were within normal values, although some changes were observed. Elevated FT4 levels in children have been associated with improvements in motor skills observed among boys. TT3 concentrations in pregnant women were positively correlated with language performance, while TSH levels were inversely correlated with linguistic development. Finally, we also observed a non-linear association between TSH levels in children and motor development. Taken together, this work provides an assessment of the associations between pesticide exposure, maternal and child thyroid function, and ND. The results highlight the importance of maternal thyroid health during pregnancy, considering its influence on infant ND. The detection of pesticides with endocrine-disrupting properties and deleterious effects in ND underscores the urgent need for targeted interventions, ongoing monitoring, and new research to protect the most vulnerable populations and deepen understanding of these complex interactions.
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VICTOR OTERO MARTINEZ
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IMPACTO DAS INFECÇÕES MATERNAS CRÔNICAS: Associações entre a soropositividade materna para anticorpos IgG contra Toxoplasma gondii com restrição no crescimento fetal e efeitos no neurodesenvolvimento infantil
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Orientador : JOSE ANTONIO MENEZES FILHO
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MEMBROS DA BANCA :
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CARINA CARVALHO DOS SANTOS
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CHRISSIE FERREIRA DE CARVALHO
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GEYANNA DOLORES LOPES NUNES
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JOSE ANTONIO MENEZES FILHO
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MARCIA CRISTINA AQUINO TEIXEIRA
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Data: 06/12/2024
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Mostrar Resumo
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A hipótese da ativação imune materna sugere que a exposição a um meio imunológico materno alterado no útero afeta o neurodesenvolvimento fetal. Embora diversos agentes infecciosos estejam associados a um risco elevado de distúrbios específicos, evidências acumuladas sugerem que este processo, mesmo na ausência de um episódio infeccioso agudo, pode aumentar a suscetibilidade a uma ampla gama de patologias do sistema nervoso central (SNC). Este estudo teve como objetivo revisar sistematicamente a literatura científica sobre as associações entre a ativação imunológica materna induzida por agentes infecciosos, particularmente nos casos em que a doença aguda não está presente, e as alterações subsequentes no neurodesenvolvimento na população humana. Revisamos e resumimos os estudos publicados desde 1990. Os descritores utilizados foram relacionados às infecções maternas e a desfechos no neurodesenvolvimento ou doença mental; as principais bases de dados da literatura médica foram acessadas. Foram revisados 61 artigos, dos quais 13 (21,3%) discutiram a ativação do sistema imune materno mediada por infecções crônicas/latentes e a associação com alterações no neurodesenvolvimento e/ou doença mental. Estudos associam a presença de marcadores maternos, como anticorpos IgG anti-Herpes vírus tipo 2, ao aumento do risco de Transtorno do Espectro Autista. Além disso, há evidências de associações entre infecções maternas crônicas/latentes e risco aumentado de esquizofrenia, com destaque para Herpes vírus tipo 2 e Toxoplasma gondii. No entanto, a heterogeneidade dos estudos e a falta de investigações sobre a interação entre fatores genéticos e ambientais limitam a generalização dos resultados. A presente revisão sugere a importância de monitorar e intervir durante a gravidez em relação a infecções crônicas/latentes. Todavia, novos estudos longitudinais são necessários para entender melhor os mecanismos subjacentes e como diferentes patógenos influenciam o desenvolvimento neurológico, considerando também fatores genéticos e ambientais.
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The maternal immune activation hypothesis suggests that exposure to an altered maternal immune environment in utero affects fetal neurodevelopment. Although various infectious agents are associated with an increased risk of specific disorders, accumulated evidence indicates that this process, even in the absence of an acute infectious episode, can increase susceptibility to a wide range of central nervous system pathologies. This study aimed to systematically review the scientific literature on the associations between maternal immune activation induced by infectious agents, particularly in cases where acute illness is not present, and subsequent neurodevelopmental alterations in the human population. We reviewed and summarized studies published since 1990. The descriptors used were related to maternal infections and neurodevelopmental outcomes or mental illness; major medical literature databases were accessed. A total of 61 articles were reviewed, of which 13 (21.3%) discussed maternal immune system activation mediated by chronic/latent infections and its association with neurodevelopmental alterations and/or mental illness. Studies associate the presence of maternal markers, such as IgG antibodies against Herpes simplex virus type 2, with an increased risk of Autism Spectrum Disorder. Additionally, there is evidence of associations between chronic/latent maternal infections and an increased risk of schizophrenia, with particular emphasis on Herpes simplex virus type 2 and Toxoplasma gondii. However, the heterogeneity of the studies and the lack of investigations into the interaction between genetic and environmental factors limit the generalization of the results. This review suggests the importance of monitoring and intervening during pregnancy concerning chronic/latent infections. Nevertheless, new longitudinal studies are needed to better understand the underlying mechanisms and how different pathogens influence neurological development, also considering genetic and environmental factors.
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