RESUMO
INTRODUÇÃO. As alterações elastofibromatosas do trato gastrointestinal caracterizam-se, em geral, como pólipos com acúmulo anômalo de fibras elásticas, sobretudo na submucosa. São pouco estudadas e descritas como casos isolados ou pequenas séries. A maior série relata 13 casos. Não há publicação de casos no Brasil. Com o uso sistemático de colonoscopia na prevenção e detecção precoce de câncer colorretal, lesões polipoides com características dessa alteração têm sido vistas, mas parecem ser subdiagnosticadas. Os diagnósticos diferenciais são importante na prática dos gastroenterologistas e patologistas. Sua patogênese ainda não foi esclarecida. OBJETIVO. Descrever as características clínicas e histopatológicas de uma série de casos de alteração elastofibromatosa colorretais vistos em um laboratório de referência em patologia gastrointestinal. Verificar sua frequência em colonoscopias com biópsias submetidas à avaliação histopatológica. A partir das observações morfológicas especular sobre a possível patogênese dessa alteração. MATERIAL E MÉTODOS. Estudo descritivo de uma série de casos diagnosticados em um laboratório de Salvador-Bahia, referência em patologia gastrointestinal no período de janeiro de 2016 a outubro de 2023. Os laudos foram revistos e anotadas informações de idade, sexo, manifestações clínicas, indicação do exame, topografia e descrição endoscópica das lesões. As lâminas histológicas, coradas pela hematoxilina e eosina, além de colorações especiais para identificação das fibras elásticas e matriz conjuntiva (Orceína, Weigert Van Gieson e tricrômico de Masson) e de depósitos amiloides (vermelho Congo), foram revistas. Em oito casos se fez avaliação imunoistoquímica com CD34 e anticorpo anti-músculo liso para caracterização de vasos sanguíneos nas lesões. RESULTADOS. Em 26 laudos foram identificadas 27 lesões como elastose e/ou alteração elastofibromatosa em topografia de intestino grosso. Um paciente tinha duas lesões sincrônicas. Vinte e seis lesões foram identificadas pela coloração com Hematoxilina-Eosina em conjunto com colorações para fibras elásticas. Uma lesão requereu avaliação imunoistoquímica para o diagnóstico diferencial com neoplasias mesenquimais. Onze pacientes eram do sexo masculino e 16 do sexo feminino. A média etária foi de 60,31 anos (variando de 49 e 73 anos). Todas as lesões foram identificadas como pólipos à endoscopia. Para o eventual diagnóstico diferencial com amiloidose, utilizou-se a coloração pelo vermelho Congo com observação à luz polarizada. A avaliação imunoistoquímica com marcadores de vasos sanguíneos mostrou associação da lesão com vasos sanguíneos anômalos, consistentes com malformações vasculares. Em nenhum dos casos estudados houve referência a elastoses extra intestinais. CONCLUSÃO: Pólipos com alteração elastofibromatosas são diagnosticados em serviços que recebem grande volume de pólipos de cólon e reto para avaliação histopatológica. Nesta série de casos, estas lesões foram identificadas em 0,03% dos exames de colonoscopia realizados no período de janeiro de 2016 a outubro de 2023. Suas características morfológicas são distintas
de pólipos de natureza epitelial neoplásica ou não neoplásica, bem como de outros pólipos de natureza mesenquimal e devem ser reconhecidos pelos patologistas. O diagnóstico é suspeitado em secções coradas pela hematoxilina-eosina e confirmado pelo uso de método histoquímico para fibras elásticas. As características histopatológicas são distintas dos acúmulos amiloides e, quando necessária, a coloração pelo Vermelho Congo exclui essa possibilidade. Em nossa série, todos os casos tinham localização submucosa e vários deles mostravam características semelhantes aos pólipos mucosos-submucosos com anomalias vasculares, notando-se vasos com paredes musculosas, maiores que os normais na submucosa. A análise histopatológica acrescida da avaliação imunoistoquímica sugere que a alteração elastótica está relacionada à parede de vasos anômalos com deposição aumentada e desorganizada de fibras elásticas e outros elementos da matriz conjuntiva. Associada, há redução da luz dos vasos, não apenas pelo acúmulo de fibras elásticas, mas também pela deposição de matriz conjuntiva, sugerindo que esses vasos anômalos, em suas porções mais distais, sofreram trombose e um processo de organização anômala com redução ou desaparecimento da luz vascular. Nossos dados sugerem uma associação entre esses pólipos elastofibromatosa com anomalias vasculares focais na submucosa do intestino grosso. Dado ao seu aspecto polipoide e relação com vasos, sugere-se que a denominação angioelastose polipoide seja utilizada.

RESUMO
Leishmania spp. infectam diversos hospedeiros vertebrados, incluindo o homem. As doenças causadas por este protozoário, as leishmanioses, podem apresentar diferentes tipos de manifestações clínicas, desde lesões localizadas na pele que cicatrizam espontaneamente, lesões de pele, que se espalham de forma disseminada, a forma mucocutânea da doença, além da leishmaniose visceral, forma mais grave que podem levar à morte se não tratada. A disseminação e homing de células infectadas contendo antígenos de Leishmania são fundamentais para a sobrevivência deste parasito no hospedeiro e para o estabelecimento da lesão. Ainda hoje, pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na adesão da célula hospedeira e sua migração na infecção por este protozoário. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a migração de monócitos, macrófagos e células dendríticas humanas na infecção por Leishmania e os mecanismos envolvidos nesse processo. Células hospedeiras humanas oriundas de doadores saudáveis foram obtidas, infectadas por diferentes espécies de Leishmania e submetidas a migração direcional e randômica por sistema transwell e em tempo real, respectivamente. Avaliamos ainda a formação de complexos de adesão pela imunomarcação de p-FAK e p-paxilina. Adicionalmente, investigamos a dinâmica de actina por meio de análise da expressão de Rac1, Rho-A, Cdc42 e marcação por faloidina nestas células, bem como a formação de podossomos por meio da imunomarcação de vinculina. Por fim, investigamos o papel da via de sinalização associada a AKT/PI3K na migração de células hospedeiras infectadas por estes parasitos, através da análise da expressão desta proteína por western blot, além do efeito da inibição dessa via na migração de células hospedeiras infectadas. Nossos dados mostram uma redução na migração bidimensional de monócitos e macrófagos humanos infectados por L. amazonensis, L. braziliensis ou L. infantum, associado a uma redução na formação de complexos de adesão, podossomos e dinâmica de actina nestas células. Entretanto, observamos um aumento na migração de células dendríticas infectadas por L. infantum ou isolados de Leishmania oriundos de pacientes com a forma disseminada ou difusa da doença. Adicionalmente, observamos que o aumento da migração nessas células está associado a um aumento na formação de complexos de adesão, podossomos, dinâmica de actina e expressão de CCR7. Por fim, observado que a infecção por Leishmania induz a ativação da via de AKT/PI3K. Em conjunto, nossos dados apontam para um papel de células dendríticas, mas não de macrófagos e monócitos na disseminação de Leishmania no hospedeiro vertebrado.

INTRODUÇÃO: O carcinoma oral de células escamosas (CECO) é um problema de saúde mundial. As interações celulares contribuem para a agressividade tumoral através de mecanismos como a formação de estruturas cell-in-cell (CIC). No entanto, somente com o desenvolvimento dos modelos in vitro 3D, se tornou possível estudar a biologia desses eventos. OBJETIVO: O objetivo deste trabalho é estudar o modelo de magnetização celular (bioprinting) de esferoides como ferramenta para avaliação das estruturas cell-in-cell em carcinoma oral de células escamosas. MATERIAIS E MÉTODOS: A linhagem metastática de CECO (HSC3) e os linhagem de fibroblastos associados ao câncer (FACs) (CAF1) foram selecionadas para obtenção de esferoides tumorais utilizando o sistema de bioprinting com NanoshuttlesTM (Greiner Bio-One). Em placas repelentes de 24 poços (Greiner Bio-One), as células foram plaqueadas em grupos de esferoides homotípicos e heterotípicos. O protocolo de plaqueamento foi modificado para eliminar a etapa de levitação e reduzir o número de beads magnéticas. Os esferoides foram avaliados nos tempos de 6h, 12h, 24h, 48h e 72h (Evos™ XL) e suas medidas unidimensionais foram registradas (Image J versão 1.8). Os esferoides foram seccionados para obtenção de lâminas e foram submetidos ao processamento e coloração com hematoxilina e eosina (H/E). As lâminas foram escaneadas (Axio Imager Z2/VSLIDE) e as análises foram feitas por meio do visualizador OlyVIA. Avaliação histomorfológica foi realizada considerando morfologia celular e formação de zonas tumorais (zonas de hipóxia e proliferativa). A contagem de estruturas CIC foi realizada considerando a porcentagem de eventos CIC pelo número total de células em áreas de centro e periferia dos esferoides. Para identificação das estruturas CIC, foi considerado o padrão morfológico de “anel de sinete” ou “olho de pássaro”. RESULTADOS: Com apenas 6h de bioprinting, já houve formação de esferoides tumorais. O protocolo modificado permitiu a formação de esferoides homotípicos e heterotípicos de tamanho e integridade reprodutíveis. Na análise das colorações em H/E, observou-se reprodução da espacialidade e morfologia compatível com o microambiente tumoral, com formação de zonas de hipóxia (centro) e proliferação (periferia). Foi observado afrouxamento e hipercromatismo celular na periferia dos esferoides. Estruturas CIC foram localizadas em todos os grupos, predominantemente na zona proliferativa dos esferoides mistos com FACs. Foram registrados eventos de “canibalismo complexo”, nos quais uma célula englobada contém outra em seu interior. CONCLUSÃO: O modelo de bioprinting viabiliza a obtenção de esferoides tumorais homotípicos e heterotípicos que reproduzem características histomorfológicas do carcinoma oral de células escamosas. A ocorrência de estruturas CIC foi maior na presença dos FACs e na zona proliferativa dos esferoides. Este modelo pode ser utilizado no aprofundamento dos estudos dos eventos CIC, dos seus mecanismos de formação e na sua relação com marcadores de prognóstico tumoral.

RESUMO

INTRODUÇÃO: As leishmanioses são doenças de importância para a saúde pública, endêmicas em cerca de 98 países, afeta 12 milhões de pessoas em todo o mundo. No Brasil, a forma clínica prevalente é LCL, e o principal agente etiológico é a Leishmania braziliensis. O controle e a patologia na LCL são determinados por uma complexa interação entre uma variedade de tipos celulares e fatores solúveis, associados as respostas celulares Th1/Th2/Th17, que é pouco compreendida. Nesse sentido, análise e comparação dos perfis imunológicos de diferentes compartimentos biológicos, pode ser útil para entender a interação e a ativação do sistema imune, e os mecanismos associados à resposta sistêmica e in situ. OBJETIVO: Caracterizar e identificar a resposta imune predominante na Leishmaniose Cutânea Localizada Humana causada por L. braziliensis. MÉTODO: Avaliamos a resposta imune sistêmica e in situ de pacientes com LCL recrutados em uma clínica de referência de Jiquiriçá, área endêmica da Bahia. Amostras de plasma e biópsia de lesões, foram utilizadas para realização de imunoensaios por Luminex™ para identificação dos níveis de citocinas, quimiocinas, fatores de crescimento e receptores solúveis. RESULTADOS: Os resultados mostraram uma predominância do perfil Th1 em pacientes com LCL, com altos níveis de moléculas pró-inflamatórias e regulatórias. O plasma de pacientes com LCL apresentaram um aumento significativo de IL-8, IL-1β, TNF-α, IL-6, MIP-1α, MIP-1β, GMCSF, VEGF e TGFβ-1. Na lesão encontramos um aumento significativo de IL-8, IL-6, TNF-α, IL-1β, IFN-γ, IL-12(P40), IL-17A, IL-2, IL-7, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, IP-10, Eotaxina, G-CSF, GM-CSF e VEGF e IL-10. Apenas os receptores sIL-2Rα e sTNFRII apresentaram níveis significativamente aumentados na biópsia da lesão. CONCLUSÃO: Foi possível evidenciar que os perfis de resposta imune sistêmica e local da LCL são convergentes, entretanto a resposta imune local é mais expressiva. A resposta imune predominante, na fase tardia, é do tipo Th1, mediada por moléculas inflamatórias, porém elementos regulatórios e receptores solúveis podem modular o possível dano causado pela inflamação.

RESUMO
INTRODUÇÃO: A leishmaniose é uma doença tropical causada pelo protozoário intracelular obrigatório do gênero Leishmania. Diferentes espécies de Leishmania desenvolveram mecanismos distintos de evasão imune, como a interrupção da sinalização celular e de processos metabólicos, afim de obter uma infeção efetiva nas células mononucleares do hospedeiro. No entanto, como as diferentes espécies de Leishmania impactam no metabolismo celular do hospedeiro permanece pouco compreendido. OBJETIVO: Assim, o objetivo deste estudo é dissecar a assinatura metabólica das duas espécies de Leishmania: L. amazonensis e L. braziliensis, na infecção de monócitos humanos. MATERIAL E MÉTODOS: Monócitos humanos foram coletados do sangue periférico de doadores saudáveis e foram infectados com Leishmania spp. por 18 horas, e as taxas de acidificação extracelular (ECAR) e consumo de oxigênio (OCR) foram obtidas através do Seahorse. Além disso, foram realizadas dosagens da produção de lactato e óxido nítrico através de espectrofotometria. Os monócitos foram pré-incubados com diferentes inibidores das principais vias metabólicas para verificação das concentrações inibitórias mínimas que não provocam a morte celular. Avaliou-se, ainda, a porcentagem de células infectadas, bem como o número de parasitas por célula mediante o tratamento com os inibidores metabólicos. Em adição, avaliamos a massa mitocondrial e o potencial de membrana por meio das sondas “MitoTrackers” por citometria de fluxo. A produção de espécies reativas de oxigênio mitocondrial e celular foram mensuradas através das sondas “MitoSox” e “Cellrox” respectivamente, por microscopia de fluorescência. A dosagem de citocinas foi adquirida através do Luminex. Os dados obtidos foram então submetidos à análise estatística, e os valores foram considerados significativos quando p ≤ 0,05.
RESULTADOS: Nossos dados demonstram que monócitos infectados por L. amazonensis e L.braziliensis exibem um perfil metabólico semelhante, levando a uma menor taxa de acidifação extracelular e consumo de oxigênio. Quando os monócitos são tratados com diferentes inibidores das vias metabólicas previamente à infecção, há uma maior produção de lactato, entretanto, quando os monócitos são tratados após infecção, há uma diminuição da produção de lactato. Monócitos infectados, tratados com inibidores que atuam no metabolismo glicolítico, mitocondrial, na β-oxidação e síntese de ácidos graxos apresentaram uma diminuição na carga parasitária, mostrando a importância dessas vias para a sobrevivência do parasita. Além disso, observou-se que a infecção por ambas espécies de Leishmania aumenta a massa mitocondrial e o potencial de membrana, bem como, interferências no metabolismo dos monócitos estão relacionadas com o aumento do estresse oxidativo, elevando a produção de espécies reativas de oxigênio celular (ROS) e mitocondrial (mtROS) que auxiliam na eliminação do parasita. CONCLUSÃO: Este estudo demonstra que a infecção por L. amazonensis e L.braziliensis apresenta um perfil semelhante na alteração do metabolismo celular. A inibição do metabolismo do hospedeiro é relevante para eliminação do parasita, evidenciando que interferências no metabolismo celular são de suma importância para erradicar a infecção. Esse trabalho destaca o potencial do metabolismo celular dos monócitos como um futuro alvo terapêutico para modular a infecção por Leishmania spp.

RESUMO Introdução: A doença Chikungunya, causada pelo Chikungunya vírus (CHIKV), caracteriza-se por uma síndrome febril aguda com artralgia frequente e com evolução para manifestações musculoesqueléticas crônicas em 15-86% dos casos. Pouco se sabe sobre a infecção nas crianças e adolescentes. Objetivo(s): Pretendemos compreender as características e a dinâmica da infecção por CHIKV em uma população pediátrica em situações epidêmicas e não epidêmicas. Material e Métodos: Trata-se de um subestudo de coorte aninhado ao ensaio clínico fase III da vacina da Dengue do Instituto ButantanDEN-03-IB. Foram incluídas crianças e adolescentes acompanhadas no município de Simões Filho, Bahia entre 2018 e 2023. Foi realizada vigilância de arbovirose em visitas médicas para: 1. rotina, agendadas periodicamente e com coleta de sangue; 2. de eventos adversos, em caso de qualquer sintoma ou doença; e 3. de febre, com coleta de sangue para teste de RT-PCR para Chikungunya, Dengue e Zika. Nesses dois últimos tipos de visita, foi aplicado um questionário estruturado com sintomas de arbovirose (cefaleia, artralgia, artrite, mialgia, dor retro ocular, diarreia, dor abdominal e vômitos. Para o subestudo, foram avaliados dados clínicos e laboratoriais das visitas de até 4 anos de seguimento, com coleta de sintomas de arbovirose e de persistência de artralgia. Adicionalmente, foi realizado ELISA para IgG Anti-CHIKV em amostras da admissão (T1) e do final do acompanhamento (T2). Chikungunya crônica foi definido pela persistência de artralgia por mais de três meses após a infecção. Resultados: Foram incluídos 348 voluntários, sendo 52% feminino, com mediana de seis anos (intervalo interquartil- IQR-3-10). No T1, 23 das 348 (7%) foram positivas para IgG AntiChikungunya. Dos 325 voluntários soronegativos no T1, 311 completaram o acompanhamento, com duração média de 41 (IQR- 38 - 43). 53/311 (17%) foram infectados por CHIKV, sendo 25 casos detectados através de RT-PCR e 28 apenas por sorologia. Desses 28 casos, 2 (7%) foram assintomáticos. Os 25 casos positivos no RTPCR foram seguidos por 29 (IQR=25-34) meses após a infecção aguda, sendo que 3 (12%) apresentaram Chikungunya crônica. Um deles teve suspeita clínica de artrite reumatoide juvenil após infecção por CHIKV. Quanto à distribuição dos casos no município, 17 (46%) dos 37 bairros analisados (46%) tiveram casos positivos. As regiões com maiores números de casos foram Região 2 (39) e Região 1 (10). Conclusão: Cerca de um quinto das crianças e adolescentes foram expostas a CHIKV antes ou durante o período de acompanhamento. Entre os acompanhados, a infecção foi sintomática para pelo menos um quinto deles. Embora com baixa frequência, artralgia crônica foi observada na população pediátrica.

RESUMO INTRODUÇÃO: O carcinoma escamocelular oral (CEO) é uma neoplasia agressiva com elevada morbimortalidade e apesar dos avanços científicos relacionados a sua biologia, estes ainda não proporcionaram impacto positivo na terapêutica e prognóstico deste tumor. A reativação da via de sinalização Hedgehog (Hh) se destaca na patogênese do CEO e a sua inibição representa um alvo terapêutico promissor. Nesse contexto, a via Hh interage com a autofagia e esta relação representa uma oportunidade emergente para otimizar esta estratégia, sendo que dentre os inibidores de autofagia apenas a cloroquina e a hidroxicloroquina apresentam aprovação para uso terapêutico em humanos. OBJETIVO: Estudar o efeito biológico de GANT61 na autofagia, em células metastáticas de CEO. METODOLOGIA: A citotoxicidade de GANT61 (18 e 36 μM) e cloroquina (10 μM) em células HSC3 foi avaliada inicialmente pelo método de Alamar Blue por 72 horas. O ensaios de viabilidade celular foi realizado através do CellTiter-Glo®️ por 12, 24 e 48 horas de tratamento de GANT61 (18 e 36 μM), cloroquina (10 μM) e a associação destes fármacos. A morfologia celular foi avaliada no sistema de alto conteúdo pela marcação do citoesqueleto com faloidina 568 após tratamento das condições por 24 horas. A expressão das proteínas do fluxo autofágico (LC3 e P62) foi avaliada após tratamentos através de Western Blot e imunofluorescência, e, posteriormente, analisadas utilizando o sistema de imagem Operetta HTS. A avaliação ultraestrutural das células HSC3 após 24 horas de tratamento foi realizada por microscopia eletrônica de transmissão (MET). RESULTADOS: A análise da citotoxicidade da GANT61 e cloroquina em células HSC3 demonstrou CI50 de 36 μM e 11,6 μM, respectivamente. A associação terapêutica do GANT61 com a cloroquina demonstrou redução da viabilidade celular e incremento de alterações da morfologia das células HSC3. O acúmulo da expressão de LC3 e de P62 foram observados de forma mais acentuada nas combinações de GANT61 (18 e 36 μM) com cloroquina (10 μM) em 24 horas de tratamento, assim como foi possível observar a presença de autofagossomos em células HSC3 tratadas com GANT61 de forma isolada e combinada. CONCLUSÃO: A associação do composto GANT61 com o inibidor autofágico, cloroquina, promove uma acentuação do efeito citotóxico deste composto em células HSC3, o que pode indicar o papel citoprotetor da autofagia em células de carcinoma escamocelular oral. Além disso, ação de GANT61 com a cloroquina acentua o efeito inibitório da cascata autofágica caracterizada pelo aumento da expressão de LC3 e de P62 com maior acúmulo de autofagossomos no citoplasma celular. Entretanto, novos estudos são necessários a fim de melhor compreender os mecanismos envolvidos nessa modulação.

RESUMO
Introdução: Pandemias são eventos recorrentes na história humana, e a COVID-19 se destaca,
com 767 milhões de casos e 6,9 milhões de mortes registradas. No Brasil, a crise de saúde foi
agravada pela desigualdade socioeconômica e pela magnitude do país, resultando em um rápido
aumento de casos que sobrecarregou os serviços de saúde e colocou grande pressão sobre os
profissionais da linha de frente. Com o objetivo de otimizar a alocação de recursos,
compreender os fatores relacionados à doença e apoiar os profissionais de saúde, buscamos
identificar determinantes clínicos e epidemiológicos associados ao diagnóstico e prognóstico
dos pacientes e burnout profissional. Metodologia: Esta tese é composta por quatro
manuscritos longitudinais e analíticos que abordam diferentes aspectos relacionados à COVID-
19. Resultados: Inicialmente, observaram-se diferenças nos perfis epidemiológicos e
sintomáticos dos agentes virais causadores de infecções graves do trato respiratório inferior em
crianças durante a pandemia. Destaca-se a prevalência atípica e exacerbada do Vírus Sincicial
Respiratório (RSV) ao longo do ano. Além disso, após ajustes para comorbidades, idade,
sazonalidade e região do país, encontrou-se uma associação inversa entre o SARS-CoV-2 e
sintomas de desconforto respiratório, estes diretamente relacionados ao RSV. Por outro lado, a
Influenza esteve associada a febre e odinofagia. O segundo manuscrito descreve o
desenvolvimento e validação interna do escore COPS, demonstrando uma acurácia de 88% no
prognóstico de pacientes atendidos no departamento de emergência. Além disso, calibramos o
escore pShock, desenvolvido anteriormente por nossa equipe, para avaliar o prognóstico de
pacientes com COVID-19 na unidade de terapia intensiva. O escore pShock apresentou uma
acurácia de 80% e superou os escores QSOFA e CURB-65. Por fim, identificou-se que o
consumo de álcool estava associado ao desenvolvimento da síndrome de burnout entre os
profissionais de saúde que trabalharam no departamento de emergência ou na UTI. Por outro
lado, trabalhar na unidade de terapia intensiva e engajar-se em orações diárias estavam
inversamente associados a esse fenômeno. Conclusão: Os manuscritos que compõem esta tese
fornecem informações relevantes sobre a manifestação viral, prognóstico e burnout profissional
na COVID-19, servindo como base para uma alocação justa de recursos e enfrentamento de
futuros desafios.

INTRODUÇÃO: O LPG é um fator de virulência que juntamente com outras moléculas como os PPGs, PGs e sAP participa em uma variedade de processos durante o estabelecimento da infecção no hospedeiro mamífero. A GDP-manose transferase que é codificada pelo gene lpg2
é umas das enzimas essenciais para síntese dessas moléculas que contêm fosfoglicanos (PGs) em suas estruturas. O sistema CRISPR/Cas9 tem eficaz na obtenção de parasitos deficiente do gênero Leishmania para diversas moléculas chave na interação parasito-célula hospedeira. OBJETIVOS: Este estudo tem como objetivo geral utilizar o sistema CRISPR/Cas9 tendo
como alvo o gene lpg2 em L. infantum e L. amazonensis (formas clínicas LCL e DCL), agentes etiológicos das formas clínicas de leishmaniose visceral e tegumentar, respectivamente. MÉTODOS: Em L. infantum a edição do genoma foi realizada com a inserção de códons de parada com posterior seleção utilizando ensaios de aglutinação. Em L. amazonensis nós
inserimos um gene marcador de resistência no sítio de clivagem da Cas9. Em ensaios in vitro,
neutrófilos humanos ou BMDM foram infectados com L. infantum ou L. amazonensis WT ou Δlpg2. A avaliação in vivo envolveu a inoculação de promastigotas de L. amazonensis WT ou Δlpg2 na orelha de camundongos BALB/c. RESULTADOS: Durante o processo de obtenção de L. infantum Δlpg2 detectamos e caracterizamos que este gene estava duplicado nesta espécie. Os resultados obtidos com o sequenciamento mostraram a ocorrência da edição esperada no genoma em todos os clones das duas espécies. Além disso, o resultado do Western blot mostrou a perda completa da expressão do LPG e de PGs. Constatamos que a deleção do gene lpg2 em L. infantum diminui a taxa de infecção (83%) em neutrófilos, enquanto que para L. amazonensis
os ensaios in vitro não revelaram diferenças nas taxas de infecção e replicação entre os parasitos WT e Δlpg2. In vivo o isolado de DCL Δlpg2 apresentou diferenças mínimas no desenvolvimento da lesão em relação ao WT, enquanto que o isolado de LCL Δlpg2 falhou em induzir qualquer desenvolvimento de lesão. CONCLUSÃO: Os resultados reforçam a importância do LPG e outros PGs como fatores de virulência para a L. infantum. Para L.
amazonensis a ausência de PGs não parece ser essencial para os ensaios de virulência in vitro.
Em contraste, os PGs parecem desempenhar um papel essencial no desenvolvimento da lesão induzida pelo isolado de LCL. Este trabalho amplia o conhecimento da função de glicoconjugados de espécies de Leishmania do Novo Mundo.

RESUMO
INTRODUÇÃO: A tuberculose (TB) é uma infecção causada em humanos principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb) e constitui um grave problema de saúde pública global. Mtb é um patógeno intracelular que tem um tropismo para humanos e causa principalmente tuberculose pulmonar. A coinfecção por tuberculose em pessoas vivendo com HIV (PVHIV) é de grande preocupação em nível global, uma vez que, a TB é a infecção que mais os acometem e a principal causa de morte por patógeno intracelular em PVHIV. A autofagia, por sua vez, é um processo fisiológico responsável pela remoção de componentes celulares não funcionais e em condições de privação de nutrientes, componentes celulares funcionais podem ser digeridos para geração de energia para a célula. Esse mecanismo envolve a formação de uma vesícula de dupla membrana denominada autofagossomo, este engloba componentes do citoplasma, incluindo macromoléculas e organelas e após a fusão com lisossomo digere o conteúdo através da ação de enzimas lisossomais. A autofagia tem sido associada à eliminação intracelular de patógenos como o Mtb e HIV. MÉTODOS: O presente estudo avaliou a expressão de genes relacionados a autofagia em voluntários infectados com Mtb ou por HIV e co-infectados por Mtb e HIV e a expressão de LC3 em macrófagos derivados de monócitos de linhagem THP-1 infectados com diferentes micobactérias para compreender como a autofagia pode modular e influenciar na infecção tuberculosa e na co-infecção por HIV. RESULTADOS: A partir da avaliação do perfil de expressão gênica relacionado a autofágia, foi possível observar que grande parte dos genes da via autofágica apresentaram uma expressão mais elevada nos grupos TB e TB-HIV. Os genes ATG4B, ATG4C, ATG7 e LGALS3 separaram os grupos TB e TB-HIV, enquanto os genes ATG9A, IFNA10 e THBD separaram os grupos LTBI e HIV dos demais. Em condições experimentais, a expressão de LC3 diferentes níveis de expressão de LC3 nas diferentes condições, enquanto a expressão de LC3 foi maior na condição sem estímulo e com infecção por Mtb H37Rv após 24 horas, essa expressão foi mais elevada após 48 horas. Na condição de células infectadas e incubadas com rapamicina, foi possível observar uma maior expressão de LC3 após 48 horas nas condições, sem infecção, infecção com M. bovis (BCG) e na condição de infecção com Mtb proveniente do isolado clínico de alta prevalência 76937. CONCLUSÕES: Os genes ATG4B, ATG4C, ATG7 e LGALS3 foram capazes de separar os grupos TB ativa e TB-HIV dos demais, sugerindo uma relação destes com a TB ativa, enquanto os genes ATG9A, IFNA10 e THBD foram capazes de separar os grupos LTBI e HIV. Os fatores virulência do Mtb podem influenciar no desenvolvimento da autofagia, uma vez que o gene LC3 foi sugerido com diferentes níveis de expressão nos diferentes isolados clínicos de Mtb; O tempo de indução da autofagia através da rapamicina pode influenciar nos diferentes níveis de expressão de LC3 observados em macrófagos infectados por diferentes micobactérias.

RESUMO O carcinoma escamocelular oral (CEO) é um grave problema de saúde pública com elevada prevalência em populações com baixo nível socioeconômico, sendo frequentemente diagnosticado em fase tardia, quando o prognóstico se torna reservado. Ainda há poucas opções de fármacos para o tratamento deste tumor nos pacientes. Previamente, demonstramos que a via embrionária Hedgehog (HH) está reativada neste tumor, levando a um perfil de maior agressividade. Deste modo, a busca por fármacos inibidores da via HH, seja inibindo sua ativação canônica ou não canônica, passa a ser de grande relevância para o tratamento do CEO. Dentre os mecanismos de ativação não canônica da via HH destaca-se a interação com PI3K/AKT, uma importante via de sobrevivência celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral in vitro e a inibição farmacológica de componentes da via HH por um inibidor farmacológico de PI3K, o Pictilisib, em linhagem metastática de CEO. Deste modo, foi realizado o tratamento das células HSC3 com Pictilisib em diferentes concentrações para avaliação da citotoxicidade, viabilidade celular, análise de apoptose por ensaio de Anexina-PI em citometria de fluxo, análise de migração celular por scratch assay, além da avaliação da expressão dos componentes da via HH por western blot, Imunofluorescência e RT-qPCR. O Pictilisib apresentou perfil de citotoxicidade na linhagem HSC3, com valor de CI50 de 0,05 µM. Nas concentrações de 0,97 μM e 1,94 μM, foi demonstrada significativa redução da viabilidade celular, além de aumento do percentual de células na fase sub-G1 após 48 e 72 h de incubação com o Pictilisib na concentração de 0,97 μM. O ensaio de Anexina-PI demonstrou indução de apoptose 48 e 72 h após incubação com o Pictilisib nas concentrações de 0,97 µM e 1,94 µM. O ensaio de migração celular demonstrou que o tratamento com Pictilisib reduziu a migração celular nos tempos de 6 e 24h. Através da técnica de Western blot, as proteínas PTCH1, SHH e GLI1 foram analisadas após o tratamento com o Pictilisib no período de 24h nas concentrações de 0,97 e 1,94 µM, mas não foi observada diferença na expressão destas proteínas com o tratamento. Através da técnica de imunofluorescência, as proteínas GLI1, GLI2 e SMO foram analisadas em relação à presença e à localização. Os resultados demonstram forte imunoexpressão dos componentes citados, havendo marcação nuclear das proteínas GLI1, GLI2 e SMO em ambas as concentrações com o Pictilisib. A expressão gênica dos componentes da via Hedgehog (GLI1, GLI2 e GLI3), foi avaliada através de RTqPCR na linhagem HSC3 após 24 h de incubação com Pictilisib 1,94 µM. Não foi observada inibição da expressão do mRNA de GLI1 e GLI2, quando células tratadas foram comparadas com o controle não tratado. No entanto, observou-se aumento do mRNA de GLI3 após incubação com Pictilisib a 1,94 µM. Em conclusão, os dados deste estudo dão suporte para um potencial papel do Pictilisib como um fármaco promissor para utilização terapêutica no CEO. O papel deste fármaco na interação do PI3K/AKT com a via HH merece aprofundamento em estudos futuros.

RESUMO
Introdução: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa causada pela Leishmania infantum, em que há o comprometimento de órgão internos. No baço a infecção é crônica e progressiva. Além disso, na LV grave ocorre a desorganização dos compartimentos esplênicos, a diminuição do número de células B na polpa branca (PB) e plasmocitose na polpa vermelha (PV). Os plasmócitos têm sobrevida estendida e acumulam-se em várias doenças crônicas. Contudo, pouco se sabe sobre as funções e os mecanismos de geração e manutenção da sobrevida dessas células. Objetivo: Neste trabalho, investigamos os potenciais mecanismos associados com o desenvolvimento anômalo de células B que levam à plasmocitose no curso da LV. Métodos: 56 hamsters da linhagem Golden Sirius com 6 a 8 semanas de idade foram usados neste estudo: 28 foram injetados intraperitonealmente com 1x107 promastigotas de L. infantum e 28 receberam a solução diluente pela mesma via. Sete animais de cada grupo foram eutasiados 30, 60, 120 e 150 dias após a injeção (dpi). Os animais foram necropsiados e amostras dos órgãos foram fixadas em parafina para estudo histológico e avaliação da distribuição de célula B e plasmócitos por imuno-histoquímica. Para três animais de cada grupo e em cada ponto, um fragmento do baço foi colhido para avaliação transcriptômica da expressão gênica e associação entre moléculas relacionadas com o desenvolvimento de células B, incluindo uma molécula chamada DLK1. Resultados: Houve aumento da PB dos animais infectados 120 dpi, enquanto, no ponto consecutivo ocorreu atrofia, após 150 dias. Afetando a região de folículo linfoide, possivelmente devido a diminuição de células B. Também observamos redução da quimiotaxia de células B, pela diminuição de CXCL13 e CXCL12 que ocorreu 120 e 150 dpi. Houve uma tendência a diminuição de fatores moleculares relacionados com a resposta de centro germinativo (CG), observado pela expressão gênica dos hamsters infectados. Não houve alterações na quantidade de células B na PV dos animais infectados, mas houve progressiva plasmocitose na PV dos animais nos pontos mais tardios da doença, 120 e 150 dpi e o acúmulo dessas células na zona de células T 120 dpi, sendo que DLK1 está associada com a plasmocitose na PV. A expressão gênica dos animais infectados confirmou a diferenciação de plasmócitos 150 dpi e associou a sinalização por IL-21 e IFN- como as principais moléculas envolvidas. Além disso, houve o aumento de IL-6 150 dpi. Conclusões: Neste estudo correlacionamos alterações estruturais e celulares com a expressão molecular, para investigar os determinantes da diferenciação anômala de células B em formas graves da LV. Os resultados deste trabalho demonstram aumento de IL-21 e INF- como moléculas responsáveis pelas alterações nas vias de diferenciação de células B, que geram plasmócitos em estágio crônico da doença. Além disso, demonstramos uma diminuição de CXCL13 e CXCL12, e um aumento de IL-6. Houve aumento da proporção de células B 120 dpi, mas diminuição em 150 dpi na PB e plasmocitose na PV.

RESUMO
INTRODUÇÃO: O vírus Dengue (DENV) já circula no Brasil a aproximadamente 35 anos, no ano de 2014, o vírus Chikungunya (CHIKV) foi identificado pela primeira vez no país, sucedido pela introdução do vírus Zika (ZIKV) no ano seguinte. A circulação dessas 3 arboviroses pelo território brasileiro, resultou em grandes epidemias que atingiram com maior força as regiões Sudeste e Nordeste do país, além dos casos agudos, graves sequelas dessas infecções como artralgia crônica e microcefalia, contribuíram para o entendimento de que neste cenário epidêmico de alta complexidade o desenvolvimento de pesquisas e reforço na vigilância eram não só necessários como também urgentes. Apesar dos esforços da comunidade cientifica, inquéritos que visam avaliar o impacto e susceptibilidade de populações a estes arbovírus ainda são escassos na literatura, principalmente em regiões rurais do país afastadas dos grandes centros urbanos. OBJETIVO: Estimar a prevalência de positividade para anticorpos específicos marcadores de infecções prévias pelo vírus Zika, vírus Dengue e vírus Chikungunya, em residentes de áreas urbanas e rurais de um município no estado da Bahia, afastado da capital Salvador e sua região metropolitana. METODOLOGIA: Este é um estudo de corte-transversal realizado no município de Conde-BA, em três vilarejos rurais e em áreas urbanas próximas ao centro da cidade, nas quais foram incluídos indivíduos com idade a partir de 4 anos dos quais foram coletadas amostras de soro sanguíneo. Essas amostras foram utilizadas para a realização do ELISA para detecção de anticorpos anti-DENV, anti-ZIKV e anti-CHIKV. Todas as amostras com resultado reagente no ELISA anti-ZIKV, foram submetidas a um PRNT, com endpoint de 90% (PRNT90). RESULTADOS: No total foram avaliadas 328 amostras. Do total 144 (43,9%) soropositivas para DENV, 57 (17,4%) para Zika e 18 (5,5%) soropositivas para CHIKV. Dentre as soropositivas 118 (77,6%) amostras eram provenientes de áreas urbanas do município e 109 (51,7%) amostras provinham de participantes do sexo feminino. Na faixa etária entre 30 e 59 anos foi observada a maior frequência de positividade, nesta mesma faixa etária, observa-se uma associação com soropositividade para arbovírus principalmente dentre os residentes da zona rural (RP: 6,86; IC95%: 2,16-21,78), uma associação positiva é também observada dentre os participantes com renda superior a 1 salário mínimo (RP: 1,44; IC95%: 1,12-1,84). Após o ajuste do modelo de regressão, observa-se associação com soropositividade apenas dentre os indivíduos com renda familiar mensal, maior que 1 salário mínimo (RP: 1,30 IC95%: 1,02-1,65) e os participantes de raça não negra (RP: 1,31; IC95%: 1,00-1,69). CONCLUSÃO: Os dados avaliados apontam que a exposição prévia ao DENV e ao CHIKV na população residente em setores urbanos do município se assemelha a encontrada em outros estudos desenvolvidos inclusive em grandes centros urbanos. É possível observar também que provavelmente ainda não houve circulação expressiva de ZIKV e CHIKV nas localidades rurais estudadas, o que aponta estes indivíduos como suscetíveis a futuras epidemias. A identificação de susceptibilidade é um fator importante para implementação de medidas de prevenção e controle, e fomenta o desenvolvimento de estudos nesta e em outras regiões com características semelhantes.

RESUMO
INTRODUÇÃO: Os macrófagos são importantes células em processos inflamatórios e a
sua desregulação pode afetar diversas doenças, tais como doenças autoimunes e doenças
parasitárias. As leishmanioses, um conjunto de doenças tropicais negligenciadas, estão
incluídas nesta categoria de enfermidades. A leishmaniose cutânea é caracterizada por
úlceras em área de tegumento e a sua gravidade está relacionada com a imunopatogênese.
O tratamento disponível é citotóxico, está associado à falha terapêutica, resistência
parasitária, alto custo e tempo de administração prolongado. A fisalina F possui
propriedades farmacológicas promissoras com potente atividade antileishmania e
imunomoduladora em camundongos. OBJETIVO: Este trabalho teve como objetivo
avaliar o papel imunomodulador em macrófagos humanos e a atividade anti-Leishmania
braziliensis da fisalina F, in vitro. MATERIAL E MÉTODOS: Macrófagos humanos
foram obtidos de PBMC de doadores sadios. A dosagem de citocinas inflamatórias foi
realizada pelo método de ELISA no sobrenadante de macrófagos humanos estimulados
com LPS e com adição ou não de fisalina F e dexametasona. A citotoxicidade da fisalina
F em macrófagos humanos e a viabilidade de promastigotas de L. braziliensis foram
mensuradas utilizando o Alamar Blue®. A ação da fisalina F em macrófagos humanos foi
determinada após 24 horas de infecção com L. braziliensis. Ensaios de citometria de fluxo
e de microscopia eletrônica foram realizados para avaliação dos possíveis mecanismos de
ação da fisalina F em promastigotas de L. braziliensis. RESULTADOS: A fisalina F
reduziu a produção das citocinas pró-inflamatórias IL-6, IL-1β e TNF-α por macrófagos
ativados. Nos ensaios de citotoxicidade, apresentou o valor de CC50 de 6,07 ± 1,17 μM.
Este composto também inibiu a proliferação de formas promastigotas de L. braziliensis,
com valor de IC50 de 10,85 ± 0,99 μM e reduziu o número de macrófagos infectados e o
número de amastigotas por macrófago, quando comparado com os controles. Em
promastigotas, o surgimento de inclusões lipídicas, encurtamento do corpo celular, a
destruição e o afrouxamento de membrana foram observados na análise ultraestrutural por
MEV e MET após o tratamento com fisalina F. Análises de citometria de fluxo indicam
que a fisalina F induz um mecanismo de morte similar a apoptose em L. braziliensis.
CONCLUSÕES: A fisalina F inibiu a ativação de macrófagos humanos e promoveu uma
atividade anti- L. braziliensis eficaz em promastigotas e em amastigotas.

INTRODUÇÃO: As MSCs se tornaram alvos de estudos clínicos e pré-clínicos, pelo seu potencial anti-inflamatório e imunoregulador. Sabe-se que parte dos efeitos das MSCs estão relacionados ao seu secretoma, que inclui fatores solúveis, tais como citocinas, proteínas e a liberação de vesículas extracelulares (EVs). As EVs são pequenos componentes celulares, que tem como composição moléculas bioativas (pequenos RNAs, proteínas, entre outras) que foram herdadas das células de origem e desenvolvem ações imunomoduladoras e tróficas. A análise de parâmetros que envolvem o perfil imunomodulador das EVs derivadas de MSCs (MSC-EV) é imprescindível, para ensaios importantes para o desenvolvimento clínico. OBJETIVO: Caracterizar a atividade imunomoduladora in- vitro das hucMSC-EVs em um ensaio de linfoproliferação. MATERIAL E MÉTODOS: As MSC derivadas da geleia de Wharton humana (hucMSC) foram utilizadas para o isolamento e purificação de hucMSC-EVs. As hucMSC foram caracterizadas de acordo com a ISCT analisando morfologia, imunofenotipagem e ensaios de diferenciação. Por RT-PCR avaliamos a expressão de genes relacionados com a biogênese das EVs (CD81, CD63) e ao potencial imunomodulador (IDO1 e TNFAIP6). As hucMSC-EVs foram isoladas em passagem 5 e caracterizadas seguindo as recomendações da ISEV, por microscopia eletrônica de transmissão (TEM), análise de nanofluxo e análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). As células mononucleares do sangue (PBMC) de doadores saudáveis foram estimulados com beads anti-CD3/ anti-CD28 e incubadas com diferentes concentrações de hucMSC-EVs (10,25 e 50 μg/ml) por 72 horas a 37 °C com 5% de CO2, a análise de linfoproliferação foi feita por ensaio de ATP por luminescência. As células T reguladoras (Treg-CD4+CD25+FoxP3+) foram avaliadas por meio de citometria de fluxo. As citocinas do sobrenadante foram quantificadas por ELISA. RESULTADOS: As hucMSC cultivadas apresentaram morfologia fibroblastóide, expressão > 95% para CD90, CD105, CD44, e CD73, com <0,05% de marcadores hematopoiéticos e capacidade de diferenciação em adipócitos, osteócitos e condroblastos. A privação de lisado de plaquetas humano foi associada ao pico na expressão gênica de CD81, CD63 e TNFAIP6 após 24h, 48h e 72h. A expressão IDO1 não foi detectada. Observamos que a estabilidade do CM permanece quando armazenado a -20°C por 7 dias. As hucMSC-EVs apresentaram diâmetro médio <200 nm, mostraram morfologia típica em TEM e a análise fenotípica demonstrou marcadores positivos para EVs (Annexin, CD81, CD63) e para origem hucMSC (CD90). O tratamento com hucMSC-EVs inibiu a linfoproliferação in vitro em todas as concentrações testadas. A estimulação de Tregs foi ligeiramente aumentada após o tratamento com 50 μg/ml de MSC-EVs. A produção de TNF-a, IFN-y, e IL-10 foi inibida pela incubação com MSC-EVs, enquanto que a IL-6 não apresentou alterações significativas. CONCLUSÃO: As hucMSC-EVs apresentaram efeitos imunoregulatórios, por meio da inibição de linfócitos in-vitro, indução moderada de células Treg, porém testes adicionais precisam ser realizados, para elucidar maiores efeitos na aplicação das hucMSC-EVs em larga escala.

RESUMO
A anemia falciforme (AF) é uma das formas de apresentação da doença falciforme (DF), que
é caracterizada por eventos hematológicos como a hemólise e lesão endotelial que culminam
na vaso-oclusão, levando ao aparecimento de diversas manifestações clínicas. A AF é
resultado de uma alteração eritrocitária condicionada pela mutação de ponto no gene HBB
que leva a formação da hemoglobina S (HbS). A hemoglobina fetal (HbF) é conhecida por
afetar positivamente a clínica dos indivíduos com AF, por interferir no papel da HbS na
alteração eritrocitária. Polimorfismos genéticos são conhecidos por modularem positivamente
os fenótipos clínicos na AF, sendo o gene BCL11A um marcador importante nesse aspecto.
Contudo, polimorfismos no gene BCL11A têm sido descritos por alterar negativamente o
quadro clínico dos pacientes com AF. O presente estudo teve como objetivo associar
biomarcadores laboratoriais na presença dos polimorfismos rs766432 (C>A) e rs6732518
(C>T) no gene BCL11A. Os marcadores hematológicos e bioquímicos foram investigados por
métodos automatizados e os marcadores genéticos foram identificados pelas técnicas de
reação em cadeia da polimerase e Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP).
As análises estatísticas foram realizadas no software Graphpad prism na versão 9.0. A HbF
apresentou associação estaticamente significante na presença do polimorfismo rs766432
(p=0,0306) bem como simultaneamente com o polimorfismo rs6732518 (p = 0,0302), e como
as concentrações da HbS (p=0,0464). As concentrações de hemoglobina (Hb) (p=0,0008),
hematócrito (Ht) (p=0,0243) (p=0,0329) e contagem de hemácias (Hm) (p=0,0069)
(p=0,00466) estiveram elevadas na presença dos polimorfismos. As concentrações de
bilirrubina total (p=0,0264) e direta (p=0,0039) apresentaram valores menores na presença do
polimorfismo rs766432, bem como na co-herança dos polimorfismos (p=0,0073) (p=0,0154).
Concentrações elevadas de colesterol HDL estiveram associados na presença do alelo variante
do polimorfismo rs766432 (p=0,0402) e níveis elevados de alfa1- antitripsina estiveram
associados na presença do alelo variante do polimorfismo rs6732518 (p=0,0320) e a ausência
de correlação entre o a HbF e HDL(r=0,03705). Conclui-se que que polimorfismos no locus
BCL11A são importantes para a variação dos níveis de HbF, e que podem apresentar efeito
pleiotrópico pela determinação de parâmetros laboratoriais não-relacionados com os níveis de
HbF.

RESUMO A tuberculose (TB), causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis, ainda é um problema de saúde pública mundial. A transmissão da TB acontece pelo ar, quando a pessoa infectada expele os bacilos de Koch através da expulsão de gotículas de Flügge, pelo meio da fala, tosse ou espirro, ficando suspenso no ar e podendo ser inalado por outras pessoas. Assim, a pessoa exposta pode-se tonar doente ou com a infecção latente (ILTB). Através do tempo, diversas pesquisas e iniciativas no mundo tem sido feitas para controlar a TB, entre eles a Estratégia para o Fim da TB da Organização Mundial da Saúde, cujo objetivo é eliminar a TB até o ano 2035. Apesar da implementação da estratégia, o cenário para o continente americano não tem melhorado muito em razão do incremento da incidência dos casos de TB, sendo o Brasil e o Peru os países com maior carga da doença. A fim de melhorar o panorama atual, são necessários conhecimentos atuais e adicionais da TB para a implementação de novas abordagens nos sistemas de saúde. Este trabalho de tese agrupa onze manuscritos que identificam potenciais determinantes clínicos e epidemiológicos da susceptibilidade à infecção pelo M. tuberculosis e da resposta terapêutica em pacientes TB. O primeiro estudo utiliza ferramentas estatísticas inovadoras para caracterizar a amostra coorte do RePORT-Brasil e a compara com a população nacional brasileira de TB, além disso identifica fatores associados aos desfechos desfavoráveis no tratamento anti-TB como o uso de drogas ilícitas, coinfecção por HIV e diabetes (DM) apenas na coorte do RePORT-Brasil. O rastreio de contactantes de casos TB e tratamento profilático daqueles com ILTB são importantes para o controle da transmissão da doença, em um dos nossos trabalhos identificamos que não completar a cascata de acompanhamento de ILTB estava associado independentemente com o aumento da idade, baixo status socioeconômico e a coinfecção por HIV. Além disso, seguindo com os resultados no primeiro estudo, demostramos mais uma vez que a DM está associada a um risco aumentado de desfechos desfavoráveis de tratamento, assim como da mortalidade em pacientes com TB pulmonar e comparamos esses resultados com os do SINAN-TB. Na coorte peruana achamos que a disglicemia persistente está associada também com desfechos desfavoráveis no tratamento. Adicionalmente, identificamos que a presença do HIV não afetou substancialmente a apresentação clínica em pessoas com TBDM. Adicionalmente, os contatos de pacientes com TB e pré-DM apresentaram maior risco de QuantiFERON positivo, no início do estudo e os contatos de pacientes que tinham TB-DM apresentaram um risco aumentado de ter uma conversão (QuantiFERON negativo no início para positivo no mês 6). Na triagem de DM nos casos de TB, identificamos diferenças quanto aos valores de HbA1c e FPG para diagnóstico da DM nas coortes do Peru (onde achamos alta prevalência de DM e de pré-DM em casos TB) e do Brasil. Finalmente, na coorte do Peru, a disglicemia (DM e pré-DM) afetou a apresentação lesões pulmonares nos casos de TB e padrões alimentares foram identificados no perfil de ingestão alimentar dos participantes desse estudo. Assim, os manuscritos que compõem a tese, adicionam informação relevante na identificação dos determinantes clínicos e epidemiológicos na infecção, transmissão e tratamento da TB, o que visa ser um suporte para a estratégias implementadas no sistema de saúde.

RESUMO Estima-se que aproximadamente um quarto da população global está infectada com Mycobacterium tuberculoses(Mtb). Polimorfismos genéticos do hospedeiro podem ser importantes na determinação da suscetibilidade à infecção Mtb, porém seu papel não é totalmente compreendido. No presente estudo, em uma coorte de contatos próximos de pacientes com TB pulmonar confirmados microbiologicamente atendidos em ambulatório de referência de TB no Rio de Janeiro, identificamos potenciais biomarcadores genéticos de suscetibilidade à infecção (conversão do teste tuberculínico (TST)) por Mtb e desenvolvimento de TB ativa, de forma prospectiva e retrospectiva. Além disso, realizamos uma revisão sistemática visando análise de biomarcadores genéticos adicionais. No primeiro estudo, diferente “single nucleotide polymorphims” (SNPs) foram estudados como fatores de risco para conversão do TST e desenvolvimento de TB: TLR2 (rs5743708), TLR4 (rs4986791), TNFA (rs361525), IFNG (rs2430561), IL1B (rs1143627). Em um segundo estudo, 7 SNPs adicionais foram testados para associação com positividade do TT: genes candidatos IFI16-PYHIN1-AIM2 (rs1101998, rs1633256, rs866484), IFIT5 (rs59633641, rs10887959), IFIT1 (rs304478, rs304498) e IRF7 (rs11246213). Ambos os estudos foram realizados em contatos de casos de TB pulmonar confirmados microbiologicamente em laboratórios de referência, no Rio de Janeiro. Finalmente, realizamos uma revisão sistemática para avaliar a associação entre todos os SNPs relatados de CD14 e NOD2 e a ocorrência de TB, e como essa associação pode diferir em populações étnicas distintas. No estudo prospectivo, entre os 526 participantes, 60 tiveram conversão no TST e 44 desenvolveram TB ativa durante o acompanhamento. Na análise de regressão multivariada observou-se que os SNPs em genes TLR4 (odds ratio [OR]: 62,8, intervalo de confiança de 95% [IC 95%]: 7,5–525,3) e TNFA (OR: 4,2, IC 95%: 1,9–9,5) foram independentemente associados à conversão no TST. No estudo retrospectivo foram examinados 482 contatos, dos quais 296 contatos apresentaram TST positivo. Em um modelo multivariável, observamos que no modelo recessivo o SNP PYHIN1-IFI16-AIM2 rs1101998 (OR ajustado [aOR] = 2,90; IC 95% = 1,24-6,78; p = 0,014) e rs1633256 (aOR = 10,1; IC 95% = 2,20- 46,28; p = 0,003) foram associados a um risco aumentado de reatividade no TST. Na revisão sistemática, foram incluídos, 13 estudos que preencheram os critérios de seleção. Destes, 9 foram investigados do gene CD14 e em 6 foi relatada uma associação significativa entre o alelo T e os genótipos TT do SNP rs2569190 e aumento do risco de TB. Ademais, em 4 estudos foram relatadas relações entre os SNPs do gene NOD2 e a TB, e destes, foram observadas associações significativas de rs1861759 e rs7194886 com maior risco de TB em uma população chinesa Han em 2 estudos. Os resultados sugerem associações entre polimorfismos dos genes da imunidade e as probabilidades de infecção e/ou adoecimento por Mtb. No intuito de promover conhecimento sobre fatores imunogenétcos em TB na presente análise, foram apresentadas associações entre polimorfismos de genes relacionados à imunidade e as probabilidades de infecção e/ou adoecimento por Mtb.

RESUMO
INTRODUÇÃO: O diagnóstico da tuberculose (TB) é realizado através da detecção do M. tuberculosis (MTB) em testes microbiológicos, como baciloscopia e cultura e ensaios de biologia molecular. A intepretação desses exames é limitada, pois não trazem informações sobre a repercussão sistêmica, celular, inflamatória e apresentam baixa sensibilidade em indivíduos paucibacilar. OBJETIVO: Avaliar a ativação celular e as alterações fenotípicas em linfócitos T CD4+ em indivíduos com tuberculose, na presença ou não do HIV. MÉTODOS: Inicialmente, em uma coorte do Brasil, validamos a utilização de marcadores de ativação celular CD38, HLADR e/ou Ki67 em células TCD4+ específicas para MTB em discriminar tuberculose Pulmonar (TBP), Tuberculose extrapulmonar (TBEP) e tuberculose latente (ILTB). Testamos ainda o efeito da coinfecção pelo HIV no desempenho do diagnóstico. Juntou-se a esta tese, outro manuscrito abrangendo pacientes do sul da Índia com TB-HIV antes e após o início da terapia antiretroviral (TARV), determinando as alterações fenotípicas nas células T durante a síndrome inflamatória de reconstituição imune (SIRI) e sua relação com a inflamação sistêmica. Neste estudo, analisamos subpopulações de linfócitos T CD4 e biomarcadores no sangue periférico. RESULTADOS: Os pacientes com TBEP e TBP apresentaram uma maior frequência de células T CD4+ IFN-γ+ expressando CD38, HLADR em comparação com ILTB. Além disso, as frequências de células HLADR+ ou Ki67+ distinguiram com precisão TBEP do TBP. A infecção pelo HIV não afetou a capacidade desses marcadores de distinguir tuberculose ativa de ILTB ou TBEP de TBP. No segundo estudo, a frequência de células T CD4 naive (CD27+CD45RO−), bem como de memória efetora (CD27−CD45RO+) distinguiram os indivíduos que desenvolveram a síndrome inflamatória de reconstituição dos que não apresentaram, na 2°-6° semana após o início da TARV. Análises posteriores revelaram que o TARV reconstituiu diferentes quantidades de subconjuntos de linfócitos T CD4+ com expansão preferencial de células CXCR3+ CCR6− em pacientes com TB-SIRI. Além disso, houve uma expansão e restauração funcional de linfócitos T CD4+ CXCR3−CCR6+ expressando marcadores de memória central (CD27+CD45RO+) e citocinas correspondentes, com redução nas células CXCR3−CCR6+ após TARV apenas naqueles que desenvolveram TB-SIRI. CONCLUSÃO: Os marcadores de ativação celular em células T CD4+ específicas para MTB distinguiram TB ativa de ILTB e TBEP da TBP, independentemente do status de infecção pelo HIV. Os subconjuntos de células T CD4+ estão fortemente associadas com SIRI.

Trabalho com sigilo

RESUMO
INTRODUÇÃO: Com milhões de casos e mortes confirmadas em todo o mundo, a pandemia da doença do coronavírus 2019 (COVID-19), causada pela infecção do novo coronavírus, denominada síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2), se tornou uma preocupação mundial. Sabe-se que níveis elevados de glicose na corrente sanguínea são um dos principais fatores de risco para o agravamento da doença. No entanto, ainda não estão elucidados os reais mecanismos envolvidos no agravamento da COVID-19 em indivíduos com pré-diabetes e diabetes. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel do diabetes e do pré-diabetes no agravamento da COVID-19. MATERIAL E MÉTODOS: Inicialmente, foram identificados possíveis genes relacionados a gravidade da COVID-19 em indivíduos com diabetes a partir de dados públicos de expressão gênica em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs). Em seguida, foram validados alvos de importância para a infecção do SARS-CoV-2 em PBMCs de pacientes com e sem diabetes. Dosagem de mediadores inflamatórios sistêmicos e análises de correlação foram utilizados para identificar fatores associados à gravidade da COVID-19 em pacientes com a glicemia alterada. RESULTADOS: As análises de dados globais públicos revelaram a via do metabolismo do leucotrieno como uma via potencialmente associada a condições respiratórias em pacientes com diabetes. Em seguida, identificamos, na fase aguda da COVID-19, um aumento na expressão dos genes ALOX5 e ACE2/TMPRSS2 em PBMCs de indivíduos com diabetes. Nesses pacientes, também foi encontrado um aumento dos níveis séricos de LTB4 e IL-6 em comparação a pacientes sem diabetes. O aumento de IL-6 observado em indivíduos com diabetes estava associado com maior internação em unidade de terapia intensiva. Em conjunto, os dados mostram que o diabetes, com a participação da via do LTB4, pode levar a COVID-19 grave, induzindo lesão pulmonar mais intensa e maior tempo de doença. Curiosamente, pacientes com pré-diabetes, sob a participação da produção de IL-6, também evoluem para a COVID-19 grave em maior frequência, considerando a redução nas taxas de troca gasosa e maior tempo de hospitalização. Contudo, o pré-diabetes não induziu sequelas da COVID-19 distintas daquelas de indivíduos sem diabetes. Além disso, nós mostramos também, que exames laboratoriais de rotina podem ser utilizados para identificar altos/baixos produtores de IL-6, cujos níveis estão relacionados com a gravidade da COVID-19. CONCLUSÃO: O aumento da produção de LTB4 e IL-6 observado em indivíduos com diabetes e pré-diabetes, respectivamente, pode piorar o desfecho da COVID-19.

A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa de difícil controle e os
mecanismos envolvidos na progressão da doença não são totalmente
estabelecidos. O perfil de expressão gênica vem sendo estudado com o objetivo de
validar potenciais biomarcadores que auxiliem no entendimento dos processos
envolvidos na TB e no desenvolvimento de estratégias para o combate da doença.
A vacinação com a BCG vem sendo apontada com a capacidade de modular a
resposta do hospedeiro e sua eficácia contra a TB têm sido amplamente discutida,
porém ainda não se sabe totalmente sobre quais seriam esses efeitos e a sua
duração no organismo. Por meio de uma metanálise de dados de transcriptoma
utilizando o repositório GEO, conseguimos demonstrar que a vacinação com a
BCG é capaz de gerar efeitos duradouros no hospedeiro, afetando a modulação de
genes específicos. Ao comparar os grupos de não infectados, infectados e doentes
que não foram vacinados, observamos 100 genes (92 modulados negativamente e
8 modulados positivamente), associados principalmente com vias e funções ligadas
ao metabolismo. Já entre os indivíduos vacinados, comparando-se os mesmos
grupos, foram observados 53 genes, sendo 18 superexpressos e 35 subexpressos,
associados principalmente aos processos de imunidade. Em uma metanálise
secundária, verificamos também assinaturas distintas ligadas à vacina, com 5
genes subexpressos identificados para os vacinados e 2 genes (1 super e 1
subexpresso) para os não vacinados. Nossos resultados ainda apontaram que um
gene da subfamília Rab11 (composta por outros dois membros de elevada
homologia, o RAB11A e RAB11B), o RAB25, apresentou-se superexpresso em
indivíduos doentes e não vacinados com a BCG, quando comparados também com
os doentes, porém vacinados. Identificamos durante as nossas avaliações o
RAB11A como o gene-alvo do nosso estudo. Em amostras de sangue total de uma
coorte de pacientes com tuberculose ativa da nossa população, observamos
valores médios de expressão maiores para o gene RAB11A em indivíduos doentes
e não vacinados, quando comparados aos indivíduos vacinados, corroborando com
os dados da metanálise. Vimos também que os valores de expressão deste gene
são menores em células THP-1 infectadas com a cepa vacinal BCG em
comparação com as não infectadas. Para investigação futura do papel deste gene,
realizamos com sucesso o silenciamento gênico em células THP-1 através da
metodologia de RNA de interferência. Com este trabalho, conseguimos então
identificar as assinaturas transcricionais associadas à vacinação com a BCG e
apontar um alvo que merece ser melhor estudado na tuberculose.

RESUMO
INTRODUÇÃO: Pessoas vivendo com HIV (PVHIV) frequentemente apresentam anemia como complicação. A anemia em pacientes com HIV pode ser associada a uma exacerbação do perfil inflamatório, com aumento de citocinas no sangue e progressão da doença mais acelerada. Entretanto pouco se tem relatado sobre o impacto da gravidade da anemia nos desfechos clínicos desfavoráveis durante tratamento desses pacientes com antirretrovirais, como tuberculose (TB) incidente, síndrome de imunorreconstituição inflamatória (SIRI) e morte. OBJETIVO: Caracterizar o perfil inflamatório de pacientes anêmicos com HIV, bem como identificar as associações entre a presença de anemia e sua gravidade com os desfechos desfavoráveis de tratamento desses pacientes. METODOLOGIA: Esta tese reúne um conjunto de seis manuscritos que visam caracterizar e associar a anemia aos desfechos clínicos de PVHIV. Ao todo, foram avaliados dados de 1617 PVHIV. Anemia e sua gravidade foram definidos de acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde. Para cada manuscrito foi utilizada uma diferente coorte de PVHIV, e em cada uma delas foram analisados os níveis plasmáticos de marcadores inflamatórios, tal como dados clínicos, socioeconômicos e laboratoriais. Foram aplicados métodos de estatística descritiva e um conjunto de técnicas multidimensionais, incluindo análises de rede, análises integrativas, regressões logísticas e cálculo de grau de perturbação inflamatória (GPI). RESULTADOS: No primeiro estudo, concluímos que PVHIV anêmicos têm maior risco de desenvolver TB incidente após o início do tratamento antirretroviral (TARV) se comparado os não-anêmicos. No segundo, foi constatado que a anemia grave aumenta o risco de SIRI, principalmente por TB, em PVHIV durante o TARV. No terceiro estudo, foi observado que a anemia está associada a uma maior disseminação da TB em PVHIV. Nos três estudos supracitados, anemia moderada/grave são fatores de risco para óbito. O quarto estudo demonstrou que baixos níveis de hemoglobina estavam associados a um maior GPI em pacientes com HIV-TB. Em seguida, observamos que pacientes HIV-TB com anemia persistente possuem maior risco de vir a óbito que aqueles não-anêmicos durante o tratamento anti-TB (TAT). Esse último resultado foi reforçado pelo sexto estudo, onde a anemia moderada/grave pré-TAT foi um fator de risco para óbito. CONCLUSÕES: Em conjunto, os manuscritos desta tese adicionam importantes informações quanto à importância da anemia no contexto da coinfecção por HIV-TB. Ao identificar a anemia moderada e grave como fator de risco para TB incidente, SIRI, TB disseminada, perturbação inflamatória e óbito, demonstramos que PVHIV devem ser cuidadosamente monitorados e, se possível, a anemia deve ser cuidadosamente avaliada como um marcador de possível infecção oportunista e pior prognóstico. Nesse contexto, essas informações são úteis no direcionamento de novas abordagens para otimizar o manejo clínicos e melhorar a qualidade e expectativa de vida de PVHIV.

Resumo

INTRODUÇÃO: A síndrome inflamatória de reconstituição imune associada à tuberculose (TB-SIRI) é um agravamento clínico dos sintomas de tuberculose observados em uma fração de pacientes coinfectados com HIV logo após o início da terapia antirretroviral (TARV). É bem conhecido que a TBIRIS ocorre em função de inflamação exacerbada e dano tecidual em resposta à produção elevada de IFN-γ derivado de células T CD4+. Concomitante a reconstituição linfócitaria, diversas alterações em diferentes camadas de organização biológicas são alteradas e dão suporte ao fenomenos patologicas associados a SIRI. Sabe-se que perturbações metabólicas subjacentes às alterações qualitativas das funções de diversas células imunológicas culminam na exacerbação da inflamação sistêmica e hiperativação celular. Além disso, vários estudos destacam o papel das células imunes adaptativas na patogênese da IRIS, mas até que ponto a ativação dos linfócitos T contribui para o desenvolvimento da SIRI ainda precisa ser esclarecido. OBJETIVO: Caracterizar a ativação e perfil de memória de linfócitos T CD4+ e CD8+ em indivíduos TB coinfectados com HIV mediante ao início do tratamento antirretroviral (TARV). Juntou-se a essa tese outro manuscrito que investigou a aplicação de técnicas de multi-ômicas para a bioprospecção de marcadores associados a TB-SIRI. MÉTODOS: Este foi um estudo retrospectivo de pacientes TB-HIV do sul da Índia antes e semanas após o início do TARV, em que houve a caracterização fenotípica dos linfócitos e determinação do grau de inflamação sistêmicas nestes pacientes. RESULTADOS: Observamos que a SIRI está relacionada com alterações no metabolismo de aminoácidos e lipídios. Tais vias metabólicas foram correlacionadas com mediadores pro-inflamatórios elevados durante a SIRI. O segundo manuscrito desta tese revelou que pacientes que desenvolveram SIRI possuíam uma linfopenia de células T CD4+ acentuada antes do início da TARV e possuíam elevadas frequências de células T CD8+. Além disso, os episódios de IRIS foram associados às disfunções da dinâmica de ativação linfocitária, com elevação de linfócitos T CD4+ HLA-DR+ e células T CD4+ e CD8+ expressando granzima B. Desenvolvemos modelos baseados em algoritmos de aprendizado de máquinas que foram capazes de predizer e diagnosticar IRIS levando em consideração as frequências de linfócitos expressando moléculas associadas a ativação celular. No terceiro manuscrito, observamos que a reconstituição do compartimento de células T CD8+ de memória é predominada por células de memória efetora em pacientes que desenvolvem SIRI. Por sua vez, a magnitude da variação das frequências dessas células esta correlacionada positivamente com as abundancias de citocinas pro-inflamatórias. Em pacientes que manifestaram SIRI associada a TB, ocorre retenção de células T CD8+ expressando CXCR3 em sítios persistentemente inflamados e a frequência destas células foi capaz de distinguir os pacientes com grande acurácia. CONCLUSÃO: Os dados apresentados nesta tese ratificam o papel da ativação linfocitária na imunopatogênese da SIRI, sendo que os subconjuntos destas células e o perfil de alteração metabólicas são capazes de diagnosticar ou predizer a manifestação desta síndrome.

INTRODUÇÃO: As leishmanioses podem apresentar diferentes manifestações clínicas, desde lesões localizadas na pele, bem como a forma mucocutânea que acomete a mucosa, além da leishmaniose visceral, forma mais grave que pode levar à morte se não tratada. A disseminação e homing de células infectadas contendo antígenos de Leishmania são fundamentais para a sobrevivência deste parasito no hospedeiro e para o estabelecimento da lesão. Entretanto, ainda hoje, pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na adesão da célula hospedeira e sua migração na infecção por este protozoário. Em estudo realizado em ambiente bidimensional, foi observada uma redução da migração de macrófagos após a infecção por L. amazonensis. associada a uma redução da formação de complexos de adesão e alteração da dinâmica de actina. Entretanto, o processo de migração transendotelial de macrófagos envolve sinais regulatórios oriundos de um ambiente tridimensional. OBJETIVO: Assim, o presente estudo tem como objetivo avaliar a migração de macrófagos infectados por Leishmania e os mecanismos envolvidos neste processo, em ambiente tridimensional. METODOLOGIA: Para isso, macrófagos derivados de medula óssea foram infectados por L. amazonensis, L. braziliensis ou L. infantum e colocados em matriz de colágeno I para avaliação da migração utilizando HighContent Analysis System do modelo Operetta (PerkinElmer). Adicionalmente, avaliamos a formação de complexos de adesão pela imunomarcação de p-FAK e ppaxilina, a polimerização do citoesqueleto de actina por faloidina, Cdc42, RhoA, Rac1 e gelsolina, utilizando microscopia confocal ou quantificação da intensidade média de fluorescência por poço através do Operetta. Além disso, utilizando matrigel, avaliamos a secreção de proteases por estas células. RESULTADOS: Nossos resultados mostram uma redução da migração de macrófagos infectados por L. amazonensis, L. braziliensis e L. infantum em ambiente tridimensional. Adicionalmente, as análises mostram uma redução da formação de complexos de adesão nestas células. Em relação a organização de actina, houve um aumento da expressão de Rac1 após a infecção por L.braziliensis e L.infantum, mas uma redução da expressão de Cdc42. Mostramos ainda que houve uma redução da expressão de RhoA e gelsolina após a infecção por L. amazonensis e L. infantum. Por fim, nossos resultados mostram que a infecção por diferentes espécies de Leishmania não altera a secreção de proteases por macrófagos. CONCLUSÃO Nossos dados em conjunto mostram que a infecção por L. amazonensis, L. braziliensis ou L. infantum leva à redução da migração de macrófagos em ambiente tridimensional. Esta redução da migração está associada à alteração da dinâmica de actina e redução formação de complexos de adesão nestas células.

Introdução: A leishmaniose é uma zoonose causada pelo protozoário do gênero Leishmania ssp., que geralmente apresenta diferentes manifestações clínicas, a leishmaniose cutânea (LC), a leishmania muco-cutânea (LMC) e a leishmaniose visceral (LV). A disseminação e homing de células infectadas contendo antígenos de Leishmania são fundamentais para a sobrevivência do parasito no hospedeiro e para o estabelecimento da lesão. Além de fatores do hospedeiro, fatores intrísecos ao parasito são componentes importantes para a manutenção da infecção no hospedeiro. Estudos recentes já demonstraram a relevância da presença do LPG de Leishmania na interação com células hospedeiras, no mecanismo de sobrevivência do parasito, bem como no estabelecimento da infecção. Entretanto, a relação do LPG com a migração e adesão de células hospedeiras humanas ainda precisa ser elucidada. Objetivo: Desta forma, o objetivo deste trabalho é avaliar o papel do lpg2 na adesão e migração de células hospedeiras humanas infectadas por L. infantum. Material e Métodos: Para isso, células dendríticas e macrófagos humanos coletados de doadores saudáveis foram cultivados, infectados por L. infantum selvagem ou nocaute para o gene lpg2 e submetidos à migração utilizando um sistema Transwell na presença de quimioatratantes. Além disso, foram realizadas imunomarcações com os anticorpos para FAK e paxilina para avaliar a formação de complexos de adesão; e com anticorpos para Rac1, Cdc42, RhoA e faloidina para avaliar a polimerização do citoesqueleto de actina, utilizando microscopia confocal. Resultados: Os resultados obtidos revelam um aumento da migração de células dendríticas após a infecção por L. infantum selvagem. Entretanto, observa-se uma redução da migração de células dendríticas após a infecção por L. infantum nocaute para o gene lpg2, em comparação àquelas infectadas com o parasito selvagem. Os resultados mostram ainda um aumento da formação de complexos de adesão e da polimerização de actina em células dendrítica infectadas por L. infantum selvagem, em comparação àquelas infectadas por L. infantum nocaute para o gene lpg2. Em macrófagos, observamos uma redução da migração de células infectadas por L. infantum selvagem. Entretanto, observa-se um aumento da migração de macrófagos após a infecção por L. infantum nocaute para o gene lpg2, em comparação àquelas infectadas com o parasito selvagem. Os resultados mostram ainda um aumento da formação de complexos de adesão em macrófagos infectados por L. infantum selvagem e por parasitos nocaute para o gene lpg2. Adicionalmente, foi observado uma redução da marcação de faloidina e Rac1 nas células infectadas por L. infantum selvagem e pelo parasito nocaute para o gene lpg2, em comparação as células não infectadas. Adicionalmente, foi observado um aumento da expressão de RhoA nas células infectadas pela L. infantum selvagem, em relação a células não infectadas. Entretanto observa-se uma redução da expressão de RhoA em macrófagos nocaute para o gene LPG2, em comparação as células infectadas com o parasito selvagem. Conclusões: Os dados apresentados neste trabalho sugerem que o LPG de L. infantum apresenta um papel importante na modulação da migração de células hospedeiras humanas infectadas. Experimentos adicionais são importantes para confirmação e melhor entendimento do papel do LPG na migração de células infectadas por L. infantum.

RESUMO

INTRODUÇÃO: A Anemia Falciforme é uma hemoglobinopatia autossômica recessiva, caracterizada pela mutação na sexta posição do gene da β-globina (GAG à GTG) que leva à substituição do ácido glutâmico por valina, gerando a hemoglobina S (HbS). Sua patogênese está relacionada com a polimerização da HbS, vaso-oclusão e inflamação estéril com posteriores complicações e alterações sistêmicas. As úlceras falciformes são complicações que afetam 8% a 10% dos pacientes com AF. Nesse contexto, embora seja estabelecido que a úlcera falciforme tanto resulte da predisposição dos pacientes, como induza processos inflamatórios, os mecanismos envolvidos, em particular, a participação dos mediadores lipídicos, permanecem por ser melhor investigados. OBJETIVO: Caracterizar o perfil hematológico, bioquímico e inflamatório de camundongos humanizados para anemia falciforme e avaliar as alterações locais e sistêmicas induzidas pela úlcera cutânea nestes animais. MATERIAIS E MÉTODOS: Após anestesia, amostras de sangue total, soro, órgãos e fragmentos de pele de camundongos da linhagem Townes B6:129 foram coletados a fim de determinar as diferenças basais em parâmetros bioquímicos, hematológicos e inflamatórios de camundongos sadios (AA), com traço falciforme (AS) e com anemia falciforme (SS). No modelo murino de úlcera falciforme, quatro lesões cutâneas de 4 mm foram induzidas no dorso dos animais, e amostras destas lesões foram coletadas nos tempos de 0, 24 e 72h após a indução das úlceras.  Nestes mesmos períodos de avaliação, amostras de sangue total foram destinadas à análise de hemograma e leucograma por análise semiautomatizada, utilizando equipamento URIT 5160 Vet e esfregaços sanguíneos corados com Romanowsky. Análises bioquímicas de colesterol total (CT), triglicerídeos, AST, ALT, ureia e creatinina realizada no soro, por espectrofotometria por método automatizado no equipamento Smart Vet 200+. As concentrações de PGE₂ e LTB₄ no soro foram avaliados por ELISA. A expressão de genes associados à produção de eicosanoides tais como COX-1, COX-2, 5-LO, PLA₂ e PLIN₂ nas lesões cutâneas foram determinadas por RT-qPCR.  Análises histológicas do infiltrado inflamatório foram realizadas por microscopia em lâminas coradas por H&E, utilizando o programa Imaje J 1.53. As diferenças entre os grupos e respectivos tempos foram avaliadas por pelos testes One-way ANOVA, Mann-Whitney e Kruskal-Wallis, utilizando o programa Graphpad Prism 8.0.2. RESULTADOS: A caracterização dos parâmetros basais mostrou que animais SS apresentaram anemia hemolítica grave e leucocitose, enquanto o grupo AS se assemelhou ao controle. Níveis elevados de AST foram observados nos grupos AS e SS em comparação ao grupo AA, enquanto ALT do grupo SS estava elevada em comparação com os grupos AA e AS, e os níveis de creatinina do grupo SS foram significativamente maiores que o grupo AA. No grupo SS a concentração sérica de PGE₂ se mostrou elevada enquanto os níveis de LTB₄ estavam diminuídos em comparação com os animais do grupo AA e AS. Correlações negativas entre hemoglobina, hemácias, hematócrito e PGE₂ foram observadas. As alterações induzidas pela úlcera no hemograma do grupo SS não foram significantes. No entanto, houve redução dos leucócitos totais em 24h e aumento em 72h nesse grupo. Em contrapartida, o infiltrado leucocitário tecidual apresentou aumento em 24h e leve redução em 72h. No grupo SS em 24h, houve redução de CT e de AST. Já em 72h, observamos aumento do CT e redução de ALT e creatinina no mesmo grupo. Ainda no grupo SS, o perfil de expressão da COX-2 no tecido aumentou em 72h, enquanto a PGE₂ e LTB₄ sistêmicos não apresentaram alterações significativas. CONCLUSÃO: Animais transgênicos com anemia falciforme apresentam alterações bioquímicas e hematológicas que estão correlacionadas a um desbalanço no metabolismo lipídico e produção de eicosanoides, contribuindo para um maior estado inflamatório em nível basal. A indução de úlcera cutânea neste modelo leva a um maior recrutamento de leucócitos nos animais doentes em comparação com os animais saudáveis e com traço falciforme, o que parece estar relacionado com as alterações bioquímicas, hematológicas e inflamatórias apresentadas por estes animais.  

RESUMO INTRODUÇÃO: A esquistossomose é uma doença negligenciada causada por helmintos do gênero Schistosoma, e reconhecida como um importante problema de saúde pública que afeta especialmente as comunidades mais pobres ao redor do mundo. A esquistossomose possui uma ampla distribuição ao redor do mundo, porém, está restrita apenas às zonas tropical e subtropical, onde vivem os parasitos e seus hospedeiros intermediários, fator esse que influencia diretamente na distribuição global da doença. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) as pessoas mais suscetíveis a contrair a esquistossomose são as que habitam áreas carentes, cuja fonte de renda principal seja a pesca ou a agricultura em rios e lagos com caramujos infectados. O diangóstico atualmente é realizado por exame parasitológico de fezes, pelo método Kato-Katz, o que representa uma limitação dos estudos e inquéritos parasitológicos, considerando o cenário epidemiológico atual do Brasil. Alguns testes diagnósticos estão sendo propostos e avaliados em todos o mundo, dentre eles, destaca-se o teste rápido em urina POC-CCA. OBJETIVO: Determinar a frequência de positividade do teste rápido em urina para o diagnóstico da esquistossomose, POC-CCA, em uma população de alta prevalência no estado da Bahia, antes e após o tratamento da esquistossomose. METODOLOGIA: Trata-se de uma coorte realizada no município de Conde-BA, localizado a cerca de 170 km de Salvador-BA. Foram incluídos indivíduos de ambos os sexos com idade entre 4 e 70 anos que entregaram amostras de fezes e urina. As amostras de fezes foram utilizadas para a confecção de duas lâminas de Kato-Katz, e as de urina para a execução do POC-CCA e tira reagente de urina. Para as análises do póstratamento, todos os indivíduos que receberam o tratamento para a esquistossomose e enviaram amostras de fezes e urina foram incluídos. O acompanhamento foi realizado em cinco momentos: avaliação pré-tratamento (D0), tratamento (D30), controle de cura (D30), acompanhamento 180 (D180) e 360 (D360) dias após tratamento. RESULTADOS: Foi identificada a presença de ovos de S. mansoni em 189 indivíduos (55,59%) com mediana da carga parasitária de 36 (12–108) ovos por grama de fezes (OPG). Para a avaliação do POCCCA das 273 amostras no D0, 58,24% (n=159) foram positivas para o Antígeno Catódico Circulante (CCA), destes, 18,32% (n=50) foram considerados falso-negativos; 19,05% (n=52) falso-positivos; 23,44% (n= 64) verdadeiro-negativos e 39,19% (n=107) verdadeiro-positivos. Demonstramos ainda que a densidade da urina é um fator que interfere no desempenho do POC-CCA, onde urinas com densidade mais elevada aumentar a chance de resultados falsonegativos no POC-CCA CONCLUSÃO: O POC-CCA, apesar de apresentar uma frequência de resultados positivos maior do que a trazida por duas lâminas de Kato-Katz, apresenta um número considerado de falso-negativos, especialmente entre os indivíduos com baixa carga parasitária. O POC-CCA mostrou as mesmas falhas que o Kato-Katz, no que diz respeito a sensibilidade em amostras com baixa carga parasitária, além disso, o método demonstrou sofrer influência da densidade urinária. Por essa razão a utilização em larga escala do POCCCA não pode ser recomendada em seu formato atual. É possível que a adequação do teste ou do estado do paciente, como a recomendação de hidratação do paciente antes da coleta de material, ou utilização de solução tampão durante a aplicação da amostra, possam auxiliar na melhoria de desempenho deste teste em regiões de alta endemicidade do Brasil.

RESUMO INTRODUÇÃO: As leishmanioses são um conjunto de doenças consideradas negligenciadas pela Organização Mundial da Saúde, que atingem cerca de 1 bilhão de pessoas que estão sob risco de infecção. As manifestações clínicas variam de acordo com a espécie do parasito, da resposta imune e background genético do paciente. Para o tratamento da leishmaniose os fármacos mais utilizados atualmente são os antimoniais pentavalentes. Entretanto estas drogas possuem elevada toxicidade e efeitos colaterais desconfortáveis. Neste contexto, a busca de novos fármacos com alta ação leishmanicida e reduzida toxicidade faz-se necessária. Uma alternativa interessante tem sido o uso de fármacos que atuam em mecanismos da resposta imune, pois estes têm demonstrado resultados promissores. Dentre eles, o dietilditiocarbamato (DETC) é um quelante de cobre que inibe o funcionamento da superóxido dismutase, e já foi demonstrado que ele aumenta a produção de superóxido e diminui a carga parasitária na leishmaniose tegumentar experimental. Outro fármaco, a hidroxilamina, reage com o superóxido e durante esse metabolismo promove o aumento de peróxido de nitrito, molécula capaz de destruir parasitos intracelulares. OBJETIVO: Por isto, o objetivo deste trabalho foi testar a ação in vitro da associação de Hidroxilamina e DETC contra Leishmania braziliensis, amazonensis e infantum. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram realizados testes de toxicidade em Leishmania braziliensis, amazonensis e infantum e em macrófagos murinos derivados de medula de camundongo BALB/C. Além disso, macrófagos derivados de medula óssea foram infectados por L. amazonensis, L. braziliensis e L. infantum e tratados por 48 horas para avaliar a percentagem de infecção e número de amastigotas através de contagem em microscópio de fluorescência. RESULTADOS: Nossos resultados mostraram uma redução do crescimento e viabilidade dos parasitos quando tratados a partir de 2 µM de DETC e na concentração mais alta de hidroxilamina (5mM). O índice de inibição de 50% foi de de 33,03 µM para hidroxilamina, 0,247 µM para DETC e 1,676 µM para combinação das drogas contra a Leishmania braziliensis. E contra os macrófagos murinos o índice de inibição de 50% foi de 237,0 µM para hidroxilamina, 11,47 µM para DETC e 67,16 µM para combinação das drogas (DETC/Hidroxilamina=1:2,5). Foi observado uma ação antagonista em macrófagos murinos usando a concentração combinada de 20uM de DETC e 500uM de hidroxilamina. Por outro lado, esta concentração combinada foi altamente sinérgica para L. braziliensis. A combinação dessas concentrações também foi capaz de reduzir significativamente a percentagem de infecção e o número de amastigotas por 100 células. CONCLUSÕES: Nosso resultados demonstram que a associação de hidroxilamina com DETC tem efeitos antiproliferativos potentes em promastigotas e amastigotas de L. braziliensis, amazonensis e infantum e apresenta baixa toxicidade em macrófagos murinos.

O câncer de pulmão é a causa mais comum de mortalidade relacionada ao câncer em todo o mundo, representando 18% de todas as mortes por câncer. As novas estratégias de tratamento tornam necessária uma abordagem multidisciplinar integrada entre patologistas, clínicos, biólogos moleculares, radiologistas e cirurgiões. A investigação através de técnicas de imagem e metabólicas, como PET-TC, na avaliação de metástases para linfonodos mediastinais vem sendo recomendada; contudo, a análise dos resultados é dificultada prioritariamente por resultados falsos positivos. O presente estudo investigou as alterações histopatológicas neoplásicas e, especialmente, não neoplásicas, assim como a imunoexpressão de GLUT1 e Ki67 para avaliação de metabolismo celular e proliferação celular, respectivamente, correlacionando-as aos resultados do exame PET-TC com 18F-FDG numa amostra de pacientes com CPNPC. Não houve associação entre padrão histológico em linfonodos e captação no PET; observou-se associação estatisticamente significante dos padrões histológicos de histiocitose com extensão paracortical com antracose (p=0,0001) e de hiperplasia folicular com número de cigarros/dia (p= 0,001), respectivamente. A reação granulomatosa foi incomum acometendo 4/54 pacientes com resultado falso positivo correspondente em apenas 1/54 (1,8%). Houve correlação estatisticamente significante entre o índice de proliferação celular (Ki67) e o metabolismo celular (GLUT1); assim como entre o índice de proliferação celular (Ki67) e SUV 1h (p=0,013) e SUV 2h (p=0,020); no entanto, o mesmo não ocorre para avaliação de metabolismo celular (GLUT1 - EIR), possivelmente em decorrência de captação de glicose por outro transportador em linfonodos reativos. A associação de técnicas de imagem e metabolismo unindo tomografia computadorizada e PET, aumentam a especificidade do exame de 54% e 57%, respectivamente, para 71%; e, o valor preditivo negativo atinge 71%. Além disso, o achado de lesão à distância através do PET-TC, indica a biópsia de lesão potencialmente mais avançada, evitando cirurgias desnecessárias em pacientes com metástases à distância.

RESUMO Introdução: As artrogriposes múltiplas congênitas (AMC) são contraturas articulares em mais de duas articulações em diferentes áreas do corpo, observadas desde o nascimento. É um achado clínico, observado em cerca de 400 doenças distintas, a maioria de origem genética. Todas elas resultam em acinesia fetal por redução dos movimentos fetais intrauterino, com limitações articulares, que podem estar associadas a outros achados como dismorfias, fraqueza muscular, alterações cognitivas e envolvimento de outros órgãos. As doenças neuromusculares são uma causa frequente de AMC. A definição etiológica é fundamental para definição terapêutica, aconselhamento genético e prognóstico. A frequência das AMC é desconhecida no Brasil e não existem estudos demográficos para esta população em nosso meio. Objetivo: O presente estudo objetivou identificar a etiologia das AMC em indivíduos assistidos em serviço público especializado em doenças neuromusculares e genéticas do Hospital Universitário Professor Edgard Santos, além de levantar dados demográficos e clínicos destes pacientes. Material e Métodos: Um estudo prospectivo, formado por uma amostra de conveniência de pacientes encaminhados para avaliação, onde foi elaborado um protocolo racional de investigação baseado em aspetos clínicos e exames complementares. Após preenchimento da ficha padrão, os pacientes realizavam investigação com exames complementares, tais como: dosagem de creatinofosfoquinase, eletroneuromiografia, ressonância magnética de crânio, cariótipo, biópsia muscular e estudo molecular. Resultados: Durante o período de 42 meses foram avaliados 41 pacientes. 53,7% eram do sexo feminino e a média de idade na primeira avaliação foi de 8,8 anos. Cerca de 30% dos pacientes relatavam uma história familiar positiva. O número médio de articulações envolvidas foi 6, sendo o pé torto a alteração mais observada (85,4%). O diagnóstico etiológico foi estabelecido em 75,6% dos casos, com base no fenótipo e em exames complementares. Em quatro pacientes de três famílias distintas, o diagnóstico foi estabelecido por exoma. Do total dos casos diagnosticados, 39% foram causados por doenças neuromusculares e do tecido conjuntivo, 24% classificados como amioplasia, em 12 % a causa foi acometimento do sistema nervoso central e em 24,4% não foi estabelecido um diagnóstico etiológico. Foram encontradas nesta casuística formas raras de AMC e variantes patogênicas previamente não descritas em genes associados a miopatias. Conclusão: O presente estudo demonstrou as principais características clínicas e morfológicas de diversas formas de AMC na população estudada. Foi capaz de estabelecer um diagnóstico etiológico na maioria dos casos com AMC, com base em dados de exame clínico, biópsia muscular, eletroneuromiografia e estudo genético.

INTRODUÇÃO: a doença falciforme (DF) é um grupo de hemoglobinopatias onde a
anemia falciforme (AF), caracterizada pela homozigose HbSS, é a forma mais grave,
enquanto a hemoglobinopatia SC, apesar de menos grave, é a segunda mais prevalente.
As principais manifestações clínicas presentes na DF são decorrentes da hemólise
contínua e do processo inflamatório crônico, levando à anemia e fenômenos de vasooclusão. A vaso-oclusão tem sido associada a presença de hemácia falcizada, e a
ativação de reticulócitos, leucócitos e plaquetas, juntamente com alterações no
endotélio vascular e hipercoagulabilidade sanguínea. Diversos fatores ambientais e
genéticos têm sido associados ao quadro clínico heterogêneo presente na doença.
Portanto, estudos envolvendo genes associados a disfunção endotelial são importantes
para a compreensão da fisiopatologia da DF. OBJETIVO: identificar biomarcadores
genéticos de disfunção endotelial e associações a dados laboratoriais e manifestações
clínicas em indivíduos com AF e doença SC. MÉTODOS: foi realizado um estudo de
corte transversal cujos dados clínicos foram obtidos a partir de entrevistas aos pacientes;
as análises hematológicas e bioquímicas foram desenvolvidas por métodos
automatizados; as análises moleculares foram realizadas para determinar os haplótipos
βS, talassemia α e os polimorfismos SELP (rs6127, rs6131 e rs6136); SELPLG
(rs2228315) ; CD40 (rs1883832) ; e CD40L (rs3092952). RESULTADOS: o primeiro
manuscrito demonstrou que os pacientes com AF exibiram quadro de anemia, hemólise,
leucocitose e inflamação mais proeminente que os pacientes com doença SC, que
apresentaram marcadores lipídicos alterados. A principal causa de internação em ambos
os grupos foram as crises de dor, as quais estiveram asscicadas à contagem elevada de
hemácias em pacientes com AF. A ocorrência de dactilite apresentou frequência
significativamente maior nos pacientes com AF e foi associada ao aumento do RDW,
monócitos e PCR, bem como à terapia pela hidroxiuréia (HU). Pneumonia e STA foram
associadas com níveis elevados de PCR e LDL-C, respectivamente. Nos indivíduos com
doença SC, a história prévia de esplenomegalia foi associada à contagem mais baixa de
plaquetas. O segundo manuscrito demonstrou associação da variante CD40L
(rs3092952) com a história prévia de crises de dor e dactilite em pacientes com AF.
Além disso, nossos resultados sugerem a associação independente da variante SELP
(rs6127) com o aumento dos níveis de endotelina 1 (ET-1) e da variante SELP (rs6131)
com níveis elevados de glicose. Também foi reforçado que indivíduos com AF em
terapia com HU apresentaram redução da contagem de monócitos e dos níveis de LDH.
O terceiro manuscrito demonstrou que indivíduos com AF portadores do haplótipo TTC
do gene SELP apresentaram níveis reduzidos de glicose em comparação com aqueles
com haplótipo não-TTC. Indivíduos com haplótipo TTT apresentaram níveis reduzidos
de colesterol total e LDL-C em relação aqueles com haplótipos não-TTT. Além disso,
foi observado que os indivíduos portadores dos haplótipos βS CAR/BEN ou CAR/CAR
apresentaram níveis elevados de colesterol total. CONCLUSÕES : Os nossos
resultados confirmam estudos anteriores sobre as diferenças nos aspectos clínicos e
laboratoriais entre os indivíduos com AF e HbSC. O nosso estudo também confirmou
que a terapia com HU está associada a melhora dos perfis inflamatório e hemolítico; e
que indivíduos com AF portadores do haplótipo βs CAR/BEN ou CAR/CAR podem
apresentar o perfil clínico mais grave. Além disso, os dados sugerem que variantes nos
genes SELP e CD40L estão associadas a complicações clínicas e marcadores
laboratoriais de vaso-oclusão; e que haplótipos no gene SELP podem regular
biomarcadores clássicos envolvidos na disfunção endotelial em pacientes com AF.

INTRODUÇÃO: O carcinoma escamocelular oral (CECO) é o subtipo tumoral que mais acomete os tecidos bucais. A via Hedgehog (HH) é uma importante cascata no desenvolvimento embrionário, que também está associada ao desenvolvimento tumoral, inclusive do CECO. A via HH ocorre, de maneira canônica, no Cílio primário (CP), estrutura que funciona como um sensor, responsável por abrigar diversas vias de sinalização. Uma alteração da função do CP pode culminar em diversos problemas, inclusive neoplasias. HIPÓTESE: Há perda do CP em CECO, o que favorece a manutenção da proliferação celular e desregulação da via HH. OBJETIVO: Estudar o processo de ciliogênese e a presença do cílio primário em tecidos e linhagens celulares de CECO, bem como a relação entre CP, moléculas HH e proliferação celular deste tipo tumoral. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizadas linhagens celulares tumorais (CT), não metastática (CAL27) e metastática (HSC3), linhagem celular não tumoral (HGK, controle) e 22 amostras de tumores humanos (TH). As linhagens tumorais foram cultivadas em meio DMEM completo suplementados com 10% de Soro Bovino Fetal, 1% de antibióticos e 8% de hidrocortisona; a linhagem HGK foi cultivada em meio Keratinocyte SFM. As células foram analisadas nos tempos 0h e, para CT, também nos tempos 6, 12, 24 e 48h em privação de soro (sincronização em G0). qPCR foi realizado no tempo 0h (CT e HGK) e nos tempos 6, 12 e 24h (CT), como também para as amostras de TH para análise da expressão gênica da via HH (PTCH1, SMO, GLI1 e SHH), CP (KIF3A, IFT88, AURKA e BORA) e proliferação (Ciclina D1). Para caracterização das proteínas do CP (α-Tubulina acetilada), via HH (SMO e GLI1) e proliferação (Ki-67 e profilina), foram realizados os ensaios de Western Blot (WB) e Imunofluorescência (IF) nas CT (tempos 0, 24 e 48h) e HGK (tempo 0h), assim como Imuno-histoquímica nos TH. A análise estatística foi realizada utilizando o teste ANOVA (p<0,05). RESULTADOS: Genes de montagem e desmontagem apresentaram níveis de expressão abaixo ou similar nas CT quando comparadas à HGK; Não houve diferença estatisticamente significante entre componentes de montagem e desmontagem do CP, proliferação celular e moléculas HH. SHH não foi encontrado nas linhagens estudadas. CP, ativação da via HH (GLI1 nuclear), SMO nuclear e citoplasmático, e proliferação celular (Ki-67 nuclear) foi encontrado nas CT. CONCLUSÕES: O CP está presente em células metastáticas e não-metastáticas de CECO, bem como em tumores humanos. Nestas células e tumores, GLI1 e SMO nucleares foram descritos independente da presença do CP, mas também em células que exibem esta organela. Em conjunto, esses resultados indicam que há ativação da via HH, canônica e não-canônica, em CECO. Ainda, a proliferação celular ocorreu de forma independente do CP nas linhagens celulares

Material Sigiloso

RESUMO
INTRODUÇÃO: Considerada uma afecção rara da Leishmaniose Tegumentar, a Leishmaniose Recidiva Cútis (LRC) é caracterizada por lesões nodulares em torno ou no interior da cicatriz de uma úlcera previamente produzida por Leishmania sp., de aparecimento tardio e longa duração. OBJETIVO: Caracterizar citocinas, quimiocinas e células T de memória imunológica em pacientes com LRC e LCL. MATERIAIS E MÉTODOS: O grupo amostral é representado por 36 pacientes com LRC e 36 com LCL, diagnosticados como positivos pelo teste parasitológico e pelo teste de Montenegro. Foram dosadas as citocinas dos kits “inflamatório” (IL-1β, IL-8, IL-10, e IL-12p40) , “Th1/Th2/IL 17” (IL2, IL-4, IL-6, TNF, IFN e IL17) e “quimiocinas” (Rantes, MIG, MCP-1 e IP-10) utilizando kits Cytometric Bead Array (CBA) no plasma e in vitro. Para a marcação extracelular de células de memória foram utilizados anticorpos monoclonais específicos, conjugados com fluorescências para moléculas de caracterização celular (CD4+ ou CD8+). Para o painel foi inserida a marcação para células de memória CD45RO+ e CCR7+ (naive, memória efetora (TME), memória central (TMC) e células efetoras); moléculas de ativação celular (CD25, CD69 e HLA-DR) e moléculas de adesão (CD62Llow e CD62high). As amostras foram adquiridas no FACSFortessa (BD) e analisadas no Graph Pad. RESULTADOS: As citocinas plasmáticas dosadas nos kits “inflamatório” e “Th1/Th2/IL-17” em LRC e LCL estavam mais elevadas entre os indivíduos de lesão ativa ou curados em relação aos controles sadios. Em LRC IL-8 e IL-12p40 apresentaram significância somente dos curados em relação aos controles sadios. In vitro, no kit “Th1/Th2/IL-17” não foram evidenciadas diferenças ao analisar as formas clínicas isoladamente (ativos versus curados) e nem entre si (LRC versus LCL). Os níveis de IL-8 em LRC e LCL estiveram mais elevados entre os ativos e curados após estímulo com Leishmania braziliensis. Ao comparar LRC versus LCL MIG (CXCL9) e IP-10 (CXCL10), responsáveis pelo recrutamento celular para o local da infecção, apresentaram-se diminuídas no plasma de indivíduos com lesão ativa. Não foi detectada diferença entre as formas clínicas na expressão de CD45RO+ em linfócitos T (CD4+ e CD8+) de memória imunológica. Já os marcadores de ativação CD25 (ativação intermediária) e HLA-DR (ativação tardia) apresentaram menor expressão em pacientes com LRC em relação aos ativos por LCL, e as células T, tanto CD4+ quanto CD8+, de pacientes com LRC em relação aos pacientes LCL apresentaram menor expressão CD62Llow, maior quantidade de CD62Lrigh e menor quantidade de células TME no sangue periférico. CONCLUSÕES: Nossos dados sugerem que na LRC, a diminuição de IP-10 poderia caracterizar-se como biomarcador para identificação precoce desta forma clínica e que possa estar relacionada aos demais eventos da resposta celular (ativação, migração e memória efetora), associada a difícil resposta terapêutica e resistência ao tratamento.

Pacientes com anemia falciforme (AF) apresentam variabilidade fenotípica elevada, podendo
apresentar diversas manifestações clínicas, incluindo o acidente vascular cerebral (AVC). No
contexto da AF, o comprometimento das artérias cerebrais está primordialmente associado à
inflamação crônica, hemólise e a anemia. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi
identificar a presença de polimorfismos em genes de citocinas inflamatórias buscando associar a
frequência de tais alterações ao desenvolvimento do AVC em crianças com AF. Para isto, foram
investigados 66 indivíduos, 24 que experimentaram o AVC, formando o grupo caso, e 42 que
nunca experimentaram o AVC, compondo o grupo controle. Foram analisados os parâmetros
hematológicos, bioquímicos e o perfil inflamatório, bem como a presença de polimorfismos em
genes de citocinas inflamatórias, tais como TNF -308 G>A (rs1800629), IL1B +3954 C>T
(rs1143634), IL4 -590 C>T (rs2243250) e IFNG +874 T>A (rs2430561). Os marcadores
hematológicos, bioquímicos e imunológicos foram investigados através de métodos
automatizados e os marcadores genéticos foram identificados pelas técnicas de reação em cadeia
da polimerase e Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). A análise dos
parâmetros laboratoriais, revelou um aumento na contagem de reticulócitos nos indivíduos do
grupo caso (p=0,0101). Também foi encontrada a associação entre o AVC e dosagem de
albumina (p=0,0006), proteínas totais (p=0,0087) e ácido úrico (p=0,0395). Com relação a
análise genética, foi encontrada a associação do polimorfismo TNF -308 G>A, onde o alelo A
esteve associado à ocorrência do AVC (p=0,430). A análise multivariada mostrou a associação
entre a presença do polimorfismo TNF -308 G>A e a ocorrência do AVC (p= 0,016). Foi
encontrada a frequência elevada de indivíduos com o genótipo mutante para o polimorfismo do
gene do IFNG e a associação significativa entre a presença do polimorfismo IL4 -590 C>T e
alguns parâmetros laboratoriais, como contagem de linfócito (p=0,0152), plaquetas (p=0,0203),
proteínas totais (0,0227) e bilirrubina direta (p=0,0054). Analisando os parâmetros laboratoriais
no grupo de indivíduos com AF foi identificada a associação significativa entre a presença do
alelo T no polimorfismo IL4 -509 C>T e alguns marcadores, como VCM (p=0,0105), HCM (p=
0,0421), RDW (p=0,0105), LDL-C (p=0,0351), AST (p=0,0292) e bilirrubina total (p=0,0468).
Além disso, foi encontrada associação entre a dosagem das citocinas pró inflamatórias, IL-12 (p=
0,0095), IL1-β (p= 0, 0300) e IL-8 (p= 0,0167) em indivíduos com o alelo mutante para o
polimorfismo IL4 -509 C>T. Nenhuma associação estatística foi encontrada entre os parâmetros
avaliados e a presença dos polimorfismos nos genes da IL1B e IFNG. Assim, pode-se concluir
que os pacientes com AF e histórico prévio de AVC apresentaram alterações nos parâmetros

laboratoriais e apresentaram frequência elevada do alelo A do polimorfismo TNF -308 G>A.
Além disso, pode-se observar que o polimorfismo IL4 -590 C>T esteve associado a alterações
em marcadores laboratoriais, alterando o nível de expressão de citocinas inflamatórias. Esses
resultados evidenciam a necessidade de se investigar possíveis interferências genéticas, visando
estabelecer os efeitos funcionais de tais variáveis no desfecho do AVC em pacientes com AF.

INTRODUÇÃO: A esquistossomose é uma doença parasitária considerada um problema de saúde prevalente em países tropicais em desenvolvimento, sendo o Praziquantel (PZQ) a droga de primeira escolha para o tratamento. O verme adulto do S. mansoni reside no lúmen vascular, apesar disso pouco se sabe sobre a interação das células endoteliais com o verme adulto e a participação dessas células durante a progressão ou proteção na infecção. Além disso, ainda não foi avaliada a expressão de genes antioxidantes por essas células durante a esquistossomose e após o tratamento. OBJETIVO: Avaliar a expressão de genes antioxidantes em células HUVEC cultivadas com vermes adultos de S. mansoni e expostas ao tratamento, bem como a capacidade de sobrevivência de vermes cultivados com HUVEC e expostas a agentes oxidantes. METODOLOGIA: Os nomes dos genes, enzimas e substratos utilizados nesse trabalho foram apresentados de forma codificada para mater sigilo por se tratar de informação sensível para inovação. Células HUVEC foram cultivadas e desafiadas com vermes adultos do S. mansoni e submetidas ao tratamento com PZQ nos tempos de 1, 3 e 6 horas. Após o desafio, foi realizada a extração de RNA utilizando trizol. Em seguida, foi realizada a reação de qPCR de genes antioxidantes. Para avaliar a capacidade de sobrevivência dos vermes adultos frente ao estresse oxidativo, foi realizado o cultivo de vermes adultos com o agente oxidante OX e vermes adultos com OX na presença de HUVEC. Os vermes foram avaliados por microscopia óptica. RESULTADOS: Células HUVEC apresentaram aumento na expressão dos genes antioxidantes αOX-A e αOX-B quando desafiadas apenas com o PZQ. Além disso, foi interessante notar que os vermes adultos não foram capazes de induzir ou suprimir os genes antioxidantes avaliados, com exceção do αOX-E, o qual teve sua expressão aumentada significativamente em células HUVEC após 6 horas de exposição a um casal de verme adulto. Quando avaliada a capacidade de sobrevivência, os vermes adultos cultivados com células HUVEC e desafiadas com OX apresentaram maior percentual de sobrevivência e resistiram a maiores concentrações de OX quando comparados a vermes adultos desafiados com OX sem a presença das HUVEC. Foi adicionado à cultura de vermes adultos a proteína antioxidante αOX-E juntamente com o agente oxidante OX, sendo demonstrando aumento da sobrevivência dos vermes também nessa condição mesmo em altas concentrações de OX. Assim, vermes adultos cultivados com células HUVEC se comportam semelhante à cultura dos vermes em que a αOX-E foi adicionada. CONCLUSÃO: O verme adulto de S. mansoni parece induzir as células HUVEC a expressarem mais αOX-E, molécula que está envolvida no controle do estresse oxidativo. Tornando dessa forma, um ambiente propício à sua sobrevivência. Essa informação pode auxiliar novas abordagens de tratamentos adjuvantes ao PZQ.

Sob sigilo

INTRODUÇÃO: No Novo Mundo, os cães são considerados o principal reservatório da leishmaniose visceral (LV). Devido às ineficiências nos tratamentos existentes e à falta de uma vacina eficaz, a eutanásia de cães é uma das principais estratégias de controle da doença, tornando obrigatório o desenvolvimento de novas intervenções terapêuticas. Anteriormente, nosso grupo mostrou que o 17-AAG, um inibidor de HSP90, demonstrou potencial para uso no tratamento da leishmaniose. OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo testar a segurança do 17-AAG em cães, avaliando a farmacocinética plasmática, a proporcionalidade à dose e a tolerabilidade do 17-AAG em resposta a uma ou várias doses intravenosas (IV) em cães saudáveis. MATERIAL E MÉTODOS: Dois protocolos de pesquisa foram usados. Protocolo 1 (P1): cães saudáveis receberam doses variáveis (50, 100, 150, 200 ou 250 mg/m²) de 17-AAG ou placebo (n = 4) endovenoso, usando um desenho cross-over com período de ―wash-out‖ de sete dias entre os tratamentos. O protocolo

2 (P2) envolveu nove cães saudáveis que receberam três doses de 150 mg/m² de 17-AAG administradas IV em intervalos de 48 horas. RESULTADOS: Todos os cães completaram com sucesso ambos os protocolos. Em P1, o 17-AAG foi bem tolerado, no entanto, foram observados níveis aumentados de enzimas hepáticas e diarreia em todos os quatro cães que receberam dosagem de 250 mg/m². Os parâmetros concentrações plasmáticas máximas (Cmax) e área sob a curva (AUC) foram proporcionais à dose administrada entre as doses de 50 e 200 mg/m². Em relação ao P2, o 17-AAG foi considerado bem tolerado em doses múltiplas de 150 mg/m². Níveis aumentados de enzimas hepáticas e diarréia foram observados em 3/9 e 1/9 desses cães, respectivamente. Nossos resultados demonstraram segurança para realização do teste de eficácia do 17-AAG em cães com LV quando administrado em concentrações iguais ou inferiores a 150 mg/m² em intervalos de 48 horas. Mas que a hepatotoxicidade observada com o esquema de dosagem intervalado apesar de ser reversível aponta para esforços para redução da toxicidade como a utilização de nanoformulações ou lipossomas.

RESUMO

INTRODUÇÃO: O Carcinoma escamocelular de boca (CEB) é uma neoplasia invasiva e que ainda possui alta taxa de mortalidade. Sabe-se que a ativação da via de sinalização Hedgehog (HH), em tecidos adultos, pode resultar em desenvolvimento tumoral. Os fibroblastos associados ao câncer (no inglês, cancer associated fibroblasts - CAF) representam a maior população celular no estroma e favorecerem a progressão tumoral, sendo que a participação da via HH já foi descrita na ativação destas células. HIPÓTESE: CAFs contribuem para a proliferação celular e angiogênese tumoral, através da via de sinalização HH. OBJETIVO: Avaliar a participação de CAFs na ativação da via HH, proliferação celular e angiogênese em CEB. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizadas linhagens de CEB (CAL27, SCC4, SCC9 e HSC3) e culturas primárias de fibroblastos normais da cavidade bucal (NOF) e fibroblastos associados ao câncer.

Em CEBs humanos, foi realizada a imunomarcação de S100A4, α-SMA, CD105 e MCM3. A expressão gênica de componentes da via HH foi realizada nas linhagens de CEB e em NOF e CAF. HSC3 e CAL27 foram estimuladas com SHH recombinante e analisada a expressão dos genes PCTH1, GLI1 e GLI2. Foi realizado o ensaio do alamar blue para avaliação da citotoxicidade do GANT61, inibidor de GLI1, em CAL27, NOF e CAF. Meio condicionado (MC) por NOF e MC por CAF (antes e após tratamento com GANT61) foi incubado com CAL27 e, em seguida, avaliada a expressão de genes relacionados à via HH, proliferação e angiogênese. As células CAL27 também foram tratadas com GANT61 e os genes supracitados também foram avaliados. Foi realizado o ensaio do ciclo celular da CAL27 após diferentes estímulos, bem como ensaio de angiogênese utilizando a linhagem endotelial EA.hy926. RESULTADOS: Em CEBs humanos, foi encontrada uma associação positiva entre as proteínas α-SMA e S100A4 e o marcador de proliferação celular, MCM3 assim como entre α-SMA e S100A4 com a proteína CD105, positiva em vasos neoformados. A expressão gênica de componentes da via HH foi observada nas linhagens de CEB, bem como em NOF e em CAF. Nas células tumorais (HSC3 e CAL27), bem como em NOF e CAF, foi observada a marcação de proteínas da via HH, sendo esta menor em NOF. Após estímulo com SHH recombinante, as células HSC3 e CAL27 apresentaram uma maior expressão dos genes da via HH (PTCH1 e GLI1). MC CAF, quando incubado com CAL27, aumentou os níveis de transcritos de genes da via HH (PTCH1, GLI1, GLI2), bem como genes alvo desta cascata que estão envolvidos na proliferação (MYC, Ciclina D1) e angiogênese (HIF-1, VEGF-A). Por outro lado, o MC CAF pós GANT61 impediu o aumento da expressão dos genes supracitados, em diferentes tempos. Ainda, este composto também foi capaz de impedir maiores níveis de expressão dos genes supracitados, após incubação com a CAL27. No ciclo celular, observamos uma maior população de células na fase G0-G1, no grupo tratado com MC CAF, além de uma menor população de células em apoptose. Por fim, observamos que a despeito do tipo de fibroblasto (NOF ou CAF), os fatores secretados por estas células exercem um efeito na indução da angiogênese. CONCLUSÕES: As moléculas secretadas por CAFs podem mediar a ativação parácrina da via HH e contribuir com a proliferação e angiogênese, em CEB. 

INTRODUÇÃO: O carcinoma escamocelular oral (CEO) é o tumor mais frequente da região de cabeça e pescoço, constituindo um importante problema de saúde pública no Brasil. Apesar dos avanços nos estudos moleculares desta doença, especialmente com relação aos dados disponíveis no TCGA, a terapêutica deste tipo tumoral é ainda um desafio, especialmente quando a doença encontra-se nos estágios 3 e 4. A via PI3K-AKT é uma das mais importantes para a tumorigênese e, a ativação desta cascata também pode estar relacionada com a via Hedgehog (HH). Estudos apontam para a relação entre a expressão do fator de crescimento semelhante à insulina-1 (IGF-1) em células estromais, com a ativação não-canônica da via HH e manutenção da atividade de AKT, contribuindo desta forma, para o comportamento mais agressivo dos tumores. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do IGF-1 na expressão de moléculas das vias HH e PI3K-AKT, além de sua participação em eventos pró-tumorigênicos como: proliferação, angiogênese, migração, invasão e população de células-tronco tumorais in vitro. MATERIAL E MÉTODOS: Fibroblastos de pele (MF1) foram geneticamente modificados para superexpressão de IGF-1 por transdução lentiviral (MF1-IGF-1). As células SCC-4 foram incubadas com meio condicionado (MC) de fibroblastos ou rIGF-1 para avaliação da proliferação, migração, expressão de genes de pluripotência, formação de esferas tumorais e identificação de proteínas das vias AKT e HH. O MC também foi usado para o ensaio de angiogênese, feito em linhagem endotelial EA.hy926. Condições de co-cultivo (fibroblastos e SCC-4) foram adotadas para imunomarcação de fatores de pluripotência e da via HH. Fibroblastos e SCC-4 foram semeadas nos diferentes compartimentos do transwell para avaliação da invasão. RESULTADOS: A análise da expressão gênica confirmou a superexpressão de IGF-1 em MF1-IGF-1 e ausência de mRNA para IGF-1 em SCC-4, porém, estas células apresentaram alta expressão do IGF1R. Foi observado o ligante Ihh em MF1 e MF1-IGF-1, e aumento de mRNA de GLI1 em SCC-4 estimuladas com CM MF1. Proteínas das vias HH (GLI1, Ihh e SMO) e AKT (AKT total e fosforilado) foram identificadas em SCC-4 cultivadas na presença de MC MF-1-IGF-1. rIGF-1 promoveu: proliferação, migração, invasão e formação de esferas tumorais. MC MF1 foi o estímulo mais importante para a angiogênese. CONCLUSÕES: rIGF-1 exerceu efeitos pró-tumorigênicos em SCC-4 (proliferação, migração, invasão e esferas tumorais). Porém MC MF1 teve maior influência sob a angiogênese e expressão gênica de GLI1. Proteínas das vias AKT e HH foram identificadas em SCC-4 frente aos diferentes estímulos, sugerindo que a regulação destas vias pelo IGF-1 pode se relacionar aos eventos observados. Entretanto, mais estudos são necessários para comprovar esta relação.

Introdução: a hidroxiuréia (HU) é o tratamento de escolha para os indivíduos com anemia falciforme (AF) que apresentam o quadro clínico grave. Ela foi aprovada em 1998 pela FDA, sendo conhecida por aumentar as concentrações de hemoglobina fetal (HbF) e reduzir a polimerização da hemoglobina variante S (HbS), com melhoria do quadro clínico e de alguns parâmetros laboratoriais desses indivíduos. Entretanto, apesar desses efeitos benéficos, observa-se variabilidade na resposta ao tratamento, desde ausência de melhoria até ocorrência de toxicidade. Objetivo: o presente estudo buscou validar um modelo que pode explicar a variabilidade na resposta à HU e, investigar os efeitos da HU, em associação com alguns marcadores genéticos clássicos da doença, em crianças com AF. Método: inicialmente, foi realizada a revisão de literatura para identificar os prováveis fatores genéticos que podem influenciar na resposta à HU, com foco nos polimorfismos em genes de enzimas metabolizadores de drogas (EMD) e proteínas transportadoras de solutos. Além disso, foram realizados dois tipos de estudo, um longitudinal e outro transversal. O estudo longitudinal envolveu 22 crianças com AF e as amostras foram coletadas antes de iniciar o tratamento pela HU e durante o tratamento. O estudo de corte transversal envolveu uma casuística composta por 90 crianças com AF em uso ou não de HU. As amostras foram utilizadas para as determinações laboratoriais e de polimorfismos em genes relacionados a metabolização de drogas. Resultados: inicialmente, a revisão de literatura resultou na identificação de vários polimorfismos em genes relacionados à expressão da HbF (HBG2, BCL11A, HMIP, OR51B5/6, MAP3K5, FLT1, KLF10), bem como ao metabolismo de drogas e proteínas transportadoras (CYP450, CAT, SLC), os quais estão associados a variabilidade na resposta à HU. Além disso, foi possível propor o modelo de metabolismo diferencial da HU, que em conjunto com os dois modelos (modelo de níveis basais de HbF diferencial e modelo de suscetibilidade diferencial), já descritos na literatura, poderiam explicar a variabilidade interindividual na resposta à HU. A análise dos parâmetros laboratoriais antes e durante o tratamento pela HU demonstrou a associação da HU com o aumento da HbF em algumas crianças bem como o aumento da glicose, HDL-C, proteína total e albumina e, redução da AST. Além disso, os alelos variantes 1934A, - 21T, -262T e A dos polimorfismos CYP2D6 1934G>A, CAT -21A>T, CAT -262C>T e SLC14A1 G>A rs2298720, respectivamente, estiveram associados ao aumento dos efeitos da HU. Conclusão: o presente estudo demonstra a importância de se avaliar o perfil metabólico durante a terapia com a HU, além dos parâmetros clássicos investigados, visto que o medicamento parece possuir amplo espectro de ação. Os resultados de associação entre os polimorfismos em genes de EMD e proteínas transportadoras de solutos corroboram o modelo proposto (modelo de metabolismo diferencial da HU) e demonstram a necessidade de se identificar genes candidatos envolvidos no metabolismo da HU. 

O fator de transformação do crescimento beta (TGF-β) é uma citocina com papel importante em processos biológicos, como disfunção endotelial e vascular, inflamação e homeostase hematopoiética. O objetivo do presente estudo foi investigar a associação dos níveis plasmáticos de TGF-β1 e de polimorfismos no gene do receptor 3 do fator de transformação do crescimento beta (TGFBR3) com biomarcadores genéticos, hematológicos, bioquímicos e imunológicos em indivíduos com doença falciforme (DF) e com as complicações clínicas. Para tanto, foi conduzido um estudo transversal, onde foram investigados 175 indivíduos com DF (120 HbSS e 55 HbSC). Os níveis plasmáticos do TGF-β, inibidor tecidual de metaloproteases-1 (TIMP-1) e da metaloproteinase da matriz 9 (MMP-9) foram determinados pela técnica de ELISA e os marcadores hematológicos, bioquímicos e imunológicos foram determinados por métodos automatizados. A genotipagem dos polimorfismos no gene TGFBR3 foi realizada utilizando TaqMan SNP Genotyping Assays. Os indivíduos HbSS apresentaram concentrações elevadas de TGF-β1 quando comparados a indivíduos controles saudáveis e HbSC. Nos indivíduos HbSS, o TGF-β1 esteve positivamente correlacionado com as hemácias, plaquetas, hemoglobina, hematócrito e TIMP-1. Além desses marcadores, os indivíduos HbSS com concentrações de TGF-β1 ≥72.29 ng/mL apresentaram contagem elevada de monócitos e níveis diminuídos de albumina. Os indivíduos HbSC apresentaram correlação positiva entre o TGF-β1 e leucócitos, eosinófilos, linfócitos, monócitos, plaquetas, TIMP-1, lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL-C), triglicérides, heme e aspartato aminotransferase (AST). Os indivíduos HbSC com concentrações de TGF-β1 ≥ 47.80 ng/mL apresentaram contagens elevadas de leucócitos e plaquetas e concentrações elevadas de triglicérides, VLDL-C, MMP-9 e TIMP-1 e concentrações diminuídas de lipoproteína de alta densidade (HDL-C). Nos indivíduos com HbSS, o alelo variante A do polimorfismo rs1805110 no gene TGFBR3 esteve associado a concentrações elevadas de hemoglobina, hematócrito, lipoproteína de baixa densidade (LDL-C), acido úrico e endotelina; contagem elevada de reticulócitos e platelet distribution width (PDW) diminuídos e estiveram associados à ocorrência de alterações ósseas. O alelo variante T do polimorfismo rs7526590 no gene TGFBR3 esteve associado a concentrações elevadas de red cell distribution width (RDW), PDW, fosfatase alcalina, AST, bilirrubina indireta e lactato desidrogenase e concentrações diminuídas de ferritina e a ocorrência de úlceras de pernas. Os indivíduos com DF portadores do haplótipo GG no gene TGFBR3 apresentaram níveis mais elevados de colesterol total (T-CHOL), LDL-C, triglicérides, colesterol não HDL (não-HDL-C), proteínas totais e globulina que aqueles com o haplótipo não-GG. Indivíduos com o haplótipo CGG apresentaram níveis elevados de plaquetócrito, T-CHOL, LDL-C e não-HDL-C. Ambos os haplótipos GG e CGG estiveram associados à ocorrência de pneumonia e os indivíduos com haplótipo não-GG apresentaram ocorrência maior de colelitíase. Nossos dados sugerem que o TGF-β1 desempenha papel importante no remodelamento vascular, vasculopatia, angiogênese, inflamação e hemólise na DF e que polimorfismos no gene TGFBR3 podem estar ligados ao estado inflamatório, hemólise e a complicações clínicas. Além disso, os indivíduos portadores dos haplótipos GG e CGG no gene TGFBR3 apresentaram alterações importantes no perfil lipídico e apresentaram ocorrência maior de pneumonia. 

INTRODUÇÃO: A gestação para mulheres com doença falciforme é considerada de alto risco com maior risco de morbidade e mortalidade materna e fetal. O aumento da frequência e da gravidade das crises de dor ocorrem durante a gravidez de mulheres com doença falciforme. OBJETIVO: O objetivo deste trabalho foi analisar as características clínicas e laboratoriais de gestantes com doença falciforme diante de crises de dor. MATERIAL E MÉTODOS: Foi desenvolvido um estudo observacional, de corte longitudinal, prospectivo, descritivo, exploratório, de abordagem quanti-qualitativa. Foram incluídas na pesquisa 27 mulheres com doença falciforme, sendo destas 13 nulíparas e 14 gestantes, acompanhadas pelo Ambulatório Municipal Especializado em Doença Falciforme e pelo Ambulatório da Maternidade de Referência Professor José Maria de Magalhães Netto, respectivamente. Foram realizadas entrevista estruturada e acompanhamento de exames laboratoriais. As análises estatísticas foram realizadas utilizando os softwares Graph Pad Prism versão 6, SPSS versão 22, e programa Excel versão 2010. RESULTADOS: A maior parte das mulheres nulíparas e gestantes classificaram a crise de dor como frequente. A maioria das mulheres nulíparas com doença falciforme demoraram mais dias para obter a resolução da sua dor em relação às gestantes com doença falciforme. Quanto à intensidade da dor, houve variação entre dor leve a moderada nos dois grupos analisados, com destaque para a dor moderada no grupo de nulíparas; e dor moderada e intensa no grupo de gestantes. Os locais anatômicos dolorosos mais acometidos foram os membros superiores e inferiores no caso das mulheres nulíparas; e membros inferiores e colunar lombar no grupo de gestantes. Destaca-se que os fatores sensoriais e afetivos apresentaram uma maior influência na percepção da dor pelas participantes deste estudo. Dentre os exames laboratoriais analisados nesse estudo, notou-se que as gestantes com DF em estado de crise de dor em comparação com mulheres nulíparas com DF estáveis, apresentaram níveis de hemácias, hematócrito e hemoglobina significativamente mais baixos; valor de CHGM significativamente maior; contagem de leucócitos, porcentagem de neutrófilos, bastonetes e segmentados, foram significativamente maiores; porcentagem de eosinófilos e linfócitos foram significativamente menores. CONCLUSÕES: O quadro de crise de dor apresentado pelas gestantes com DF está associado a níveis alterados nos parâmetros hematológicos e hemolíticos. Sendo assim, futuras intervenções preventivas podem ser direcionadas para o controle da crise de dor e dos níveis sanguíneos desses parâmetros nessas pacientes. Os resultados deste trabalho consolidam a idéia de que a gestação é um fenômeno que está relacionado à crise de dor na doença falciforme e que é capaz de alterar determinados parâmetros laboratoriais, que devem ser levados em consideração para garantir uma assistência à saúde adequada, com a finalidade de evitar as complicações e proporcionar bem- estar materno-fetal.

A Leishmaniose é uma doença infecto-parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania e é considerada um problema de saúde pública no Brasil e no mundo. Apresenta um amplo espectro de formas clínicas, sendo a Leishmaniose Visceral (LV) a mais grave. No Brasil, a LV tem como agente etiológico a Leishmania infantum, sendo caracterizada por febre alta, perda de peso, hepatoesplenomegalia, anemia, leucopenia e hemorragia nos casos mais graves. Os neutrófilos têm demonstrado ter um papel importante na imunopatogênese da Leishmaniose, sobretudo na LV. Sabe-se que diferentes vias de morte celular podem ser ativadas em neutrófilos, influenciando o curso da infecção por diferentes patógenos. A necroptose, uma via de morte programada, é canonicamente ativada em ausência de caspase 8 e possui características pró-inflamatórias. Necroptose tem sido descrita no contexto de diferentes doenças. O objetivo geral desse trabalho foi avaliar o efeito do bloqueio de caspases na via de morte por necroptose em neutrófilos humanos e murinos infectados por L. infantum e seu efeito na viabilidade do parasita. Pacientes com LV mostraram níveis séricos elevados de Lactato Desidrogenase (LDH), característica de dano celular/tecidual. Usando o sistema in vitro de infecção de neutrófilos humanos e murinos com inibidores de caspase, evidenciamos a ativação da via de morte por necroptose com o envolvimento de RIPK1, RIPK3 e MLKL. Em seguida, foi testado o papel da necroptose na carga parasitária de neutrófilos humanos in vitro. O pré-tratamento com inibidores de caspases, seguido da infecção, aumentou os níveis de LDH, a expressão de RIPK3 e MLKL em neutrófilos humanos, ao passo que diminuiu a viabilidade dos parasitas. Esse efeito foi revertido pela Necrosulfonamida (NSA), inibidor farmacológico da MLKL. Em neutrófilos murinos infectados por L. infantum, também observamos o envolvimento de moléculas da via da necroptose, RIPK1 e RIPK3 no controle da viabilidade do parasita. Nesses grupos, neutrófilos pré-tratados com os inibidores de caspases apresentaram níveis elevados de Espécies Reativas de Oxigênio (EROs) e LDH, sugerindo a participação dessas moléculas pró-inflamatórias no controle da infecção. A inibição farmacológica de RIPK1 pela Nec-1 e RIPK3 por GSK'872, reverteu a morte dos parasitas. Por fim, a microscopia eletrônica de transmissão (MET) revelou características morfológicas associadas a necroptose em neutrófilos infectados com L. infantum quando estes foram pré-tratados com inibidores de caspases, enquanto as células infectadas em presença de inibidores da via de necroptose não apresentaram alterações estruturais. Esses dados sugerem que a inibição de caspase 8 em neutrófilos pode contribuir para controle da infecção por L. infantum, possivelmente pelo estímulo de uma resposta inflamatória associada à morte por necroptose.

As doenças cardiovasculares são a principal causa de morte no mundo. Dentre as patologias do grupo, o infarto agudo do miocárdio (IAM), caracterizado pela extrema perda de cardiomiócitos e consequente remodelamento negativo, é a manifestação clínica mais prevalente. Intervenções terapêuticas convencionais são capazes de amenizar os sintomas, mas não resultam na regeneração do tecido e, consequentemente, no restabelecimento da função cardíaca. Para alguns pacientes a única alternativa é o transplante, porém há limitações no número de doadores e compatibilidade. Neste sentido, novas estratégias vêm sendo investigadas com o intuito de regenerar o miocárdio lesionado, incluindo a terapia gênica, a terapia celular e a utilização de biomateriais. Esta última abordagem exerce um papel crucial na administração de células-tronco diante da necessidade de uma plataforma física e de um microambiente que permita a viabilidade e diferenciação celular no tecido cardíaco. Portanto, o desenvolvimento de matrizes poliméricas 3D (scaffold) que mimetizem a matriz extracelular e permitam a ancoragem de células representa uma importante abordagem no contexto do potencial translacional da terapia celular no IAM. O presente trabalho fundamenta-se no desenvolvimento de uma matriz à base de fibroína de seda como plataforma para administração de células-tronco no miocárdio infartado. Matrizes na forma de hidrogel injetável foram preparadas pelo método de crosslink químico através de um solvente orgânico (metanol). Os hidrogéis foram submetidos à caracterização físico-química, morfologia, ensaios de citocompatibilidade in vitro e retenção celular em um modelo farmacológico de infarto agudo em camundongos. Após sintetizados e secos os hidrogéis apresentaram a capacidade de absorver água. A análise por espectroscopia de infravermelho transformada de Fourier (FTIR) indicou a mudança conformacional protéica, comprovando a gelificação do material. Não houve variação significativa no pH do hidrogel nas temperaturas de armazenamento avaliadas (4°C e 37°C). A análise morfológica por microscopia eletrônica de varredura (MEV) indicou um arranjo tridimensional com poros, o que demonstra a arquitetura porosa na forma de scaffold. Este padrão espacial permitiu a adesão de fibroblastos L929, cardiomiócitos H9c2, células-tronco mesenquimais (CTM) e células progenitoras cardíacas induzidas (CPCi) na matrix de fibroína. Estas células também apresentaram-se viáveis e proliferativas quando cultivadas em substrato plástico revestido com o hidrogel. Este scaffold foi avaliado quanto a sua capacidade de proporcionar retenção celular em um modelo murino de infarto agudo do miocárdio. Foi possível observar iCPCs no tecido cardíaco 72 horas após sua administração via intramiocárdica guiada por ecografia. No contexto da pesquisa em novos biomateriais para terapia celular, este trabalho demonstra o potencial do hidrogel de fibroína como um sistema de administração capaz de otimizar a retenção de células-tronco no tecido cardíaco.

INTRODUÇÃO: A cardiomiopatia chagásica crônica é uma doença debilitante de curso fatal, sendo as arritmias cardíacas a principal causa de morte súbita dos indivíduos acometidos por essa doença. Devido à falta de opções terapêuticas adequadas, o entendimento dos mecanismos que levam ao desenvolvimento das arritmias graves é de grande relevância. A conexina 43 é uma importante proteína componente das junções comunicantes em cardiomiócitos, e a expressão alterada dessa proteína está relacionada a distúrbios de condução em outras cardiomiopatias. OBJETIVO: Caracterizar as alterações na expressão e distribuição da Cx43 em corações chagásicos crônicos. MATERIAL E MÉTODOS: Camundongos C57BL/6 com 6 e 12 meses de infecção pela cela Colombiana do Trypanosoma cruzi e controles não infectados foram submetidos à avaliação funcional (ergométrica e ECG). Após eutanásia, os corações foram coletados e destinados para análises histopatológicas, para avaliação do infiltrado inflamatório e de fibrose; análise por imunofluorescência para avaliar o padrão de distribuição da Cx43 total e fosforilada (S368); análise pela técnica de Immunogold, para avaliar a presença da Cx43 nos discos intercalares; análise de expressão gênica por RT-qPCR, para avaliar a expressão gênica da Cx43 total, TNF-α e IL-1β. Amostras de corações explantados de pacientes portadores de cardiomiopatia chagásica crônica, submetidos à transplante cardíaco, foram utilizadas para análise por imunofluorescência da expressão de Cx43. RESULTADOS: Animais com 6 e 12 meses de infecção perderam a capacidade de realizar exercício na esteira ergométrica e apresentaram distúrbios de condução no coração, observados no ECG. As análises histopatológicas confirmaram intenso infiltrado inflamatório e fibrótico nos corações chagásicos (6 e 12 meses), diferente do observado nos animais controles. Nas análises de imunofluorescência, observamos alteração na distribuição da Cx43 total e com marcações na membrana lateral ou no interior do cardiomiócitos nos animais infectados (6 e 12 meses), enquanto que os corações de animais não infectados apresentaram Cx43 localizadas nos discos intercalares. A análise da Cx43(S368) foi mais intensa nos animais infectados (6 e 12 meses) do que nos animais não infectados. Na análise por Immunogold, observamos que os animais não-infectados apresentaram maior concentração de Cx43 total nos discos intercalares, enquanto que nos infectados as marcações estavam presentes em estruturas semelhantes a vacúolos autofágicos. As análises por RT-qPCR mostraram um aumento da expressão gênica de TNF-α e IL-1β nos infectados (6 e 12 meses). A expressão do gene da Cx43 está reduzida nos animais com 6 meses de infecção, mas não com 12 meses, em comparação com os animais controles. Por fim, a marcação de Cx43 total e Cx43 (S368) no material humano apresentaram padrão semelhante ao observado no modelo experimental. CONCLUSÃO: Corações chagásicos crônicos apresentam alteração na expressão da Cx43, bem como no padrão de distribuição da Cx43 total e fosforilada, o que pode estar associada com a alta produção de citocinas pró-inflamatórias TNF-α e IL-1β e contribuir para o estabelecimento dos distúrbios de condução na doença de Chagas

A própolis é um produto natural com diversas atividades biológicas testadas e seus extratos obtidos por variadas técnicas tem sido utilizado nas indústrias alimentícia, farmacêutica e cosmética. Variações na composição química dos extratos estão diretamente associadas ao tipo e origem geográfica da própolis e, consequentemente, interfere na atividade biológica da própolis. O presente trabalho teve como objetivo a caracterização química e da atividade biológica de amostras de extrato de própolis: vermelha, verde e marrom, coletados em diferentes regiões do Estado da Bahia, Brasil, obtidas pelo método convencional ou pela técnica de extração supercrítica. Inicialmente identificamos o perfil físico-químico em amostras de extrato bruto, quanto ao teor de umidade, atividade de água, teor de cinzas totais, proteínas, lipídios e fibras. Os extratos de própolis obtidos pelos métodos de extração etanólico e supercrítico foram avaliados quanto ao teor de compostos fenólicos, flavonóides, atividade antioxidante (DPPH), catequina, ácido ferúlico e luteolina. Nossos dados indicam que os extratos etanólicos, especialmente os obtidos a partir da própolis vermelha, possuem uma maior seletividade para compostos antioxidantes, bem como melhor ação antimicrobiana contra duas cepas de bactérias (Staphylococcus aureus e Escherichia coli), quando comparados com os extratos obtidos pela extração supercrítica, indicando que não houve um incremento dos parâmetros avaliados nesta condição. Por último, comparamos a ação leishmanicida dos extratos etanólico obtidos a partir das própolis verde e vermelha na infecção in vitro de macrófagos por Leishmania braziliensis, principal agente etiológico da forma clínica cutânea da doença. Neste contexto, a própolis vermelha apresentou um maior potencial quanto ao efeito leishmanicida.  Os resultados confirmam a influência do tipo de matéria-prima, bem como dos métodos de extração quanto a composição e atividade biológica dos diferentes extratos da própolis, incluindo sua utilização como agentes antimicrobiano e leishmanicida. O presente estudo contribui com novas perspectivas no intuito de possibilitar aplicações tecnológicas da própolis e seus derivados na indústria de produtos naturais.

Introdução: a doença falciforme (DF) possui prevalência mundial elevada e herança autossômica recessiva, sendo considerada um problema de saúde pública e social. A hidroxiuréia (HU) tem sido utilizada como terapia farmacológica para a anemia falciforme (AF), sendo que nos últimos trinta anos tornou-se a modalidade primária de tratamento modificador da doença, com redução na incidência de episódios dolorosos agudos, hospitalizações, síndrome torácica aguda, transfusões e mortalidade. A HU tem sido descrita como bem tolerada e com baixa toxicidade. O uso da HU no Brasil foi normatizado em 2010, e existe um protocolo clínico e diretrizes terapêuticas para o seu uso. Entretanto, a realização de investigações referentes à evolução clínica do paciente com DF em uso de HU são necessárias para que se tenha dados referentes ao acompanhamento clínico desse grupo de indivíduos de forma prolongada. Objetivo: o objetivo desse estudo foi avaliar a evolução clínica e laboratorial de pacientes com AF em uso de HU em um ambulatório de referência, antes e após o uso da terapia. Métodos: a população foi composta por pacientes com AF acompanhados no ambulatório de hematologia pediátrica do ambulatório do Complexo do Hospital Universitário Professor Edgard Santos da Universidade Federal da Bahia (HUPES-UFBA), em uso de HU há pelo menos seis meses. Foram avaliados dados demográficos, clínicos e laboratoriais relativos ao uso da HU. Resultados: a casuística foi constituída por 58 pacientes com AF de 5 a 19 anos, com média de idade de 12,81 anos (DP  3,82), 55,2% do sexo feminino, com início de uso da HU em média aos 8,8 anos de idade e média de tempo de uso da HU em torno de 50,5 meses. Com o tratamento houve melhora das variáveis clínicas avaliadas (número de internações, transfusões, episódios dolorosos agudos, síndrome torácica aguda e infecções), diminuição geral da velocidade do doppler transcraniano e melhora laboratorial com aumento significativo dos parâmetros hematológicos de hemoglobina fetal, hemoglobina e volume corpuscular e diminuição significativa nas contagens de plaquetas, leucócitos, neutrófilos, monócitos e linfócitos. Conclusão: o estudo mostrou melhora clínica e laboratorial em pacientes com AF após o uso da HU, sem efeitos adversos graves, com diminuição de hospitalizações e transfusões; porém, o uso requer acompanhamento regular com especialista e monitorização frequente, devido a possíveis causas de toxidade a droga. O uso da HU reduziu a velocidade do doppler transcraniano tanto em crianças com velocidade condicional quanto em crianças com velocidade normal. De acordo com os resultados obtidos, acredita-se que a HU poderia ser prescrita de forma mais precoce e frequente na AF, tendo como base os benefícios alcançados.

A Leishmaniose Tegumentar, causada pelo parasito Leishmania, afeta milhões de indivíduos em todo o mundo. Atualmente, os compostos antimoniais são o tratamento de primeira escolha para o tratamento de pacientes com leishmaniose, apesar da citotoxicidade e dos efeitos adversos que eles causam. Estudos prévios realizados in silico (modelo farmacofórico) identificaram 116 compostos com potencial inibidor da enzima arginase, uma enzima chave na biossíntese de poliaminas, e que é essencial para a proliferação do parasita. Ensaios in vitro para testar os três compostos (A4021, M5171 e S783579) com melhor escore de acoplamento, melhor solubilidade e menor custo foram realizados com arginase recombinante, formas promastigotas de Leishmania amazonensis e macrófagos infectados. Os fármacos A4021, M5171 e S783579 não apresentaram efeito inibitório da arginase recombinante purificada em nenhumas das concentrações usadas (500;125;31,25;7,81;1,95 e 1,95μM). No que se refere a cultura axênica de L. amazonensis, detectamos uma redução na proliferação de parasitas nas concentrações mais altas utilizadas (1000,500 e 100 μM) e observamos redução da atividade da arginase nos tratados com M5171 e S783579. Além disso, através de microscopia de florescência observou-se dilatação nuclear e coloração com iodeto de propídio pela alteração da permeabilidade da membrana, sugerindo que os fármacos causam necrose secundária ou apoptose tardia. Quanto a morfologia intracelular, avaliada por microscopia eletrônica de transmissão, observamos estruturas indicativas de processo de morte celular nos tratados com M5171 e S783579. Em relação, ao efeito de M5171(77,88μM) e S783579 (379,5μM) na interação parasita-hospedeiro observamos redução na carga parasitária, sendo o M5171 o mais eficaz, embora não tenha sido detectado redução na atividade da arginase. O estudo com A4021 foi interrompido por dificuldade de diluição e baixa eficácia. Embora os compostos apresentassem toxicidade para leishmania, a viabilidade dos macrófagos humanos não foi afetada em nenhuma das concentrações avaliadas pelo ensaio Alamar Blue (1000,100,10,1 e 0,1μM). Estes resultados demonstram a eficácia da abordagem in silico para selecionar compostos como possíveis candidatos para controlar a replicação de L. amazonensis. Além disso, a ausência de toxicidade celular e complexidade estrutural da A4021, M5171 e S783579 torna-os bons candidatos para otimização e design de novos fármacos com a perspectiva no desenvolvimento de tratamentos mais eficazes para a leishmaniose cutânea causada por L. amazonensis.

INTRODUÇÃO: Diabetes é classificada como um fator de risco para doenças infecciosas e
endêmicas, em países tropicais. O aumento da incidência na gravidade das manifestações clínicas
em pacientes com doenças metabólicas, como a DM2, ocorre devido a inflamação crônica induzida
pelo aumento dos níveis plasmáticos de glicose e lipídios exógenos. Portanto, infecções cutâneas
causadas por patógenos, no Brasil, como L. braziliensis (L.b), causador da leishmaniose cutânea
(LC), representam um modelo proposto para avaliar o efeito da associação entre DM, uso da
metformina, fármaco hipoglicemiante de primeira escolha para o tratamento hipoglicemiante da
DM e mais amplamente utilizado no Sistema Único de Saúde (SUS), e suas interferências na
resposta imune in situ e sistêmica do hospedeiro contra o protozoário. Tendo em vista, os efeitos
adicionais da metformina (MET) pela capacidade moduladora na resposta imunológica inata e
adaptativa do hospedeiro. OBJETIVO: Avaliar o efeito imunomodulador da metformina em
modelo experimental de infecção por L.b e em pacientes diabéticos. MATERIAL E MÉTODOS:
Trata-se de um estudo de caso-controle, amostra de conveniência, de caráter investigativo e
descritivo em pacientes com LC com e sem DM. Adicionalmente, um estudo experimental de
infecção com L.b e tratamento com MET in vivo em camundongos BALB/c e in vitro em
macrófagos Raw 264.7. RESULTADOS: Pacientes com DM desenvolvem LC atípica, com menor
frequência de necrose e diminuição do número de células T CD8+, nas lesões. MET no modelo
experimental in vivo induziu diminuição de TNF-α e IL-12p70 séricos, interferiu na cinética da
lesão e esteve associado a aumento da carga parasitária no local da inoculação e nos linfonodos
ipsilaterais. In vitro, em macrófagos tratados com MET, foi observado redução da proliferação
celular e não houve interferência na viabilidade celular. Diminutas concentrações de MET no
cultivo de L.b permite a manutenção da fase estacionária de crescimento. Na infecção in vitro por
L.b e células tratadas com MET, observou-se aumento do número de macrófagos infectados e da
carga parasitária. MET e infecção por L.b isoladamente promove a produção de EROs intracelular,
contudo os níveis de EROs são reduzidos em macrófagos tratados com MET e submetidos a
infecção com L.b. CONCLUSÃO: DM e MET podem interferir no fenotípico das lesões cutâneas
através da modulação no infiltrado celular no local da inflamação, assim como, na extensão e
frequência da necrose na LC em pacientes diabéticos. De forma sistêmica, o tratamento
experimental com MET foi capaz de reduzir os níveis de citocinas indutoras de uma resposta Th1,
descrita como protetora para o controle parasitário, como também e interferir na cinética da
ulceração cutânea e causando aumento da carga parasitária. As evidenciais experimentais foram
comprovadas em ensaios de cultivo celular nos quais a MET aumentou a carga parasitária, alterou
a produção de EROs e modulou a proliferação celular. Diante dessas evidências conclui-se que o
uso de MET piora a evolução da leishmaniose cutânea e o uso em diabéticos em regiões endêmicas
para LC deve ser avaliado.

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma enfermidade causada pela Leishmania infantum, acomete seres humanos e também animais. O baço está envolvido na imunopatogênese da LV e apresenta alterações nos microambientes da polpa branca que estão associadas ao aumento da susceptibilidade à coinfecções e a morte. A plasmocitose é uma das alterações observadas no baço na LV, porém a fração dessas células produtora de anticorpos específicos para moléculas de Leishmania e a distribuição dessas células nos compartimentos esplênicos ainda não é conhecida. OBJETIVO: O objetivo deste trabalho foi padronizar a técnica para detecção de células produtoras de anticorpos contra antígenos de L. infantum e determinar a proporção e distribuição dessas células no baço de cães com LV. MATERIAL E MÉTODOS: Antígenos solúveis biotinilados de membrana de promastigots de L. infantum foram utilizados como sondas em uma reação de imunohistoquímica modificada para detectar a presença de células secretoras de anticorpos anti-L. infantum. Utilizamos baços de 8 cães oriundos de área endêmica para LV e como controle, 3 cães normais do canil do Instituto Gonçalo Moniz. As amostras foram criopreservadas, seccionadas e coletadas em lâminas para imunohistoquímica. A quantidade de células marcadas e não marcadas foi quantificada, e calculada a proporção na PV e PALS do baço. RESULTADOS: Cães com LV possuem hiperglobulinemia e mais plasmócitos na PV que cães sem LV. Desses cães, 75% (6/8) apresentavam menos de 42% de células secretoras de anticorpos anti-L. infantum na PV. A proporção de plasmócitos marcados é maior na PALS (59,3%) do que na PV (29,8%) e quanto maior a proporção na PALS, menor é a proporção de células positivas na PV. CONCLUSÕES: A baixa frequência de plasmócitos produtores de Ig anti-L. infantum pode ser relacionada à ativação policlonal de linfócitos B, resultando em produção não específica de imunoglobulinas e hiperglobulinemia

A Leishmaniose Visceral (LV) está entre as zoonoses mais relevantes transmitidas por vetores. Os pacientes graves com LV apresentam distúrbios sanguíneos, como hemólise e heme livre, que podem alterar o comportamento de neutrófilos. No presente estudo, notamos que em pacientes com LV há uma associação direta entre os níveis de heme e neutropenia. A partir de ensaios in vitro, vimos que o heme reduz a sobrevida dos neutrófilos humanos infectados com Leishmania infantum através da produção de espécies reativas de oxigênio e liberação de enzimas neutrofílicas, ao mesmo tempo em que favorece a viabilidade do parasito. Além disso, os neutrófilos infectados em presença de heme mostraram aumento na atividade enzimática da superóxido dismutase-1 (SOD-1) e com interferência nas vias oxidativas houve redução da taxa de proliferação da L. infantum nestas células. Desse modo, a ativação de neutrófilos em presença de heme, provoca a morte da célula e a sobrevivência dos parasitos. Em seguida, investigamos o lipofosfoglicano (LPG) de L. infantum também como gatilho de ativação dos neutrófilos nos momentos iniciais da infecção. Para avaliarmos como o LPG de superfície da L. infantum intervém na ativação dos neutrófilos, infectamos neutrófilos humanos com parasitos deficientes para LPG (Dlpg1 ) e comparamos com promastigotas selvagens (WT) ou parasitos que tiveram o seu LPG reconstituído (Dlpg1+LPG1). A ausência do LPG nas formas Dlpg1 aumentou a taxa de infecção, mas favoreceu a mortalidade dessas formas em neutrófilos em comparação aos WT ou Dlpg1+LPG1. No que se refere à ativação dos neutrófilos, houve uma produção expressiva de espécies reativas de oxigênio (ROS) nas culturas infectadas com L. infantum Dlpg1, capaz de modular a sobrevivência desses promastigotas. Esses achados estimulam novas interpretações no contexto da LV e evidenciam a complexidade das interações neutrófilo-parasito a depender do estímulo.

Os neutrófilos (NØs) modulam a resposta imune pela produção de citocinas e quimiocinas ou
interação direta com outras células. Células dendríticas (DCs) apresentam antígenos e ao
interagirem com diferentes componentes do sistema imune, modulam a resposta adaptativa,
responsável pela eliminação de microrganismos e manutenção da memória imunológica. O
ATP extracelular produzido após dano celular exibe propriedades pró-inflamatórias, enquanto
a adenosina, produto do catabolismo do ATP, exibe propriedades antiinflamatórias. Neste
trabalho, avaliamos o efeito da interação entre DCs humanas e NØs infectados por L.
braziliensis (Lb) ou L. amazonensis (La) e a participação dos receptores de adenosina.
Metodologia: NØs purificados do sangue de doadores saudáveis foram infectados ou não por
Lb ou La e co-cultivados com DCs geradas in vitro de monócitos tratados com IL-4 / GMCSF.
As DCs nestas co-culturas foram avaliadas quanto sua taxa de infecção, expressão de
moléculas de superfície e produção de citocinas. Para investigar a participação da adenosina,
a carga parasitária nestas células foi avaliada após inibição de CD39, CD73 ou receptores
A2A e A2B. Resultados: O co-cultivo de DCs com NØs infectados com La aumentou a carga
parasitária, reduziu a expressão de moléculas de superfície e a produção de citocinas próinflamatórias,
aumentando a produção de anti-inflamatórias. Resultados opostos foram
obtidos nas co-culturas de DCs e Nϕs infectados por Lb. O bloqueio do CD39, mas não do
CD73, em NØs ou em DCs reduziu a carga parasitária nas DCs co-cultivadas com NØs
infectados por La. Já a inibição dos receptores A2B ou A2A diminui a carga parasitária após a
co-cultura das DCs com NØs infectados por La ou quando cultivadas com adenosina. Este
mesmo tratamento só alterou a carga parasitária em DCs co-cultivadas com NØs infectados
por Lb na presença da adenosina. Nossos resultados indicam que NØs infectados por La e Lb
modulam diferentemente a ativação das DCs. Apenas os NØs infectados por La parecem
inibir as DCs, com consequente aumento da sua carga parasitária, ativação de
ectonucleotidases, redução de moléculas co-estimulatórias e de IL-12 e aumento de IL-10.
Observamos também influência dos receptores de adensosina, evidenciada pela reversão da
carga parasitaria nas DCs na presença dos inibidores desses receptores.

A doença falciforme (DF) é um grupo de hemoglobinopatias onde a anemia falciforme (AF), caracterizada pela homozigose HbSS, é a forma mais grave, enquanto a hemoglobinopatia SC (HbSC), apesar de menos grave, é a segunda mais prevalente. As manifestações clínicas na DF são heterogêneas, o que faz com que os marcadores laboratoriais e inflamatórios sejam úteis na prática clínica. Diversos mecanismos fisiopatológicos foram propostos ao serem associados as manifestações clínicas e ao envolvimento inflamatório sistêmico da doença. O tratamento da DF consiste, principalmente, no uso da hidroxiureia (HU), que é capaz de melhorar os marcadores laboratoriais e reduzir as manifestações clínicas. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar marcadores inflamatórios e laboratoriais associados a manifestações clínicas na DF, bem como ao uso da HU. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa (CAAE: 52280015.1.0000.0048), as análises laboratoriais foram desenvolvidas por métodos automatizados e os pacientes são acompanhados na Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Estado da Bahia (HEMOBA). O primeiro manuscrito teve a casuística de 181 pacientes com DF (126 HbSS e 55 HbSC), no qual foram comparadas as alterações clínicas e laboratoriais presentes nos dois genótipos. Nossos resultados sugerem que os indivíduos com AF apresentam anemia, hemólise, leucocitose e inflamação de forma mais proeminente, bem como maior frequência de complicações clínicas, enquanto os pacientes HbSC apresentam menos hemólise e complicações clínicas. No segundo manuscrito investigou-se a associação entre as manifestações clínicas e o perfil lipídico em um grupo de 126 pacientes com AF. Observou-se a associação entre o histórico de pneumonia e níveis elevados de colesterol total; úlcera de perna e níveis reduzidos de lipoproteína de baixa densidade (LDL) e crises de dor e níveis elevados de lipoproteína de alta densidade (HDL). Observou-se também a associação entre níveis elevados de colesterol total, LDL e HDL com marcadores de hemólise e concentração de HbF, o que foi confirmado nas análises de correlação entre os indivíduos com pneumonia e crise de dor. No terceiro manuscrito foram estudados 43 indivíduos com AF, sendo investigados os níveis plasmáticos de interleucina-8 (IL-8) e a presença do polimorfismo rs4073 o gene CXCL8. Os resultados sugeriram que os indivíduos portadores do alelo A apresentaram níveis elevados de IL-8, que também estiveram associados a marcadores de inflamação e hemólise. Além disso, níveis diminuídos de IL-8 também estiveram associados a ocorrência de esplenomegalia. No quarto e último manuscrito desta tese, investigou-se o efeito do tratamento com HU nos monócitos dos pacientes com AF. Foram incluídos 37 pacientes, dos quais 17 estavam sob tratamento com HU e 20 sem uso da medicação. Os resultados mostraram que a HU foi capaz de reduzir a contagem de monócitos no sangue periférico, reduzir a frequência de monócitos clássicos (CD14++CD16-) e aumentar a de monócitos não clássicos (CD14dimCD16+). A HU também teve influencia na produção de citocinas, como o TNF-α, IL-1β, IL-6 e de fator tecidual (FT) pelos monócitos, bem como na polifuncionalidade destas células. Os resultados ainda sugeriram a associação entre os monócitos que produzem FT e a ocorrência de vaso-oclusão e que os monócitos clássicos podem ser responsáveis por produzir citocinas e FT na AF. Os resultados obtidos corroboram com estudos prévios sobre os aspectos clínicos e inflamatórios da DF, além de demonstrar associações novas entre os mecanismos fisiopatológicos da doença, marcadores laboratoriais e moléculas pró-inflamatórias.

INTRODUÇÃO: A leishmaniose é uma zoonose amplamente disseminada em mais de 90 países, que já afeta 15 milhões de pessoas em todo o mundo e cresce a uma taxa de 1,6 milhão de novos casos por ano. A forma clinica mais frequente da doença é a leishmaniose cutânea localizada (LCL). Geralmente, pacientes acometidos por LCL apresentam uma única lesão que começa no local de entrada do parasito (Leishmania braziliensis), como pequenas pápulas que evoluem para nódulos e ulceram no centro. Alguns estudos têm buscado esclarecer os mecanismos que controlam o desenvolvimento destas lesões e a resposta imune envolvida. Neste sentido, técnicas de médio/alto rendimento têm revelado genes e mecanismos imunológicos importantes na progressão da doença. OBJETIVO: Identificar as principais moléculas e vias relacionadas à patogênese da leishmaniose cutânea humana ex vivo e definir, através de análise in silico, mecanismos de proteção/susceptibilidade. MÉTODO: Exploramos biópsias de lesões de pele usando técnicas de médio rendimento para quantificar a expressão de genes nCounter (NanoString) em pacientes recrutados durante visitas médicas a áreas endêmicas do Vale de Jiquiriçá, Bahia. Associamos as técnicas de citometria de fluxo in silico e o Ingenuity Pathway Analysis (IPA) para analisarmos a expressão gênica e os mecanismos biológicos envolvidos na LCL humana. RESULTADOS: A análise transcriptômica de 601 genes da resposta imune do hospedeiro, 4 genes de Leishmania braziliensis e 1 gene de Staphylococcus aureus foi capaz de diferenciar dois grupos de lesões com perfil de resposta imune distintos associado a presença ou ausência de Leishmania braziliensis. Dados clínicos epidemiológicos indicam que as lesões com presença de transcritos de Leishmania braziliensis são mais recentes do que as lesões que não foram detectados transcritos. A avaliação por citometria de fluxo in silico revelou um predomínio de células pertencente à imunidade inata em lesões com presença de transcritos de Leishmania braziliensis (iniciais) e predomínio de células da imunidade adaptativa em lesões que não foram detectados transcritos de Leishmania braziliensis (tardias). As análises de expressão gênica integrada do IPA revelaram principalmente um mecanismo contínuo de destruição da matriz extracelular. CONCLUSÃO: Nossos dados sugerem uma relação entre a assinatura transcriptômica de lesões iniciais com a presença do parasito e de células da resposta imune inata. Além disso, confirmamos a participação de vias associadas à inflamação na progressão da doença. Finalmente, revelamos a presença de uma via de degradação de matriz extracelular duradoura em lesões de pacientes com LCL.

RESUMO
INTRODUÇÃO: A leishmaniose permanece como uma das doenças tropicais mais negligenciadas do mundo. A resposta imune do hospedeiro contra a Leishmania tem um papel crítico na eliminação dos parasitas, mas também é responsável pela inflamação e gravidade da doença. A forma cutânea localizada (LCL) é caracterizada pela presença de uma única lesão ulcerada na pele e inflamação descontrolada. A suscetibilidade aumentada de infecções de pele é uma das complicações do diabetes. Quando comparada ao estado euglicêmico, a hiperglicemia leva a alterações na produção de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias, principalmente pelo aumento da produção de leucotrieno B4 (LTB4), um mediador lipídico inflamatório. OBJETIVO: Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a influência do diabetes no resultado do LCL humano, considerando o papel do LTB4. MATERIAL E MÉTODOS: Primeiramente, foram medidos os níveis séricos de mediadores inflamatórios, como LTB4, PGE2, IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10 por ensaio imunoenzimático (ELISA) em pacientes euglicêmicos ou hiperglicêmicos com LCL. Em seguida foi feito uma correlação com dados clínicos, como glicose, tempo, tamanho, número e área da lesão. Para determinar à suscetibilidade a infecção por Leishmania braziliensis, foi feito a infecção de macrófagos de indivíduos diabéticos ou não, cultivados em condições com baixa e alta concentração de glicose. O sobrenadante da cultura foi destinado a mensuração do LTB4 e as células para análise da expressão gênica de receptores do tipo Toll (TLR) e do BLT1. RESULTADOS: Detectamos aumento de LTB4, IL-6 e TNF-α no plasma de pacientes diabéticos com LCL comparado a não diabético. Interessantemente, apenas o LTB4 apresentou correlação positiva com o tempo de cicatrização. Os ensaios in vitro indicam que a glicose aumenta a taxa de infecção e a viabilidade de parasitos de maneira dose-dependente em macrófagos humanos infectados por L. braziliensis. Além disso, a alta concentração de glicose modula negativamente BLT1, TLR2 e TLR4. CONCLUSÃO: Juntos, esses resultados sugerem que pacientes diabéticos produzem altos níveis de LTB4 e que este está relacionado com o tempo de cicatrização. Além disso, altas concentrações de glicose aumentam a suscetibilidade de macrófagos à infecção por L. braziliensis através da modulação negativa de BLT1, TLR2 e TLR4 diminuindo assim, a ação do LTB4 produzido exacerbadamente.

RESUMO
INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral (LV) é grave problema de saúde pública no Brasil, onde permanece com elevadas taxas de letalidade a despeito das tentativas de controle. OBJETIVO: Identificar aspectos clínicos e laboratoriais admissionais associados ao óbito na LV. MATERIAIS E MÉTODOS: trata-se de estudo de corte transversal retrospectivo incluindo os pacientes admitidos no Hospital Couto Maia (Salvador/Ba) com diagnóstico de LV entre janeiro de 2010 e dezembro de 2014. Variáveis epidemiológicas, clínicas e laboratoriais admissionais foram coletadas em instrumento padronizado e analisadas no software Stata® versão 13.0 na comparação entre os grupos de desfecho clínico (DC) de alta hospitalar (n=106) ou óbito (n=12). RESULTADOS: Predominaram pacientes do sexo masculino (62,7%), da faixa etária pediátrica (53,4%), de procedência da área urbana de municípios do interior da Bahia com baixo Índice de Desenvolvimento Humano e de apresentação clínica clássica com hepatoesplenomegalia febril e citopenias. A letalidade média foi de 10,2%, superior a partir dos 40 anos de idade. As principais causas de óbito declaradas foram insuficiências renal e hepática/hepatite, sepse/choque séptico, choque não especificado e coagulação intravascular disseminada. Comorbidades ocorreram em 19,5% dos pacientes e foram associadas ao DC óbito (p=0,043), assim como a presença de dor abdominal (p=0,022), sangramentos mucosos (p=0,034), edema (p=0,029), icterícia (p=0,000), redução do sensório (p=0,001), crepitação pulmonar (p=0,014), bulhas arrítmicas (p=0,027), coinfecção bacteriana (p=0,019) e alterações eletrocardiográficas (p=0,001). Apresentaram associação óbito níveis de plaquetas < 81.000/mm³ (p=0,004), albumina ≤ 2,2g/dL (p=0,032), ureia > 37 mg/dL (p=0,009), bilirrubinas totais > 0,9 mg/dL (p=0,001), bilirrubina direta > 0,4mg/dL (p=0,002), atividade de protrombina ≤ 45% (p=0,008) e creatinina elevada para a idade (p=0,003). Os escores obtidos nos modelos prognósticos clínico (EC) e clinicolaboratorial (ECL) adotados pelo Ministério da Saúde do Brasil apresentaram concordância com o DC; EC ≥ 4 e ECL ≥ 6 foram significativamente associados ao óbito nesta amostra, com maior força de associação para o último (p=0,000). CONCLUSÕES: O perfil clínico da amostra foi concordante com a literatura, porém algumas variáveis classicamente associadas ao óbito na LV não se mostraram significantes, ou se fizeram em diferentes pontos de corte, o que pode ter se devido a variações populacionais ou ao delineamento do estudo, requerendo pesquisas mais robustas para a sua verificação. Os resultados para as pontuações nos EC e ECL nesta amostra refletem a importância de sua realização enquanto ferramenta de estratificação de risco dos pacientes diagnosticados com LV. Espera-se que este estudo possa contribuir no diagnóstico situacional da doença na população local e na identificação de questões-chave a serem aprofundadas através de diferentes metodologias.

INTRODUÇÃO: A esquistossomose é uma doença parasitária causada por trematódeos do gênero Schistosoma. A doença está entre as principais doenças tropicais negligenciadas. No Brasil, a esquistossomose é endêmica, distribuindo-se, principalmente, em estados do Nordeste. O método padrão-ouro para diagnóstico da doença, segundo a Organização Mundial de Saúde, é o Kato-Katz. Porém, a técnica apresenta diminuição da sensibilidade em áreas de baixa endemicidade, além da dificuldade de aquisição de amostras de fezes em dias diferentes e alternados e da necessidade de expertise de um profissional para análise das lâminas. Dentro desse contexto, outras metodologias têm se apresentado como boas alternativas para o diagnóstico da esquistossomose em áreas de baixa endemicidade, tais como o teste imunológico de POC-CCA e o teste molecular de rt-PCR. OBJETIVO: O presente estudo visou é avaliar o desempenho do método imunológico de POC-CCA e o método molecular de PCR em tempo real para diagnóstico da esquistossomose mansônica em áreas de baixa endemicidade, em relação ao padrão ouro, o método parasitológico de Kato-Katz. MATERIAL E MÉTODOS: Foram avaliados 121 indivíduos da comunidade rural de Jenipapo, município de Ubaíra, Bahia, com faixas etárias entre 2 e 80 anos. Cada indivíduo forneceu uma amostra de urina e uma amostra de fezes. Para execução do Kato-Katz e PCR em tempo real, foram utilizadas as amostras de fezes. Para a execução do POC-CCA, foram utilizadas as amostras de urina. Foram determinadas intensidade de infecção e taxas de prevalência e o desempenho diagnóstico foi avaliado através dos parâmetros de sensibilidade, especificidade e acurácia. O índice Kappa avaliou a concordância dos resultados entre observadores do teste rápido de POC-CCA. O método padrão ouro do estudo é o Kato-Katz. RESULTADOS: O maior número de indivíduos positivos foi encontrado pelo Kato-Katz (32), seguido pelo POC-CCA (25) e rt-PCR (18). O POC-CCA apresentou um desempenho mais inconsistente, com sensibilidade de 43,8%, especificidade de 87,6% e acurácia de 76%. A intensidade de cor da reação foi mais forte em indivíduos com alta e média cargas parasitárias. Já o rt-PCR apresentou sensibilidade de 56,2%, especificidade de 100% e acurácia de 88,4%. O índice Kappa demonstrou que houve uma forte concordância entre os observadores do teste POC-CCA (k=0,94). Segundo os índices de acurácia obtidos, o melhor teste foi o rt-PCR (88,4%). CONCLUSÕES: Os resultados demonstram que o método de Kato-Katz é uma boa técnica a se utilizar para triagem e controle de morbidade. O POC-CCA apresentou resultados inconsistentes, não sendo uma boa alternativa para triagem ou diagnóstico. Houve correlação entre a intensidade de carga parasitária e a intensidade de coloração da reação no teste de POC-CCA. O rt-PCR se mostrou uma alternativa viável, apesar do alto custo. A associação entre o método parasitológico de Kato-Katz e o método molecular de rt-PCR é uma boa alternativa para o controle de transmissão e diagnóstico, por apresentar aumento na sensibilidade, o que pode aprimorar o diagnóstico em áreas de baixa endemicidade.

RESUMO
INTRODUÇÃO: Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por
Leishmania major, no entanto, são permissivos à infecção por Leishmania
amazonensis. Os estudos conduzidos, até o momento, sobre o papel
desempenhado pela autofagia na infecção por Leishmania levaram a dados
controversos. OBJETIVO: No presente trabalho, avaliamos se a resposta
autofágica de macrófagos infectados pode ser responsável pela diferença no
curso da infecção por essas duas espécies de Leishmania. MATERIAL e
MÉTODOS e RESULTADOS: Inicialmente, demonstramos por qPCR e por
análise de dados de microarranjos públicos que um número maior de genes
relacionados à autofagia é modulado positivamente em células infectadas por L.
amazonensis em comparação às infectadas L. major. Ingenuity Pathway Analysis
(IPA) demonstrou modulação oposta dos genes relacionados à autofagia entre
os macrófagos infectados com L. amazonensis daqueles infectados com L.
major. Após 24 h de infecção, a relação LC3-II/Act é aumentada tanto em
macrófagos infectados por L. amazonensis quanto nos infectados por L. major
em comparação com controles não infectados, mas menos do que em células
tratadas com cloroquina. Embora, os vacúolos parasitóforos induzidos por L.
major tenham apresentado maior positividade para o marcador degradativo, DQBSA,
o recrutamento de LC3 foi maior nos vacúolos parasitóforos induzidos por
L. amazonensis. Interessantemente, tanto a indução farmacológica quanto a
fisiológica da autofagia aumentaram a viabilidade intracelular de L. amazonensis
e L. major, enquanto a inibição da autofagia não teve efeito sobre a viabilidade
intracelular desses parasitas. Também demonstramos que a indução da
autofagia reduziu a produção de NO por macrófagos infectados por L.
amazonensis ou L. major, mas não alterou a atividade da arginase, A análise de
componentes principais e agrupamento hierárquico de clusters discriminaram
completamente os macrófagos infectados por L. major de células infectadas por
L. amazonensis de acordo com a intensidade da infecção e características
autofágicas dos vacúolos induzidos por essas duas cepas. CONCLUSÃO: Em
conclusão, a infecção por L. amazonensis ou L. major, apesar de ativar
similarmente o fluxo autofágico em macrófagos infectados e os parasitos terem
sua viabilidade favorecida pela indução da autofagia, promove expressão
diferenciada de genes relacionados à autofagia e interação distinta dos vacúolos
parasitóforos com compartimentos autofágicos. Essas diferenças são capazes de
separar completamente os macrófagos infectados por L. amazonensis daqueles
por L. major.

RESUMO
INTRODUÇÃO: a fisiopatologia da anemia falciforme (AF) é marcada por crises
hemolíticas e vasoclusivas intermitentes com aumento da condição redox no
microambiente vascular que favorece a cronicidade inflamatória. OBJETIVOS:
avaliar a associação do heme com marcadores clínico-laboratoriais em pacientes
com AF; o papel de hemácias falciformes íntegras e lisadas na expressão gênica do
inflamassoma NLRP3, e se o tratamento de pacientes com hidroxiureia (HU)
interfere nesta expressão e na liberação de IL-1β e leucotrieno B4 (LTB4); e
investigar as propriedades antioxidantes da HU. MÉTODOS: o heme plasmático de
pacientes com AF (n = 80) foi dosado por ELISA, os marcadores laboratoriais foram
determinados por métodos automatizados, e as análises genéticas por polimorfismo
de comprimento de fragmentos de DNA (RFLP). O histórico clínico dos pacientes foi
obtido através de prontuários. Os ensaios de expressão gênica de componentes do
inflamassoma NLRP3 (NRLP3, IL1B, CASP1 e IL18) por RT-qPCR foram realizados
em células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) de voluntários
sadios desafiados com hemácias falciformes íntegras e lisadas (n = 8), e hemácias
normais (n = 10); e em leucócitos totais de pacientes com AF tratados (n = 13) ou
não tratados com hidroxiureia (HU) (n = 15) e voluntários sadios (n = 20). As
determinações de IL-1β e LTB4 foram realizadas por ELISA. A atividade antioxidante
foi avaliada por ensaios de varredura usando o radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazila
(DPPH). A expressão de superóxido dismutase 1 (SOD1), glutationa peroxidase
(GPx), glutationa S-redutase (GSR) e heme oxigenase-1 (HMOX1) foi realizada por
RT-qPCR em human umbilical vein endotelial cells (HUVEC) e PBMC. Análises de
microarranjo foram realizadas em HUVEC tratadas com HU. RESULTADOS: o
aumento no heme livre esteve associado ao aumento de hemoglobina S (HbS),
contagem de monócitos, marcadores hepáticos, triglicérides e lipoproteína de
densidade muito baixa (VLDL-C); e a diminuição dos níveis de hemoglobina fetal
(HbF) e lipoproteína de alta densidade (HDL-C). O genótipo BEN/BEN esteve
associado a níveis mais elevados de HbF que os CAR/CAR. A liberação de heme
livre não apresentou associação com os haplótipos, mas foi associada ao histórico
clínico de AVC. As hemácias falciformes íntegras e lisadas (SS-RBC) induziram a
expressão de componentes do inflamassoma NLRP3 e a secreção de IL-1β e LTB4.
SS-RBC íntegras induziram expressão de IL1B com secreção de IL-1β e LTB4, em
comparação com SS-RBC lisadas ou hemácias de voluntários sadios (AA-RBC). A
diminuição significativa na expressão de NLRP3 e secreção de LTB4 foram
observadas em pacientes tratados com HU. A HU apresentou atividade antioxidante
em concentrações equivalentes à encontrada no plasma de pacientes tratados com
a droga (~200 μM). Os tratamentos com HU ou HU+hemina não induziram
toxicidade em PBMC e HUVEC. O tratamento HU+hemina estimulou a produção de
nitrato/nitrito em PBMC e HUVEC. A HU aumentou a expressão de SOD1 e GPx em
PBMC e HUVEC. O aumento na expressão de GSR foi observado em PBMC e
HUVEC tratadas com HU+hemina. O tratamento com HU (ou em combinação com a
hemina) não interferiu na expressão de HMOX1 em PBMC quanto em HUVEC. A HU
induziu a expressão de SOD2, GSR, GST1 (glutationa S-transferase-1), GSTM2
(glutationa S-transferase mu 2), MGST1 (glutationa S-transferase 1), CBR1 (carbonil
redutase 1), proteinas quinases phosphatidylinositol 3-phosphato C (PRKCB,
PRKCZ, PIK3C2B) e sequestossomo-1 (p62/SQSTM1). Em contraste, foi observada
a diminuição na expressão do fator transcricional BACH1. “Upstream analyses”
demonstraram predição de ativação de Jun, miR-155 e mir-141-3p. CONCLUSÕES:
a liberação excessiva de heme a partir de eventos hemolíticos recorrentes pode
contribuir substancialmente para a gravidade clínica da AF. Hemácias íntegras e
lisadas podem atuar como DAMPs induzindo diferentemente a expressão de
componentes do inflamassoma e a produção de IL-1β e LTB4, contribuindo para o
estabelecimento da inflamação. O tratamento com HU parece diminuir a inflamação
por vias dependentes de NLRP3 e LTB4. A HU apresenta propriedades antioxidantes
diretas eliminando radicais livres além de induzir o sistema enzimático de resposta
antioxidante via Nrf2 sob regulação do sequestossomo-1. Esses achados podem
auxiliar no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas que possam ser
utilizadas em conjunto com a indução de HbF visando minimizar a cronicidade
inflamatória da AF.

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas é uma doença parasitária causada pelo Trypanosoma cruzi, a qual representa uma das principais causas de morbimortalidade na América Latina. As intervenções terapêuticas existentes não são totalmente eficazes, sendo o transplante cardíaco a única alternativa para os pacientes com cardiopatia chagásica crônica (CCC) grave. Neste sentido, a ausência de terapias capazes de atuar diretamente sobre os determinantes fisiopatológicos da doença torna necessária a identificação de novas abordagens terapêuticas. Estudos previamente realizados pelo nosso grupo mostraram que a utilização de células-tronco obtidas da medula óssea e de outras fontes teve efeitos benéficos no tratamento da CCC experimental. A possibilidade de potencializar os efeitos parácrinos das células-tronco através de modificação genética tem sido alvo de investigações científicas. OBJETIVO: Avaliar os efeitos da terapia com células-tronco mesenquimais (CTMs) da medula óssea, modificadas geneticamente para superexpressar o fator estimulador de colônias de granulócitos (hG-CSF) ou o fator de crescimento semelhante à insulina 1 (hIGF-1) em um modelo experimental de CCC. MATERIAL E MÉTODOS: Camundongos C57BL/6 foram infectados com 1000 tripomastigotas da cepa Colombiana de T. cruzi e, após seis meses de infecção, foram tratados com CTM, CTM-G-CSF, ou CTM-IGF-1. Grupos de animais não infectados ou infectados tratados com salina (veículo) foram utilizados como controles. Todos os animais foram eutanasiados sob anestesia após dois meses de tratamento para análises histopatológicas e morfométricas do coração ou músculo esquelético, bem como para avaliação da expressão de citocinas inflamatórias. RESULTADOS: As secções de corações de camundongos dos grupos tratados com CTM, CTM-GCSF ou CTM-IGF-1 apresentaram redução significativa do número de células inflamatórias e do percentual de fibrose em comparação aos animais chagásicos tratados com salina, sendo esta diferença mais evidente no grupo que foi tratado com células-tronco que superexpressam o G-CSF. Além disto, a terapia com CTM-G-CSF induziu a mobilização de células imunomoduladoras para o coração, tais como células supressoras de origem mielóide (MDSC) e células T regulatórias Foxp3+ que expressam IL-10. A avaliação da expressão gênica das citocinas inflamatórias no tecido cardíaco mostrou um aumento das citocinas inflamatórias em animais chagásicos crônicos quando comparados aos controles não infectados, sendo a maioria delas moduladas de forma significativa nos grupos que foram tratados com CTM ou CTM-G-CSF. Apesar da terapia utilizando CTM-IGF-1 não ter apresentado benefício adicional ao tecido cardíaco comparado ao grupo que foi tratado com CTM não modificadas, foi observado um efeito regenerativo desta terapia no músculo esquelético dos animais, resultando em um aumento de fibras musculares esqueléticas 60 dias após o tratamento. CONCLUSÃO: Nossos resultados demonstram que o tratamento com CTM da medula óssea que superexpressam hG-CSF ou hIGF-1 potencializou o efeito terapêutico das CTMs através de ações imunomoduladoras e pró-regenerativas no coração e músculo esquelético de camundongos cronicamente infectados por T. cruzi. Desse modo, a modificação genética de CTMs para superexpressão de fatores com potencial terapêutico representa uma estratégia promissora para o desenvolvimento de novas terapias para a cardiomiopatia chagásica crônica.

RESUMO
A entomologia forense é a ciência que estuda aspectos da biologia dos insetos e sua relação com eventuais fatos criminosos. Em investigações criminais, sobretudo na medicina legal, esta ciência torna-se uma importante ferramenta na obtenção de cálculos de estimativa de intervalo pós-morte (IPM). Calliphoridae (Diptera) constitui uma das principais famílias de interesse forense visto que são os primeiros a localizarem a carcaça, desenvolver-se nela e serem encontrados durante todo o processo de decomposição. O presente trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência das espécies desta família em carcaças suínas exposta durante as estações do ano em um fragmento de Mata Atlântica. Foram realizadas coletas diárias, sendo os insetos adultos capturados em armadilhas específicas, e os estágios imaturos coletados sobre a carcaça e colocados em criação no Laboratório de Entomologia Forense do Departamento de Polícia Técnica da Bahia, para identificação pós-emergência. Além disso, verificamos a correlação entre as espécies que visitam a carcaça com àquelas que se desenvolvem na mesma, relacionando-a as fases da decomposição. Foram coletados 29136 adultos e do total de imaturos coletados apenas 1278 emergiram no laboratório. Os adultos capturados pertenciam às seguintes espécies: Cochliomyia macellaria (Ver: 1,5%; Out: 0,1%; Inv:0,5%; Prim:1,3%), Chrysomya megacephala (Ver:11,3%; Out17,6%; Inv:2,7%; Prim:7,6%), Chrysomya albiceps (Ver:83,5% Out:67,5%; Inv:89,2%; Prim:47%), Chrysomya putoria (Ver:2,1% Out:7,8%; Inv:1,8%; Prim:0,8%), Lucilia eximia (Ver: 0,9% Out:2,1%; Inv:2,9%; Prim:0,5%), Mesembrinella bellardiana (Ver:0,6% Out:3,7%; Inv:0,8%; Prim:3,4%), Hemilucilia segmentaria (Ver:0,2% Out:1,1%; Inv:1,6%; Prim:6,2%) e Chloroprocta idioidea (Inv: 0,4%; Prim:33,1%), Os imaturos coletados e criados no laboratório, após a emergência, foram identificados como: Cochliomyia macellaria (Ver:0,2%), Chrysomya megacephala (Ver:0,2%), Chrysomya albiceps (Ver: 97,2%; Out:79,1%; Inv:82,2%Prim:53,5), Chrysomya putoria (Out: 5,9%; Inv: 0,3%; Prim: 1,3%), Hemilucilia segmentaria (Out: 12,8%; Inv: 15,2%; Prim:40,3%), Lucilia eximia (Ver: 2,4%; Out:2,2%; Inv:2,3%; Prim: 5,0%). Conclui-se que há diferenças na abundância entre as espécies durante o experimento, sendo a espécie Chrysomya albiceps a mais prevalente. Não foi possível estabelecer padrões de sucessão entre as espécies desta família. Foi verificado que nos primeiros momentos após colonização, até cerca de 24 horas, há uma maior chance de se coletar outras espécies de Calliphorideos, no entanto, após este período, C. albiceps ocupa quase a totalidade do nicho, sendo cada vês mais raro o encontro de larvas de outras espécies, provavelmente pela predação. Esse trabalho contribuiu com informações essenciais para a implementação deste tipo de perícia na rotina do Laboratório de Entomologia Forense do Departamento de Polícia Técnica -BA.