Banca de DEFESA: PATRICIA KAUANNA FONSECA DAMASCENO

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : PATRICIA KAUANNA FONSECA DAMASCENO
DATA : 27/05/2022
HORA: 14:00
LOCAL: IGM Sala Virtual 3
TÍTULO:

Potencial imunomodulador de células-tronco mesenquimais geneticamente modificadas para superexpressão de IL-15, flagelina e CCL21 in vitro e em modelo de melanoma in vivo

PALAVRAS-CHAVES:

Células-tronco mesenquimais; CCL21, IL-15, flagelina, câncer, edição gênica

PÁGINAS: 121
RESUMO:

O câncer é um problema de saúde pública em todo o mundo, sendo responsável por milhões de óbitos todos os anos. O avanço da medicina e das terapias oncológicas têm permitido uma maior sobrevida livre de doenças aos pacientes, entretanto ainda é limitado. O tratamento considerado mais promissor atualmente é a imunoterapia, que consiste em potencializar o sistema imunológico a reconhecer e eliminar células malignas. Em paralelo, a propriedade de tropismo tumoral das células tronco mesenquimais (CTM) tem sido evidenciada pelo potencial de carrear moléculas de interesse microambiente tumoral. Assim, a superexpressão de fatores que estimulem o sistema imunológico em CTM pode ser um mecanismo eficaz na regressão de tumores. Este projeto tem como objetivo avaliar o potencial indutor de respostas antitumorais de linhagens de CTMs geneticamente modificadas para superexpressar CCL21, IL-15 e flagelina, que são agentes com potencial imunoestimulador. Para isso, três linhagens de células foram produzidas (CTM-CCL21, CTM-IL15 e CTM-Flag), utilizando um sistema lentiviral de segunda geração para a realização da modificação genética. As linhagens geradas foram caracterizadas quanto à manutenção do fenótipo mesenquimal através de ensaios de diferenciação células nas linhagens condrogênica, osteogênica e adipogênica, além de imunofenotipagem por citometria de fluxo para os marcadores Sca1, CD45, CD44, CD90 CD29 e CD11B. As propriedades imunogênicas de cada linhagem gerada foram avaliadas in vitro através de ensaios específicos, de acordo com a atividade biológica de cada fator inserido. Para a linhagem CTM-IL15, foi realizado o ensaio de linfoproliferação; para a CTM-Flag, o ensaio de ativação de macrófagos; e, para CTM-CCL21, o ensaio de quimioatração de leucócitos. Além disso, as propriedades indutoras de respostas antitumorais in vivo foram avaliadas através de um modelo experimental de melanoma subcutâneo (células da linhagem B16F10) em camundongos C57Bl/6. As linhagens geradas foram caracterizadas, e demonstraram manter o perfil mesenquimal e a habilidade de diferenciação mesmo após a edição gênica. Os ensaios in vitro demonstraram o potencial imunoestimulador das três linhagens, através de uma maior proliferação de linfócitos pela CTM-IL15, maior atração de células dendríticas pela CTMCCL21 e maior ativação de macrófagos pela CTM-Flag, na presença dos sobrenadantes das células modificadas quando comparadas com o sobrenadante de CTMs controle ou com meio DMEM. No modelo in vivo, a administração endovenosa de células das 3 linhagens promoveu uma inibição significativamente maior do crescimento tumoral em comparação com a linhagem CTM controle. Em conclusão, as linhagens de CTMs geneticamente modificadas foram com sucesso e possuem atividades imunogênicas que podem ser exploradas na terapia anticâncer.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 012.993.637-50 - MILENA BOTELHO PEREIRA SOARES - UFRJ
Interno - 287831 - MITERMAYER GALVAO DOS REIS
Interna - 011.952.725-10 - NATALIA MACHADO TAVARES - UFBA
Externa à Instituição - SHEILLA ANDRADE DE OLIVEIRA - Fiocruz - PE
Externo ao Programa - 1221606 - VITOR ANTONIO FORTUNA